TNF-α对大鼠肺微血管内皮细胞SSeCKS表达的影响及甲强龙的干预作用

目的研究肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对培养大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）中Src抑制的蛋白激酶C底物（SSeCKS）表达的影响及甲基强的松龙（甲强龙）对TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性损伤和SSeCKS表达的干预作用,探讨SSeCKS是否具有调控PMVEC单层通透性的作用。方法根据TNF-α刺激时间与浓度的差异,将培养的大鼠PMVEC随机分为TNF-α时间刺激组与浓度刺激组,前组以5000U/ml的TNF-α分别与PMVEC作用0.5、1.5、3、6、12h;后组分别以200、1000、5000U/ml的TNF-α与PMVEC作用3h。药物干预：分别以5000U/ml的TNF-α和0.2mg/ml的甲强龙＋5000U/ml的TNF-α与PMVEC作用1.5h。以正常PMVECSSeCKS的表达作为对照,运用RT-PCR法及Western-blot法检测SSeCKSmRNA及蛋白的表达变化。用针头式滤器检测TNF-α（5000U/ml）组及甲强龙（0.2mg/ml）＋TNF-α（5000U/ml）组作用1.5h后大鼠PMVEC单层通透系数（Kf）,以正常PMVEC单层通透性作对照。结果正常情况下大鼠PMVEC呈低表达SSeCKS。5000U/ml的TNF-α作用PMVEC后,SSeCKSmRNA及蛋白的表达自0.5h开始增高,3h达到高峰,随后渐行性下降但维持较高表达水平至12h,以上各时间点mRNA及蛋白的表达均明显高于正常对照组。200、1000、5000U/ml的TNF-α作用PMVEC后,SSeCKSmRNA及蛋白的表达依次递增,均明显高于正常对照组。甲强龙＋TNF-α组SSeCKS的蛋白表达明显低于TNF-α组,而甲强龙＋TNF-α组PMVEC单层通透系数（Kf）也明显低于TNF-α组。结论 TNF-α以时间及浓度依赖的方式上调大鼠PMVEC中SSeCKS的mRNA及蛋白表达。甲强龙在抑制TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性增加的同时,降低SSeCKS蛋白高表达水平。提示SSeCKS参与TNF-α诱导大鼠PMVEC单层通透性损伤,可能具有调控PMVEC单层通透性的作用。     

CTRP9抑制低氧环境下肺微血管内皮细胞IL-6和TNF-α表达的研究

目的 研究低氧环境下C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9（C1q/TNF-related protein 9,CTRP9）对肺微血管内皮细胞（Pulmonary microvascular endothelial cell,PMVEC）中白介素（IL）-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α表达的影响。 方法 将雄性SD大鼠随机分为常氧组、低氧组,采用低压低氧法建立大鼠低氧性肺动脉高压（Hypoxic pulmonary hypertension,HPH）模型,28 d后检测各组大鼠血流动力学、右心室肥厚指标和组织病理学改变;用RT-PCR检测HPH大鼠肺组织中IL-6、TNF-α mRNA表达水平;用ELISA法检测二者在血清中的变化。分离培养健康雄性SD大鼠的PMVEC,分别在常氧（210 ml/L O₂、50 ml/L CO₂）、低氧（50 ml/L O₂、50 ml/L CO₂）、或者低氧+CTRP9（5 μg/ml）环境中孵育48 h。 结果 与常氧组相比,低氧组大鼠右心室收缩压和右心室肥厚指标增加（P<0.05）,肺小动脉管壁增厚,显示造模成功;肺组织中IL-6、TNF-α mRNA水平上调（P<0.05）,两种炎症因子在血清中的含量增加（P<0.05）。与常氧组相比,低氧处理使两种炎症因子IL-6、TNF-α在PMVEC中mRNA水平及在细胞培养上清中的含量均增加（P<0.05）;在低氧的同时给予CTRP9孵育时,与单纯低氧组相比,两种炎症因子在PMVEC中mRNA水平及在细胞培养上清中的含量均降低（P<0.05）。 结论 大鼠发生HPH时,炎症因子IL-6、TNF-α表达升高。而CTRP9对低氧条件下PMVEC表达和分泌IL-6及TNF-α具有抑制作用,进而有望预防或延缓HPH的发生发展。     

促红细胞生成素促心肌细胞肥大的实验研究

目的观察促红细胞生成素（Erythropoietin,Epo）对离体乳鼠心肌细胞肥大形态学及分子生物学表现的影响。方法（1）新生大鼠原代心肌细胞分为空白对照、AngⅡ1×10^-6M和Epo10U／ml干预组,取24h、48h和72h三个时间点固定细胞,cTnI免疫组化染色,比较各组细胞面积;（2）RT．PCR法检测比较空白对照和Epo10U／ml干预30min c-los mRNA和2hANP和BNPmRNA表达;（3）Western blot检测Epo10U／ml刺激p-ERK表达的时间变化。4）Western blot检测不同浓度Epo刺激p-ERK表达的差异。结果（1）AngⅡ和Epo刺激均使心肌细胞面积增大（P〈0．05,24h、48h和72h,AngII组VSCon组;P〈0．05,48h和72h,Epo组VSCon组）;（2）Epol0U／ml干预组心肌细胞30minc．fosmRNA表达量与对照组相比差异不明显,2hANP mRNA和BNP mRNA表达量和对照组相比,明显升高（P〈0．05）;（3）Western blot结果显示,Epo干预心肌细胞后P—ERK2表达随时间出现先升高后下降的变化,30min时达到高峰,与干预前和干预后120min差别具有统计学意义（P〈0．05,30minVS0,120min）;（4）随Epo干预浓度增大,P-ERK2表达水平升高（P〈0．05,Epo10U／ml和Epo100U／ml组VS Con组）。Epo刺激p-ERKl表达也出现相同的时间浓度趋势,但各组差别无统计学意义。结论Epo刺激可使心肌细胞表面积增大,促进肥大基因ANP-BNP mRNA表达的升高,并刺激p-ERK出现时间相关性和浓度依赖性表达。     

肿瘤坏死因子α诱导脑血管内皮细胞产生病理性一氧化氮的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF—α）作用于脑血管内皮细胞产生病理性一氧化氮（NO）的机制。方法体外培养肿瘤坏死因子受体（TNFR1）基因敲除的小鼠脑血管内皮细胞（BVEC／RI）和野生型小鼠脑血管内皮细胞（BVEC）,分别给予5ng／ml TNF-α刺激24h后,应用PCR技术、Western blot方法、硝酸还原酶法,测定两种细胞的诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因mRNA和蛋白表达量以及所分泌的一氧化氮（NO）含量。结果①给予TNF—α刺激后,野生型BVEC的iNOS mRNA表达增加,BVEC／RI的iNOS mRNA表达未出现明显变化。②给予TNF—α刺激后,野生型BVEC的iNOS蛋白表达量（0．91±0．08）高于未给予TNF-α的BVEC（0．15±0．02）,差异有统计学意义,P〈0．05;BVEC／RI的iNOS蛋白表达量（0．21±0．06）与未给予TNF—α的BVEC／RI（0．30±0．05）相比,差异无统计学意义,P〉0．05。③给予TNF-α刺激后,野生型BVEC的NO含量[（58．6±2．6）μxmol／L]高于未给予TNF—α的BVEC[（18．1±4．3）μmol／L],差异有统计学意义,P〈0．05;BVEC／RI的NO含量[（21．2±3．5）μmol／L]与未给予TNF-α的BVEC／RI[（16．9±3．4）μmol／L]相比,差异无统计学意义,P〉0．05。结论TNF—α可能通过作用于脑血管内皮细胞TNFR1增加iNOS表达,从而增加病理性NO产生。     

吸入不同浓度异氟烷对大鼠肺脏肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 探讨大鼠自主吸入异氟烷对肺脏肿瘤坏死因子-α（TNF—α）表达的影响。方法2005年2月至12月北京大学人民医院将实验用Wistar大鼠随机分为空气对照组（C组）、氧气对照组（O2C组）、0．7％和1．5％异氟烷吸入组，O2C组及异氟烷组又分为吸入4h、8h、吸入8h停药2h亚组。采用分子生物学方法测定TNF—α浓度及其基因表达和肺组织髓过氧化物酶（MPO）含量。结果各组问MPO含量差异无统计学意义（P〉0．05）。1．5％异氟烷组吸入4h和8h后支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF—α浓度及肺组织TNF—α信使核糖核酸（TNF—αmRNA）均高于C组（P〈0．05），停药2h恢复。吸入异氟烷4h和8h时，1．5％异氟烷组BALF中TNF—α浓度和肺组织TNF—αmRNA表达高于O2C组（P〈0．05），与0．7％异氟烷组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论吸入较高浓度的异氟烷可逆性的增加大鼠肺脏TNF—α表达，但不会造成中性粒细胞的聚集。     

己酮可可碱对体外内毒素诱导大鼠心肌细胞生成TNF-α的影响

目的观察己酮可可碱（PTX）对体外内毒素（LPS）诱导新生大鼠心肌细胞生成肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,探讨PTX对大鼠心肌细胞的保护机制。方法将培养的新生大鼠心肌细胞分为A、B、C、D组,A组（对照组）加入生理盐水,B组加入1μg／ml PTX,C组加入10μg／ml PTX,D组加入100μg／ml PTX。作用6h后均予LPS 1μg／ml处理。采用RT-PCR及ELISA法观察各组心肌细胞TNF-α水平及TNF-α mRNA表达情况。结果B、C、D组TNF-α生成及TNF-α mRNA表达均低于A组,且与PTX浓度呈正相关。结论PTX能抑制LPS诱导的心肌细胞产生TNF-α;本研究为PTX治疗心力衰竭提供了实验依据。     

阿托伐他汀通过PPARβ／δ信号通路下调衰老心肌TNF-α表达的研究

目的：观察阿托伐他汀下调老年大鼠心肌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的作用及其与过氧化物酶体增殖物激活型受体β／δ（PPARβ／δ）信号通路之间的关系。方法：分离培养24个月龄大鼠的心肌细胞,将心肌细胞分为空白对照组、溶剂对照组、阿托伐他汀组、阿托伐他汀＋PPARβ／δ拮抗剂GSK0660组。各组细胞分别加入细胞培养液、二甲基亚砜（DMSO）、阿托伐他汀、阿托伐他汀＋GSK0660处理。用RT—PCR方法检测各组大鼠衰老心肌细胞的TNF-αmRNA表达水平,用westernblot方法检测各组TNF-α蛋白含量。结果：（1）与空白对照组相比,溶剂对照组大鼠衰老心肌细胞的TNF-α mRNA和蛋白水平均无显著差异;（2）与空白对照组相比,阿托伐他汀组的TNF-α mRNA和蛋白水平含量均显著降低（P〈0．01）;（3）阿托伐他汀＋GSK0660组的TNF-α mRNA表达水平及蛋白含量均显著高于阿托伐他汀组,但仍低于空白对照组（P〈0．05）。结论：阿托伐他汀可通过激活PPARβ／δ信号通路下调衰老心肌细胞TNF—d的表达。     

高浓度葡萄糖对乳鼠心肌细胞肿瘤坏死因子-α基因表达的影响

目的：观察高糖对不同状态下乳鼠心肌细胞肿瘤坏死因子-α（TNF—α）基因表达的影响,探讨TNF—α在糖尿病心肌病的非特异性炎症中的作用机制。方法：体外培养乳鼠心肌细胞,分别用不同浓度的葡萄糖（0、20、30、50mmol／L）干预正常心肌细胞、胰岛素抵抗心肌细胞,采用逆转录聚合酶链反应检测细胞TNF-α mRNA的表达水平,并在透射电镜下观察心肌细胞结构的变化。结果：（1）在50mmol／L葡萄糖作用下,正常心肌细胞TNF—α mRNA表达（0．58±0．03）明显高于20mmol／L（0．27±0．02）、30mmol／L（0．29±0．05）葡萄糖作用的正常心肌细胞,而后两组之间比较无统计学差异。（2）胰岛素抵抗心肌细胞在0、20、30、50mmol／L葡萄糖作用下,各组心肌细胞TNF-α mRNA表达均有显著性差异（P〈0．05）,并随着葡萄糖浓度的提高,TNF—α mRNA表达越高;在相同浓度葡萄糖作用下,胰岛素抵抗心肌细胞TNF—α mRNA表达明显高于正常心肌细胞。（3）在高浓度葡萄糖作用下,正常心肌细胞和胰岛素抵抗心肌细胞出现线粒体肿胀,髓样结构形成,胞内脂滴增多等细胞结构损伤性改变。结论：高糖作用下胰岛素抵抗心肌细胞TNF—α mRNA表达明显增加,引起胞内脂滴增多等细胞结构变化。     

炎症细胞因子对人脐静脉内皮细胞分泌VEGF、ICAM-1的影响

目的：探讨炎症因子自细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNFα）对人脐静脉内皮细胞（HU—VEC）分泌血管内皮生长因子（VEGF）、细胞间粘附分子1（ICAM-1）的影响。方法：人脐静脉内皮细胞在37℃、5％CO2的条件下常规培养。实验采用4～5代细胞;按1×10^5／ml密度接种于5cm^2的培养皿中。24h后换液。生长接近80％融合时进行干预。按IL-1β组、TNF—α组、IL-1β＋TNF—α组、空白对照组进行刺激（IL—1β和TNFα干预浓度均为10ng／m1）,每组12个样本;在共同培养24h后收集细胞上清液。应用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞上清液中VEGF、ICAM—1的浓度。结果：IL—1β组、TNF—α组、IL—1β＋TNF-α组的VEGF值（ng／ml）分别为（27．91±0．63）、（13．54±1．17）和（13．05±0．11）,均明显高于对照组（4．21±0．91）,P=0．000;IL—1β组、TNF-α组、IL-1β＋TNF—α组的ICAM-1值（ng／ml）分别为（2．88±0．98）、（2．96±0．03）和（2．30±0．20）．均明显高于空白对照组（0．25±0．01）。P=0．000。结论：炎症因子IL—1β、TNF—α均可促进人脐静脉内皮细胞分泌斑块不稳定相关标志物VEGF、ICAM-1,可能是炎症在急性冠脉综合征的发生、发展中起重要作用的机制之一。     

雌二醇对大鼠成骨细胞凋亡受体mRNA表达的影响

目的建立成骨细胞体外培养模型，并研究雌二醇（E2）对体外培养大鼠成骨细胞主要凋亡受体mRNA的调节作用，探讨E2抑制成骨细胞凋亡的机制。方法用新生大鼠颅盖骨进行成骨细胞的原代培养并进行纯化和鉴定；应用TNF-α（200U／ml）以及TNF-α＋E2（10^-8mol／L）进行刺激；用AO-EB染色观察成骨细胞凋亡并计数和计算凋亡率；应用RT—PCR的方法测定成骨细胞的Fas、FasL、TNFR1、TNFR2 mRNA的相对表达量。结果10^-8mol／L的E2明显抑制由TNF-α诱导的成骨细胞Fas、TNFR1 mRNA的表达（P〈0．01），但是对FasL、TNFR2 mRNA的表达没有影响（P〉0．05）。结论雌激素可以通过调节成骨细胞凋亡受体的表达来改变成骨细胞对致死性细胞因子如TNF-α．和FasL等的凋亡敏感性，从而抑制其凋亡。选择性抑制成骨细胞凋亡受体的表达可能有助于增加成骨。     

血管紧张素Ⅱ促进培养的新生鼠心肌细胞表达TNF—α

目的 观察血管紧张素Ⅱ对培养心肌细胞表达TNF—α的影响。方法 采用新生大鼠心肌原代培养和免疫组化，RT—PCR评价用10^-7M血管紧张素Ⅱ，100ng／ml脂多糖(LPS)对心肌细胞表达TNF—α的影响。结果 TNF—α的免疫组化染色在对照心肌细胞呈阴性，100ng／ml脂多糖和10^-7M血管紧张素Ⅱ作用心肌细胞24小时、48小时后，心肌细胞胞浆中出现棕色颗粒，随着作用时间的延长有增强趋势。与单纯培养的对照心肌细胞相比，10^-7M血管紧张素Ⅱ，100ng／ml脂多糖刺激心肌细胞24小时后心肌细胞TNF—α表达的mRNA显著增高，刺激48小时，TNF-αmRNA进一步增高。结论 正常情况下培养的新生大鼠心肌细胞表达的TNF—α在蛋白质水平和mRNA水平均极低，10^-7M血管紧张素Ⅱ可以促使培养的心肌细胞表达TNF-a，提示它可能是血管紧张素Ⅱ对心肌的效应机制之一。     

铜绿假单胞菌肺炎大鼠核因子-κB表达及二硫代氨基甲酸吡咯烷对其的影响

目的探讨NF-κB及其诱导TNFα在大鼠铜绿假单胞菌（PA）肺炎中的表达及二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对其的影响。方法72只SD大鼠分为健康对照组、PA组、PDTC干预组。每组24只。PA组大鼠制作PA模型,PDTC干预组制作PA模型前腹腔注射PDTC200mg／kg体重。PA组、PDTC干预组接种铜绿假单胞菌悬液0．2ml（6×10^8CFU／m1）。观察大鼠肺组织形态学改变,免疫组化及Western blot检测肺组织NF-κB表达,RT-PCR检测肺组织TNFαmRNA表达。结果PA组大鼠肺组织明显充血、水肿,大量炎性细胞浸润;PDTC干预组大鼠肺组织充血、水肿等炎性表现较PA组明显减轻。PA组大鼠肺组织NF-κB表达阳性细胞明显增多,PDTC干预组NF—κB表达阳性细胞明显减少。Western blot显示,各时间点NF-κB表达不同,3h达高峰。RT—PCR显示,PA组TNFαmRNA高表达,以6h最为明显;PDTC干预组TNFαmRNA表达明显下调,与PA组相比,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论NF-κB及其诱导的TNFα在PA肺炎中发挥重要作用,PDTC可能通过抑制NF-κB的活性减轻PA引起的肺损伤。     

转化生长因子β1对大鼠肝星状细胞表达β-连环蛋白的影响

目的研究转化生长因子β1（TGF—β1）对大鼠肝星状细胞（HSC）表达β-连环蛋白（β-catenin）的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）比较经不同浓度的TGF-β1刺激不同时间后HSC表达β-catenin、smad3和α-SMA mRNA的变化,并比较三者之间的关系。结果1ng／ml TGF—β1刺激2h后,HSC表达β—catenin mRNA、smad3 mRNA和α—SMA mRNA量最大,β—catenin mRNA表达与两者均具有明显的相关关系（r=0．947,P〈0．01;r=0．950,P〈0．01）。结论β—catenin在TGF—β1活化HSC的过程中发挥重要作用。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肿瘤坏死因子α及受体的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF—α）与肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）在慢性阻塞性肺疾病（COPD）发生发展中的意义。方法建立吸烟大鼠COPD模型,测定大鼠的肺功能及其血清和BALF的细胞数,观察肺组织病理形态变化和肺平均内衬间隔（MLI）和平均肺泡数（MAN）评估肺气肿的程度。用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测大鼠血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF—α及TNFRI的表达。结果COPD组BALF中白细胞、中性粒细胞及巨噬细胞数增高。COPD组肺功能指标FEV0．3、FEV0．3／FVC％和PEF分别为（1．86±0．22）ml、（65．064-8．40）％、（18．84±1．56）ml/s,比正常组（4．20±0．25）ml、（85．56±5．85）％、（47．24±7．28）ml／s下降。COPD组MLI、MAN分别为（77．32±28．73）um／个、（232．00±97．18）个／mm。而正常组为（43．96±7．16）um／个、（392．84±24．41）个／mm^2,COPD组MLI增加而MAN减少;COPD组血清和BALF的TNF—α、TN—FRl表达增高,分别为TNF—α（117．98±33．82）pg／ml、（155．10±27．60）pg／ml而TNFR1为（85．00±16．34）pg／ml、（98．13±11．97）pg／ml而正常组为TNF-α（73．98±16．41）ps／ml、（79．20±27．70）ps／ml,TNFR1为（58．82±24．57）pg／ml、（61．89±26．25）pg／ml。COPD组BALF的TNFR1表达与MLI呈正相关（r=0．79,P=0．004）与MAN呈负相关（r=-0．626,P=0．039）。两组间不比较均有统计学差异（P〈0．05）。结论TNF—α、TNFR1作为炎症介质在COPD的发生、发展中起重要促进作用。     

金雀异黄素对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞骨保护素／细胞核因子κB受体活化因子／细胞核因子κB受体活化因子配体通路的影响

目的研究金雀异黄素（genistein,Gen）对人类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）成纤维样滑膜细胞（fibroblast—like synoviocytes,FLS）骨保护素（osteoprotegerin,OPG）／细胞核因子KB受体活化因子（receptor—activator of nuclear factor kappa bata,RANK）／细胞核因子KB受体活化因子配体（receptor—activator of nuclear factor kappa bata ligand,RANKL）通路的影响及机制。方法培养人RA—FLS,并分为对照组（RA—FLS细胞）、TNF—α组（RA—FLS细胞＋TNF-α 10ng／ml）、TNF—α＋Gen组（RA—FLS细胞＋TNF—α 10ng／ml＋Gen 50μM）、Gen组（RA—FLS细胞＋Gen 50μM）。应用免疫印迹检测Gen作用RA—FLS的RANK、RANKL、OPG、雌激素受体（estrogen receptora,ERa）表达情况,免疫荧光检测ERα细胞内分布情况。结果Gen组、TNF-α组及TNF—α＋Gen组细胞内RANK蛋白表达量较对照组无明显差异（P〉0．05）,但OPG及RANKL蛋白表达明显高于对照组（均P〈0．05）。Gen组OPG／RANKL较对照组增高（P〈0．05）。Gen组、TNF-α组及TNF-α＋Gen组细胞内ERa蛋白表达量与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫荧光结果显示核内ERα表达量增加。结论Gen可能通过与雌激素受体结合,转入核内发挥免疫调节作用,从而调节0PG／RANKI／RANK通路,发挥抑制骨破坏的作用。Gen可以上调人RA—FLS中OPG及RANKL,且对OPG的上调作用更强。     

高浓度葡萄糖对乳鼠心肌细胞肿瘤坏死因子-α基因表达的影响

目的：观察高糖对不同状态下乳鼠心肌细胞肿瘤坏死因子-α（TNF—α）基因表达的影响,探讨TNF—α在糖尿病心肌病的非特异性炎症中的作用机制。方法：体外培养乳鼠心肌细胞,分别用不同浓度的葡萄糖（0、20、30、50mmol／L）干预正常心肌细胞、胰岛素抵抗心肌细胞,采用逆转录聚合酶链反应检测细胞TNF-α mRNA的表达水平,并在透射电镜下观察心肌细胞结构的变化。结果：（1）在50mmol／L葡萄糖作用下,正常心肌细胞TNF—α mRNA表达（0．58&#177;0．03）明显高于20mmol／L（0．27&#177;0．02）、30mmol／L（0．29&#177;0．05）葡萄糖作用的正常心肌细胞,而后两组之间比较无统计学差异。（2）胰岛素抵抗心肌细胞在0、20、30、50mmol／L葡萄糖作用下,各组心肌细胞TNF-α mRNA表达均有显著性差异（P〈0．05）,并随着葡萄糖浓度的提高,TNF—α mRNA表达越高;在相同浓度葡萄糖作用下,胰岛素抵抗心肌细胞TNF—α mRNA表达明显高于正常心肌细胞。（3）在高浓度葡萄糖作用下,正常心肌细胞和胰岛素抵抗心肌细胞出现线粒体肿胀,髓样结构形成,胞内脂滴增多等细胞结构损伤性改变。结论：高糖作用下胰岛素抵抗心肌细胞TNF—α mRNA表达明显增加,引起胞内脂滴增多等细胞结构变化。     

急性坏死性胰腺炎大鼠心肌核因子-κB激活及重组葡激酶的干预作用

目的研究重症急性胰腺炎（SAP）心肌功能损害时心肌核因子-κB（NF—κB）的活化及葡激酶的干预作用。方法63只SD大鼠随机分为假手术组（n=9）、ANP组（n=27）、葡激酶干预组（n=27），ANP模型采用5％的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立。干预自造模前2d腹腔注射葡激酶1．5mg／kg体重，一天2次，共4次。ELISA法测定制模后6h、12h、24h各时点血TNF—α、IL-6含量；RT—PCR检测心肌NF—κB mRNA的表达；免疫组化法检测心肌NF—κB蛋白的表达，常规观察胰腺及心肌组织的病理变化。结果ANP组术后6h大鼠心肌NF—κB mRNA及NF—κB蛋白表达异常增高，TNF—α、IL-6呈进行性升高，干预组胰腺及心肌组织的病理变化减轻。心肌NF—κB mRNA及蛋白表达下调，血TNF—α、IL-6明显下降，与ANP组比较，差异均显著（P〈0．05）。结论ANP大鼠的心肌损伤可能与循环中TNF—α、IL-6水平升高导致的心肌NF—κB活化有关。葡激酶对SAP并发的心肌损伤具有防治作用。     

HepG2肝癌细胞中干扰素-α对抑癌基因Diekkopf-1上调表达的研究

目的探讨重组干扰素-α（IFN-α）对肿瘤抑制作用的靶分子及可能作用机制。方法选用HepG2肝癌细胞系,分别应用1000U/ml、2000u／ml浓度的IFN-α作用于HepG2细胞,在药物作用6h、16h后应用RT-PCR;Dickkopf-1（DKK-1）方法分别检测各实验组DKK-1mRNA表达水平,Westernblot杂交法检测DKK．1蛋白表达水平。结果定量RT-PCR结果显示,IFN-α处理能增强DKK-1mRNA表达。2000U／mLIFN-α作用HepG2细胞16h组其DKK-1mRNA表达（0．00039±0．000057）高于处理6h组（0．000195±0．000021,t=6．994,P=-0．0022）以及1000U／mL作用16h组（0．000307±0．000012,t=2．876,P=0．0452）;Westernblot显示重组IFN．仪作用于I-lepG2细胞后,均能够导致细胞内DKK-1蛋白表达增强（P值均〈O．05）。结论IFN-α能够上调DKK-1表达,DKK-1可能是IFN-α作用的下游调节靶基因,这可能是IFN-α发挥抗肿瘤作用机制之一。     

α-硫辛酸对大鼠急性胰腺炎的保护作用及其抗氧化机制

目的探讨抗氧化剂α-硫辛酸对急性胰腺炎（AP）的治疗作用以及可能的机制。方法3．5％牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射制备AP大鼠模型,数字表法随机分为假手术组、AP组、生理盐水组和α-硫辛酸组,每组30只。α-硫辛酸组于造模后腹腔内注射α-硫辛酸1mg／kg体重,生理盐水组注射等量生理盐水。分别于术后1、3、6、9、12h处死大鼠,检测血清淀粉酶、TNF-α、ICAM-1水平,观察胰腺病理改变,测定胰腺组织超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量。结果AP组胰腺水肿、粘连、坏死,腹腔内可见血性腹水。术后6hAP组血清淀粉酶、TNF-α、ICAM-1水平以及胰腺组织MDA含量分别为（2211．0±547．4）U／L、（174．8±7．9）ng／ml、（49．3±8．0）ng／ml和（32．2±5．9）U／mgprot,较假手术组的（160±23）U／L、（6．5±1．1）mg／ml、（13．9±3．4）mg／ml、（16．2±3．2）U／mgprot明显升高（P〈0．05）;胰腺组织SOD活力为（38．5±9．5）U／mgprot,显著低于假手术组（56．7±6．6）U／mgprot（P〈0．05）。α-硫辛酸6h组的血清淀粉酶、TNF-α、ICAM-1水平以及胰腺组织MDA含量分别为（1478±642）U／L、（164．8±6．2）ng／ml、（37．5±3．9）ng／ml和（20．2±8．4）U／mgprot,较AP组显著降低（P〈0．05）;胰腺组织SOD活力为（66．0±8．6）U／mgprot,较AP组显著升高（P〈0．05）。结论AP发病与氧化应激有关,抗氧化剂α-硫辛酸对AP大鼠具有较好的治疗作用,其机制可能与抑制TNF-α、ICAM-1活性有关。     

肿瘤坏死因子α在急性缺氧状态下对豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流的抑制作用

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）在正常和急性缺氧状态下对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的作用。方法急性分离成年豚鼠的心室肌细胞，采用全细胞膜片钳法记录L-型钙通道电流，并分别在正常和急性缺氧的条件下，给予不同浓度的TNF-α（100U／ml、300U／ml、500U／ml），观察其对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的作用。结果在全细胞封接后20min，L-型钙通道峰值电流分别是：正常对照组-471．948 306．587pA；不同浓度TNF-α组-497．698 296．686pA（100U／ml）、-471．894 366．758pA（300U／ml）、-503．988 396．958pA（500U／ml）（与正常对照组相比P〉0．05）；急性缺氧组-369．577 104．280pA（与正常对照组相比P=0．022）；急性缺氧＋不同浓度TNF-α组-268．445 124．112pA（100U／ml）、-190．588 102．281pA（300U／ml）、-87．666 70．670pA（500U／ml）（与急性缺氧组相比P值均〈0．05）。结论在正常条件下，TNF-α对豚鼠心室肌细胞的L型钙通道电流无明显影响，但在急性缺氧条件下，TNF-α可以增强缺氧对该电流的抑制作用。