Faecalibacterium prausnitzii对实验性结肠炎中TLR4/NF-κB信号通路的影响

背景:Faecalibacterium prausnitzii(Fp)是一种肠道共生菌,其数量减少是炎症性肠病(IBD)患者肠道菌群紊乱的重要特征之一。既往研究显示Fp上清液在实验性结肠炎中具有明显的抗炎效应。目的:探讨Fp上清液在实验性结肠炎中的抗炎效应是否与抑制TLR4/NF-κB信号通路激活有关。方法:24只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、结肠炎模型组和Fp上清治疗组。通过予小鼠连续5 d饮用3.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)建立急性结肠炎模型,观察小鼠体质量和结肠组织病理学变化,分别以real-time PCR和免疫组化法检测结肠组织TLR4 mRNA和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)表达,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、环氧合酶-2(COX-2)水平。结果:与正常对照组相比,结肠炎模型组小鼠体质量明显下降,结肠缩短,结肠组织病理学评分、TLR4 mRNA和p-NF-κB p65表达以及血清TNF-α、IL-6、COX-2水平均显著升高(P0.05)。Fp上清治疗组上述指标均较结肠炎模型组显著改善(P0.05),其中血清炎症因子水平与正常对照组相比无明显差异(P0.05)。结论:Fp上清液通过抑制TLR4/NF-κB信号通路激活及其下游炎症因子表达,在实验性结肠炎中发挥抗炎效应。     

中药红藤合剂灌肠对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的影响

目的 探讨中药红藤合剂灌肠对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠结肠炎的影响,为中药灌肠的临床应用提供实验依据.方法 给昆明小鼠连续饮用5%的葡聚糖硫酸钠13天,造成小鼠结肠炎模型.实验分为对照组(未处理)、模型组(DSS处理)和实验组(造模后红藤合剂灌肠).病理切片检测小鼠局部肠道病理变化;ELISA法检测局部肠道组织细胞因子分泌情况;Western Blot法检测肠道组织IκBα、NF-κβ表达.结果 模型组小鼠疾病活动指数、病理评分均明显高于对照组,局部组织细胞因子IL-12p、TNF-α明显上升,抑炎因子IL-10表达下降,IκBα表达减弱,NF-κB表达上调,且中药治疗组可以有效地缓解临床症状,调节局部肠道组织IκBα、NF-κB细胞因子的表达.结论 中药红藤合剂灌肠对DSS诱导的结肠炎小鼠有较好的治疗作用,而这种作用可能是通过对肠道IκBα、NF-κB的表达产生影响,并进而凋节局部细胞因子的表达来达成的.     

VX-680对小鼠实验性结肠炎NF-κB通路的调节作用

目的 探究极光激酶A(Aurora-A)抑制剂(VX-680)对小鼠实验性结肠炎的作用以及对NF-κB通路的调节作用。方法 选择18只体质量相近的C57BL/6小鼠，随机分为3组，每组各6只：对照组(正常饮水+10%DMSO溶剂腹腔注射7 d)、DSS模型组(3%DSS饮水造模+10%DMSO溶剂腹腔注射7 d)、治疗组[3%DSS饮水造模+VX-680(40 mg/kg)腹腔注射7 d]。记录小鼠肠炎疾病活动指数(disease activity index, DAI)和结肠组织病理评分，ELISA检测小鼠结肠组织炎性因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ的变化，qRT-PCR检测Mucin-1、Mucin-2、NF-κB p65的mRNA表达，检测Aurora-A和NF-κB通路中NF-κB p65、IRF-5的蛋白表达。结果 与对照组相比，DSS模型组DAI评分和组织病理学评分更高(P<0.01),促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ的表达上升(P<0.01),Mucin-1、Mucin-2的mRNA水平下降(P<0.01)...     

不同频率电针足三里对运动大鼠腓肠肌核因子-κB、血清肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β的影响

目的研究不同频率电针对运动大鼠腓肠肌核因子(NF)-κB、血清肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β的影响。方法采用Bedford渐增负荷跑台跑运动模型,用韩式电针仪对运动性疲劳大鼠双侧足三里穴进行2/15 Hz、2/100 Hz两种不同频率的刺激,观察血清睾酮/皮质酮比值、腓肠肌NF-κB含量、血清TNF-α和IL-1β含量的变化。结果 1与安静对照组比较,运动组大鼠血清睾酮/皮质酮比值显著降低(P0.05,P0.01);2运动组大鼠腓肠肌NF-κB、血清TNF-α和IL-1β显著升高(P0.05,P0.01);3运动+2/15 Hz电针组和运动+2/100 Hz电针组两组大鼠腓肠肌NF-κB、血清TNF-α和IL-1β与运动后60 min组比较差异显著(P0.05,P0.01);4运动+2/15 Hz电针组大鼠腓肠肌NF-κB、血清TNF-α和IL-1β与运动+2/100 Hz电针组比较,差异显著(P0.05,P0.01)。结论 1急性运动后可显著增加大鼠腓肠肌NF-κB、血清TNF-α和IL-1β含量;2不同频率电针均可降低急性运动后大鼠腓肠肌NF-κB、血清TNF-α和IL-1β的含量;32/15 Hz可能是要筛选的电针消除运动性疲劳的最佳频率。     

通心络胶囊对冠脉支架植入术后病人NF-κB,IL-6及TNF-α表达的影响

目的研究通心络胶囊对冠脉支架植入术后核转录因子κB(NF-κB)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达情况的影响。方法选取164例于我院接受冠脉支架植入术的冠心病病人,将其随机分为A组(通心络组,82例)和B组(对照组,82例),A组在B组基础上加用通心络胶囊2粒每日3次口服。所有病人均于术前及术后14d检测血清NF-κB、IL-6及TNF-α。结果A组有效性较B组更高(P0.05);B组NF-κB,IL-6及TNF-α表达水平高于A组(P0.05)。结论通心络胶囊能有效改善冠脉支架植入术后病人心绞痛症状;同时可显著抑制NF-κB,IL-6及TNF-α的表达,抑制炎症反应,可能改善冠脉支架植入术后再狭窄的发生。     

健脾清肠方对DSS诱导结肠炎小鼠肠道动力学影响的研究

[目的]探讨健脾清肠方(JQD)对DSS诱导结肠炎小鼠肠道动力的作用机制。[方法]C57BL/6小鼠随机分为Control组、DSS组、JQD组、5-ASA组。除Control组外,余各组小鼠用5%DSS自由饮用诱导结肠炎模型,造模7d后灌胃给药。第15天处死小鼠收集结肠组织,检测结肠组织病理学,ICC的超微结构,结肠组织IL-1β、IL-10、IFN-γ、TNF-α含量,c-kit mRNA、LC3-II mRNA、Beclin-l mRNA、NF-κB p65表达和结肠平滑肌张力。[结果]与DSS组比较,JQD组结肠黏膜表面上皮细胞移行修复,少量炎症细胞浸润,黏膜腺体基本恢复正常;ICC与其他细胞间连接完好,内部细胞器结构相对完整,可见到少量自噬泡存在;结肠组织IL-1β、TNF-α含量降低,IL-10、IFN-γ含量上升;c-kit mRNA表达上调,LC-3II mRNA、Beclin-1mRNA、NF-κB p65表达下降;结肠平滑肌条收缩振幅上升、收缩频率减少。[结论]JQD调节DSS模型小鼠异常肠道动力,其机制可能是通过抑制NF-κB/TNF-α通路及调节细胞因子IL-1β、IL-10、IFN-γ表达,抑制了肠道炎症的级联放大反应;抑制ICC过度自噬,调控ICC/SMC网络通路。     

壳寡糖抑制炎症相关性结直肠癌的研究

目的观察壳寡糖对炎症相关性结直肠癌(CAC)的防治效果和对肠道细菌的影响。方法 32只8~10周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为健康对照组(CK,正常饮食)、壳寡糖对照组(COS,每日灌胃壳寡糖300mg/kg)、炎症相关性结直肠癌模型组(CAC,氧化偶氮甲烷AOM/葡聚糖硫酸钠DSS诱导炎症相关性结直肠癌)和壳寡糖治疗组(CAC+COS,每日灌胃壳寡糖300mg/kg的CAC处理组),每组8只。每周称量小鼠体重并测定疾病活动指数(DAI),造模结束时(第10周末)取小鼠结肠组织,进行病理组织学检查和结肠上皮细胞因子COX-2、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α丰度的RT-qPCR检测,以及小鼠粪便中总细菌、乳酸杆菌、肠球菌、具核梭杆菌、丁酸盐产生菌丰度的Real-time PCR检测,评估壳寡糖对CAC的防治效果和对肠道细菌的影响。结果 CAC+COS组小鼠成瘤率从CAC组的100%下降至71.4%,且小鼠体重下降得到明显改善,实验结束时CAC组小鼠体重为(22.14±1.18)g,CAC+COS组为(24.84±0.60)g,差异有统计学意义(P0.05);CAC组小鼠出现肛门脱垂,CAC+COS组小鼠未出现明显脱肛。CK和COS组小鼠DAI为0;CAC和CAC+COS组小鼠在实验第1周即出现腹泻等疾病活动特征,但从第4周开始,CAC+COS组小鼠DAI显著降低至实验结束时分别为1.57±0.23和2.67±0.47,与CAC组比较差异有统计学意义(P0.05)。CAC组小鼠结肠上皮细胞因子COX-2、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-αmRNA较CK和COS组均显著升高,壳寡糖的应用可显著下调上述5种因子的丰度(P0.05),ΔΔCT值CAC+COS组分别为3.57±0.90、5.25±0.82、1.26±0.64、1.32±0.25和1.50±0.25,CAC组分别为5.56±0.94,7.99±0.94,3.53±0.48,3.63±0.30和2.78±0.40。CAC组小鼠肠道的肠球菌和具核梭杆菌较CK组显著增加(Lg值分别为3.52±0.18vs.0.97±0.22,2.06±0.07vs.1.21±0.06),丁酸产生菌较CK组显著减少(Lg值为1.00±0.21vs.2.85±0.09)(P0.05);而壳寡糖治疗后的CAC+COS组中肠球菌和具核梭杆菌丰度均较CAC组小鼠显著降低(Lg值分别为1.16±0.15vs.3.52±0.18,1.69±0.20vs.2.06±0.07),丁酸盐产生菌显著增加(Lg值为2.11±0.22vs.1.00±0.21)。结论壳寡糖可通过显著降低小鼠疾病活动指数、成瘤率和改变结肠上皮细胞因子丰度控制小鼠炎症相关性结直肠癌的发生发展,且壳寡糖可显著增加肠道总细菌和丁酸盐产生菌丰度,降低肠球菌和具核梭杆菌的丰度,是预防和治疗炎症相关性结直肠癌的潜在有效药物。     

锚蛋白重复序列通过NF-κB信号通路参与肠炎相关肿瘤的调控

目的:探讨锚蛋白重复序列(gann ankyrin repeats,Gankyrin)在炎症相关肿瘤进展中的作用机制.方法:将36只同系C57BL/6♂鼠随机分为3组,其中12只服用2.5%葡聚糖硫酸钠盐(dextransodium sulfate,DSS)饮水建立溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型,其中12只首日腹腔注射氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM),10 d后开始服用2%DSS 7 d,恢复正常饮水2 wk后再次口服2%DSS共3个循环,建立结肠炎相关肿瘤(colitis-associated cancer,CAC)模型,另有12只同种系小鼠口服普通饮水饲养作为对照组.分别采用病理组织学苏木精-伊红(hematoxylineosin,HE)染色观察结肠组织;并用实时荧光定量PCR方法检测3组结肠组织中Gankyrin的m RNA水平;采用双荧光报告系统检测Gankyrin对肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和白介素(interleukin,I L)-1β刺激下核因子-κB(nuclear factor-κB,N F-κB)转录活性的影响,同时用免疫印迹方法检测转染效率.结果:病理组织学HE染色证实了UC和CAC小鼠模型的建立;3组小鼠结肠组织中Gankyrin mRNA表达明显不同,在肿瘤组织中Gankyrin mR N A水平明显高于炎症组织;在H C T116细胞中过表达Gankyrin能够明显抑制TNF-α和IL-1β刺激引起的NF-κB转录活性,而干涉Gankyrin后得到的结果则相反.结论:在肠炎进展至肠癌过程中Gankyrin的表达明显上调,可能通过NF-κB信号通路参与肠炎相关肿瘤的调控.     

阿托伐他汀对溃疡性结肠炎小鼠炎症因子和血管内皮的影响

目的观察阿托伐他汀对溃疡性结肠炎小鼠炎症因子表达水平的影响。方法将27只清洁级C57BL/6小鼠随机分成3组,模型组和干预组饮用2%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液,干预组在造模前1周给予阿托伐他汀灌胃,持续42d至实验结束。比较各组小鼠的一般情况和结肠组织病理学,ELISA法检测血清白介素-8(IL-8)和血管内皮生长因子(VEGF)的水平,免疫组化法检测主动脉核转录因子(NF-κB)和VEGF的表达。结果与对照组相比,模型组小鼠肠道黏膜的炎症表现明显,血清IL-8和VEGF的水平显著升高(P0.05);与模型组相比,干预组血清IL-8和VEGF的水平显著降低(P0.05),免疫组化法提示小鼠主动脉NF-κB和VEGF的表达减少(P0.05)。结论阿托伐他汀可能通过降低炎症因子的表达水平而发挥血管内皮的保护作用。     

甘草查尔酮A对THP-1巨噬细胞促炎因子表达的影响——依赖于TLR-4/NF-κB炎症信号通路

目的探讨甘草查尔酮A(Lico A)对脂多糖(LPS)诱导的人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)巨噬细胞相关炎症因子表达的影响。方法用100μg/L佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞48 h,使其分化为巨噬细胞后,分为空白组、LPS组和LPS+不同浓度Lico A组(20、10、5 mg/L)。用酶联免疫吸附法检测细胞培养液中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,实时定量PCR检测Toll样受体4(TLR-4)和核因子κB(NF-κB)m NRA水平,采用Western blot检测TLR-4、NF-κB、IκB激酶(IKKα)、磷酸化IKB-α(p-IKB-α)、环氧合酶2(COX-2)和一氧化氮合酶(i NOS)蛋白表达水平。结果 LPS诱导THP-1巨噬细胞后,IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高,Lico A可降低LPS诱导引起的IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平升高。LPS刺激后TLR-4 m NRA及蛋白表达增加,NF-κB活化,Lico A可拮抗以上作用,阻止NF-κB活化。结论 Lico A可通过TLR-4/NF-κB通路抑制LPS诱导的THP-1巨噬细胞炎性反应。     

NF-κB p65反义寡核苷酸对TNBS结肠炎小鼠肠黏膜细胞因子和NF-κB表达的影响

目的:探讨NF-κB p65反义寡核苷酸对实验性结肠炎BALB/c小鼠肠黏膜NF-κB表达的抑制作用和对黏膜肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-10、IL-1β)表达的影响,研究其对肠道炎症的治疗作用.方法:将50只BALB/c小鼠均分为模型对照组(UC组)、NF-κB p65反义寡核苷酸组(ASODN组)、错义寡核苷酸组(MSODN组)和正义寡核苷酸组(SODN组),采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠造模.造模后24h后对各组进行相应灌肠治疗,灌肠后第7天处死小鼠,行光镜下观察肠黏膜炎症并评分,免疫组化检测各组小鼠肠黏膜CTNF-α、IL-1β、IL-10和NF-κB表达.结果:ASODN组小鼠在结肠炎症评分较UC组、MSODN组和SODN组明显改善(均P<0.05).ASODN组小鼠TNF-α、IL-1β、NF-κB表达较UC组、MSODN组和SODN组明显减少(82.68±14.30 VS 168.48±11.89,166.49±11.63,176.49±12.33, P<0.05;42.42±5.77 VS 168.48±11.89,120.43±28.21,131.43±30.601, P<0.01;62.66±11.32 VS 158.38±12.49,161.09±12.73,168.64±11.83, P<0.01),而IL-10表达则显著增多(146.68±6.02 VS 62.50±11.57,58.44±10.92,54.24±10.64, P<0.01).结论:NF-κB p65反义寡核苷酸可抑制NF-κB的活化,降低TNF-α、IL-1β表达,升高IL-10的表达,减轻小鼠结肠炎症,可用于治疗实验性结肠炎.     

血脂康胶囊对LPS诱导大鼠肝脏Kupffer细胞NF-κB表达的影响

目的探讨血脂康胶囊对脂多糖(LPS)诱导大鼠肝脏Kupffer细胞NF-κB表达的影响。方法将分离的Kupffer细胞按1×105个/ml接种于24孔板内培养48 h后,对照组:常规培养;LPS组:给予终浓度为100 ng/ml的LPS培养8 h;血脂康胶囊组:血脂康胶囊用生理盐水溶解,90 mg·kg-1·d-1,其余处理同LPS组。ELISA法检测上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平。Western blotting检测胞浆IκBα、p-IκBα及胞核NF-κB p65蛋白表达水平。结果 LPS组细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6表达高于对照组(P0.05)。血脂康胶囊组细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6低于LPS组(P0.05),但高于对照组(P0.05)。对照组胞浆蛋白IκBα表达显著高于LPS组和血脂康胶囊组(P0.05),但LPS组明显低于血脂康胶囊组(P0.05)。LPS组胞核NF-κB p65和p-IκBα表达高于对照组和血脂康胶囊组(P0.05),但血脂康胶囊组表达低于LPS组(P0.05)。结论血脂康胶囊对LPS诱导的Kupffer细胞炎症因子分泌有一定的抑制作用。     

外源性补充FGF-10对新生支气管肺发育不良小鼠肺损伤的修复作用研究

目的探究外源性补充纤维母细胞生长因子10(FGF-10)对新生支气管肺发育不良(BPD)小鼠肺损伤的修复作用。方法新生KM小鼠45只随机分为对照组、模型组、FGF-10组,每组15只,对照组置于空气中(氧浓度维持在21%),模型组、FGF-10组置于封闭氧箱中(氧浓度维持在60%),以制备BPD模型,从造模开始,FGF-10组小鼠给予外源性FGF-10 400ug/kg腹腔注射,1次/d,连续21 d。22 d时,观察小鼠一般情况,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织中炎性因子白细胞介素6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及FGF-10水平,采用Western Blot检测肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)p65蛋白表达水平。结果 FGF-10组小鼠较模型组小鼠生长、反应、进食、呼吸等一般状况好转,未出现死亡小鼠,各组小鼠体重差异显著(P0.05)。FGF-10组病理改变较模型组明显减轻,肺大泡明显减少,肺泡结构趋于正常,炎性浸润、间质水肿有明显改善。模型组小鼠肺组织中FGF-10水平显著低于对照组(P0.05);FGF-10组小鼠肺组织中FGF-10水平显著高于模型组(P0.05);模型组小鼠肺组织中IL-6、IL-8、TNF-α、NF-κB p65水平显著高于对照组(P0.05);FGF-10组小鼠肺组织中IL-6、IL-8、TNF-α、NF-κB p65水平显著低于模型组(P0.05);FGF-10组小鼠肺组织中FGF-10、NF-κB p65、IL-6、IL-8、TNF-α水平与对照组比较有显著差异(P0.05)。结论外源性补充FGF-10对新生支气管肺发育不良小鼠肺损伤具有修复作用,其作用可能通过抑制NF-κB信号通路介导的炎症反应而实现。     

小分子RNA干扰PTPRO表达对克罗恩病大鼠的保护作用及机制研究

目的探究小分子RNA干扰受体型蛋白酪氨酸磷酸酶样O(PTPRO)表达对克罗恩病(CD)大鼠的作用及机制。方法将40只大鼠随机分为4组:对照组(A组)、模型组(B组,TNBS+尾静脉注射生理盐水)、空载体组(C组,TNBS+尾静脉注射含空载质粒的慢病毒)和干扰组(D组,TNBS+尾静脉注射含si-PTPRO mRNA质粒的慢病毒),每组各10只。采用TNBS乙醇溶液灌肠构建CD大鼠模型。采用HE染色方法观察肠黏膜组织的病理学变化,实时荧光定量PCR法检测PTPRO mRNA水平,酶联免疫法检测肠黏膜组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白质免疫印迹法检测PTPRO、Toll样受体4(TLR4)及核因子κB(NF-κB)蛋白水平。结果与A组比较,B组的CD疾病活动指数、PTPRO mRNA、IL-1β、IL-6、TNF-α、PTPRO、TLR4及NF-κB水平均升高,IL-10水平降低,差异均有统计学意义(P均0.05)。与B组和C组比较,D组的CD疾病活动指数、PTPRO mRNA、IL-1β、IL-6、TNF-α、PTPRO、TLR4及NF-κB水平均降低,IL-10水平升高,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论抑制PTPRO表达对CD大鼠有一定保护作用,其机制可能与调控TLR4、NF-κB表达有关。     

肾上腺髓质素对实验性溃疡性结肠炎小鼠作用的研究

目的观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)对实验性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠的作用,并探讨其可能的作用机制。方法 30只清洁级C57BL/6小鼠,随机分为正常对照组、模型组、AM干预组,每组10只。模型组和AM干预组给予质量浓度为40 g/L的葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)水溶液自由饮用7 d,建立小鼠急性UC模型。评估模型建立成功后,对照组和模型组给予0. 5 ml生理盐水灌肠,AM干预组给予0. 5 ml AM灌肠,实验期间观察各组小鼠精神、毛发、饮食、大便性状等变化,记录小鼠体质量改变,对3组小鼠的疾病活动指数(DAI)、肠黏膜及组织学损伤进行评分。HE染色评估小鼠结肠病理变化,Western blotting检测结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白的表达; ELISA检测血清NF-κB、TNF-α、IL-6表达。结果模型组小鼠DAI、肠黏膜及组织学损伤评分均显著高于正常对照组和AM干预组,差异有统计学意义(P 0. 01)。与正常对照组相比,模型组TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及炎症因子TNF-α、IL-6的表达均明显增加(P 0. 05),给予AM干预后,TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及炎症因子TNF-α、IL-6的表达均下调(P 0. 05)。结论 AM干预能减轻UC小鼠结肠损伤情况,其机制可能是通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,下调TNF-α、IL-6等炎症因子表达从而对UC小鼠发挥治疗作用。     

苦瓜蛋白通过阻止核因子κB核转位抑制炎性因子生成

目的 研究苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠炎症因子核因子κB(NF-κB)蛋白核转位的影响,探讨苦瓜蛋白抗炎的分子机制.方法 40只6周龄雄性ApoE-/-小鼠,随机分为普食组、高脂高胆固醇组、高脂高胆固醇苦瓜蛋白组、普食苦瓜蛋白组.12周后眼球采血,ELISA测定血浆中炎性因子NF-κB、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6和γ干扰素(IFN-γ)及抗炎因子IL-10的水平,免疫组织化学检测主动脉壁IκB表达,RT-PCR和Western blot检测NF-κB和IκB表达.结果 ApoE-/-小鼠经高脂高胆固醇饲料喂养12周后,血液中炎症因子NF-κB、IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平均显著高于普食组(P＜0.01,n=5),但抗炎因子IL-10仍维持较高水平.经苦瓜蛋白干预后,血清中炎症因子水平下降,而抗炎因子IL-10水平并不上升.RT-PCR以及Western blot检测结果表明,苦瓜蛋白显著降低高脂高胆固醇饲料喂养小鼠动脉血管壁细胞核内NF-κB蛋白水平,阻止其核转位.与普食组比较,高脂高胆固醇组IκB被显著降解(0.19±0.05比0.74 +0.15,P＜0.05,n=5),但其经苦瓜蛋白干预后,这种降解作用得到显著的抑制(0.19±0.05比0.36±0.07,P＜0.01,n=5).结论 苦瓜蛋白通过减少IκB降解抑制NF-κB蛋白核转位而发挥抑制炎性因子生成的作用.     

异鼠李素对高糖高脂诱导胰岛β细胞损伤保护作用的研究

目的探讨异鼠李素(ISO)对高糖高脂诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞损伤的保护作用及机制。方法不同浓度ISO预处理MIN6细胞后高糖高脂培养48 h,CCK8法筛选ISO最佳干预浓度。细胞分为正常对照(Con)组(11. 1 mmol/L葡萄糖)、高糖高脂损伤模型(M)组(33. 3 mmol/L葡萄糖+0. 25 mmol/L棕榈酸)及ISO预处理(ISO+M)组(10μmol/L ISO+33. 3 mmol/L葡萄糖+0. 25 mmol/L棕榈酸)。流式细胞术测定各组细胞凋亡率;硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量;RT-PCR测定IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达;Western blot法检测磷酸化核因子κB(NF-κB)抑制蛋白(IκB)激酶β(p-IKKβ)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及NF-κB p65蛋白的表达。结果细胞凋亡及NO含量M组高于Con组,ISO+M组低于M组(P0. 01)。IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA,p-IKKβ、p-IκB、iNOS蛋白与NF-κB p65蛋白表达M组高于Con组,ISO+M组低于M组(P0. 05)。结论 ISO可减轻高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,可能与抑制IκB激酶(IKK)/IκB/NF-κB/iNOS通路活性有关。     

基于TLR4/NF-κB信号通路研究调肝理脾方联合熊去氧胆酸干预原发性胆汁性胆管炎小鼠的作用机制

目的:通过研究肿瘤坏死因子-a(TNF-α)及Toll样受体4/核转录因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路相关基因在原发性胆汁性胆管炎(PBC)模型小鼠回肠组织中的表达情况,探讨中药调肝理脾方(TGLP)联合熊去氧胆酸(UDCA)干预PBC小鼠的作用机制。方法:将100只C57BL/6雌性小鼠随机分为正常组、模型组、阳性组(UDCA 0.1g·kg~(-1)·d~(-1))、中药组(TGLP 5.4g·kg~(-1)·d~(-1))、联合组(TGLP 5.4g·kg~(-1)·d~(-1)+UDCA 0.1g·kg~(-1)·d~(-1)),每组20只;采用聚肌胞苷酸(poly l:C)5mg/kg复制PBC小鼠模型;给药8w、16w后颈脱位法处死小鼠,采集末端回肠,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法及实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测回肠组织中TLR4、TNF-α的表达水平,RTPCR法测定回肠组织中TLR4、NF-κB mRNA的相对表达水平。结果:与模型组比较,正常组小鼠回肠组织中NF-κB、TNF-α表达水平较低,差异有显著性意义(P0.01);经治疗后3个治疗组小鼠TLR4、NF-κB、TNF-α表达水平均较模型组降低,差异有显著性意义(P0.01或P0.05),且联合组小鼠TLR4、NF-κB、TNF-α表达水平下降最显著;与联合组相比,中药组小鼠NF-κB表达水平较高,差异有显著性意义(P0.01或P0.05)。结论:负性调节小鼠回肠组织中TLR4/NF-κB信号通路并抑制TNF-α因子的释放可能是TGLP联合UDCA干预PBC模型小鼠的作用机制之一。     

雷公藤多苷通过抑制TLR4/NF-κB信号通路抑制小鼠结肠炎症

背景:临床实践中,雷公藤多苷对溃疡性结肠炎(UC)具有良好的疗效,但确切机制不明。目的:探讨雷公藤多苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎模型的治疗作用及其可能机制。方法:60只健康雄性BALB/c小鼠随机分为6组:模型对照组、低、中、高剂量雷公藤多苷组、空白对照组和正常对照组,前四组自由饮用5%DSS溶液1周复制结肠炎模型,同时予蒸馏水或相应浓度雷公藤多苷[9.01、27.03、81.09 mg/(kg·d)]灌胃,持续3周。观察各组动物结肠黏膜组织病理学改变,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测TLR4 mRNA和蛋白表达,免疫组化染色检测NF-κB p65表达,ELISA法检测IL-1α、TNF-α、IL-13含量。结果:雷公藤多苷组小鼠结肠黏膜出现不同程度的组织损伤和炎症改变,但均轻于模型对照组。各组雷公藤多苷组结肠黏膜组织TLR4 mRNA和蛋白表达、NF-κB p65表达和组织匀浆上清中的IL-1α、TNF-α含量均显著低于模型对照组(P0.01),中、高剂量组间差异无统计学意义(P0.05,除TNF-α),均显著低于低剂量组(P0.05),但仍高于空白对照组和正常对照组(P0.05)。结论:雷公藤多苷对DSS小鼠结肠炎有良好的保护作用,其可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路激活及其下游促炎细胞因子表达、分泌而抑制结肠炎症反应。     

硫化氢对脂多糖致大鼠ARDS时肺组织NF-κB表达的影响

目的探讨外源性硫化氢对脂多糖(LPS)致大鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的保护作用机制。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分为3组:对照组(Control)、模型组(LPS)和硫化氢干预组(Na HS+LPS),每组10只。静脉注射LPS建立ARDS模型,ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量的变化;免疫组化检测肺组织中核因子-κB(NF-κB)的表达变化。结果模型组较对照组大鼠血清中TNF-α、IL-6含量增多,肺组织中NF-κB表达增加(均P0.05);硫化氢干预组与模型组相比,血清中TNF-α、IL-6含量降低,肺组织中NF-κB表达减少(均P0.05)。结论外源性硫化氢对脂多糖致ARDS大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与降低TNF-α、IL-6含量、减少NF-κB表达有关。