全身亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤海马CA1区神经元凋亡的影响

目的：观察全身亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响,探讨亚低温的脑复苏机制和脑缺血后凋亡刺激因素．方法：采用改良的Ｐｕｌｓｉｎｅｌｉ－ＷＡ４ＶＯ法,制备大鼠全脑缺血再灌注模型,采用ＴＵＮＥＬ法,观察海马脑区细胞凋亡的特征变化．结果：发现脑缺血２０ｍｉｎ再灌注６ｈ,海马ＣＡ１区可见少量细胞核呈蓝染颗粒,于再灌注１２ｈ,２４ｈ,４８ｈ,３ｄ,５ｄ蓝染阳性细胞明显增多,５ｄ达高峰,７ｄ开始下降．给予亚低温治疗后上述变化明显减轻．结论：亚低温脑复苏作用可能是通过抑制或延迟脑缺血后细胞凋亡,而抑制或阻断凋亡发生的启动级联反应为其重要机制．     

亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡的干预研究

目的探讨亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡的影响。方法选取成年雄性健康清洁级Wistar大鼠42只,随机分为假手术组、对照组及亚低温组。亚低温组和对照组采用大鼠4条血管阻断全脑缺血模型(Pulsinelli-4VO法)制备大鼠全脑缺血再灌注模型,假手术组仅切开颈部皮肤和肌层暴露双侧椎动脉和颈动脉,不行椎动脉凝闭和颈总动脉夹闭。假手术组和对照组置于室温下,亚低温组给予亚低温处理。采用流式细胞仪对海马神经元Bcl-2、Bax表达进行测定。结果假手术组、对照组及亚低温组神经元凋亡百分率及增殖指数比较,差异均有统计学意义(F=142.869,P<0.01;F=153.993,P<0.01)。假手术组Bcl-2、Bax表达(均道值)微弱,在此忽略;对照组Bcl-2、Bax表达(均道值)与亚低温组比较,差异均有统计学意义(t值分别为63.747、28.803,P<0.01);两组Bcl/Bax比值比较,差异亦有统计学意义(t=9.601,P<0.01)。结论全身亚低温可有效干预大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡,其机制与Bcl-2、Bax的表达有关,受到二者比值的调控。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马c-fos表达和神经元的凋亡

目的研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马c fos表达和神经元的凋亡。方法wistar大鼠双侧颈总动脉夹闭 30min ,造成全脑缺血 ,松开动脉夹再灌注。动物均于再灌注 1h行c fos原位杂交 ,再灌注 4 8h行TUNEL染色 ,观察海马神经元的凋亡情况。结果缺血再灌注后 ,大鼠海马CA1区c fos基因表达增强 ,缺血再灌注大鼠的TUNEL染色可见CA1区有大量阳性细胞 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论脑缺血再灌注后导致海马c fos基因的表达显著增强 ,细胞凋亡明显增加。     

全身亚低温对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区bcl-2, bax基因表达的影响

目的:观察全身亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤相关基因表达的影响及其机制. 方法:采用改良的Pulsinelli-WA 4VO法,制备大鼠全脑缺血再灌注模型,采用SABC法观察亚低温对大鼠全脑缺血再灌注后bcl-2, bax基因表达规律. 结果:SABC法观察显示bcl-2在缺血再灌注后6 h有少量表达,24 h达峰值,7 d时明显减弱. 亚低温组再灌注后6 h表达较弱,3 d时表达增强达峰值,7 d时明显减弱. 亚低温组与单纯缺血再灌组比较,在缺血再灌注后3 d时有显著性差异(P<0.01). bax基因在缺血再灌注后6 h出现表达, 5 d时达高峰,7 d时仍有较高水平表达. 亚低温组各时间点bax基因呈低表达,与缺血再灌组比较,5 d和7 d时相差最显著(P<0.01),并且未见表达高峰出现. 结论:亚低温可抑制脑缺血再灌注后促凋亡基因如bax基因的表达,从而抑制脑缺血后神经元凋亡的发生. 亚低温的脑复苏作用可能与其抑制脑缺血再灌注后神经元凋亡的发生有关.     

八味沉香散对脑缺血再灌注损伤大鼠海马CA1区神经元凋亡的影响

目的 探讨八味沉香散对脑缺血再灌注损伤大鼠海马CA1区神经元凋亡的影响.方法 Wistar大鼠随机分五组:常氧对照组、低氧组和八味沉香散大、中、小剂量组.将低氧组和八味沉香散组放入模拟海拔4 500m的低氧低压舱内.常氧对照组和低氧组以0.9％生理盐水灌胃,八味沉香散组对脑缺血再灌注损伤大鼠模型以八味沉香散灌胃.利用流...     

高压氧治疗对沙土鼠脑缺血再灌注海马CA1区神经元凋亡的影响

目的:观察高压氧 (HBO) 作用下沙土鼠脑缺血再灌注海马CA1区神经元凋亡的变化,探讨HBO对脑缺血再灌注损伤的疗效及其机制.方法:建立沙土鼠脑缺血后再灌注模型,用HBO治疗连续3 d后,应用H-E和TUNEL染色方法,观察海马CA1区神经元的凋亡情况.结果:两种方法均显示沙土鼠脑缺血再灌注3 d后海马CA1区大量神经元凋亡,HBO治疗组凋亡细胞数明显减少(P<0.01),并以0.25 ATA HBO治疗组为佳.结论:HBO治疗对海马神经元缺血性损伤有保护作用,能减少其凋亡,是HBO治疗脑缺血性损伤的疗效机制之一.     

地塞米松对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡的影响

目的：探讨凋亡机制在地塞米松（DXM）加剧脑局灶缺血再灌注后神经元损伤中的意义。方法：缺血前3天始腹腔注射DXM,采用线栓法大鼠右侧大脑中动脉阻塞检测,TTC染色后测定脑梗死体积,TUNEL法标记凋亡阳性细胞。结果：应用DXM大鼠缺血再灌注后脑梗死体积较对照组明显增加,不同剂量DXM组间脑梗死体积差别无显著性意义;应用DXM大鼠细胞凋亡指数较对照组明显增加,且不同剂量DXM组之间细胞凋亡指数差别有显著性意义。结论：DXM诱导缺血再灌注后神经的凋亡可能是引起局灶缺血再灌注损伤加剧的机制之一。     

脑血管内皮细胞损伤对大鼠脑缺血再灌注神经元凋亡的影响

目的:探讨脑缺血再灌注脑血管内皮细胞损伤、内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)与神经元凋亡的关系。方法:采用4血管夹闭法制作大鼠脑缺血再灌注模型,观察缺血再灌注不同时间内皮素、一氧化氮及脑血管内皮细胞超微结构变化对神经元凋亡的影响。结果:脑缺血再灌注组缺血10m in血浆ET-1含量显著升高,再灌注24h有所下降,于72h又开始升高,血浆NO于再灌注24h有所下降,48h时间点又恢复到缺血时水平。全脑缺血10m in内皮细胞部分缺损,凋亡神经元数量较少,缺血再灌注24h内皮损伤加重,凋亡神经元数量明显增加,至48h达到高峰,再灌注72h,凋亡神经元数量明显减少。结论:脑缺血再灌注ET-1含量升高,NO水平下降,内皮损伤加重可导致神经元进一步损害。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡及认知功能的研究

目的探讨大鼠脑缺血再灌注海马神经元凋亡及认知功能变化。方法雄性SD大鼠60只,随机分成假手术组（SH组）、模型组（IR组）。模型组采用4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,不同时间点进行水迷宫测试。TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞。结果尼氏染色显示,与假手术组间比较,缺血组海马CA1区神经元数量显著下降（P〈0.01）;TUNEL法检测显示：与假手术组相比,凋亡指数显著增加（P〈0.01）。Morris水迷宫检测,与假手术组相比,模型组大鼠学习阶段寻台时间明显延长,而其记忆测试潜伏期也明显长于假手术组。结论大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡显著增加,认知功能明显下降。     

亚低温对鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的研究

在复制鼠脑缺血再灌注损伤模型的基础上，利用亚低湿作为治疗手段，观察亚低温对鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其对氧自由基的影响。结果发现：亚低温度（３３℃、３３℃）能降低脑缺血再灌注性损伤脑皮质的水肿程度，减少ＭＤＡ产生，保护ＳＯＤ活力，且以３０℃低温作用更为显著。结果提示：亚低湿对鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，且随低温程度加深而增加；同时提示，抑制自由基产生，保护ＳＯＤ活力可能为亚低温保护作用机制     

大鼠全脑缺血再灌注后海马区细胞凋亡及bcl-2和Bax的检测

目的：证实缺血性脑损伤主要是以细胞凋亡的方式发生。方法;用ＴＵＮＥＬ法标记检测损伤的神经细胞,用原位杂交组织化学法检测ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ,用免疫组织化学法检测Ｂａｘ蛋白。结果：手术组检测到ＴＵＮＥＬ标记的阳性神经细胞主要位于海马ＣＡ１区,渐进性增多,第３天达到高峰,可检测到凋亡小体和正在形成凋亡小体的神经细胞。     

亚低温对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡和caspase-3释放的影响

目的 从信号转导及细胞凋亡角度,研究亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤(I/R)的脑保护作用及机制。方法 72只雄性健康SD大鼠,随机分成假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、亚低温组(M组),每组24只;三组缺血10min后分别按再灌注12h、24h、48h,再分为3个亚组,各亚组动物均为8只。大鼠脑缺血再灌注损伤模型制作采用改良四血管阻滞法,免疫组化SP法动态观察各个时间点海马CA1区caspase-3蛋白的变化;光镜和电镜分别观察再灌注48h亚组海马CA1区神经细胞形态和线粒体超微结构的改变。结果(1) 大鼠脑缺血再灌注损伤后12h海马CA1区caspase-3即有明显表达,24h达高峰,48h后仍有较高表达;(2) IR组和M组各时间点caspase-3表达水平比S组明显升高(P<0.05);24h亚组线粒体超微结构和神经细胞形态受损严重;(3) M组各个时间点caspase-3表达水平较IR组明显下降(P<0.05或P<0.01);24h亚组线粒体超微结构和神经元形态均有不同程度的改善。结论 亚低温对caspase-3依赖的线粒体凋亡通路有干预作用,通过维持线粒体膜稳定,抑制释放和激活caspase-3蛋白,保护线粒体的形态功能,从而减少神经细胞凋亡的发生,发挥脑保护作用。     

替勃龙对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡的影响

目的:研究雌激素对缺血性脑损害的神经保护作用是否与抗神经元凋亡有关。方法:30只雌性成年SD大鼠,随机分为假手术组(sham),手术对照组(OVX),替勃龙组\[0.25 mg/(kg·d)\];采用大鼠大脑中动脉闭塞制成局灶性脑缺血模型。在缺血2 h、再灌注24 h后立即断头取脑,应用2,3,5-三苯基氯化四唑(TTC)染色观察脑梗死体积,TUNEL法检测凋亡细胞,链酶菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)法检测抗凋亡基因Bcl-2、细胞凋亡诱导因子Bax和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶caspase-3的表达。结果:替勃龙用药组较手术对照组脑梗死体积显著缩小(P<0.05),TUNEL阳性细胞数减少(P<0.01),Bcl-2阳性细胞增多(P<0.01),Bax及caspase-3阳性细胞减少(P<0.01)。结论:替勃龙可抑制去卵巢大鼠局灶性脑缺血再灌注时神经细胞凋亡,具有神经保护作用。     

短暂性脑缺血再灌注损伤对老年大鼠认知功能及海马神经元凋亡的影响

目的探讨短暂性脑缺血再灌注损伤对老年大鼠认知功能及海马神经元凋亡的影响。方法老年雄性Wistar大鼠60只,随机分为脑缺血1min组(A组)、脑缺血5min组(B组)和假手术组(C组),各20只。用Pulsineli方法建立全脑缺血模型。3组分别于再灌注12h和再灌注3d处死10只大鼠,应用TUNEL法检测海马神经元凋亡,Morris水迷宫实验评价认知功能。结果 A组及C组再灌注12h和再灌注3d有少量神经元凋亡,两组TUNEL阳性细胞计数比较差异无显著性(P>0.05);B组再灌注12h和再灌注3d神经元凋亡计数较A组、C组明显增加,差异有显著性(F=17.44,P<0.01);B组再灌注3d神经元凋亡明显增加,与再灌注12h比较差异有显著性(t=3.05,P<0.05)。水迷宫检测结果显示,与A组和C组比较,B组大鼠再灌注12h和再灌注3d逃避潜伏期和学习潜伏期明显延长(F=29.84、34.11,P<0.01)。B组再灌注12h和再灌注3d逃避潜伏期和学习潜伏期差异无统计学意义(P>0.05)。A组与C组比较,再灌注12h和再灌注3d逃避潜伏期和学习潜伏期差异无显著性(P>0.05)。结论短暂性脑缺血5min即可造成老年大鼠神经元凋亡增加、出现认知功能障碍。     

尼莫通对大鼠脑缺血再灌注时细胞凋亡的影响

①目的 探讨尼莫通过大鼠脑缺血再灌注时细胞凋亡的影响。②方法 对实验大鼠于脑缺血前应用尼莫通进行干预,在脑缺血再灌注不同时间内,用免疫组化法检测凋亡相关基因ｃ－ｆｏｓ及ｂｃｌ－２蛋白表达的变化。③结果 尼莫通组大鼠脑缺血后的梗死体积显著减小（ｔ＝２．７９,Ｐ〈０．０５）;尼莫通组脑缺血再灌注时皮层和基底核区ｃ－ｆｏｓ的表达明显下降（ｔ＝４．８４,６．１４,Ｐ〈０．００１）,而ｂｃｌ－２蛋白的表达明     

亚低温复合山莨菪碱颈动脉灌注对大鼠脑缺血再灌注自由基的影响

探讨亚低温复合山莨菪碱颈动脉灌注对大鼠脑缺血再灌注损的影响。方法利用前脑缺血模型及动脉灌注技术，观测缺血再灌注后不同时间点ＳＯＤ、ＭＤＡ、ＮＯ、ＮＯＳ变化。结果亚低温及静脉复合用药能显著促进ＳＯＤ活性恢复、抑制ＮＯＳ活性与ＭＤＡ、ＮＯ值的升高；以亚低温复合大剂量山莨菪碱颈动脉灌注疗最佳。     

全身亚低温对脑缺血再灌注海马CA1区Bcl-2、Bax表达影响的动态变化

目的　研究脑缺血再灌注后全身亚低温的脑保护作用及其对Bcl- 2、Bax表达的动态影响。方法　 12 6只S -D雄性大鼠随机分为假手术组、常温组和亚低温组。采用Pulsinelli四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型 ,即刻全身亚低温 4h ,分别在 7个时间点取脑标本 ,进行Bcl- 2、Bax免疫组织化学及苏木精 -伊红染色。结果　与常温组相比 :亚低温组海马CA1区死亡细胞数明显减少 (P <0 .0 1) ;Bcl - 2蛋白免疫反应强度峰值增高持续时间延长 ;Bax蛋白免疫反应强度峰值减低 ,持续时间缩短。结论　全身亚低温对缺血再灌注锥体细胞损害有较好的保护作用。可增强具有抗凋亡的Bcl- 2蛋白的表达 ,延长其表达持续时间 ;而减弱具有促凋亡的Bax表达 ,同时缩短其表达持续时间。此可能是亚低温对缺血再灌注脑组织损害产生保护作用的分子机制之一。     

全脑缺血再灌注后海马神经元凋亡及组织NO含量动态变化的研究

目的:观察全脑缺血15 m in后再灌注不同时间点海马神经元凋亡及海马组织NO含量的动态变化。方法:采用4血管闭塞法制备大鼠全脑缺血再灌注模型,采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测缺血15 m in后再灌注1 d、2 d、3 d、5 d、7 d时海马神经元凋亡情况;硝酸还原酶法检测各时间点海马组织中NO含量。结果:DNA琼脂糖凝胶电泳显示:在再灌注1 d时呈大致正常条带,2 d、3 d呈“梯状条带,”5和7 d出现了代表部分神经元坏死的涂抹状条带;流式细胞仪检测结果显示:在脑缺血再灌注1 d时,海马神经元凋亡率即明显增加,再灌注3 d时凋亡率达高峰,随后凋亡率逐渐下降,7 d时大致达正常水平;海马组织中NO含量于再灌注后2 d明显升高,3 d达峰值,以后逐渐下降,7 d降至接近对照组水平。结论:全脑缺血再灌注后海马神经元凋亡和NO含量均于再灌注3 d时达高峰,7 d大致恢复至正常水平,提示NO增多可能是诱导海马神经元凋亡的机制之一。     

大鼠小脑缺血再灌注损伤的细胞凋亡航尼莫通的保护作用

目的：探讨小脑缺血再灌注损伤神经元的死亡方式及尼莫通的保护作用。方法：将实验用ＳＤ大鼠１５只分为三组，即缺血再灌组、药护组、正常对照组。采用四血管闭塞法制作全脑缺血再灌注动物模型，再灌后４８小时取小脑，石蜡包埋切片。应用末端转移酶介导的缺口末端标记法原位检测凋亡细胞。药护组缺血前３０分钟腹腔注射尼莫通。结果：在小脑皮质及小脑核均见反应阳性的凋亡细胞，药护组的凋亡细胞数显著少于缺血组。结论：细胞凋亡