人感染H7N9禽流感病毒的流行特征分析

目的分析人感染H7N9禽流感病毒的流行特征,并对人感染H7N9禽流感与外界环境导致发病之间的关联进一步了 解遥方法分析自然因素尧社会因素对人感染H7N9病毒流行特征的特点尧影响因素遥结果收集我科室68 例人感染H7N9禽流感 病毒病例,根据地区分布有3 例死亡曰根据年龄比较,逸60 岁的有45 例,臆60 岁的有23 例曰根据性别院男性38 例,女性30 例曰 根据职业院离退休人员有22 例,农民有26 例,其他职业有20 例曰根据接触禽类史情况院确定与禽类接触史的有14 例,剩余为不 确定是否有接触史的有54 例曰根据按月份院3 月21 例,4 月47 例曰比较发病至入院隔离时间院有33 例入院时间明确,当天入院 患者有11 例,最长在12 d后入院曰比较发病时间和检测时间院在进行H7N9检测中,有21 例是在4 d内,47 例在9 d内遥结论 人感染H7N9禽流感病毒的流行特征经过分析后,未能明确传染和流行特征遥因此,需要对疫情加强监测,对自然尧社会因素的 作用进行深入研究     

北京市首例人感染H9N2禽流感病例的流行病学调查

目的 分析2016年12月北京市朝阳区确诊的l例人感染H9N2禽流感病例流行病学特征.方法 访谈病例发病前后的相关知情人,调查病例发病经过和可能感染来源.采集病例、密切接触者及环境标本,应用实时荧光定量PCR(real-timePCR)方法,检测甲型流感病毒及H9N2禽流感病毒特异的核酸片段.对病例咽拭子标本和l件阳性环境标本中的H9N2禽流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)基因进行序列测定和分析.结果 病例表现为轻症流感样病例症状,发病前15天曾有活禽市场暴露史.该市场环境标本中H9N2禽流感病毒阳性率为18.2％ (2/11).病例咽拭子标本与市场环境标本中病毒的HA基因高度同源,氨基酸相似度为100％,在进化关系上同属于欧亚系的Y280分支.4名密切接触者在医学观察期内未出现过发热、咳嗽等呼吸道症状.结论 病例感染来源与活禽市场环境暴露有关.加强流感监测以及活禽市场的管理对于防控人感染禽流感疫情具有重要意义.     

抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的 :制备抗禽流感病毒 (AIV)H9亚型血凝素蛋白的单克隆抗体 (mAb)。方法 :以AIVH9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原 ,免疫 8wk龄BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹水mAb的效价 ;采用ELISA、HI、免疫荧光染色 (IF)及Westernblot鉴定mAb的特异性。结果 :获得 3株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株 2A3、2H1和 1C8,其腹水mAb的ELISA效价依次为 1× 10 7、1× 10 5和 5× 10 6,血凝抑制效价为 1× 2 8～ 1× 2 13 ;3株mAb的Ig亚类均为IgG1。以mAb 2H1进行Westernblot的结果显示 ,该mAb能与AIV的Mr 为 75 0 0 0的蛋白条带起反应 ,表明其是针对AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb。与 32株AIVH9亚型国内分离株进行血凝抑制试验表明 ,mAb 2H1具有良好的广谱性。结论 :成功地制备了抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ,为AIV的抗原性分析、血清学诊断、疫苗质量的监测及流行病学调查等奠定了基础     

基于iTRAQ技术的人感染H7N9禽流感病例血浆蛋白质组学特征分析

目的 分析人感染H7N9禽流感病例与正常人之间血浆蛋白质组学差异.方法 收集华北地区首例人感染H7N9禽流感病例发病期和恢复期血浆标本,以及同时期病例父亲(未感染病毒)血浆标本,分离提取血浆蛋白,通过同位素标记相对与绝对定量(isotopically labeled relative and absolute quantification,iTRAQ)技术联合液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术对样本进行蛋白质质谱检测.利用PANTHER平台对差异蛋白质组进行Gene Ontology(GO)注释以及基因路径(pathway)分析.结果 本研究鉴定得到与人感染H7N9禽流感病毒感染相关的差异表达蛋白共250个,其中表达上调蛋白合计159个,表达下调蛋白合计91个.这些差异蛋白共参与了11个生物学过程、共参与了7个分子通路.结论 入感染H7N9禽流感病毒可能导致7个分子通路发生改变.     

我国分离人H5N1禽流感病毒血凝素基因特性的研究

目的 分析我国分离的人高致病性禽流感H5N1病毒的抗原性以及基因特性.方法 对所分离的H5N1病毒的血凝素基因和神经氨酸酶基因进行序列测定.结果 对血凝素基因的序列测定结果表明从我国分离的H5N1病毒具有较高的同源性,但是与越南、泰国等国家分离的H5N1病毒明显不同.序列测定的结果同时表明无论是受体特异性还是连接肽都是禽源的.结论 目前我国分离的H5N1病毒属于同一个组,与泰国、越南分离毒株不同,并且发现病毒的特性仍然是禽源的,没有发现从禽到人的重组或者重配。     

2016年淮南市外环境H7N9禽流感病毒基因组特征分析

目的:分析淮南市2016年度外环境标本中H7N9禽流感病毒基因组特征。方法:采集活禽市场禽类粪便、笼具、台面或砧板、脱毛机、禽类饮水、污水等标本,选取H7N9、H9亚型PCR检测阳性标本( Ct值≤30),鸡胚分离培养后提取RNA,扩增8个基因节段进行基因序列测定、分子特征与进化分析。 结果:20...     

人感染H7N9禽流感临床病理学特征分析

目的探讨人感染高致病H7N9禽流感的临床病理学特征。方法收集12例人感染高致病H7N9禽流感患者的临床资料,其中3例有病理资料,分析其流行病学及病理学特征。结果流行病学统计显示H7N9禽流感最常见的症状为发热、咳嗽、咳痰、气促,伴全身酸痛、乏力等。血常规示白细胞计数正常或下降,淋巴细胞计数及比例下降,合并感染者白细胞计数和(或)中性粒细胞百分比升高;血气分析提示严重低氧血症、呼吸衰竭等。胸部影像学检查表现为双肺弥漫性斑片状、磨玻璃影及肺实变影且进展迅速。3例病理学显示:例1,左主气管赘生物纤支镜活检:形态学符合坏死性气管炎;例2,右下肺纤支镜活检:提示肺部急性感染性病变;例3,因气胸在体外膜氧合(ECMO)辅助通气胸腔镜下(VATS)行右肺大疱修补术,病理检查结果提示弥漫性肺泡损伤合并肺大疱。结论人感染H7N9禽流感的流行病学表现为病情进展迅速、凶险,临床表现为重症肺炎、多脏器功能衰竭等;针对具有疑似症状的患者,相关的临床检查及病理组织活检对该病诊断与鉴别诊断具有重要意义。     

北京市1例人感染H9N2禽流感病例的流行病学调查与分析

目的 分析北京市人感染H7N9禽流感疫情强化监测中发现的1例人感染H9N2禽流感病例流行病学调查情况,为今后科学防控人感染H9N2禽流感疫情提供参考.方法 采用现场流行病学和实验室检测相结合的方法,收集病例流行病学资料,采集并检测病例、暴露环境和密切接触者等标本,分析流行病学特征和可能的感染来源.结果 病例发病第3日和第7日咽拭子标本检测均为H9N2禽流感病毒核酸阳性.病例发病前10天内无禽类接触史,但病例平时活动有暴露于H9N2禽流感病毒污染环境的可能.密切接触者在医学观察期内均未出现流感样症状.结论 该病例为北京市首例成人感染H9N2禽流感确诊病例,同时也是北京市第二例H9N2禽流感确诊病例.医疗机构加强流感样病例监测是及时发现人感染H9N2禽流感病例的重要手段.     

禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体的研制和初步应用

目的：获得特异针对禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体。方法：以H9N2亚型病毒制成疫苗免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与SP2／0细胞融合，取细胞上清用HI筛选。结果：共获得9株稳定分泌针对血凝素蛋白抗体的杂交瘤细胞；经广谱性和特异性鉴定，所有单抗株均能与所有检测的82株不同年代不同地方不同禽源H9亚型流感病毒大部分分离株反应，且所有单抗株均不与非AIV-H9病毒反应，而其中一株（8E6）能与所有检测的H9亚型病毒株反应。进行Western blot分析显示，其中8株单抗能与AIV的Mr为75000处反应，表明是针对AIVH9HA的单抗。结论：本试验获得9株广谱性特异性很好的单抗，特别是8E6株；这些单抗株为以后作病毒抗原性位点分析、临床检测和流行病学调查提供了良好试剂。     

人感染H7N9禽流感疫情形势与应对策略

自2013年3月31日上海市和安徽省发现人感染H7N9禽流感确诊病例后,多省市陆续报告新增病例,疫情波及区域不断扩大.我国反应迅速,多部门合作,形成联防联控工作机制,采取了一系列有效的措施[1],如关闭活禽市场,加强高危人群和禽类的病原学监测等,从而遏制了疫情进一步扩大[2].本文就目前全国人感染H7N9禽流感疫情形势以及应对策略进行了评述.     

H9N2禽流感病毒一步法双重荧光RT-PCR检测方法的建立

目的 建立一种可同时检测禽流感病毒H9N2的HA和NA基因一步法双重荧光RT-PCR方法.方法 针对H9N2禽流感病毒的HA和NA基因保守区,设计相应的特异性引物以及探针,优化检测体系及反应条件,建立一步法双重荧光定量RT-PCR方法.对该方法的灵敏度、特异性、稳定性进行验证与评估,并对家禽粪便标本进行应用检测,以单重实时荧光RT-PCR方法作为参照,检测结果不一致的样本采用测序进行验证.结果 该方法特异性强,与H1、H3、H5、H7亚型禽流感病毒、鸡新城疫及鸡传染性支炎病毒均无交叉反应,对HA和NA基因的最低检出限分别可达50拷贝/μL和25拷贝/μL,组间与组内的变异系数在0.20 ～0.79％之间.对82份粪便标本进行检测,H9N2禽流感病毒的阳性率为8.14％ (7/82),与单重实时荧光RT-PCR法检测结果一致.结论 该方法特异性强、灵敏度高、稳定性好,可应用于临床禽流感样本的检测.     

整合深圳人源H5N1禽流感病毒株血凝素蛋白的假型逆转录病毒的构建

目的 构建整合深圳人源H5N1禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)株血凝素(HA)的假型逆转录病毒.方法 利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增深圳人源H5N1禽流感病毒株HA基因,将扩增产物与pGEM-T载体连接,在经过酶切及测序鉴定后,通过Sal Ⅰ与BamHⅠ酶切位点将HA基因克隆至真核表达载体CMV/R,然后协同转移载体pHR-Luc、包装载体pCMV&8.2通过磷酸钙共沉淀法转染人胚肾细胞(293T),72 h后收集假病毒上清,超速离心后通过Western blot鉴定假病毒颗粒HA、P24蛋白的表达,同时测定HIV-HA假病毒对犬肾传代细胞(MDCK)、宫颈癌上皮细胞(HeLa)、中国仓鼠卵母细胞(CHO)和293T等4种不同细胞株的感染活性.结果 深圳人源HSN1禽流感病毒株A/Shenzhen/406H/06属于subelade2.3,其HA基因开放读码框编码567个氨基酸,在GenBank登录号为EF137706.经Sal Ⅰ与BamH Ⅰ双酶切鉴定HA基因成功克隆至真核表达载体CMV/R.将pHR-Luc、pCMV&8.2、CMV-HA共转染293T细胞后,所收集的假病毒经Western blot证实假病毒颗粒不仅含有HIV基质蛋白P24,还可以整合AIV HA蛋白,并且能够由前体蛋白HA0裂解为具有生物活性的HA1和HA2蛋白.HIV-HA假病毒可以感染MDCK、HeLa、CHO、293T等4种靶细胞,表明所构建的假病毒具有感染活力,且具有广泛的宿主范围.结论 本研究成功构建整合A/Shenzhert/406H/06 HA蛋白的假型逆转录病毒,并且HIV-HA假病毒具有良好的感染活性,从而为下一步筛选中和抗体及抗原表位分析奠定基础.     

禽H9N2亚型流感病毒能感染人的发现

目的了解禽（Ｈ９Ｎ２）亚型流感病毒是否能感染人。方法对人、鸡和猪进行Ｈ９亚型毒株血清流行病学调查。对流感样患者和鸡咽喉部采样,用常规鸡胚双腔法分离流感病毒并进行毒株鉴定。对分离出Ｈ９Ｎ２亚型毒株的患者进行个案调查。结果约１９％的人含有对Ｈ９Ｎ２毒株的抗体,其ＨＩ滴度为≥２０,从流感样患者中分离到５株Ｈ９Ｎ２病毒。结论Ｈ９Ｎ２亚型毒株能自然感染人。     

一例儿童轻型人感染H7N9禽流感确诊病例调查

目的 分析2013年北京市海淀区一例人感染H7N9禽流感病例的发病、诊治和感染来源情况,提出疫情控制措施.方法 采集患儿标本进行实验室检测,应用《人感染H7N9禽流感个案调查表》对患儿及其家属开展面对面问卷调查,获得现场资料.结果 患儿以上呼吸道症状为首发症状,经门诊治疗痊愈,传染源不明.患儿无肺部感染,未服用达菲,经过抗炎、抗病毒治疗.结论 人感染H7 N9禽流感是一种新出现的传染病,传染和流行特征未明,要加强流感样病例监测、流感病原学监测、不明原因肺炎监测等传染病监测工作,及时发现病例,及早采取防治措施.     

一例儿童轻型人感染H7N9禽流感确诊病例调查

目的 分析2013年北京市海淀区一例人感染H7N9禽流感病例的发病、诊治和感染来源情况,提出疫情控制措施调整意见.方法 采集患儿标本进行实验室检测,应用《人感染H7 N9禽流感个案调查表》与患儿及其家属面对面问卷调查,获得现场资料.结果 患儿以上呼吸道症状为首发症状,经门诊治疗痊愈,传染源不明.患儿无肺部感染,经过抗炎、抗病毒治疗,未服用达菲.结论 人感染H7 N9禽流感是一种新出现的传染病,传染和流行特征未明,要加强流感样病例监测、流感病原学监测、不明原因肺炎监测等传染病监测工作,及时发现病例,及早采取防治措施.     

慢病毒介导的H7N9禽流感病毒血凝素基因快速真核表达系统的建立

目的利用慢病毒载体构建新型H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因的快速真核表达体系,在人胚肾细胞(HEK293T)中表达并进行功能鉴定。方法提取H7N9禽流感病毒基因组RNA,采用反转录PCR技术扩增HA读码框全长基因,将HA基因连接pMD18-T载体构建pMD18-T-HA重组载体。设计含Kozak序列的引物从pMD18-T-HA质粒中扩增出平末端HA基因,采用Topo克隆构建表达载体pLenti-HA-V5。将表达载体转染HEK293T细胞,通过间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法鉴定HA蛋白的表达,通过血凝实验鉴定重组蛋白的生物学活性。结果经反转录PCR获得1 683 bp的HA全长基因,完成真核表达载体的构建并表达出相对分子质量(Mr)为70 000的重组蛋白。IFA和Western blot法结果显示该蛋白与阳性血清具有良好的免疫反应,同时血凝实验证实其具有血凝活性。结论成功利用慢病毒载体建立了HA蛋白的快速真核表达系统,为研制H7N9病毒亚单位疫苗、中和表位研究、假病毒包装奠定基础。     

抗禽流感病毒H7亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制

目的:研制禽流感病毒H7亚型血凝素特异性单克隆抗体(mAb)。方法:以H7亚型禽流感诊断抗原为免疫原免疫6～8周雌性BALB/c小鼠,末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14进行融合。通过HA和HI试验筛选阳性克隆。应用HI试验和Western blot试验测定mAb的反应性和特异性。结果:共获得4株分泌抗AIVH7亚型HAmAbs的杂交瘤细胞株,分别命名为2E2、2A4、5F5、7G5。这些mAb的腹水HI效价在5×27～5×211之间,其中2E2属于IgM亚类,2A4属于IgG1亚类,5F5、7G5属于IgG2a亚类。Western blot分析结果显示,4株AIVH7亚型HAmAb能与AIVH7蛋白在Mr75000处反应,但不与新城疫病毒(NDV)蛋白发生反应,表明这些mAb能特异性识别AIVH7亚型HA。mAbHI反应性测定结果表明:4株mAb中,2E2、5F5、7G5只与H7亚型AIV发生特异性HI反应,而不与其他亚型AIV以及NDV、传染性支气管炎病毒(IBV)反应,显示出良好的特异性;而2A4除了与H7亚型AIV反应外,还与H15N8标准株发生低水平交叉反应。结论:这些mAb不仅为H7亚型AIV的HA结构分析提供了工具,而且为建立快速廉价的H7亚型禽流感诊断方法提供了核心试剂。