TGFβ1转染hMSC对MHCC97-H影响的实验研究

目的观察经TGFβ1基因修饰的人骨髓间充质干细胞(hMSC)对高转移潜能肝癌细胞(MHCC97-H)增殖能力及侵袭能力的影响。方法构建TGFβ1慢病毒载体,eGFP为报告基因,转染hMSC。Transwell法检测hMSC与肝癌细胞共培养实验,检测MHCC97-H细胞侵袭能力的变化。CCK-8法检测与hMSC共培养前后MHCC97-H增殖能力的变化。PCR法检测转基因hMSC与MHCC97-H细胞共培养前后转移相关因子基因α-V、肿瘤生长因子TGFβ1和肿瘤凋亡因子PDCD4等基因表达。结果 MHCC97-H与hMSC细胞共培养后,MHCC97-H增殖能力增强,hMSC TGFβ1基因过表达组对MHCC97-H细胞增殖具有抑制作用。MHCC97-H与hMSC细胞共培养后,侵袭能力增强,hMSC TGFβ1基因过表达组对MHCC97-H细胞侵袭能力具有明显的抑制作用。hMSC基因转染组TGFβ1表达明显增高。hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞TGFβ1基因表达明显低于对照组。hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞α5基因表达降低。hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞PDCD4基因表达降低。结论转基因hMSC具有抑制MHCC97-H细胞增殖、侵袭的作用。     

骨髓间充质干细胞对高低转移潜能肝癌细胞影响的实验研究

目的观察人骨髓间充质干细胞(hMSC)对高低转移潜能肝癌细胞(MHCC97-H和MHCC97-L)侵袭能力和增殖能力的影响。方法 Transwell法检测hMSC对高低转移潜能肝癌细胞侵袭能力的影响,下室加入培养基和hMSC,上室加入高低转移潜能肝癌细胞悬液,共培养36 h,酶标仪吸光度(optical density,OD)值检测及细胞计数法观察侵袭能力的变化。CCK-8法检测hMSC对高低转移潜能肝癌细胞增殖能力的影响。PCR检测共培养前后转移相关因子骨桥蛋白(OPN)、唾液酸蛋白(BSP)、α-V基因、增殖相关基因TGFβ1和PDCD4的表达差异。结果 (1)侵袭能力检测结果:与对照组比较,镜下观察实验组高低转移潜能肝癌细胞迁移数量明显减少,OD值两组比较差异有统计学意义(P0.05)。MHCC97-H与hMSC共培养后OPN、BSP表达明显下降(P0.05),而α-V表达无明显变化(P0.05)。MHCC97-L与hMSC共培养后OPN、BSP、α-V表达均显著下降(P0.05)。(2)增殖能力检测结果:与对照组比较,实验组高低转移潜能肝癌细胞OD值明显增高(P0.05),实验组TGFβ1基因表达上调(P0.05),而PDCD4基因表达在两组间差异无统计学意义(P0.05),在MHCC97-L实验组PDCD4基因表达上调(P0.05)。结论 hMSC使高低转移潜能肝癌细胞的侵袭能力下调,增殖能力增强。     

ADAMTS9基因联合去甲氧基姜黄素对肝癌细胞侵袭迁移及PI3K/PTEN/AKT信号的影响

目的探讨过表达带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解联蛋白金属蛋白酶(ADAMTS)9基因或去甲氧基姜黄素(DMC)单独或联合对肝癌细胞侵袭迁移及磷脂酰肌醇3-激酶/第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白/蛋白激酶B(PI3K/PTEN/AKT)信号的影响。方法 Western印迹检测肝癌(HepG2)、MHCC 97-L和MHCC97-H细胞中ADAMTS9的蛋白表达。将MHCC97-H细胞分为对照组、pcDNA3.1-ADAMTS9组、DMC组和pcDNA3.1-ADAMTS9+DMC组4个处理组,其中pcDNA3.1-ADAMTS9的转染参照LipofectamineTM 2000转染说明,收集处理48 h的细胞,CCK8法、Transwell小室分别检测细胞活力及侵袭和迁移能力。Western印迹检测ADAMTS9、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、PI3K、PTEN和p-AKT的蛋白表达。结果肝癌HepG2、MHCC97-L和MHCC97-H细胞中ADAMTS9表达均有不同程度的降低,与正常肝细胞HL-7702比较,差异具有统计学意义(P0.05)。pcDNA3.1-ADAMTS9组DAMTS9的蛋白表达显著高于对照组(P0.05)。pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组细胞活力、侵袭和迁移能力及PCNA、MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于对照组,PTEN蛋白表达显著高于对照组(P0.05),而pcDNA3.1-ADAMTS9+DMC组细胞活力、侵袭和迁移能力及PCNA、MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组,PTEN蛋白表达显著高于pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组(P0.05)。结论过表达ADAMTS9及DMC均可抑制肝癌细胞活力、侵袭和迁移能力,两者联用对细胞抑制作用更明显,机制可能与下调PCNA、MMP-2和MMP-9及PI3K/PTEN/AKT信号通路有关。     

高低转移潜能肝癌细胞OPN、TGFβ1基因沉默位点的筛选

目的通过对高低转移潜能肝癌细胞进行骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和转移生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)基因沉默的位点进行筛选,筛选最佳基因沉默位点。方法 q PCR检测MHCC97-H和MHCC97-L细胞两种因子表达差异情况,对MHCC97-H TGFβ1和MHCC97-L OPN高表达组进行基因沉默,每组确定3个基因位点进行沉默,Western blotting法分析各组OPN和TGFβ1表达。q PCR定量分析各组沉默效果。结果 q PCR检测显示:与MHCC97-L细胞比较,MHCC97-H细胞中TGFβ1表达量更高,与MHCC97-H细胞比较,MHCC97-L细胞中OPN的表达量更高(P0.05)。q PCR定量分析3个位点沉默效果显示MHCC97-L OPN siRNA 226、MHCC97-H TGFβ1 siRNA 1382沉默效果较好(P0.05)。MHCC97-L OPN不同位点沉默效果电泳图结果显示所有沉默组MHCC97-L细胞中OPN蛋白已降到非常低水平,而MHCC97-H TGFβ1不同位点沉默效果电泳图结果显示TGFβ1沉默效果1382位点明显。结论不同的基因位点沉默效果存在差异,MHCC97-L OPN siRNA 226和MHCC97-H TGFβ1 siRNA 1382位点沉默效果最佳。通过确定最佳沉默效能的基因位点,可以达到基因最佳沉默效能为后续实验提供研究基础。     

大蒜素抑制肝癌MHCC97H细胞的迁移、侵袭

目的:观察大蒜素对肝癌MHCC97H细胞株体外增殖、迁移、侵袭及对MMP-2、MMP-9、CD24 mRNA表达的影响并初步探讨其机制.方法:以肝癌MHCC97H细胞株为研究对象,MTT法、Transwell小室实验检测不同浓度大蒜素对肝癌MHCC97H细胞株迁移、侵袭能力的影响.实时定量PCR检测(realtime quantitative PCR,qRT-PCR)法检测不同浓度大蒜素对MHCC97H细胞株MMP-2、MMP-9、CD24 mRNA表达的影响.结果:MTT显示大蒜素抑制MHCC97H细胞增殖(P0.01),呈现剂量依赖性.Transwell小室实验显示大蒜素抑制MHCC97H细胞的迁移(P0.01),一定范围内呈现剂量依赖性,大蒜素组侵袭细胞较阴性对照组显著减少(P0.01).qRT-PCR检测发现不同浓度大蒜素可以下调MHCC97H细胞MMP-2、MMP-9、CD24的表达,且呈现一定程度剂量依赖性(P0.01).结论:大蒜素对肝癌MHCC97H细胞株的增殖、迁移、侵袭有抑制作用,且在一定范围内呈现出剂量依赖性.其机制可能与抑制其MMP-2、MMP-9、CD24 mRAN的表达有关.     

SRPX2对肝癌细胞侵袭与迁移能力的影响及作用机制

目的探讨sushi重复蛋白X连锁2(SRPX2)对人肝癌细胞MHCC97H侵袭与迁移能力的影响及作用机制。方法体外培养人肝癌细胞MHCC97H,用Lipofectamine法将阴性对照和SRPX2特异性siRNA转染到人肝细胞癌MHCC97H,继续培养48 h收获细胞,用Transwell检测细胞体外侵袭和迁移能力;实时荧光RT-PCR法检测人肝癌细胞MHCC97H内SRPX2和基质金属蛋白酶(MMP2)mRNA表达的影响;Western Blot法检测人肝癌细胞MHCC97H内SRPX2和MMP2蛋白水平的影响。结果与阴性对照组比较,干扰SRPX2组人肝癌细胞MHCC97H侵袭、迁移能力、SRPX2 mRNA、MMP-2 mRNA、SRPX2蛋白和MMP-2蛋白降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 SRPX2可能通过调节MMP2而影响人肝癌细胞MHCC97H侵袭和迁移。     

siRNA沉默Bmi-1基因对人肝癌细胞株MHCC97-H侵袭迁移能力的影响

目的:探讨RNA干扰技术沉默Bmi-1基因表达后,对人肝癌细胞株MHCC97-H侵袭迁移能力的影响.方法:设计并合成针对Bmi-1基因序列特异性的双链小干扰RNA(Bmi-1-siRNA),转染高转移性人肝癌细胞株MHCC97-H,用流式细胞仪观察转染效率,荧光实时定量PCR和Westernblot检测Bmi-1基因的mRNA和蛋白表达水平;通过体外Transwell小室基质侵袭和迁移实验,观察Bmi-1表达沉默后对人肝癌细胞株MHCC97-H侵袭和迁移能力的影响.结果:将针对Bmi-1基因序列特异性的小干扰RNA(Bmi-1-siRNA)转染高转移性人肝癌细胞株MHCC97-H后,流式细胞仪显示,转染效率可达到91%.与空白组、对照siRNA组相比,实验组Bmi-1-siRNA能有效抑制MHCC97-H细胞中Bmi-1基因的mRNA(F=56.199,P<0.05)和蛋白表达水平.通过Transwell小室基质侵袭和迁移实验,我们分析了不同组细胞的侵袭迁移能力.结果发现,与空白组、对照siRNA组相比,Bmi-1-siRNA转染的MHCC97-H细胞穿透能力明显降低(F=186.66,12.746,P<0....     

BMSC对经基因沉默肝癌组织的影响

目的观察BMSC对经基因改造的具有不同转移潜能肝癌的影响。方法 63只裸鼠随机分成8组:MHCC97-L组(9只)、MHCC97-L NC组(8只)、MHCC97-L OPN沉默组(8只)、MHCC97-L TGFβ1沉默组(5只)、MHCC97-H组(8只)、MHCC97-H NC组(8只)、MHCC97-H OPN沉默组(9只)、MHCC97-H TGFβ1沉默组(8只)。肿瘤体积50 mm3左右开始瘤内注射人间充质干细胞BMSC,1×10~5/只,每周2次,连续4周。计算瘤体积抑制率(%)和瘤重抑制率(%),BMSC对经基因沉默的肝癌动物模型干预结果进行病理检测。结果与MHCC97-L组比,BMSC对MHCC97-L NC组瘤体积和瘤重均有促进作用,与MHCC97-L组比,BMSC对MHCC97-L OPN沉默组瘤体积和瘤重均有明显的抑制作用,而BMSC对MHCC97-L TGFβ1沉默组瘤体积和瘤重均有促进作用。与MHCC97-H组比,BMSC对MHCC97-H NC组瘤体积和瘤重均有轻度抑制作用,与MHCC97-H组比,BMSC对MHCC97-H OPN沉默组和MHCC97-H TGFβ1沉默组瘤体积和瘤重均有显著的抑制作用。与MHCC97-H组及MHCC97-H NC组比较,MHCC97-H OPN沉默组纤维增生及核分裂象较少,而MHCC97-H TGFβ1沉默组纤维增生明显,核分裂象较多。与MHCC97-L比较,MHCC97-L NC、MHCC97-L OPN沉默组、MHCC97-L TGFβ1沉默组见较多坏死区、较多肿瘤细胞凋亡、坏死,并可见数个核分裂象。结论抑制肿瘤OPN表达BMSC可更好地抑制肿瘤的增殖,而抑制肿瘤TGFβ1表达BMSC并不能抑制肿瘤的增殖。相应的抗体沉默OPN可能是治疗肿瘤的一个比较好的靶点,配合BMSC生物治疗会提高治疗的生物效能。     

麦冬皂苷D通过调控miR-519d-3p/EIF4E表达对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的实验研究

背景麦冬皂苷D(ophiopogonin D, OPD)是中药麦冬提取物中重要的单体成分且具有抗癌作用,但是否具有抗肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)作用还未知.本研究假设OPD能够通过上调miR-519d-3p表达进而下调真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E, EIF4E)表达发挥抗HCC作用.目的探讨OPD对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制.方法培养HCC细胞Hep G2和MHCC97,不同浓度(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)的OPD作用48h后,四甲基噻唑蓝染色法(methylthiazoletrazolium, MTT)检测细胞增殖, Transwell检测细胞迁移和侵袭,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-q PCR)检测细胞中miR-519d-3p和EIF4E m RNA表达, Western blot检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、MMP-9和EIF4E蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证miR-519d-3p和EIF4E之间关系.转染miR-519d-3p mimics、si-EIF4E构建miR-519d-3p过表达或EIF4E表达抑制的Hep G2和MHCC97细胞, RT-q PCR检测细胞中miR-519d-3p表达或Western blot检测EIF4E蛋白表达验证转染效率. MTT、Transwell、Western b l o t分别检测过表达m i R-519d-3p或抑制E I F4E表达对Hep G2和MHCC97细胞增殖、迁移和侵袭,及Cyclin D1、p21、MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响.结果与对照组比,OPD组Hep G2细胞抑制率显著升高(P 0.05),迁移和侵袭数显著降低(P 0.05),Hep G2细胞中Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达显著降低(P 0.05),p21蛋白表达显著升高(P 0.05),miR-519d-3p表达显著升高(P 0.05),EIF4Em RNA和蛋白表达显著降低(P0.05),且呈浓度依赖性. miR-519d-3p在Hep G2细胞中靶向负调控EIF4E表达.miR-519d-3p过表达或抑制EIF4E表达均可抑制Hep G2细胞增殖、迁移和侵袭.抑制miR-519d-3p表达部分逆转了OPD对Hep G2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用.结论OPD可能通过调控miR-519d-3p/EIF4E表达抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭.     

膜-细胞骨架联接分子ezrin对肝癌细胞系生长和侵袭能力的影响

目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白ezrin在肝细胞肝癌生长和转移过程中的作用。方法分别应用免疫荧光、逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot检测ezrin和骨架蛋白在不同转移潜能肝癌细胞系中的表达。选取高转移潜能SF7721（SMMC-7721经转基因后稳定表达肝细胞生长因子，从而获得高转移潜能的细胞系）和MHCC97-H细胞系为研究对象。通过RNA干扰技术下调SF7721和MHCC97-H细胞系中ezrin蛋白的表达，观察其运动和侵袭能力的变化：通过四甲基偶氮唑盐检测细胞增殖能力变化；电子显微镜观察细胞伪足；Transwell检测细胞的运动侵袭能力。结果免疫荧光显示ezrin和骨架蛋白表达于细胞质，且双色荧光证实两者存在共表达，高转移潜能细胞系SF7721。MHCC—I、MHCC97-Hezrin和骨架蛋白的表达明显高于低转移潜能细胞系SMMC-7721、Hep3B、HepG2细胞（x^2=13．277，P=0．010；x^2=21．815，P〈0．01）。D-肌动蛋白在高低转移潜能细胞系的表达差异无统计学意义。通过RNA干扰技术抑制ezrin蛋白表达后。SF7721和MHHC97-H的细胞的增殖和侵袭能力均显著下降。结论ezrin和骨架蛋白的过表达与肝癌的转移潜能相关，通过下调ezrin的表达可明显抑制肝癌细胞系SMMC-7721和MHCC97-H细胞的增殖和运动侵袭能力。     

川芎嗪对人肝癌细胞钙激活中性蛋白酶-2、黏着斑激酶及迁移侵袭能力的影响

目的探讨川芎嗪(TMP)对人肝癌细胞钙激活中性蛋白酶(Calpain)-2、黏着斑激酶(FAK)及迁移侵袭能力的影响,以了解其抑制肝癌的机制。方法将人肝癌细胞(MHCC97-H)分为对照组和TMP组,TMP组予以TMP 1.0 mg/ml干预24 h,采用Western印迹检测两组Calpain-2、FAK蛋白表达情况,划痕实验、Transwell实验检测MHCC97-H迁移、侵袭能力。结果与对照组比较,TMP组Calpain-2、FAK蛋白表达均明显下调(P0.05);其迁移率、穿膜细胞数及吸光度值均明显下降(P0.05)。结论下调肝癌细胞系(MHCC97-H)的Calpain-2、FAK水平可能是TMP抗肝癌作用机制之一。     

circ＿0016788靶向调控miR-1200抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨circ＿0016788影响肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法 选取9例肝癌患者的癌组织及癌旁组织，RT-qPCR检测组织中circ＿0016788和miR-1200表达；将肝癌细胞MHCC97分为si-NC组、si-circ＿0016788组、si-circ＿0016788+anti-miR-NC组、si-circ＿0016788+anti-miR-1200组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活性；Western印迹检测增殖、凋亡、迁移和侵袭蛋白表达；Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭；流式细胞术检测细胞凋亡；双荧光素酶报告基因实验验证circ＿0016788和miR-1200的靶向关系。结果 circ＿0016788在肝癌组织中的表达水平高于显著癌旁组织(P<0.05),miR-1200表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。抑制circ＿0016788表达后，肝癌MHCC97细胞活性、细胞迁移侵袭能力及CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率及p21、Bax表达水平显著...     

ku80蛋白表达水平与肝癌细胞侵袭迁移能力的相关性

目的观察ku80蛋白表达水平与肝癌细胞侵袭迁移能力的相关性。方法使用肝癌细胞系MHCC97-H、 MHCC97-L、HepG2及正常人肝细胞HL-7702为研究对象,分别采用RT-PCR、Western印迹方法检测ku80 mRNA及蛋白水平;体外划痕实验、Transwell侵袭实验观察4株细胞迁移、侵袭能力;免疫荧光检测ku80亚细胞定位;线性相关分析ku80及其mRNA与肝癌细胞系迁移、侵袭能力的相关性。结果 ku80 mRNA及蛋白在4株细胞系中均有表达,且在3株肝癌细胞中的表达明显高于正常肝细胞系HL-7702(均P0.05),其中MHCC97-H细胞表达水平最高(P0.01);体外划痕实验、Transwell侵袭实验显示3株肝癌细胞系的迁移、侵袭能力明显高于HL-7702细胞系(均PO.05),其中MHCC97-H的迁移侵袭能力最强(P0.01)。ku80蛋白定位于细胞核。线性相关性分析显示ku80蛋白及mRNA的表达水平与肝癌细胞系的迁移、侵袭能力呈正相关。结论 ku80蛋白主要在细胞核表达,其表达水平与肝癌细胞系的迁移、侵袭能力呈正相关。     

KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞生物力学的影响

目的 探讨KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞生物力学的影响.方法 采用微管吸吮技术研究我们前已转染人类KAI1全长正、反义结构基因的人肝癌MHCC97-H细胞粘弹性以及对FN的粘附力等生物力学参数.结果 MHCC97-H肝癌细胞的粘弹性系数K1、K2、μ在转染KAI1正义基因后明显增加(P<0.05),在转染KAI1反义基因后明显降低(P<0.01),而转染空载体后则无明显变化(P>0.1).在FN裱衬表面,各组肝癌细胞的粘附力分别为MHCC97-H-S组685.4±113.6,MHCC97-H-AS组1 124.6±123.5,MHCC97-H-pCI组849.0±126.3及MHCC97-H亲本细胞组824.7±134.1(单位为10-10 N,细胞数为25).与亲本细胞组比较,MHCC97-H细胞对FN的粘附力在转染KAI1正义基因后显著下降(P<0.01),转染KAI1反义基因后显著增加(P<0.01),而转染空载体后无明显变化(P>0.1).结论 从细胞生物力学角度,KAI1基因可能增加肝癌细胞的粘弹性及降低细胞对细胞外基质FN的粘附力,从而抑制转移的初始步骤,进而抑制MHCC97-H肝癌细胞的侵袭和转移.     

下调Six1基因表达对胃癌细胞生物学特性及B7-H1表达的影响

目的探讨抑制胃癌细胞Six1表达对癌细胞增殖侵袭及B7-H1表达的影响及机制。方法以人正常胃黏膜上皮细胞GES-1为对照细胞,Western印迹检测胃癌MKN45、BGC823和AGS细胞Six1的蛋白表达;参照LipofectamineTM2000转染说明将非特异性siRNA(NC组)和Six1特异性的siRNA(si-Six1组)转染BGC823细胞,并设置空白对照组,转染48 h,通过MTT及Transwell小室分别检测各组细胞活力及侵袭能力;Western印迹检测Six1、B7-H1及JAK2/STAT3信号通路磷酸化的JAK2、STAT3及下游分子细胞周期蛋白(cyclin)D1和基质金属蛋白酶(MMP)-2的蛋白表达。结果胃癌MKN45、BGC823和AGS细胞Six1的表达均显著高于在GES-1细胞表达(P0.05);转染si-Six1的BGC823细胞Six1的蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05);与NC组比较,si-Six1组细胞活力及侵袭能力均显著降低,B7-H1、p-JAK2、p-STAT3、cyclinD1和MMP-2的蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论下调胃癌细胞Six1表达可降低癌细胞活力及侵袭能力,降低B7-H1表达,机制可能是抑制JAK2/STAT3信号通路。     

骨桥蛋白促进人肝癌细胞株SMMC-7721恶性表型的实验研究

目的研究骨桥蛋白(OPN)对低侵袭性人肝癌细胞株SMMC-7721恶性表型的影响。方法pcDNA 3,1(-)/OPN重组质粒转染SMMC-7721细胞,以空质粒转染作对照,用RT- PCR反应、Western blot检测OPN表达水平,用ELISA检测细胞培养上清液OPN、MMP-2、-9、尿激酶纤溶酶原活化因子(uPA)水平,并用体外功能试验观察转染前后恶性表型的变化。结果重组质粒转染SMMC-7721后OPN表达明显升高,细胞培养上清液OPN为(3.02±0.12)ng/ml,对照组为(1.43±0.07)ng/ml,MMP-2重组质粒转染组为(43.04±3.06)ng/ml,对照组为(22.15±4.34)ng/ml、uPA重组质粒转染组水平明显高于空质粒转染组,分别为(4.78±0.70)ng/ml和(1.61±0.34)ng/ml,两组差异均有统计学意义,t值分别为19.89、6.81和7.03,P值均<0.01。MMP-9水平分别为(7.82±2.25)ng/ml和(7.70±1.92)ng/ml,两组差异无统计学意义。体外功能试验提示SMMC-7721转染OPN重组质粒后细胞黏附、运动和侵袭能力明显增强,细胞黏附率为75.33%±10.59%,对照组为57.34%±2.52%,t=2.86,P<0.05。运动试验透膜细胞数分别为(14.3±2.5)个和(6.3±1.5)个,t=4.70,P<0.05。侵袭试验透膜细胞数分别为(8.2±1.5)个和(4.1±1.3)个,t=4.11,P<0.05。而细胞增殖能力无明显改变。结论OPN可能是通过增加MMP-2、uPA分泌促进人肝癌细胞株SMMC-7721的恶性表型。     

HOXD10基因转染对人胃癌耐药SGC7901/VCR细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

目的研究HOXD10基因转染人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR后表达情况及对细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响。方法将HOXD10基因表达质粒(pc DNA3.1-EGFP-HOXD10)转染至SGC7901/VCR中,利用Real-time PCR和Western blotting检测HOXD10基因转染后表达效果;MTT方法、平板单克隆实验、流式细胞术、Transwell方法分别检测HOXD10基因转染对细胞增殖、单克隆形成、细胞周期、凋亡、侵袭能力的影响;并用Western blotting检测HOXD10基因转染对肿瘤侵袭性相关因子MMP-2蛋白表达的影响。结果 HOXD10基因转染至人胃癌SGC7901/VCR细胞后其基因和蛋白表达水平均显著上升(P0.05),能够抑制SGC7901/VCR细胞增殖、单克隆形成、细胞周期,并提高顺铂作用下细胞凋亡率(P0.05),同时显著抑制细胞侵袭能力和MMP-2蛋白的表达(P0.05)。结论 HOXD10基因转染人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR后能够高表达,进而抑制细胞增殖、单克隆形成、细胞周期和侵袭能力并提高顺铂下细胞凋亡率,而其抑制细胞侵袭能力可能与MMP-2表达减少有关。     

活化血管内皮生长因子受体-1诱导肝癌细胞MHCC97-H上皮-间叶表型转化的实验研究

目的 探讨血管内皮生长因子受体1(VEGFR-1)促肝细胞癌(HCC)侵袭转移的作用机制.方法 用VEGFR-1的特异性配体血管内皮生长因子-B(VEGF-B)诱导活化肝癌细胞MHCC97-H,观察MHCC97-H细胞形态学改变,RT-PCR和Western blot检测MHCC97 H细胞上皮标志物钙黏蛋白(E-cad)、连环蛋白-a(a-cat)和间叶标志物波形蛋白、神经钙黏蛋白(N-cad)的mRNA和蛋白质表达改变,细胞荧光免疫组织化学法检测E-cad、a-cat和波形蛋白、N-cad表达部位改变,细胞侵袭和迁移试验检测MHCC97-H细胞侵袭和运动能力的改变.组间比较采用单因素方差分析.结果 VEGFR-1活化后MHCC97-H细胞变成梭形、纺锤状,细胞间隙增宽,有的伸出伪足;活化前上皮标志物E-cad、a-cat的mRNA吸光度值(A值)分别为12.55±2.98、14.23±1.36,活化后E-cad、a-cat的A值分别为6.78±3.66、6.18±0.92,活化后上皮标志物的mRNA表达显著下调,F=17.21,P＜0.05.活化前上皮标志物E cad、a-cat蛋白的A值分别为20 878±11.54、7520.45±8.66,活化后E cad、a-cat的A值分别为8031.23±10.44、5425.15±7.37,活化后上皮标志物的蛋白表达显著下调,F=30.49,P＜0.05.波形蛋白、Ncad mRNA的A值分别为0.72±1.77、4.46±6.50,活化后的分别为26.58±7.97、26.98±10.79,活化后间叶标志物的mRNA表达显著上调,F=26.24,P＜0.05.活化前波形蛋白、Ncad蛋白的A值分别为6100.22±12.73、1244.64±10.27,活化后的分别为12836.99±9.67、4586.70±8.58,活化后间叶标志物的蛋白表达显著上调,F=19.16,P＜0.05.上皮标志物E-cad和a-cat在胞膜表达减少,胞质中的表达增加,波形蛋白和N-cad在胞质中表达显著增加;MHCC97-H细胞运动和侵袭能力显著增强,与活化前相比,F=20.13,P＜0.05,差异有统计学意义.结论 VEGFR-1促进肝细胞癌侵袭和转移是通过诱导肝癌细胞发生上皮-间叶表型转化实现的.     

不同转移潜能肝癌细胞株血管内皮生长因子及其受体的表达和意义

目的 探讨血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)在不同转移潜能肝癌细胞株中的表达及其意义.方法 应用半定量RT-PCR、酶联免疫吸附试验和(或)Western blot检测4株不同转移潜能的肝癌细胞株及一株正常肝细胞中VEGFR-1、VEGF-A、VEGF-B及VEGFR-2的mRNA和(或)蛋白质表达.结果 MHCC97-H、MHCC97-L和SMMC-7721细胞均有VEGFR-1 mRNA和蛋白质表达,且VEGFR-1 mRNA和蛋白质在MHCC97-H中的表达高于MHCC97-L、SMMC-7721的表达,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而其配体VEG-A和VEGF-B在检测的4种肝癌细胞株和正常肝细胞株L-02中均有表达.同时在检测的四种肝癌细胞株和正常肝细胞株L-02中均能检测到VEGFR-2 mRNA和蛋白质表达,但各组间表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 具有转移潜能的肝癌细胞株有VEGFR-1表达,而且其表达强弱与肝癌细胞株的转移潜能呈正相关,VEGFR-1的表达可能促进了肝细胞癌的侵袭转移.     

组织蛋白酶-S在肝癌细胞中的表达及意义

目的研究组织蛋白酶-S（Cat-S）在肝癌细胞和正常肝细胞中的表达情况,探讨其与肝细胞癌（HCC）发生、发展的关系。方法体外培养高转移人肝癌细胞株MHCC97-H、低转移人肝癌细胞MHCC97-L和正常肝细胞LO2,采用荧光定量PCR技术定量检测其Cat-S mRNA表达水平。结果 Cat-S mRNA在LO2细胞中呈弱表达,MH-CC97-H细胞及MHCC97-L细胞表达均明显高于LO2细胞（P〈0.05）;MHCC97-H细胞表达明显高于MHCC97-L细胞（P〈0.05）。结论 Cat-S在高转移、低转移肝癌细胞株和正常肝细胞株中的表达存在差异性,此可能与肝癌的发生发展有关;Cat-S可作为肝癌诊治的分子靶标。