因子Ⅷ的标准化:第二标准的建立和应用

本文作者参加了协作研究,以建立用于测定治疗用浓缩制剂和血浆样品中因子Ⅷ促凝活性的第二参考标准品,并对能否通过采用共同的标准品,来消除实验室间因子Ⅷ促凝活性的测定差异,进行了考查.作者用枸橼酸-枸橼酸盐-葡萄糖(ACD)作抗凝剂,采集了12名正常供血员的新鲜血浆.离心后,加入3-(N-吗啉代)-丙磺酸(MOPS)缓冲.再次离心,所得血浆以0.5ml分装于小瓶中,冻干.此为血浆标准品Pl/1.由人血浆冷沉淀制备中纯度因子Ⅷ浓缩物.(此活性为0.36IU/mg蛋白),以1ml分装于     

用巴氏法消毒的治疗用人血浆因子ⅩⅢ浓制剂

作者用混合人血浆制备了一批含有亚单位A和B的治疗用浓缩因子XⅢ,方法如下,血浆中首先加入柠檬酸磷酸盐葡萄糖或柠檬酸磷酸盐葡萄糖腺嘌呤抗凝血剂,分浆冷冻。在约0℃时迅速融化,并以低温离心法连续收集冷沉淀。再用低温乙醇法从冷沉淀上清液中提取沉淀组份I-C(去除了冷沉淀的Cohn组份1),悬于缓冲液中再次离心,上清经柠檬酸钠沉淀,加热去除纤维蛋白原,然后在山梨醇溶液中进行巴氏法消毒灭活血浆中携带的病毒。经稀释、浓缩和透析过滤除去山梨醇。     

肝素和氯化钙对因子Ⅷ的试验、稳定性和回收的影响

本文介绍了肝素单独或与氯化钙一起对因子Ⅷ凝血试验、血液和血浆中因子Ⅷ的稳定性和冷沉淀以及中纯度浓缩物中因子Ⅷ回收的影响.肝素对因子Ⅷ促凝(FⅧ:C)试验的影响,用1体积含0.15mg/ml聚凝胺的巴比妥缓冲液稀释因子Ⅷ溶液使含肝素5u/ml,血浆和浓缩物中FⅧ:C试验结果较好.大     

因子Ⅷ浓缩物的纯化和病毒灭活

作者建立了一种大规模提纯人因子Ⅷ浓缩物的方法。首先将融化的约250L新鲜冷冻血浆,按1:4(W/V)的比例用水(含肝素5U/ml)溶解,离心后获得2kg冷沉淀,加入3%(V/V)氢氧化铝去除凝血酶原复合蛋白,于10℃在pH6.3～6.5之间沉淀冷不溶蛋白。     

高热处理的因子Ⅷ浓缩剂的研制和小规模生产

作者介绍一种生产少量因子Ⅷ(FⅧ)的改良方法.取16单位由全血浆分离的冷沉淀物或8单位单采血浆分离的冷沉淀物,用生理盐水加至245g,加入含19.5%甘氨酸、6%NaCl的溶液(pH6.0)中,室温放置20分钟后     

利用冷不溶球蛋白工艺制备中纯度因子Ⅷ制剂

[Rock GA et al:Thromb Res 18(3/4):551,1980(英文)] 本文作者报导在制备因子Ⅷ冷沉淀过程中,增加冷不溶球蛋白沉淀步骤,可以大大提高制剂的纯度及得率。具体步骤为:一、于新鲜CPD血浆中加入肝素使达每ml含1单位肝素,于-80℃冰冻后在40℃融化,     

加热聚乙二醇法:另一种血浆分层方法

用聚乙二醇(PEG)作沉淀剂制备的血液制品证明是无毒和无热原的,并已用于制备免疫球蛋白、浓缩因子Ⅷ和人白蛋白。本文介绍用加热PEG法制备白蛋白的过程。 ACD血浆经4℃解冻,于pH6.5加39％PEG4000溶液至最终浓度为12%,离心后,沉淀再悬于12%PEG溶液,再离心,沉淀用于制备免疫球蛋白。两次离心上清合并,于pH6.5加锌酸钠0.01mol/l,搅拌下加热75℃30分钟或过滤分离沉淀。上清或滤液经石棉板过滤,调pH至4.6,加固体PEG4000至最终浓度为22%,分离白蛋白沉淀,并溶于蒸馏水(pH7.0)至蛋白浓度为8％,对4℃蒸馏水透析,除去PEG,调节蛋白浓度至5&,加锌酸钠及乙酰色氨酸钠,再经0.2μm过滤,     

制备治疗用中纯度抗血友病因子的改进方法

中纯度抗血友病因子(AHF)通常是将冰冻血浆融化,离心收集冷沉淀,用水或缓冲液自冷沉淀中抽提 AHF,然后再经氢氧化铝吸附提纯而得。其纯度介于粗制冷沉淀和再经 PEG 或甘氨酸进一步纯化的高纯度 AHF     

应用单克隆抗体精制无病毒的因子Ⅷ制剂

本文就最近正在开发的两种利用单克隆抗体(McAb)亲和层析法高度纯化的因子Ⅷ制剂(Monoclate和AHF-M)的制备、特性及临床效果作了介绍。两种制剂纯化中所用的McAb及制剂的病毒灭活方法有较大差异。 Monoclate利用vW因子的McAb作亲和层析柱。取自血浆提取的冷沉淀,上亲和层析柱,洗净杂蛋白后,用高浓度的钙离子溶液将因子Ⅷ解离洗脱,再经氨基己基琼脂糖层析后透析、过滤、冻干,最后加热灭活病毒。 AHF-M则利用因子Ⅷ促凝成分(Ⅷ∶C)的McAb作亲和层析柱。从血浆中取得的冷沉淀,先经用有机溶剂/表面活性剂处理,以     

冷沉淀临床应用现状

冷沉淀是由新鲜冰冻血浆(fresh freeze plasma,FFP)在2～4℃条件下经离心分得的糊状物,富含纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)、纤维结合蛋白(fibronectin,Fn)、von Willebrand因子(vWF)、和Ⅷ因子(FⅧ),其中还含有分离时混入的其他血浆成分.     

冷沉淀凝血因子制备方法的改进

目的 通过冷沉淀凝血因子制备方法的改变提高了产品质量.方法 1将新鲜冰冻血浆置于4±2摄氏度水浴箱内融化后,虹吸出血浆,袋内剩余40～50 ml冷沉淀凝血因子2将新鲜冰冻血浆置于(4±2)℃冰箱中过夜融化,经离心后分离出冷沉淀凝血因子20～30 ml.结果 离心法优于虹吸法.结论 本文对比离心法和虹吸法两种方法制备冷沉淀凝血酶因子,得出离心法制备冷沉淀凝血因子质量优于虹吸法,将冷沉淀凝血因子制备方法进行改进.     

用离子交换层析法直接提取血浆因子Ⅷ:C

作者报道用离子交换层析法直接从新鲜冰冻血浆（FFP）中提取人凝血因子Ⅷ（FⅧ）。将全血在采集后6小时内离心分离得血浆,冷冻后,贮存于-30℃,即为FFP。取2L FFP于37℃水浴融化,调pH至7.0,按0.5g/L血浆的量,加入干燥的DEAE-SephadexA50,室温培育30分钟。溶液过滤,上清液以等体积无菌纯水稀释,再流经DEAE-Frac-togel TSK 650M凝胶柱,洗脱后,收集组份冰冻贮存。用一期凝固法检测FⅧ :C,用火箭免疫电泳法检测[von Willebrand因子（vWF)]、纤维蛋白原等。     

从人血浆中快速提纯HBsAg

本文介绍了一种快速、简便的从人血浆中捉取HBsAg的方法,即NaBr密度梯度等密度超速离心法.HBsAg的来源:用ELISA选择HBsAg滴度最高且HBeAg阳性的血用于提取HBsAg.HBsAg的提取:将聚乙二醇(PEG)加入血浆中沉淀出HBsAg,经离心后收集沉淀,然后用0.05M Tris-0.15M NaCl缓冲液,pH8.0(TS)溶解.加蔗糖至终浓度为20%.加入适量的NaBr,使密度增至1.39g/cm~3.将这富含HBsAg的溶液(A液)分成3份,每份500ml,进行等密度离心.将足量NaBr加到含有20%蔗糖的TS     

一个新的DNA生物素化试剂——对重氮化苯甲酰生物胞素

对重氮化苯甲酰生物胞素(DBB)是实验室合成的一种DNA生物素化试剂,用其标记DNA快速方便,不需要酶或特殊仪器.将新变性的pSVK1或pUC715质粒DNA(10μg)或单链M13 DNA mp19(1μg)加到新制备的DBB(pH9,258μl,14.6mM)溶液中,室温下反应30分钟.然后加入0.1倍体积的3M醋酸钠溶液(pH5.5)和2倍体积的冷乙醇,在-20℃下放置1小时至过夜.然后高速离心15分钟,用70%的冷乙醇洗涤沉淀的核     

4℃和6℃融化新鲜冰冻血浆制备冷沉淀的比较

目的了解4℃和6℃两种温度融化新鲜冰冻血浆制备冷沉淀对凝血因子Ⅷ含量的影响。方法对30袋新鲜冰冻血浆随机分为两组,分别以4℃和6℃循环水溶箱融化制备冷沉淀,比较融化时间和冷沉淀凝血因子Ⅷ含量。结果 4℃和6℃融化时间分别为(75.9±3.9)min和(55.4±3.8)min(P<0.01);冷沉淀凝血因子Ⅷ含量分别为(95.2±5..7)IU和(93.3±5.2)IU(P>0.05)。结论 4℃和6℃融化新鲜冰冻血浆制备冷沉淀对凝血因子Ⅷ含量没有影响,但6℃比4℃制备的时间显著缩短,血站可采用6℃融化新鲜冰冻血浆制备冷沉淀。     

冷沉淀的制备与应用

冷沉淀是由采集400ml全血分离成血浆制备,由新鲜冰冻血浆在1～5℃条件下,不溶解的白色沉淀物,其被加热至37℃时溶解的液态。它主要含有第Ⅷ因子,血管性血友病因子,纤维蛋白原,纤维结合蛋白,ⅩⅢ因子,以及其它共同沉淀物,包括各种免疫球蛋白,抗A、抗B及变性蛋白等。     

青霉素烷基酯经血浆催化降解后不释放母体青霉素

本文通过对不同青霉素酯稳定性的研究,发现苄青霉素和氨苄青霉素的甲酯及甘氨酸酯,在人血浆中虽然能迅速地降解,却不能释放出母体药物。研究药物采用苄青霉素(1),苄青霉素甲酯(2),苄青霉素甘氨酸酯(3,4),氨苄青霉素(5),匹氨西林(6)和氨苄青霉素甘氨酸酯(7)(它们的化学结构见图1)。取这些化合物的储备液100μl,加至10ml预热的0.01M磷酸缓冲液(A)或80%人血浆液(B)中,配制成浓度为10~(-5)M溶液,置于恒温水浴(37℃),于不同时间取样进行HPLC分析。     

不同方法制备的绿脓杆菌类毒素及其特性

绿脓杆菌PA-7株培养在含1%甘油和0.05M谷氨酸钠的马氏肉汤中,32℃通气培养18小时,离心取其上清液,加入60%饱和硫酸铵溶液,离心,上清液经葡聚糖凝胶G-100过滤,用0.05M pH8 Tris-HCl缓冲液平衡洗脱,即为部分纯化外毒素A。洗脱液经DEAE-纤维素层析,用0.05M Tris-缓冲液平衡和0-0.3M NaCl溶液作分段洗脱,再经葡聚糖凝胶G-200过滤,浓缩,即为高度纯化的外毒素A。类毒素制备按下述方法进行;I法:绿脓杆菌肉汤培养液中,加入1%福尔马林,在pH6.2～6.6情况下,置37℃48小时,再加     

冷沉淀临床应用现状

冷沉淀是由新鲜冰冻血浆 (freshfreezeplasma ,FFP)在 2～ 4℃条件下经离心分得的糊状物 ,富含纤维蛋白原 (fibrinogen ,Fg)、纤维结合蛋白 (fibronectin ,Fn)、vonWillebrand因子 (vWF)、和Ⅷ因子 (FⅧ ) ,其中还含有分离时混入的其他血浆成分。临床上冷沉淀多用于治疗出血性疾病以及由于手术、创伤引起的凝血机制障碍等疾病。由冷沉淀制成的纤维蛋白粘合剂 (fibrinsealant ,FS)具有组织相容性、有效性、安全性和易使用性等诸多优点 ,因此越来越广泛地应用于外科领域 ,为生物制剂在临床中的应用开辟了更加广阔的前景。冷沉淀的应用研…     

虹吸法制备冷沉淀的关键控制点

目的研究虹吸法制备冷沉淀的关键控制点,旨在为临床提供高质量的冷沉淀。方法选取30袋新鲜备用血浆随机分为三组即A组、B组、C组,每组各10袋,A组水温恒定在2℃,B组水温恒定在4℃,C组水温恒定在6℃。利用血凝仪检测冷沉淀中第Ⅷ因子和纤维蛋白原的含量。结果三组不同水温制备的冷沉淀第Ⅷ因子和纤维蛋白原的含量均符合GB18469-2001《全血及成分血质量要求》,但冷沉淀中第Ⅷ因子的含量,A组与B、C两组比较有显著性差异(P<0.05),而B、C两组之间比较无显著性差异(P>0.05),纤维蛋白原的含量三组之间比较无显著性差异(P>0.05),A、B、C三组平均用时分别为160min,65min,50min。结论为了提高产品质量和工作效率,虹吸法制备冷沉淀的水浴温度应恒定在4～6℃之间较好。