在不同转移潜能人肺癌细胞移植瘤中血管性血友病因子的表达

目的探讨血管性血友病因子(vWF)在不同转移潜能人肺癌裸鼠移植瘤中的表达。方法体外培养低转移及高转移人肺癌细胞系A549和D95,Transwell小室法检测肿瘤细胞体外侵袭和迁移能力;10只Balb/c裸小鼠随机分为A549组和D95组(n=5)。0. 2 mL两种肿瘤细胞悬液(浓度约为1×10^7/mL)分别皮下注入A549组及D95组裸小鼠左上肢,构建人肺癌裸鼠移植瘤模型。观察vWF对裸小鼠移植瘤生长的影响;ELISA检测外周血vWF水平;免疫组化检测移植瘤vWF蛋白表达;免疫印记检测移植瘤、肺和肝vWF蛋白表达。结果 D95肺癌细胞体外侵袭和迁移细胞数多于A549肺癌细胞(P<0. 05);D95组裸小鼠于皮下接种后第5天全部出现瘤结节,A549组于第7天全部出现;与A549组相比,D95组裸小鼠移植瘤质量及肺转移瘤结节数显著增多(P<0. 05),D95组移植瘤、肺及肝组织vWF蛋白的表达显著高于A549组(P<0. 01)。结论 vWF与人肺癌细胞的转移潜能密切相关。     

BCYRN1 调控miR-503 通过Notch1 信号通路对肺癌迁移和侵袭的影响

目的:探讨BCYRN1 调控miR-503 通过Notch1 信号通路对肺癌迁移和侵袭的影响机制。方法:qPCR 检测不同肺癌细胞株中BCYRN1 和miR-503 的表达情况;免疫荧光和qPCR 检测慢病毒BCYRN1+siRNA 转染肺癌细胞的转染效率;双荧光素酶报告基因检测BCYRN1 与miR-503 的相互作用;Transwell 侵袭实验和划痕实验检测沉默BCYRN1 后肺癌细胞侵袭和迁移能力的变化;Western blot 检测沉默BCYRN1 后Notch1 信号通路蛋白的表达情况;裸鼠皮下成瘤检测沉默BCYRN1后肺癌细胞裸鼠体内成瘤能力的影响。结果:在肺癌细胞H1299 中BCYRN1 表达水平最高,miR-503 的表达水平相对较高;免疫荧光及mRNA 水平证明BCYRN1+siRNA 慢病毒可以有效转染进入H1299 细胞内;BCYRN19 能与miR-503 的3’-UTR 特异性结合;沉默BCYRN1 可以抑制肺癌H1299 细胞的侵袭和迁移能力;沉默BCYRN1 后Notch1 通路蛋白表达情况相应下调;与NC 组相比,BCYRN1-siRNA 组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显减小。结论:BCYRN1 可以靶向调节miR 503 通过Notch1 信号通路影响肺癌H1299 细胞的侵袭和迁移能力。     

神经节苷脂GD2可作为肺癌干细胞一个潜在的候选标志物

目的 探索神经节苷脂GD2作为肺癌干细胞(LCSCs)标志物的可行性。方法 用成球培养的方式在体外富集肺癌细胞系的肿瘤干细胞(CSCs);用实时定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测LCSCs中干性相关基因以及GD3合成酶(GD3S)的表达；用流式细胞测量术检测肺腺癌细胞系A549中GD2及其他干性表型的表达；用CCK8法检测细胞增殖；用Transwell小室法和细胞划痕愈合实验检测细胞的体外侵袭和迁移；用肺癌移植瘤模型比较细胞系A549中不同亚群的致瘤性。结果 体外成球培养能够成功富集到A549细胞的肿瘤干细胞，贴壁培养时，GD2⁺细胞的比例为0.57%,成球培养后GD2⁺细胞比例能够上升至20.4%。与GD2^- A549细胞相比，GD2⁺ A549细胞的体外增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.05)和迁移能力(P<0.01)均显著提高。GD2与另外两种肺癌干细胞表型之间有密切联系，其表达水平与CD44(P<0.01)及EpCAM(P<0.001)的表达呈正相关。体内的结果...     

下调TCF3抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移能力

目的:探索下调T细胞因子3(TCF3)抑制非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:运用Lipofectamine 2000转染法将siTCF3和阴性对照siRNA(NCsiRNA)转染非小细胞肺癌A549和H1299细胞;运用real-time PCR和Western blot分别测定TCF3的mRNA和蛋白水平;运用萤光素酶报告基因实验测定TCF3的转录活性;MTT、克隆形成实验、Transwell实验和Annexin V-FITC/PI染色联合流式细胞术分别测定细胞的活力、克隆形成能力、转移能力及细胞凋亡率;Western blot检测Wnt、c-Myc、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-13、金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1的蛋白表达水平。结果:与NCsiRNA转染组的细胞比较,siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞中TCF3的mRNA和蛋白水平(P0.01)。TCF3转录活性和c-Myc蛋白表达水平明显低于NCsiRNA细胞(P0.05)。MTT实验结果显示,培养24 h、48 h、72 h和96 h的A549-siTCF3和H1299-siTCF3细胞活力均显著低于NCsiRNA细胞(P0.05)。与NCsiRNA细胞相比,siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞的克隆形成能力(P0.01)。Transwell实验结果显示A549-siTCF3和H1299-siTCF3细胞迁移数显著低于A549-NCsiRNA和H1299-NCsiRNA组细胞(P0.05)。流式细胞术分析结果显示A549-siTCF3细胞和H1299-siTCF3细胞的凋亡率显著高于A549-NCsiRNA和H1299-NCsiRNA细胞(P0.01)。Western blot实验结果显示,下调TCF3表达能抑制Wnt蛋白的表达,MMP-9和MMP-13的蛋白表达明显降低,TIMP-1的蛋白表达增高。结论:siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞的增殖和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其分子机制可能通过下调Wnt通路活性以及调控MMP家族关键成员的表达而实现。     

葡萄糖转运蛋白1抑制剂BAY-876对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长的影响

目的 探讨BAY-876对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长的影响及可能机制。方法 利用CCK-8实验检测BAY-876对肺癌细胞增殖的影响,利用Transwell实验分析BAY-876对肺癌细胞迁移和侵袭的影响,利用荷瘤小鼠模型检测BAY-876对肿瘤生长的影响,免疫组织化学法检测各组移植瘤组织中ITGβ1蛋白的表达水平。结果 BAY-876抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,同时抑制裸鼠移植瘤的生长,明显缩小肿瘤体积;BAY-876处理后移植瘤组织中ITGβ1蛋白表达降低;过表达ITGβ1逆转了BAY-876对A549细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 BAY-876可能通过抑制ITGβ1蛋白的表达抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长。     

lncRNA LSINCT5 通过 miR-451 调控肺癌细胞侵袭、迁移及顺铂敏感性的 实验研究

目的：探讨lncRNA LSINCT5调控miR-451对肺癌细胞侵袭、迁移及顺铂（DDP）敏感性的影响。方法：以肺癌A549细胞为研究对象,使用LSINCT5特异性siRNA、DDP(4μg/ml)、si-LSINCT+DDP+miR-451 inhibitor处理细胞,不经特殊处理的细胞为空白组,qRT-PCR检测LSINCT5和miR-451 mRNA表达;Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测E-cadherin、Vimentin和N-cadherin表达;双荧光素酶报告基因检测试剂盒测定LSINCT5和miR-451的靶向关系。结果：在转染LSINCT5 siRNA的A549细胞中,LSINCT基因表达明显降低（P<0.05）。LSINCT5 siRNA及DDP均可明显抑制A549细胞侵袭、迁移能力,上调E-cadherin表达,下调Vimentin和N-cadherin表达（P<0.05）,LSINCT5 siRNA及DDP联合使用对细胞侵袭、迁移及E-cadherin、Vimentin和N-cadherin表达影响明显强于单...     

miR-646高表达抑制EGFR/Akt通路及肺癌细胞增殖扩散的研究

目的 探讨微小RNA(microRNA,miR)-646对EGFR/Akt通路的作用及对肺癌A549细胞增殖扩散的影响及相关的作用机制.方法 利用Lipo2000将miR-646转染到肺癌A549细胞中,采用实时荧光定量PCR(real time PCR,RT-PCR)法检测转染后各组细胞中miR-646的表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕和Transwell小室分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting法检测EGFR/Akt通路中各蛋白的变化水平.结果 RT-PCR结果显示,转染miR-646组其miR-646表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),A549细胞转染miR-646后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P＜0.05);Western blotting结果显示,转染miR-646组中p-EGFR和p-Akt的蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05).结论 miR-646可显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-Akt的蛋白水平,进而抑制细胞的增殖和扩散能力.     

TPX2对人肺癌细胞增殖、凋亡及cleavedcaspase-3表达的影响

目的 探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)对人肺癌细胞增殖、凋亡及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)表达影响。方法 培养人肺癌细胞A549,分为Control组(不进行细胞转染)、siRNA-NC组(细胞转染TPX2 siRNA control)、TPX2 siRNA组(细胞转染TPX2 siRNA),采用实时荧光定量PCR (qPCR)和Western blot检测TPX2 siRNA的转染效果。取转染后各组细胞,采用噻唑蓝检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测cleaved caspase-3蛋白表达情况。结果 TPX2 siRNA组中,TPX2 mRNA、蛋白水平和细胞光密度(OD)值均明显低于Control组和siRNA-NC组,细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显高于Control组和siRNA-NC组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);而siRNA-NC组中,TPX2 mRNA、蛋白水平及细胞OD值、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase-3与Control组比较,差异均无统计学意义(P值均＞0.05)。结论TPX2 siRNA能够干扰人肺癌细胞A549中TPX2的表达。下调TPX2的表达能够抑制人肺癌细胞A549增殖,促进caspase-3活化,促进人肺癌细胞A549的凋亡。     

长链非编码H19靶向调节miR-107通过Notch通路对肺癌的侵袭迁移的影响

目的：探讨长链非编码H19靶向调节miR-107通过Notch通路对肺癌的侵袭迁移的影响情况。方法：qPCR检测肺癌和癌旁组织、不同肺癌细胞中H19的表达情况;Transwell侵袭实验检测沉默H19后肺癌细胞侵袭能力的变化;划痕实验检测沉默H19后肺癌细胞迁移能力的变化;双荧光素酶报告基因检测H19与miR-107的相互作用;qPCR检测肺癌和癌旁组织、不同肺癌细胞中miR-107的表达情况;Transwell侵袭实验检测沉默H19后miR-107对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测沉默H19后miR-107肺癌细胞迁移能力的影响;裸鼠皮下成瘤检测沉默H19后miR-107对肺癌成瘤大小以及体积的影响。Western blot检测沉默H19后Notch通路蛋白的表达情况。结果：与癌旁组织相比,肺癌组织中H19表达明显增高;肺癌细胞A549中H19表达水平最高;沉默H19可以抑制肺癌细胞侵袭和迁移能力;H19能与miR-107的3′UTR特异性结合;与癌旁组织相比,肺癌组织中miR-107表达明显降低;沉默H19后,抑制miR-107可以促进肺癌细胞侵袭和迁移能力;与H19-siRNA组相比,H19-siRNA+miR-107-inhibitor组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显增大。沉默H19后Notch通路蛋白表达情况相应下调。结论：H19在肺癌发生发展过程中起重要作用,H19可以靶向调节miR-107通过Notch信号通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移能力。     

转染缺氧诱导因子-1α对肺癌细胞A549生长的影响

目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人肺癌细胞株A549体内、外生长的影响,并探讨其可能机制。方法:将HIF-1α转染人肺癌细胞A549中,观察A549细胞生长。建立人肺癌裸鼠模型,随机将其分为两组:对照组(A组,10只),HIF-1α转染细胞组(B组,10只)。1月后,切除瘤灶、称瘤重、计算促瘤率。标本用免疫组化测定增殖细胞核抗原(PCNA),同时用Westernblot检测HIF-1α、凋亡抑制蛋白survivin和bcl-2的表达。结果:HIF-1α转染A549细胞后,细胞生长速率加快。转染HIF-1α的裸鼠肿瘤生长较对照组快,A组、B组的瘤重分别为(2.51±0.33)g,(3.44±0.40)g,促瘤率为37%。免疫组化和Westernblot提示:B组的PCNA表达比A组高,B组HIF-1α、survivin、bcl-2的蛋白水平明显高于A组。结论:转染HIF-1α体内、外均可促进肺癌A549细胞的生长,其机制可能与其能促进细胞恶性增殖和抑制凋亡有关。     

靶向沉默Ku80增强顺铂诱导的人肺腺癌细胞凋亡

目的:观察沉默Ku80能否增强顺铂诱导的人肺腺癌耐药细胞的细胞凋亡。方法:首先采用RT-PCR、Westernblot方法比较Ku80在人肺腺癌亲代(A549)与耐药细胞系(A549/DDP)的表达水平;将Ku80siRNA及si-Scramble转染至A549/DDP细胞后,加药组转染后48小时加顺铂作用24小时;应用MTT法检测顺铂对各组细胞的抑制率,采用流式细胞仪检测凋亡率,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活化程度。结果:Ku80 mRNA、蛋白在A549/DDP表达水平显著高于其亲代A549;si-Ku80组A549/DDP细胞的Ku80的mRNA、蛋白表达水平下调;顺铂对si-Ku80组细胞的抑制率明显高于si-Scram-ble组与Control组;在6μg/ml顺铂作用24小时后,si-Ku80组细胞凋亡率及Caspase-3活化程度高于si-Scramble组和Control组(P<0.05)。结论:靶向Ku80siRNA导入人肺腺癌耐药细胞特异性下调Ku80的表达,增强顺铂诱导的人肺腺癌耐药细胞凋亡作用。     

Notch1/Hes1信号通路在调控低分化胃腺癌细胞钙离子和侵袭能力中的作用

目的 探讨Notch1/Hes1信号通路对胃癌细胞钙离子水平的影响及其与侵袭的关系.方法 采用免疫组化法检测32例原发性低分化胃腺癌组织及32例癌旁正常组织中Notch1、Hes1、Calpain-1和E-cadherin蛋白的表达.将MGC-803细胞分为对照组、Lipofectamine 2000组、Notch1 ...     

miR-107 靶向NID2 通过Notch 信号通路调控肺癌细胞的增殖侵袭

目的:miR-107 靶向NID2 调控Notch 信号通路影响肺癌的侵袭和增殖。方法:免疫组化检测NID2 在肺癌组织和正常肺组织中的表达;PCR 检测miR-107 在肺癌组织中的表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-107 对NID2 转录活性的影响;肿瘤细胞成球实验检测miR-107 的表达对肺癌细胞A549 的增殖能力的影响;Transwell 侵袭实验检测miR-107 的表达对肺癌A549 细胞的侵袭能力的影响;划痕试验检测miR-107 的表达对肺癌A549 细胞的迁移能力的影响;Western blot 检测过表达miR-107 后Notch 信号通路的蛋白表达水平。结果:和正常肺组织比较,NID2 在肺癌组织中表达较高;miR-107 在肺癌组织中表达明显降低;双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-107 可以直接调控NID2 的转录活性;过表达miR-107 后,肺癌细胞A549 的增殖、侵袭和迁移能力明显降低;过表达miR-107 后,Notch1、hes-1、presenilin1 蛋白表达下调。结论:miR-107靶向NID2 的表达,通过Notch 通路调控肺癌细胞的增殖和侵袭能力。     

RNAi 结肠癌HOXB7 基因表达对癌细胞增殖及凋亡的机制研究

目的:探讨抑制HOXB7 基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响。方法:通LipofectamineTM2000 脂质体介导法将合成的阴性对照siRNA(阴性对照组)及HOXB7-siRNA(HOXB7 转染组)转染人结肠癌SW480 细胞,未经特殊处理的细胞为空白组。收集转染48 h 的细胞,RT-PCR 及Western blot 分别检测细胞中HOXB7 的mRNA 及蛋白表达;分别于转染后的24、48、72、96 h,CCK8 法检测细胞增殖;流式细胞仪检测转染后48 h 细胞的凋亡情况;Western blot 检测凋亡相关蛋白B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2(Bc-2)、Bcl-2 相关X 蛋白(Bax)及Notch1 信号通路Notch1、Hes1 的蛋白表达。结果:HOXB7 转染组HOXB7 的mRNA 及蛋白表达均显著低于空白组(P<0.05);转染24 h 后三组细胞的OD 值间差异无统计学意义(P>0.05),48、72、96 h 后,与空白组比较,HOXB7 转染组OD 值均显著降低(P<0.05);与空白组比较,HOXB7 转染组细胞凋亡率显著升高,Bcl-2、Notch1、Hes1 蛋白显著下调表达,Bax 蛋白显著上调表达(P<0.05)。结论:RNAi 结肠癌HOXB7 基因表达可通过抑制Notch1 信号通路降低癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

miRNA-126对肺癌A549细胞的增殖、迁移、侵袭及EGFR/AKT/mTOR信号通路的影响

 目的: 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-126对肺癌A549细胞功能的影响及相关的作用机制。方法: 利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-126转染入肺癌A549细胞中,采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-126的表达;MTT法检测细胞活力;台盼蓝拒染实验检测细胞存活数目;细胞集落培养实验观察转染后细胞集落形成;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blot法检测EGFR/AKT/mTOR通路中各蛋白水平的变化。结果: Real-time PCR结果显示,转染miRNA-126组细胞中的miRNA-126表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),而阴性对照组与空白对照组无显著变化;A549细胞转染miRNA-126模拟物后,细胞增殖和集落形成能力均呈明显下降(P<0.01);肺癌细胞的迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P<0.01);Western blot结果显示,转染miRNA-126组细胞中EGFR/AKT/mTOR通路相关蛋白p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的水平均有明显降低(P<0.01)。结论: miRNA-126可以显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平,进而可能抑制其细胞增殖和迁移侵袭能力。     

干扰IDH-2基因对小细胞肺癌生长抑制作用的研究

 目的：研究siRNA特异干扰沉默异柠檬酸脱氢酶2（IDH-2）基因后对人小细胞肺癌细胞NCI-H446生长作用的影响。方法：用siRNA沉默NCI-H446细胞的IDH-2基因表达,用real-time PCR及Western blotting技术检测mRNA-IDH-2和蛋白的表达;CCK-8法测定细胞生长抑制,Western blotting检测MAPK p42的表达和流式细胞术检测细胞周期;用Transwell细胞迁移系统检测siRNA-IDH-2对NCI-H446细胞迁移能力的影响;将转染siRNA-IDH-2、阴性对照siRNA的细胞或未转染细胞皮下接种于BALB/c裸鼠背部,观察移植瘤的生长状况。结果：siRNA-IDH-2有效沉默NCI-H446细胞中IDH-2的表达;与对照组相比,下调IDH-2基因表达抑制NCI-H446细胞的增殖;MAPK p42蛋白表达下降且S期细胞明显增加;下调IDH-2基因显著抑制了NCI-H446细胞的迁移能力;体内实验显示siRNA-IDH-2组的肿瘤体积明显小于对照组。结论：siRNA-IDH-2能显著抑制IDH-2基因在人小细胞肺癌细胞NCI-H446中的表达,并降低细胞迁移效率,在体外和体内明显抑制NCI-H446细胞的生长。