解热抗炎Ⅰ号口服液质量控制方法的研究

目的 :利用 TL C和 HPL C对解热抗炎 号口服液中有效成分大黄素进行定性、定量分析。方法 :用 TL C法对成分大黄素和薄荷进行定性分析 ,以 HPL C法在 ODS- C1 8柱上以甲醇 - 0 .1%高氯酸 (2 0∶ 80 )为流动相测定其含量。结果 :大黄素回收率为 96 .89% (RSD =0 .96 % ) ,检测范围为 0 .0 5～ 0 .8μg/ m L ,r=0 .9995 ,可以作为该制剂的质控方法。结论 :所用定性、定量方法快速简便、灵敏度高、重现行好。     

大黄素对肺成纤维细胞增殖及细胞周期的影响

目的　探讨大黄素对体外培养肺成纤维细胞 (L F)增殖的作用。方法　采用体外细胞培养、透射电镜、流式细胞仪和同位素检测等技术 ,比较了在大黄素作用下 L F的增殖 ,并检测大黄素作用下 L F的细胞增殖周期和电镜下的形态学特征。结果　大黄素能够抑制体外培养 L F的增殖 (P<0 .0 1) ,并随着剂量增加抑制效应增强 ,大黄素可以提高 L F细胞周期中 G1 期细胞的比例 (P<0 .0 1) ,减少 S期和 G2 期细胞的比例 (P<0 .0 1)。同时 ,发现大黄素作用组的 L F形态上与对照组无明显差异。结论　大黄素具有抑制 L F增殖和阻止 L F由 G1 期进入 S期和 G2期的作用 ,同时 ,本研究的最大剂量大黄素 (10 0 μg/ ml)对 L F细胞形态无明显损伤。     

高效毛细管电泳法测定决明子及决明子茶中大黄素和芦荟大黄素的含量

目的　建立简单、快速且能同时分离测定决明子及决明子茶中大黄素、芦荟大黄素含量的胶束毛细管电泳法。方法　采用高效毛细管电泳法 ,缓冲体系为 15 0mmol/L硼砂 30 0mmol/LSDS 10 %乙醇 (pH 9 6 0 ) ,熔融石英毛细管柱 (5 0cm× 75 μm) ,分离电压为 2 0kV ,检测波长为 2 5 4nm ,温度为 (2 5± 0 3)℃ ,进样时间为 5s。 结果　大黄素、芦荟大黄素在 4～ 12 0 μg/mL、10～ 2 0 0 μg/mL与峰面积线性关系良好 ,大黄素和芦荟大黄素平均回收率分别为 98 6 %和 10 2 9%。结论　该方法简单、快速、准确、重现性好 ,可用于决明子药材及决明子茶的质量控制     

滋补生发片中大黄素含量测定方法的研究

目的建立可行的大黄素含量测定方法。方法采用ODS -C18柱,流动相为乙腈-水-冰醋酸(6 0 :4 0 :1) ;流速:1ml/min ;检测波长为4 37nm的条件下能获得理想的检则结果。结果大黄素在0 .0 312 5 μg - 0 .2 5 0 0 0 μg范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.5 %。结论以HPLC法在上述条件下测定滋补生发片中的大黄素含量准确、稳定、可靠。     

芦荟大黄素调控Notch-1/Akt/NF-κB信号通路对胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响

目的:观察芦荟大黄素调控Notch-1/AKT/NF-κB信号通路对胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法:实验分为对照组(正常培养SGC-7901细胞)、芦荟大黄素低剂量组(SGC-7901细胞+芦荟大黄素10 mg·L^-1)、芦荟大黄素中剂量组(SGC-7901细胞+芦荟大黄素30 mg·L^-1)及芦荟大黄素高剂量组(SGC-7901细胞+芦荟大黄素50 mg·L^-1)。噻唑蓝比色法检测各组细胞培养后的增殖抑制率;Transwell小室检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-APC/7-AAD双染法检测细胞凋亡情况;Western blot法检测Notch-1/AKT/NF-κB信号通路蛋白及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达。结果:与对照组比较,芦荟大黄素低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞增殖抑制率升高(P<0.05),细胞穿膜个数和划痕闭合率明显降低(P<0.05),G0/G1期肿瘤细胞比例增加(P<0.05),细胞凋亡AI值升高(P<0.05),Notch-1、p-Akt、P65、Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值降低,Bax表达升高(P<0.05)。结论:芦荟大黄素可能通过阻滞SGC-7901细胞在G0/G1期,抑制其增殖能力,降低迁移和侵袭能力,并通过抑制Notch-1/AKT/NF-κB信号通路起到诱导细胞凋亡作用。     

大黄素对HCT116结肠癌细胞凋亡作用及机制研究

目的 研究大黄素促进人结肠癌细胞HCT116细胞凋亡的作用及其分子机制。方法 通过CCK8法检测大黄素对细胞活力的影响,并计算出IC₅₀。Annexin-V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期和荧光探针DCF-DA细胞内活性氧(ROS)的水平,Western blot法检测Bax、Bcl-2、p-ERK1/2、ERK1/2和c-Myc的表达。结果 不同浓度的大黄素抑制HCT116细胞的活力,并且具有浓度依赖性。大黄素将HCT116细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05),并且能够明显诱导ROS的产生(P<0.01),Western blot结果显示大黄素能够引起Bax/Bcl-2表达的上调,p-ERK1/2和c-Myc表达的降低(P<0.05)。结论 大黄素可以通过上调Bax/Bcl-2,下调c-Myc和p-ERK/ERK的表达从而促进结肠癌细胞的凋亡,阻滞细胞周期和增加ROS的产生。      

大黄素对人结肠癌Lovo细胞增殖周期影响的实验研究

目的 观察大黄素对人结肠癌Lovo细胞增殖及周期的影响.方法 采用MTT法检测大黄素不同浓度梯度(20、40、80 μmol/L)和时间梯度(12、24、48 h)处理后Lovo细胞的增殖活力;采用流式细胞仪检测Lovo细胞周期变化.结果 大黄素对Lovo细胞的增殖抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性,流式细胞仪分析发现在大黄素作用下Lovo细胞被阻滞于G0/G1期,阻止细胞进入S期,并成剂量依赖性.结论大黄素对结肠癌Lovo细胞增殖具有显著的抑制作用;且使Lovo细胞增殖周期停滞于G0/G1期,而阻止其进入S期,具有良好的结肠癌临床应用前景.     

大黄素调节Wnt1/β-catenin信号通路对垂体腺瘤HP75细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨大黄素调节Wnt1/β-catenin信号通路对垂体腺瘤HP75细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 以CCK-8法测定0、10、20、40、80、120μmol/L浓度大黄素处理24 h后的人垂体腺瘤细胞HP75的存活率,筛选出最佳药物作用浓度。体外培养HP75细胞并随机分为对照组、大黄素组、大黄素+氯化锂(Wnt1/β-catenin信号激活剂)组,以80μmol/L的大黄素和20 mmol/L的氯化锂分组处理后以免疫印记法检测各组细胞Wnt1/β-catenin通路相关蛋白表达;以Edu和TUNEL染色法分别检测各组细胞增殖、凋亡;以细胞划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞迁移、侵袭;以免疫印记法检测各组HP75细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)和上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、MMP-9、Vimentin)表达。构建垂体腺瘤裸鼠移植瘤模型并随机分为对照组、大黄素组、大黄素+氯化锂组,以10 mg/kg的大黄素和1 mg/kg的氯化锂分组处理后检测各组肿瘤体积。结果 与对照组比较,大黄素组细胞凋亡率、Bax与E-cadherin...     

大黄素对人胚肾成纤维细胞产生纤溶酶原激活物抑制剂的影响

目的 :观察大黄素对人胚肾成纤维细胞 (KFB)产生纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI) -1的影响作用机制。方法 :利用原代培养的KFB。PAI -1活性采用发色底物法测定。结果 :大黄素 10 μg/ml、2 0 μg/ml可以降低血管紧张素 (Ang)Ⅱ诱导的KFB分泌的PAI -1活性 (P <0 .0 5 )。结论 :大黄素可以降低PAI -1活性 ,增加细胞外基质 (ECM )降解 ,从而在防治肾间质纤维化中起一定的作用。     

大黄素对人肺肿瘤细胞(H522)增殖与凋亡的效应及作用机制

目的 探讨大黄素(Emodin)对人非小细胞肺肿瘤细胞(H522)增殖与凋亡效应及作用机制.方法 用不同浓度(0、5、20、100μmol/L)的大黄素处理H522细胞24 h、48 h与72 h,用CCK-8法检测大黄素对H522细胞增殖的影响,用流式细胞术检测大黄素对H522细胞凋亡及其细胞周期的影响,用荧光染色检...     

大黄素诱导白血病KG-1a细胞凋亡及对Bcl-2/Bax mRNA表达的影响

目的本研究观察大黄素(emodin)对人急性髓系白血病KG-1a细胞的增殖及凋亡影响,探讨Bcl-2/Bax基因在其中的作用。方法采用四唑蓝比色试验(MTT)检测大黄素对KG-1a细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)测定细胞周期变化与凋亡情况;RT-PCR法检测大黄素作用后细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的变化。结果大黄素能抑制KG-1a细胞的增殖,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)约为171.8μmol/L流式细胞仪分析出现典型的亚二倍体峰(凋亡峰),将细胞阻滞于G0/G1期,大黄素作用后KG-1a细胞Bcl-2基因表达下调,而Bax基因表达上调,并呈量效关系。结论大黄素可诱导KG-1a细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax基因表达水平有关。     

Emodin induces apoptosis and down-regulates Bcl-2/Bax in leukemia KG-1a cells

目的 本研究观察大黄素( emodin)对人急性髓系白血病KG-1a细胞的增殖及凋亡影响,探讨Bcl-2/Bax基因在其中的作用.方法 采用四唑蓝比色试验(MTT)检测大黄素对KG-1a细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)测定细胞周期变化与凋亡情况;RT-PCR法检测大黄素作用后细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的变化.结果 大黄素能抑制KG-1a细胞的增殖,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)约为171.8 μmol/L流式细胞仪分析出现典型的亚二倍体峰(凋亡峰),将细胞阻滞于G0/G1期,大黄素作用后KG-1a细胞Bcl-2基因表达下调,而Bax基因表达上调,并呈量效关系.结论 大黄素可诱导KG-1a细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax基因表达水平有关.     

芦荟大黄素诱导人子宫内膜癌细胞HEC-1-B凋亡及其机制的研究

目的探讨芦荟大黄素对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B凋亡及机制的研究。方法应用芦荟大黄素(0、20、40、80μmol/L)处理HEC-1-B细胞后,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;用Western Blot方法检测Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果芦荟大黄素明显抑制HEC-1-B细胞增殖,能够诱导HEC-1-B凋亡,Caspase-3、Bax蛋白表达水平明显增加,Bcl-2蛋白表达水平明显下降。结论芦荟大黄素能明显抑制HEC-1-B生长,促进HEC-1-B凋亡,这可能与Caspase-3和Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达降低相关。     

高效液相色谱法测定虎梅冲剂中大黄素和大黄素甲醚含量研究

目的建立用HPLC(高效液相色谱法 )测定虎梅冲剂中大黄素和大黄素甲醚含量的方法。方法用氯仿提取 ;SupelcosilTMC8色谱柱 ( 1 5 0mm× 4 .6mm ,5 μm) ,流动相为甲醇 -水 ( 333∶1 5 6 ) ,磷酸调pH值至2 .5 ,检测波长 2 5 4nm。结果大黄素的线性范围为 2 0～1 2 0 .0mg L ,平均回收率为 98.7% ,RSD为 2 .5 % ;大黄素甲醚的线性范围为 2～ 30mg L ,平均回收率为 98.6 % ,RSD为 3.1 %。结论该方法简便 ,准确 ,重现性好 ,可用于虎梅冲剂的质量控制。     

补肾益髓胶囊补泻成分对EAE小鼠大脑内Olig1、Olig2表达的作用研究

目的观察梓醇配伍大黄素对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)小鼠大脑内少突细胞转录因子(Olig) 1和Olig2表达的影响,探讨梓醇配伍大黄素促进髓鞘损伤修复的作用机制。方法 80只C57BL/6小鼠,随机分为正常组、模型组、激素组、配伍组(梓醇40 mg/kg、大黄素1 mg/kg),每组20只。于免疫当天,髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)多肽皮下注射诱导产生EAE。于免疫诱导后第18天(症状高峰期)及第40天(症状缓解期)进行取材。透射电镜(TEM)观察髓鞘脱失情况,蛋白质免疫印迹法(WB)观察Olig1、Olig2蛋白的表达情况。实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(Real-time rt-PCR)观察Olig1、Olig2基因表达情况。结果梓醇、大黄素合用能够显著减轻EAE小鼠髓鞘损伤,降低症状高峰期及症状缓解期神经功能评分。TEM显示,配伍组髓鞘环形层状结构较模型组小鼠破坏松散程度减轻。WB结果显示,第40天配伍组较模型组Olig2蛋白表达升高(P 0. 05),Olig1蛋白表达与模型组比较差异无统计学意义(P 0. 05)。Real-time rt-PCR结果显示,第18天及第40天配伍组较模型组Olig1、Olig2基因表达均升高(P 0. 05)。结论梓醇、大黄素合用能够缓解EAE髓鞘损伤,增加EAE小鼠脑内Olig1、Olig2的表达,对髓鞘再生具有一定的促进作用。     

薄层扫描法测定解毒泄浊Ⅰ号颗粒中大黄素的含量

目的：建立解毒泄浊号Ⅰ颗粒中大黄素的含量测定方法。方法：薄层扫描法,展开剂：正己烷-乙酸乙酯-甲酸（30：10：0．5）,检测波长440nm。结果：大黄素在0．2～1．0μg范围内呈良好线性关系,r=0．99859,平均回收率为98．22％,RSD为1．29％。结论：薄层扫描法简单、准确、重现性好,可用于解毒泄浊Ⅰ号颗粒中大黄素的含量测定。     

大黄素甲醚对豚鼠皮肤黑色素细胞NOS的影响

目的 :研究大黄有效成分大黄素甲醚对豚鼠皮肤黑色素细胞内一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ;NOS)表达的变化 ,阐明大黄对黑色素细胞的有效作用浓度和可能机制。方法 :将 2 1只雄性豚鼠随机分成对照组和5个实验组 ,用大黄素甲醚 5种浓度对局部皮肤真皮注射处理 ,48小时后取材 ,免疫组织化学方法 (SABC法 )显示NOS的表达 ,用光学显微镜和图象分析仪对结果进行统计分析。结果 :大黄素甲醚作用下 ,豚鼠表皮黑色素细胞NOS表达明显减少 ,光密度明显下降 (P <0 .0 5) ;不同浓度药物作用之间无显著差异 (P >0 .0 5) ,加注侧与未加注侧之间无显著差异。结论 :大黄素甲醚对黑色素细胞NOS的表达具有调节作用 ,提示大黄对黑色素细胞的调节是经NO信号介导途径 ,为大黄的临床应用提供实验依据。     

大黄素对豚鼠单个心室肌细胞胞浆游离钙浓度的影响

目的　研究大黄素 (Emodin)对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。方法　酶解法分离单个豚鼠心肌细胞 ,用与钙离子特异性结合的Fluo 3 Am标记细胞内游离钙离子 ,应用激光扫描共聚焦显微镜实时监测钙荧光强度 (FluorescentIntensity ,FI)的变化 ,以平均荧光强度代表 [Ca2 + ]i。结果　在静息状态下 ,大黄素 1～10 0 μmol L对 [Ca2 + ]i 均无影响 ;大黄素 1μmol L对KCl 6 0mmol L诱导的外钙内流引起的胞浆钙升高有促进作用 ,平均荧光强度由 1876 .7± 5 5 1.3增加至 2 90 4 .8± 739.1(n =8,P <0 .0 5 ) ;10 μmol L对其无影响 ;10 0 μmol L则表现为抑制作用 ,平均荧光强度降至 12 14 .1± 334.8(n =8,P <0 .0 5 )。结论　大黄素低浓度 (1μmol L)对KCl诱导的细胞内钙增高有促进作用 ;高浓度 (10 0 μmol L)则表现为抑制作用。因此 ,大黄素对心肌细胞内钙具有双向调节作用     

消脂宁片质量控制的研究

目的 :建立消脂宁 (xiaozhining)片质量控制方法。　方法 :用薄层层析法 (TLC)鉴定消脂宁片中的黄芩、丹参、大黄、益母草成分。用高效液相色谱法 (HPLC)测定消脂宁片中大黄素含量。　结果 :TLC法对处方中四种主要成分鉴定结果满意 ;HPLC法测定大黄素含量 ,回归方程为A =2 .4 3× 10 7C +6 .0 6× 10 4(r =0 .9997) ,在 0 .0 5～ 0 .5mg/ml范围内线性关系良好 ,加样回收率为 96 .70 % ,相对标准差 (RSD) =1.0 6 % ,3批供试品中大黄素含量平均值为 0 .0 2 14mg/片 ,RSD =1.5 4 %。方法稳定可靠。　结论 :可供制定消脂宁片质量标准参考     

大黄素干预大鼠胰腺纤维化过程中TGF-β1的动态研究

目的研究TGF-β1在大黄素抗大鼠胰腺纤维化过程中的作用。方法50只大鼠按完全随机法分成5组,每组10只。胰管内注射三硝基苯磺酸(TNBS)制备大鼠慢性胰腺炎模型,用不同剂量(20、40、80mg/kg)的大黄素鼻饲干预,0.9%NaCl注射液作为对照。Western印迹分析及免疫组化分析检测大鼠胰腺组织中的TGF-β1蛋白含量。结果与对照组比较,大黄素处理组TGF-β1蛋白表达量减少,尤其是大剂量大黄素处理组。结论TGF-β1在大黄素抗胰腺纤维化中起重要作用。