HPV16型E6C真核表达质粒的构建及其免疫小鼠后对T细胞增殖的影响

目的研究HPV16型E6早期蛋白C端编码区基因片段(E6C)免疫小鼠的作用。方法利用基因重组技术构建含HPV16型E6C的真核表达质粒,用此质粒肌肉注射免疫C57BL／6小鼠,观察该疫苗对小鼠T细胞增殖的影响。结果实验组小鼠T细胞与对照组相比,增殖明显增强。结论应用该质粒能够诱导机体的细胞免疫反应增强,为乳头瘤病毒相关疾病的预防和治疗提供了思路。     

O型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达

目的口蹄疫病毒的VP1蛋白是诱导中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达VP1基因,为建立O型口蹄疫抗体血清学诊断方法奠定基础.方法将O型口蹄疫病毒VP1基因插入pFastBacHIa载体,构建重组质粒pFast BacHIa-VP1.将该重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,VP1基因与Bacmid发生特异性位点转座.经PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到病毒基因组多角体蛋白基因启动子下游,提取阳性质粒转染Sf9昆虫细胞.结果 SDS-PAGE电泳和Western blot检测结果表明VP1基因成功地在Sf9昆虫细胞中进行了表达,蛋白分子量为26.4kDa.结论 VP1基因在Bac-to-Bac系统中的成功表达为口蹄疫病毒VP1蛋白的抗原性、免疫原性以及免疫抗体水平检测研究奠定了基础.     

HPV16型E6C真核表达质粒的构建及其免疫小鼠后对T？…

目的：研究ＨＰＶ１６型Ｅ６早期蛋白Ｃ端编码区基因片段（Ｅ６Ｃ）免疫小鼠的作用。方法：利用基因重组技术构建含ＨＰＶ１６型Ｅ６Ｃ的真核表达质粒，用此质粒肌肉注射免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，观察该疫苗对小鼠Ｔ细胞增殖的影响。结果：实验组小鼠Ｔ细胞与对照组相比增殖明显增强。结论：应用质粒能够诱导机体的细胞免疫反应增强，为乳头瘤病毒相关疾病的预防和治疗提供了思路。     

wCTLA-4胞外段与HBc融合DNA疫苗的构建和真核表达

目的构建土拨鼠细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4（wCTLA-4）细胞外部分和人乙型肝炎病毒核衣壳（HBe）融合蛋白表达质粒pwCTLA-4-HBe并在真核细胞中表达。方法通过限制性酶切和T14连接,以HBc基因片段置换pwCTLA-4-WHc质粒中的WHc片段,得到质粒pwCTLA-4-HBc,分别转染幼仓鼠肾细胞系（BHK）和人宫颈癌细胞系（Hela）,间接免疫荧光和化学发光免疫法检测融合蛋白的表达。结果融合蛋白编码质粒转染BHK细胞后可检测到HBc抗原免疫荧光,转染Hela细胞后细胞裂解液和培养上清中均可检测到融合蛋白。结论成功构建wCTLA-4胞外段和HBc融合蛋白表达质粒pwCTLA-4-HBe,融合蛋白可以在真核细胞表达并分泌到细胞外。     

HIV-I编码病毒蛋白R基因在真核细胞中的表达及其表达蛋白对KSHV溶解性周期复制的影响

目的:构建含人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)编码病毒蛋白R(Vpr)基因的重组真核表达质粒并初步探索Vpr基因编码蛋白对卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)溶解性周期复制的影响.方法:构建pVpr-Flag重组质粒并进行酶切鉴定和序列测定;将pVpr-Flag重组质粒临时转染BCBL-1和NIH3T3细胞,采用RT-PCR、IFA和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测Vpr基因的表达情况:提取临时转染pVpr-Flag重组质粒的BCBL-1细胞总RNA,进行RT-PCR检测KSHV次要衣壳蛋白编码基因ORF26(仅在病毒裂解期表达)mRNA转录水平,初步探索HIV-1 Vpr基因编码蛋白对KSHV复制的影响.结果:克隆的Vpr基因序列与GenBank中已登记的Vpr序列100%同源.RT-PCR、IFA和Western blot结果显示Vpr基因mRNA及其编码蛋白在真核细胞中得到了转录和表达.RT-PCR结果进一步显示,Vpr基因编码蛋白能够降低KSHVORF26mRNA转录水平.结论:成功构建含Vpr基因序列的重组质粒并在真核细胞中获得正确表达:初步探索表明Vpr蛋白能够抑制KSHV溶解性周期复制.     

肾综合征出血热患者尿融合细胞内病毒G区基因及其蛋白表达

目的：研究肾综合征出血热（HFRS）患者尿融合细胞内汉坦病毒（HV）G区靶基因（膜蛋白基因）RNA、mRNA的定位和HV膜蛋白在尿融合细胞中的表达定位。方法：设计针对病毒M片段G基因区的探针，地高辛素标记，运用核酸原位杂交技术检测靶基因RNA和mRNA在尿融合细胞中的定位。同时用SABC免疫组化法检测病毒膜蛋白在尿融合细胞中的表达定位。结果：病毒靶RNA和mRNA检出于细胞核和细胞浆。21例中，14例阳性，阳性率66.6%(14/21)，其中核型9例，核浆混合型5例。病毒膜蛋白检测，21例中16例阳性，阳性率76.2%(16/21)，病毒膜蛋白表达见于细胞膜。两者阳性率相比较差异无显著性（P＞0．05）。结论：HFRS病毒膜蛋白的表达与病毒编码该蛋白的G基因区RNA、mRNA均可在患者尿融合细胞内检出。     

HFRSV感染NIH裸鼠抗原定位研究

目的探讨肾综合征出血热病毒感染NIH裸鼠抗原在各脏器的分布情况，观察其分布规律。方法经裸鼠腹腔注射肾综合征出血热病毒液，裸鼠发病后，濒死状态处死，进行免疫组织化学、电镜和光学显微镜观察。结果感染肾综合征出血热病毒裸鼠，其肺、脑、肾、肝、心脏和脾组织内均检测到特异性抗原，抗原主要分布于细胞浆，以高尔基器及其周围囊泡较多。结论肾综合征出血热病毒感染NIH裸鼠，病变可广泛侵犯裸鼠各组织器官，导致细胞损伤。     

Her2/neu膜外及跨膜区蛋白基因重组腺病毒的构建和鉴定

目的 构建编码Her2/neu膜外第一受体区、全长膜外区、膜外及跨膜区3个蛋白的重组腺病毒真核表达载体,为信号传导和免疫研究建立实验材料.方法 RT-PCR扩增出3个目的片段的cDNA,克隆进pAdTrack-CMV穿梭质粒,在BJ5183细菌内同源重组形成腺病毒质粒,脂质体法转染293细胞后,荧光显微镜观察病毒噬斑形成和绿色荧光蛋白表达,Western blot检测目的蛋白的表达.结果 PCR扩增出了预定大小的目的基因cDNA片段,测序结果和GenBank完全相符.病毒质粒转染293细胞后形成了病毒噬斑,绿色荧光蛋白和目的蛋白均获得表达.目的蛋白的表达量随着病毒感染复数的升高而增加.结论 成功地构建了在真核细胞中表达Her2/neu膜外及跨膜区蛋白的腺病毒载体,为Her2/neu膜外及跨膜区蛋白的功能研究提供了材料基础.     

HPV致宫颈癌机制研究进展

人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）是一类无包膜的具有嗜上皮特性的双链DNA病毒,由核酸及衣壳蛋白构成,其基因组可分为早期编码区（E区）、晚期编码区（L区）和长控制区（LCR）,研究表明高危型HPV的持续感染与宫颈癌的发生密切相关,当HPV病毒感染机体后,其基因组可随机整合到宿主细胞DNA中,随后沉默E2基因的表达,削弱E2蛋白对E6、E7基因的抑制,使E6、E7蛋白过表达,辅以E5蛋白的表达,促使感染细胞永生化甚至癌变。因此研究HPV的病毒结构及其致病机制对防治HPV感染及预防HPV相关恶性肿瘤,尤其是宫颈癌的发生、发展尤为重要。本文拟就HPV的病毒结构、致病机制研究进展进行综述。