抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体对原位种植人膀胱癌的影响

目的 研究抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体对裸鼠原位种植人膀胱癌生长和转移的抑制作用.方法 建立人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察双功能基因抗体对肿瘤生长和转移的影响,并计数肿瘤内微血管密度.结果 用药组与对照组比较,肿瘤生长和转移显著减慢和延缓,肿瘤内部微血管密度亦明显低.结论 抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体能够通过抑制肿瘤微血管的形成来遏制人膀胱癌的生长和转移,从而为该抗体进一步体内试验和临床应用提供了实验基础.     

抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体对血管内皮细胞增殖的影响

目的 研究抗人膀胱癌／抗VEGF双功能基因抗体体外抗血管内皮细胞增殖的活性。方法 MTT法检测抗人膀胱癌／抗VEGF双功能基因抗体对血管内皮细胞增殖的活性。结果 抗人膀胱癌／抗VEGF双功能基因抗体可以明显抑制血管内皮细胞增殖。结论 抗人膀胱癌／抗VEGF双功能基因抗体能通过抗肿瘤新生血管形成而发挥抗肿瘤作用，从而为膀胱癌的治疗提供了一种新的思路。     

抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体的动物实验研究

目的探讨抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体对人膀胱癌生长及淋巴转移的影响.方法通过构建人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型并注射双功能抗体,观察肿瘤生长及盆腔淋巴结转移情况,同时采用免疫组化法检测肿瘤微血管密度值及凋亡的肿瘤细胞指数.结果肿瘤大小:实验组为(19.50±4.51),对照组为(57.62±8.31),两组比较差异有极显著性意义(P<0.01);肿瘤微血管密度:实验组为(2 351±207),对照组为(4 356±548),两组相比差异具有显著性意义(P<0.05);凋亡指数:实验组为19.25,对照组为9.31,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05);盆腔转移:实验组无一只发生,而对照组为75.0%,两组比较,差异有极显著性意义(P＜0.01).结论抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体对人膀胱癌具有良好的靶向性,能够通过抑制肿瘤微血管形成和加速肿瘤细胞凋亡,遏制实验性人膀胱癌的生长转移,为该抗体用于临床膀胱癌的治疗提供了一定的实验依据.     

抗人膀胱癌/抗CD3双功能基因抗体对LAK细胞增殖和细胞毒作用的体外研究

目的　探讨抗人膀胱癌 /抗 CD3双功能基因抗体对 LAK细胞增殖和增强细胞毒的作用。方法　采用 1 2 5I- Ud R释放试验等检测方法。结果　双功能抗体显著提高 LAK细胞与肿瘤细胞结合率 ,促进淋巴细胞增殖 ,加入双功能抗体后 ,L AK细胞对肿瘤细胞细胞毒性明显增加。结论　抗人膀胱癌 /抗 CD3双功能基因抗体可以大大促进 LAK细胞增殖和增加细胞毒性作用 ,为膀胱癌的治疗提供新的方法。     

抗肝癌人源化单链抗体融合肿瘤坏死因子a的导向作用

目的 获得有临床应用潜力的人源化抗肝癌基因工程双功能抗体。方法 将鼠源性抗肝癌单克隆抗体HAb25的人源化单链抗体（hscFv25）基因与人TNF（基因偶连构建抗肝癌双功能抗体（hscFv25-TNF a）,亚克隆入原核GST融合表达载体pGEX 4T-1中,在大肠杆菌中进行表达并纯化目的蛋白。对肝癌SMMC-7721细胞涂片进行间接免疫荧光染色测定纯化后的基因重组双功能抗体蛋白活性。MTT实验测定hscFv25-TNF a对靶细胞SMMC-7721杀伤活性。荷肝癌（SMMC-7721）裸鼠体内的初步抑瘤实验检测hscFv25-TNF a的导向治疗效果。结果 hscFv25-TNF a具有与亲本抗体HAb25相同的抗原结合特异性。1h预处理的MTT实验显示,hscFv25-TNF a对靶细胞SMMC-7721具有明确的杀伤作用,其IC50值为7.1mg/L。且该杀伤作用可被亲本抗体HAb25所封闭,表明hscFv25-TNF a对靶细胞的杀伤作用是抗体hscFv25介导的选择性杀伤作用。hscFv25-TNF a对荷肝癌裸鼠体内直径3.0mm左右的肿瘤具有明确的导向杀伤作用,有效率达到3/3,1/3完全缓解,强于TNF a对照组,该组有效者只有2/3,同时无完全缓解。结论 hscFv25-TNF a是具有一定临床应用潜力的抗肝癌双功能抗体。     

熊果酸对膀胱癌T-24细胞生长的影响

目的 探讨三萜类化合物熊果酸(UA)对人膀胱癌T-24细胞增殖、迁移及裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及其机制.方法 应用熊果酸处理体外培养的人膀胱癌T-24细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、细胞迁移法检测UA对T-24细胞的增殖抑制效应;建立膀胱癌皮下移植瘤模型,观察UA对移植瘤的生长抑制作用.结果 体内﹑外实验结果显示:各治疗组UA能较明显抑制T-24细胞增殖、迁移,并在48 h抑制作用明显.在体内使裸鼠皮下移植瘤体积明显缩小,并表现具有一定的剂量-时间依赖关系.结论 UA能明显抑制肿瘤细胞生成,其作用靶点可能为肿瘤新生血管内皮细胞.     

子宫内膜癌组织中c-Met基因的表达及其与血管生成的关系

实体肿瘤的生长是血管生成依赖性的，因此，抗血管生成治疗已成为肿瘤治疗研究的热点。研究表明，原癌基因、抑癌基因的改变不仅在肿瘤的发生中起关键作用，而且在肿瘤的血管生成中亦起重要作用。微血管密度(MVD)是衡量血管生成的定量指标。原癌基因c-Met的激活与多种肿瘤的发生有关。     

重组人白细胞介素24对肺癌A549细胞生长和肿瘤血管生成影响的实验研究

白细胞介素24（IL-24）即黑色素瘤分化相关基因7（mda-7），除具有免疫刺激应答功能外，还有抑制肿瘤细胞生长、促进其凋亡和抑制肿瘤血管生成的作用，被认为是一种新的抑癌基因。本研究观察了pET-21a-IL-24重组质粒表达系统的表达产物——部分纯化人重组IL-24（rhlL-24）蛋白，在体内外对肺癌A549细胞、瘤体生长的抑制作用和抗肿瘤血管生成作用。     

血管抑素基因联合32P-胶体治疗大鼠肝癌的疗效

目的 评价血管抑素基因联合放射性药物32P-胶体治疗肝癌的疗效.方法 大鼠分为三组:血管抑察基因治疗(治疗)组,血管抑素基因+32P-胶体联合治疗(联合)组,空白对照组,每组20只.观察肿瘤体积、肿瘤微血管密度(MVD)、肿瘤细胞凋亡指数(AI)的变化.结果 RTPCR结果显示,在治疗组和联合组的大鼠肿瘤内,可见到大小为1400 bp的血管抑素mRNA特异性表达条带；而对照组未见到血管抑素mRNA表达；治疗组和联合组不同时间的肿瘤生长率均小于对照组(P＜0.01).联合组肿瘤生长率最小,MVD最低,提示多种具有协同作用的因素相互作用后抑瘤效果最好.结论 血管抑索和放射性药物32P-胶体通过抑制肿瘤血管内皮细胞增殖及迁移达到抑瘤的目的,具有很好的抗肝癌疗效.     

重组腺病毒介导的反义血管内皮生长因子对胰腺癌细胞生长的抑制作用

目的：构建表达反义VEGF165的重组腺病毒，探讨腺病毒介导的VEGF165反义核酸治疗胰腺癌的可行性。方法：应用基因重组技术，将513bp的人VEGF165cDNA反向克隆到腺病毒粘粒载体pAxCAwt的SwaI酶切位点。重组粘粒与腺病毒DNA末端肽复合物混合后以磷酸钙共沉淀法转染263细胞，制备出表达反义VEGF165的重组腺病毒。建立胰腺癌裸鼠皮下种植瘤模型，瘤体内直接注射重组腺病毒，观察肿瘤的生长及血管生成情况。结果：成功构建了反义VEGF165腺病毒粘粒载体pAxCAwt-αVEGF，并制备出高滴度的反义VEGF165重组腺病毒，注入胰腺癌瘤体内后，治疗组肿瘤生长速度比对照组明显减慢（P＜0．01），治疗组肿瘤微血管密度也明显减少（P＜0．01）。结论：反义VEGF165重组腺病毒可以抑制胰腺癌的血管生成和肿瘤生长，有潜在的应用价值。     

改良型TAT-VP3融合蛋白对膀胱癌的抑制效应研究

目的探讨改良型TAT-VP3融合蛋白对膀胱癌细胞的抑制效应,为其临床应用于肿瘤的生物大分子药物治疗提供实验基础。方法运用免疫细胞化学染色法确定改良型TAT-VP3融合蛋白进入到膀胱癌细胞EJ的细胞核内,CCK-8检测EJ细胞的生长抑制率,通过透射电镜观察凋亡细胞的超微结构变化,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率。结果改良型TAT-VP3融合蛋白进入膀胱癌EJ细胞核内;经该融合蛋白作用后,EJ细胞凋亡率呈时间和剂量依赖关系,细胞周期随着药物作用浓度和时间的增加而改变,EJ细胞的生长抑制率随其浓度的增加和作用时间的延长而呈明显上升趋势。结论改良型TAT-VP3融合蛋白对膀胱癌EJ细胞的增殖具有一定的抑制作用,并对该细胞具有凋亡诱导作用。     

膀胱动脉化疗栓塞对老年膀胱癌患者肿瘤微血管密度变化的影响

目的 探讨膀胱动脉化疗栓塞对膀胱癌肿瘤微血管密度变化的影响.方法 对30例膀胱癌患者化疗栓塞前、后的肿瘤组织,应用免疫组织化学SP法染色测定微血管密度,并对化疗后膀胱癌组织进行病理观察及3年生存率随访.结果 化疗栓塞前后,微血管密度值分别为69.8±3.4、56.4±3.3,差异有统计学意义(P<0.05).病理结果显示,化疗栓塞后的癌细胞有明显受损改变,患者经随访12～36个月(平均24.6个月),复发率为16.7%(5例).结论 化疗栓塞可减少膀胱癌组织微血管密度计数,提示化疗栓塞可能调节膀胱癌的分化程度,使肿瘤降级、降期,减少术后转移,降低复发率,提高生存率.     

Expression of survivin in gastric cancer and its relationship with tumor angiogenesis

BACKGROUND/AIMS: Survivin, a member of inhibitors of apoptosis, has been found in various human cancers. Its expression is associated with tumor progression and adverse outcome. Angiogenesis is an essential process for the primary tumor to grow and invade the adjacent normal structures. Angiogenic factors such as vascular endothelial growth factor induce survivin expression in endothelial cells. The current study was designed to investigate the possible role of survivin and vascular endothelial growth factor status for angiogenesis in human gastric cancer. METHODS: In this study, we conducted an immunohistochemical investigation of survivin and vascular endothelial growth factor expression in 106 tissue samples obtained from gastric cancer patients undergoing surgical treatment. To assess tumor angiogenesis, microvessel density was counted by staining endothelial cells immunohistochemically using anti-CD34 monoclonal antibody. RESULTS: The positive expression of survivin and vascular endothelial growth factor in gastric cancer tissues was demonstrated in 50.0 and 69.8% of cases, respectively. The expression of survivin did not associate with vascular endothelial growth factor expression. Expression of survivin was significantly associated with tumor size, depth of invasion, lymph node metastasis, tumor stage and poor survival (P=0.011, 0.004, 0.020, 0.002, 0.046, respectively). High microvessel density was significantly associated with lymph node metastasis and poor survival (P=0.006 and 0.017, respectively). The mean microvessel density value of survivin positive tumors was 87.4+/-34.4 and significantly higher than that of survivin negative tumors (P=0.016). The mean microvessel density value of vascular endothelial growth factor positive tumors was 98.7+/-37.0 and significantly higher than that of vascular endothelial growth factor negative tumors (P=0.001). A combined analysis of survivin and vascular endothelial growth factor status showed that the mean microvessel density value of both positive tumors was 103.7+/-33.1 and significantly higher than that of both negative tumors (P<0.001). CONCLUSION: These results suggest that survivin may play an important role in carcinogenesis by stimulating tumor angiogenesis in human gastric cancer.     

腺病毒介导反义微小RNA-21对裸鼠膀胱癌生长的抑制作用

目的 观察腺病毒介导反义微小RNA-21对裸鼠膀胱癌移植瘤的杀伤效应及毒性反应.方法 裸鼠膀胱接种人膀胱癌细胞株T24建立裸鼠膀胱癌移植瘤模型,经尿道膀胱内灌注重组腺病毒,自灌注始,每7 d测肿瘤体积,实验结束后处死裸鼠分离瘤体测量体积大小,噻唑蓝(MTT)比色法和原位末端标记(TUNEL)法分别检测肿瘤细胞增殖率和凋亡指数,常规病理学和生化检查评价肝肾毒性反应.结果 治疗组裸鼠肿瘤比未用药对照组生长明显缓慢,自实验对照的第1天算起至28 d实验结束处死裸鼠剥离出肿瘤,治疗组肿瘤体积显著小于未治疗组(P<0.05),两组间肿瘤细胞增殖率和凋亡率指数也存在显著差异(P<0.01);常规HE组织细胞染色病理检查以及血化验结果两组差异无统计学意义(P>0.05).结论 腺病毒介导的反义微小RNA-21在对裸鼠膀胱癌移植瘤生长发挥良好抑制作用的同时,对裸鼠肝肾无明显毒性反应,提示将微小RNA-21作为临床膀胱癌的靶向基因治疗可能具有一定价值.     

反义miRNA-21/rAV-Tumstatin腺病毒载体对膀胱癌细胞生长的抑制作用

目的探讨反义miRNA-21/rAV-Tumstatin腺病毒载体双靶向治疗对裸鼠原位膀胱移植瘤生长的抑制作用。方法应用携带反义miRNA-21/rAV-Tumstatin的载体经尿道膀胱灌注治疗移植癌,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法测定瘤细胞的增殖,原位末端标记(TUNEL)法检测瘤细胞的凋亡。结果 MTT法检测结果显示,反义miRNA-21,rAV-Tumstatin和联合应用组细胞的增殖率分别为48.7%±6.2%、35.8%±9.4%和27.8%±3.7%,均明显低于对照组(92.8%±7.4%,P<0.01)。TUNEL法检测结果提示,四组的瘤细胞凋亡率依次是:联合用药组(79.3%±4.1%),反义miRNA-21组(51.2%±7.5%),rAV-Tumstatin组(57.8%±6.9%),对照组(8.3%±2.6%),组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。用载体分别治疗的三组成瘤裸鼠的肿瘤生长均受到不同程度的抑制,但是联合应用组肿瘤生长更缓慢,与另外两组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),而且自28 d始其肿瘤生长几乎处于停滞状态。结论反义miRNA-21和rAV-Tumstatin单独应用虽也能不同程度地通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡,从而遏制膀胱癌细胞生长,但针对致癌基因和抑癌基因的双位靶向用药,疗效显著优于单一用药,也更接近理想治疗。     

选择性COX-2抑制剂联合顺铂对肺癌新生血管的影响及机制研究

目的研究选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂尼美舒利(NIM)单独应用以及联合顺铂(DDP)对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤血管生成的影响及其机制,为肺癌的治疗提供新思路。方法培养肺癌A549细胞,构建肺癌A549裸鼠移植瘤模型。依据随机数字表法将研究对象分为4组进行药物干预:对照组、NIM组、DDP组、NIM+DDP组,每组8只,观察一般状态。给药后第22天处死裸鼠,获取肿瘤组织,测量称取瘤重、瘤径,计算并比较各组体积抑瘤率。用CD31标记微血管,采用微血管计数法检测各组微血管密度。采用免疫组织化学检测肺癌A549裸鼠移植瘤内血管内皮生长因子的表达。结果本研究成功构建肺癌A549裸鼠移植瘤模型。NIM+DDP组第9、13、17、21天的移植瘤体积增长较其他3组慢(P值均<0.001)。NIM+DDP组体积抑瘤率最大。NIM+DDP组较其他3组移植瘤微血管密度低(F=27.861,P<0.001)。结论选择性COX-2抑制剂单独使用有抑制新生血管生成的作用,推测选择性COX-2抑制剂具有抗肿瘤能力,可能成为肺癌靶向治疗因子。选择性COX-2抑制剂联合DDP对新生血管因子表达的抑制效果更显著,对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长的抑制更显著。     

Prognostic value of angiogenesis and vascular invasion in muscle-invasive bladder cancer

Angiogenesis is important in the pathogenesis of tumors and correlates with clinical outcome in certain malignancies. Recent advances in staining techniques have raised doubts about the prognostic value of vascular invasion in muscle-invasive bladder cancer, for which relatively few predictors for survival exist. Twenty-one radical cystectomy specimens from patients with stage pT2-3NOMO transitional cell tumors were examined by staining with Hematoxylin and Eosin (H&E). Factor VIII-related antigen (FVIII RAG) which is specific for vascular endothelium, and MOVAT which highlights large vessels. Angiogenesis, estimated by microvessel density, and presence of vascular invasion were then correlated with survival in the follow-up period which ranged from 3 to 141 months. Six of 21 patients survived disease-free with follow-up ranging from 47 to 141 months. Twelve patients had lower microvessel density than 178/mm2 and five of these survived, whereas only one of nine patients having higher microvessel density survived. Twelve of 21 patients had vascular invasion and three survived whereas three of nine patients without vascular invasion survived. There was no correlation found between vascular invasion and survival in this study. Analysis by Kaplan-Meir survival curves demonstrated trends which were not statistically significant between high and low angiogenesis groups. The preliminary data suggest that further assessment of the prognostic role of angiogenesis and vascular invasion in muscle-invasive bladder cancer is indicated.