美满霉素对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨美满霉素(MC)对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法采用相应浓度的MC或LPS(100 ng/ml)对MC组及0.1、1、10、100μmol/L MC+LPS组、LPS组、空白对照组BV-2小胶质细胞进行预处理。ELISA法检测BV-2小胶质细胞TNF-α蛋白的表达,逆转录-PCR检测细胞TNF-αmRNA表达。结果与空白对照组比较,0.1、1μmol/L MC+LPS组及LPS组的TNF-α水平显著升高(均P0.01)。10、100μmol/L MC+LPS组TNF-α水平显著低于LPS组(均P0.01)。与空白对照组比较,LPS组及10μmol/L MC+LPS组TNF-αmRNA的表达水平显著增高(均P0.01)。10μmol/L MC+LPS组TNF-αmRNA表达水平显著低于LPS组(P0.01)。结论 MC预处理(≥10μmol/L)可显著抑制LPS诱导的小胶质细胞TNF-α的表达。     

CGS21680对脂多糖诱导的小胶质细胞炎症细胞模型白细胞介素-1β表达的影响

目的探讨CGS21680对脂多糖(LPS)诱导的小鼠大脑皮质小胶质细胞炎症细胞模型白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法采用新生小鼠大脑皮质小胶质细胞原代培养技术,将培养的小胶质细胞随机分组,设为对照组(加入单纯的DMEM/F12完全培养基)、LPS组(制作小胶质细胞炎症细胞模型)、CGS21680组(小胶质细胞炎症细胞模型基础上叠加CGS21680处理),CGS21680组再按CGS21680不同浓度分为0.1、1和10μmol·L~(-1)CGS21680亚组。ELISA检测各组24 h后IL-1β含量。结果 CGS21680组较LPS组小胶质细胞IL-1β表达量显著下降。结论 CGS21680可明显抑制LPS诱导的小鼠大脑皮质小胶质细胞的炎症反应。     

腺苷A_(2a)受体激活对脑出血后炎症反应和细胞凋亡的影响

目的探讨脑出血(ICH)后激活腺苷A2A受体对中性粒细胞浸润、TNF-α蛋白的表达及细胞凋亡的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、ICH组、CGS组、CGS+ZM组、ZM组。应用胶原酶脑内立体定向注射制作ICH模型。对照组注射生理盐水2ul,CGS组、CGS+ZM组、ZM组在ICH模型制作前15min,脑内立体定向分别注射CGS1μg,CGS1μg+ZM1μg,ZM1μg。模型制作后24h处死动物,应用HE染色检测中性粒细胞的浸润,应用Western-Blot技术检测TNF-α蛋白的表达,应用TUNEL法检测细胞凋亡。结果 ICH组可见明显的中性粒细胞浸润、TNF-α蛋白的表达及凋亡的细胞,与对照组比较,差别具有显著性(P0.001)。CGS组中性粒细胞浸润、TNF-α的表达及凋亡的细胞数目明显降低,与ICH组比较,差别具有显著性(P0.001)。CGS+ZM组中性粒细胞浸润、TNF-α的表达及凋亡的细胞明显增高,与ICH组比较差异无显著性(P0.05),与CGS组比较差异具有显著性(P0.001)。结论选择性的腺苷A2a受体激活可降低ICH后的炎症反应和细胞凋亡,从而减轻ICH后组织的损伤。     

腺苷A_(2A)受体拮抗剂治疗帕金森病的实验研究近况

近年的实验研究发现腺苷Ａ_２Ａ受体拮抗剂具有治疗帕金森病的作用。本文就腺苷Ａ_２Ａ受体及其拮抗剂的特性,腺苷Ａ_２Ａ受体拮抗剂治疗帕金森病的研究作一综述。     

脂多糖对BV-2细胞的形态及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨脂多糖对BV-2细胞的形态及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法 DMEM高糖培养基中培养的BV-2细胞平均分为空白对照组与脂多糖处理组。脂多糖处理组BV-2细胞采用含100ng/ml脂多糖的培养基培养24 h;空白对照组用PBS替代脂多糖。采用免疫组化染色法观察BV-2细胞的形态及TNF-α蛋白的表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测BV-2细胞培养上清液中TNF-α的浓度。结果空白对照组BV-2细胞形态呈上皮细胞样,每个细胞有2~3个突起,突起较细长,细胞核较小。脂多糖处理组BV-2细胞多数聚集成团,大部分胞体肥大、饱满,细胞核大而圆,核仁明显,胞体突起短小,形态均具有小胶质细胞激活后形态特征。BV-2细胞中TNF-α蛋白的阳性表达均主要在胞浆中,为棕黄色颗粒。空白对照组BV-2细胞TNF-α蛋白阳性表达产物的OD值(5.46±0.87)明显低于脂多糖处理组(53.01±5.72),差异有统计学意义(t=26.01,P<0.01)。空白对照组BV-2细胞培养上清液中TNF-α浓度为(218.13±24.10)pg/ml,脂多糖处理组BV-2细胞培养上清液中TNF-α浓度为(109...     

咪唑克生对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠小胶质细胞激活和白介素17、肿瘤坏死因子α表达的影响

目的观察咪唑克生对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑组织中小胶质细胞、白介素17(IL-17)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法 SD大鼠30只随机分成3组:EAE-咪唑克生组(免疫当日开始给予咪唑克生2 mg·kg~(-1),腹腔注射,连续14 d)、EAE-生理盐水组(给予相同剂量生理盐水)和空白对照组。用豚鼠全脊髓匀浆免疫诱导制作EAE大鼠模型。每天观察评估各组大鼠神经功能变化;苏木精-伊红染色观察病理学改变;免疫组化法检测小胶质细胞(Iba1阳性)的激活与表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测发病高峰期(免疫后15 d)脑组织中IL-17,TNF-α表达水平。结果与EAE-生理盐水组比较,EAE-咪唑克生组(1)日均神经功能评分降低(P0.05),最大临床症状评分显著降低(P0.01);(2)苏木精-伊红染色:中枢炎症细胞浸润减少(P0.05);(3)免疫组化:Iba1阳性细胞表达减少(P0.05);而EAE-生理盐水组大鼠腰髓内Iba1阳性细胞表达较空白对照组明显升高(P0.01);(4)ELISA:炎性细胞因子IL-17和TNF-α表达明显降低(P0.01)。结论咪唑克生能够减缓大鼠EAE病情,其机制可能与抑制中枢神经系统小胶质细胞激活,下调中枢神经系统炎症因子IL-17和TNF-α的表达,扰乱中枢神经系统内炎症因子的平衡有关。     

Aβ25-35激活小胶质细胞机制的研究

目的以Aβ25-35为工具药，观察小胶质细胞激活后形态和功能的变化，以探讨阿尔茨海默病发病过程中活化的小胶质细胞对神经元损伤作用的可能机制。方法用Aβ25-35处理体外培养的大鼠小胶质细胞，采用倒置相差显微镜观察细胞形态，RT-PCR方法检测炎性因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-1β、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达，Griess反应检测一氧化氮（NO）生成量，超氧化物岐化酶可抑制的WST-1还原法检测细胞外超氧化物产生量。结果Aβ25-35作用后，小胶质细胞形态发生明显变化，细胞胞体延长，由胞体伸出一个或多个树枝状突起，变为类巨噬样细胞；细胞外超氧化物产生量明显增加；但TNF—α、IL-1β、iNOS mRNA表达及NO释放量无明显改变。结论Aβ25-35激活小胶质细胞以活性氧类物质产生为主，活性氧类物质在介导Aβ诱导的神经毒性中起了关键作用。     

阿尔茨海默病中肿瘤坏死因子-α基因多态性及表达

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因多态性与广东地区汉族人群散发性阿尔茨海默病(SAD)发病易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法,检测44例SAD病人(AD组)及45例正常老年人(对照组)TNF-α基因的TNF-α1及TNF-α2等位基因频率。按比值比(OR)作疾病关联分析。用放免法检测两组的血清TNF-α含量。结果AD组的TNF-α2基因频率为0．182,明显高于对照组的0．078(OR=2．635,P=0．039)；AD组血清TNF-α含量为(567．85±102．43) ng/L,明显高于对照组的(389．73±56．68)ng/L(P＜0．05)。结论广东地区汉族人群中,TNF-α基因多态性与SAD有关联．TNF-α2等位基因与SAD的易感性有关。     

多巴胺和乙酰胆碱抑制脂多糖刺激原代胶质细胞iNOS的表达

目的观察多巴胺和乙酰胆碱对脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)刺激的原代胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)在转录和翻译水平上的影响。方法培养原代胶质细胞，多巴胺和乙酰胆碱预处理30min后，加入LPS刺激12h和24h，分别采用RT—PCR和细胞免疫组化来观察iNOS在转录和翻译水平的变化，利用Griess方法测量了上清液中内源性生成的NO。结果多巴胺能明显抑制INOS的转录；乙酰胆碱在转录水平上对iNOS无影响，但二者在蛋白水平上都能够抑制iNOS的表达和NO的生成。结论多巴胺和乙酰胆碱通过不同的方式抑制LPS刺激的原代胶质细胞iNOS的表达。     

大鼠实验性脑出血后脑组织肿瘤坏死因子-α、细胞间黏附分子-1的表达

目的　研究大鼠实验性脑出血后脑组织肿瘤坏死因子 α(TNF α)、细胞间黏附分子 1(ICAM 1)的表达。方法　采用自体不凝血注入大鼠尾状核制备脑出血模型 ,免疫组化染色法检测脑组织TNF α、ICAM 1的表达。结果　脑出血后 6小时血肿周围脑组织TNF α开始表达 ,4 8小时达高峰 ,ICAM 112小时开始表达 ,72小时达高峰。各组与假手术组之间有显著差异 (均P <0 0 5 ) ;脑出血后TNF α与ICAM 1呈正相关 (r =0 872 ,P <0 0 5 ) ,TNF α表达从开始到高峰均早于ICAM 1。结论　TNF α与ICAM 1参与了脑出血继发性脑组织损伤。     

肿瘤坏死因子-α对缺血性脑卒中的作用

缺血性脑卒中是中老年常见疾病,因其病理机制复杂,临床体征多变,现临床治疗效果仍不理想,肿瘤坏死因子-α在其发生发展过程中起到重要作用,临床如果能够利用好它的作用,促进其有益作用,抑制其有害作用,将为缺血性脑卒中的防治打开新的思路,因此,本文对肿瘤坏死因子-α在缺血性脑卒中进展中的作用进行了综述。     

肿瘤坏死因子-α表达与脑出血患者神经细胞凋亡的相关性研究

目的探讨脑出血患者炎性因子表达与细胞凋亡的关系。方法选取脑出血患者48例,登记临床资料并检测血肿周围脑组织TNF-α的不同时间段的表达。测定TNF-α表达:(1)Western Blot法;(2)免疫组化法。测定细胞凋亡:TUNEL法。结果 TNF-α的表达高峰期为0~24h、13~48h,TUNEL法测定神经细胞凋亡高峰期为13~48h,表明脑出血后神经细胞凋亡与TNF-α的表达高峰完全一致,存在时间变化规律一致性。以凋亡细胞数为纵轴,TNF-α表达阳性细胞数为横轴制作散点图。胞质TNF-α阳性细胞数与凋亡细胞数相关系数r为0.954,呈明显正相关。结论脑出血患者血肿周围脑组织TNF-α表达水平与神经细胞凋亡数一致。     

中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡与扇贝多肽的影响：肿瘤坏死因子α/肿瘤坏死因子受体1通路的研究

背景：扇贝多肽可以通过Fas通路及NF-κB通路发挥对中波紫外线照射后的人角质形成细胞株(HaCaT)的保护作用。 目的：观察中波紫外线辐射后HaCaT细胞的凋亡情况和细胞内肿瘤坏死因子α/肿瘤坏死因子受体1的活化情况,以及扇贝多肽的干预作用。 方法：实验以20 mJ/cm2中波紫外线辐照HaCaT细胞0.5 h建立细胞辐射损伤模型,药物低、中、高剂量组、阳性对照组、抑制剂组分别在造模前2 h加入1.42,2.84,5.69 mmol/L的扇贝多肽、5.68 mmol/L的维生素C及50 mg/L的抗肿瘤坏死因子α单克隆抗体。 结果与结论：中波紫外线辐照后,HaCaT细胞凋亡增多,肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体1 mRNA及磷酸化JNK蛋白表达量增加;1.42,2.84,5.69 mmol/L的扇贝多肽均可降低中波紫外线辐照引起的细胞内肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体1 mRNA及磷酸化JNK表达,抑制HaCaT细胞凋亡,以5.69 mmol/L扇贝多肽的作用效果最明显,与5.68 mmol/L维生素C的作用相当,且50 mg/L抗肿瘤坏死因子α单克隆抗体也可明显降低中波紫外线辐照引起的细胞内磷酸化JNK表达。说明扇贝多肽能抑制中波紫外线辐照引起的HaCaT细胞凋亡,其可以通过肿瘤坏死因子α/肿瘤坏死因子受体1通路发挥抗凋亡作用。     

JAK2-STAT3途径介导凝血酶诱导的小胶质细胞TNF-α的激活

目的 探讨Janus激酶2/信号转导和转录激活子3（JAK2/STAT3）途径可否介导凝血酶诱导的小胶质细胞肿瘤坏死因子（TNF-α）激活。方法 采用20U/mL凝血酶或AG490预处理（10μmol/L）＋凝血酶（20U/mL）处理原代培养的小胶质细胞,经Western Blot法检测细胞Janus激酶1（JAK1）、磷酸化（P）-JAK1、P-JAK2、磷酸化-信号转导和转录激活子3（P-STAT3）、STAT3表达,酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清上清液TNF-α水平。结果 经凝血酶处理2-12h后JAK2、STAT3发生了磷酸化,3-48h后TNF-α表达增加。经JAK激酶抑制剂AG490预处理后再经凝血酶处理的小胶质细胞的JAK2和STAT3激活显著减少,且TNF-α释放被抑制。结论 JAK2-STAT3途径可介导凝血酶诱导的小胶质细胞TNF-α激活。     

沉默P2X4R基因对P2X4/NLRP3炎性小体通路介导的BV2小胶质细胞中肿瘤坏死因子α表达的影响

目的探讨使用慢病毒(LV-P2rx4)沉默P2X4嘌呤受体(P2X4R)对活化状态小胶质细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法常规建立脂多糖(LPS)和三磷酸腺苷(ATP)双信号诱导的小胶质细胞活化模型,随机分为(1)空白对照组(常规DMEM培养液培养);(2)活化模型组(细胞种板后待密度接近80%后先给予LPS 1μg·m L-1处理6 h后弃原培养液,再加ATP 2 mmol·L-1处理3 h);(3)目的基因阴性对照组(种板1 d,先加入病毒处理12 h后弃培养液,再加入常规培养液,间隔12 h更换培养液);(4)目的基因阴性对照+活化模型组(种板1 d后,先加入病毒处理12 h后弃培养液,再加常规培养液,期间每隔12 h更换培养液,待细胞密度达80%后,予LPS 1μg·m L-1处理6 h后弃原培养液,再加ATP 2 mmol·L-1处理3 h);(5)空载病毒阴性对照组(处理方法同目的基因阴性对照组);(6)空载病毒阴性对照+活化模型组(处理方法同目的基因阴性对照+活化模型组)。各组均n=6。细胞处理后每组取3孔分别提取核糖核酸(RNA)和蛋白,应用Real time PCR和Western blot法分别检测NLRP3、TNF-α的mRNA及蛋白的相对表达。结果与活化模型组和空载病毒阴性对照+活化模型组比较,目的基因阴性对照+活化模型组TNF-αmRNA相对表达水平明显减少(P 0. 001,F=195. 4),TNF-α蛋白相对表达水平显著降低(P 0. 001,F=60. 10)。结论沉默小胶质细胞中的P2X4R基因,可下调细胞中TNF-α表达,继而可能削弱小胶质细胞的炎症反应。     

脑缺血诱发星形胶质细胞粒细胞集落刺激因子受体和胶质细胞源性神经营养因子的表达

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在缺血脑保护中的作用机制.方法 制作大鼠大脑中动脉栓塞模型,7 d后断头取脑做冰冻切片,用免疫荧光双标的方法观察缺血周边区与假手术组相同部位G-CSF受体、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和微管相关蛋白2(MAP2)、神经胶质原酸性蛋白(GFAP)的共表达情况.结果 G-CSF受体和GDNF在正常大鼠脑内广泛表达于神经元,不表达于星形胶质细胞;但在缺血周边区,星形胶质细胞亦部分表达G-CSF受体和GDNF.在正常脑组织,大部分G-CSF受体阳性的细胞也表达GDNF.结论 脑缺血可诱导缺血周边区星形胶质细胞表达G-CSF受体和GDNF,推测缺血后的内源性神经保护作用可能与缺血周边区星形胶质细胞的G-CSF受体表达以及GDNF产生有关.     

肿瘤坏死因子-α基因与精神分裂症的关联研究

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因rs1800629位点与精神分裂症及其临床特征的关系。方法:采用Taq Man探针SNP基因分型技术对稳定期精神分裂症患者(患者组) 254例和健康对照者(正常对照组) 339名TNF-α基因rs1800629位点进行分型;采用阳性和阴性症状量表(PANSS)评定患者组精神病性症状,分析比较rs1800629位点3种不同基因型间症状严重程度。结果:患者组与正常对照组TNF-α基因rs1800629位点基因型的观察值和期望值Hardy-Weinberg平衡吻合度良好(χ2=2. 70,P=0. 10;χ2=2. 58,P=0. 11);患者组与正常对照组在rs1800629位点基因型和等位基因频率分布比较,差异无统计学意义(χ2=3. 16,P=0. 21;χ2=3. 44,P=0. 06);携带A等位基因患者阳性症状分、阴性症状分、一般病理分及PANSS总分较不携带A等位基因患者更高(F=6. 03,P=0. 015; F=14. 82,P=0. 000; F=42. 02,P=0. 000; F=35. 19,P=0. 000)。结论:TNF-α基因rs1800629位点可能与精神分裂症无关;但与疾病的严重程度有关。     

依达拉奉对癫(癎)大鼠海马肿瘤坏死因子-α和白介素-1β表达的影响

目的 探讨依达拉奉对癫(癎)大鼠海马肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-1β表达的影响.方法 36只Wistar大鼠随机分为依达拉奉组、癫(癎)组和正常对照组.应用戊四氮腹腔注射制作癫(癎)模型.依达拉奉组在造模前0.5 h及造模后立即、造模后12 h分别予以腹腔注射依达拉奉3 mg/kg.癫(癎)大鼠于造模后进行行为学观察.应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠海马TNF-α和IL-1β的表达.结果 造模后,癫(癎)组12只大鼠均为Ⅴ级发作;依达拉奉组3只大鼠为Ⅴ级发作,2只为Ⅳ级发作,5只为Ⅲ级发作,2只为Ⅱ级发作.与正常对照组比较,依达拉奉组与癫(癎)组大鼠海马TNF-α、IL-1β的表达水平均明显增高(P<0.05～0.01);与癫(癎)组比较,依达拉奉组大鼠海马TNF-α、IL-1β的表达水平均明显降低(均P<0.01).结论 依达拉奉能明显降低癫(癎)大鼠海马TNF-α和IL-1β的表达水平,从而发挥抗癫(癎)作用.     

Toll样受体4在乙醇所致的小胶质细胞激活中的作用

滥用乙醇可以导致脑损害以及神经系统退行性变,但是其对脑损害的神经性炎性反应方面机制的研究还不明确。近年相关研究结果显示小胶质细胞作为中枢神经系统的主要炎性细胞,在乙醇所致的神经性炎性反应中作用非常重要。Toll样受体4(TLR4)是固有免疫系统中的一个重要模式识别受体,在脑损害和神经系统退行性变中起到重要作用。乙醇通过TLR4信号通路激活小胶质细胞,诱导炎性反应介质释放和细胞死亡而导致脑损害,抑制TLR4信号通路可能对减轻乙醇所致的神经性炎性损害具有重要意义。本文对Toll样受体4在乙醇所致的小胶质细胞激活中的作用做一综述。