裸鼹鼠生化位点的初步研究

目的研究裸鼹鼠（NMR）的生化位点特征，初步建立裸鼹鼠生化位点的检测方法。方法以小鼠近交系的生化位点为参照，应用小鼠的检测方法，检测裸鼹鼠的11种同工酶的活性。结果裸鼹鼠的酯酶-1、转铁蛋白为慢带；葡萄糖磷酸异构酶-1、苹果酸酶-1、异柠檬酸脱氢酶-1为中间带；血红蛋白B链、肽酶-3、碱性磷酸酶-1、磷酸葡萄糖变位酶-1、酯酶-3、过氧化氢酶．2为快带。结论7只裸鼹鼠的11个生化位点为一致的条带，无多态性，表现为纯合型。     

小鼠多瘤病毒荧光PCR检测方法的建立及其在裸鼹鼠感染情况调查中的应用

目的建立多瘤病毒荧光定量PCR检测方法,并对裸鼹鼠中多瘤病毒感染情况进行调查。方法比较NCBI中小鼠多瘤病毒(Genbank:NC_001515)的核酸序列,选择保守区域设计引物和探针,建立多瘤病毒的荧光定量PCR方法,对方法的敏感性和特异性进行验证。人工感染9只1日龄KM乳鼠,21 d后采集心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、盲肠内容物和血液等组织脏器,用建立的荧光PCR方法进行检测,验证方法在应用中的有效性,最后用该方法检测62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本。结果建立的检测方法特异性好,在以多瘤病毒为模板时出现明显的荧光信号,以猴空泡病毒、小鼠K病毒、小鼠微小病毒和大鼠细小病毒H-1株为模板时无荧光信号出现;方法的最低检出限为100 copies/μL;人工感染小鼠的心、肝、脾、肺、肾和盲肠内容物中均检测到多瘤病毒核酸,其中肺组织中含量最高,脑、胸腺和血液中未检出;62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本经检测多瘤病毒为阴性。结论建立的多瘤病毒荧光定量PCR方法可有效检测动物组织中的多瘤病毒,对裸鼹鼠自然感染多瘤病毒的调查为实验用裸鼹鼠微生物标准的制定提供了参考。     

党参微卫星引物筛选及群体遗传多样性研究

目的 利用筛选的党参多态性微卫星引物进行党参群体遗传多样性研究。方法 利用磁珠富集法分离党参核基因组微卫星引物,并选取党参4个野生居群48个样品进行遗传多样性分析。结果 筛选出了10个能成功扩增党参样品的微卫星引物;这些引物扩增产物的等位基因数目为5～14个,观察杂合度范围为0.446～0.833,期望杂合度范围为0.697～0.895;使用4个党参近缘物种（轮叶党参、球花党参、鸡蛋参和长叶党参）进行引物通用性检测,发现有5对引物（Cpi01、Cpi04、Cpi06、Cpi07和Cpi08）能同时在4个物种中成功扩增。结论 筛选出的多态性微卫星引物能用于党参的遗传多样性和群体遗传结构研究,同时也能够用于党参属其他近缘物种的群体遗传学研究。     

裸鼹鼠生物学特性的研究进展

裸鼹鼠是主要产于非洲肯尼亚、埃塞俄比亚等地的啮齿类动物,它诸多奇特的生物学特性为医学研究提供了一种新型应用面较广的实验动物,尤其是其在肿瘤、衰老、老年病、心血管病的发病机制研究和止痛药的研发方面更是有着无以伦比的优势,是近些年在国内外备受关注的一种新型实验动物.     

裸鼹鼠成纤维细胞原代培养方法的建立

目的建立裸鼹鼠成纤维细胞的原代培养方法,研究裸鼹鼠成纤维细胞的生长特性。方法结合传统的消化培养法和组织培养法进行裸鼹鼠和小鼠成纤维细胞原代培养,CCK-8（cell countingkit）细胞计数比较研究两种物种成纤维细胞的生长速率和细胞周期。以不同浓度接种裸鼹鼠肝脏成纤维细胞,CCK-8计数细胞24h、72h、96h、144h细胞密度。结果结合消化培养法和组织培养法两种细胞原代培养方法,裸鼹鼠及小鼠成纤维细胞的生长状态良好。裸鼹鼠成纤维细胞的增殖速率显著高于小鼠成纤维细胞,处于对数生长期的细胞比例与小鼠比较,显著较高。以1．5×10^4／ml以上的浓度接种裸鼹鼠成纤维细胞能使细胞在两天内进入细胞生长对数期。结论结合消化培养法和组织培养法的原代培养方法能提高细胞原代培养的效率,裸鼹鼠成纤维细胞的增殖能力显著高于小鼠。     

通用引物PCR法在人乳头瘤病毒基因检测中的应用

目的 建立通用引物PCR法检测人乳头瘤病毒(HPV)基因的方法,探讨其在临床辅助诊断中的应用.方法 收集787份标本,其中来自男性160份,女性标本627份.标本均使用通用引物对MY11/09扩增HPVL1基因片段.同时扩增β球蛋白(β-globin)基因作为内对照.结果 787份标本中,191份标本HPVL1基因阳性,阳性率为24.3%.男性20～岁组HPV的检出率最高,女性30～岁组HPV的检出率最高,但均无年龄上的显著性差异.患有性病(淋病、尖锐湿疣)、不孕症、宫颈炎、非淋菌性阴道炎等疾病的女性,HPVL1基因的检出率分别为83.3%、20.9%、22.7%、28.0%.男性性病(淋病、尖锐湿疣)、前列腺炎、非淋菌性尿道炎、不育症患者的HPVL1基因检出率分别为42.9%、18.9%、12.5%、7.8%.结论 HPVL1基因的检出率较高.通用引物PCR法在临床检验中具有较高的敏感性和特异性.     

裸鼹鼠的人工饲养繁育初步研究

目的 探索裸鼹鼠的人工饲养和繁育方法.方法 在科学的饲养管理和适宜的饲养环境下,采用全同胞兄妹交配的方法,观察统计裸鼹鼠的妊娠率、胎间隔、窝产仔数、离乳数和成活率.结果 通过7对裸鼹鼠的繁育观察,表明裸鼹鼠能适应人工环境.雌雄鼠初次交配年龄为8～12月龄,第1胎妊娠率为71.43％;5只母鼠第1胎平均产仔数9.20±3.90只/窝,离乳数7.60±5.03只/窝,成活率为75.10％±42.49％;第2胎胎间隔89.00±19.53 d、产仔数9.60±5.68只/窝、离乳数6.20±4.09只/窝,成活率为74.33％±34.19％;第3胎胎间隔99.60±17.17 d、产仔数12.40±4.77只/窝、离乳数10.00±3.08只/窝,成活率为82.91％±16.70％.结论 裸鼹鼠在人工环境适应后,繁殖性能大大提高,可以培育出实验动物化的裸鼹鼠.     

裸鼹鼠骨骼标本的制作及其形态学观察

目的采用传统方法制备裸鼹鼠骨骼标本,对其骨骼系统进行形态学观察。方法利用水煮法制作裸鼹鼠骨架,与C57BL／6J小鼠骨骼标本比较研究裸鼹鼠骨骼特点,并观察裸鼹鼠股骨三维结构。结果所制作的裸鼹鼠骨架完整洁净,没有骨质损伤,裸鼹鼠头骨、椎骨、肋骨、四肢骨均具有适应于穴居习性的特征。结论裸鼹鼠的骨骼具有典型的适应掘穴生活的特征。     

裸鼹鼠在生物医学研究中的应用前景

裸鼹鼠是一种奇特的动物，具有寿命长、抗肿瘤、耐缺氧、新陈代谢率低、痛觉缺失、触觉灵敏、视觉功能低下、骨骼再生能力强等诸多特点。本文在概述裸鼹鼠上述生物学特点的基础上，结合当前肿瘤、衰老、低氧适应以及疼痛等领域研究趋势，对裸鼹鼠在生物医学研究中的应用前景进行分析与展望。     

裸鼹鼠不同组织中低氧相关基因的表达

目的 检测幼年与成年裸鼹鼠肺脏、肝脏和脑组织中低氧相关基因的表达水平,分析裸鼹鼠耐低氧的分子机制.方法 分别提取幼年与成年裸鼹鼠肺脏、肝脏和脑组织中mRNA,采用RT-PCR方法检测低氧相关HIF-Iα、VEGFb、FLT-1、FLT-3、Fiz1、NKRF基因的表达.结果 成年裸鼹鼠肺脏、肝脏和脑组织中HIF-1α、VEGFb、FLT-1、FLT-3、Fiz1、NKRF的表达水平显著高于幼年裸鼹鼠.结论 裸鼹鼠体内低氧相关基因在不同年龄阶段表达水平不同.     

裸鼹鼠心脏显微结构与超微结构观察

目的 观察和分析裸鼹鼠心脏的形态结构与组成,以了解裸鼹鼠心脏是否在耐受低氧、长寿以及对抗心血管类疾病等方面有独特功能.方法 采集裸鼹鼠心脏经石蜡切片后进行苏木精-伊红染色,然后光学显微镜下观察裸鼹鼠心脏的显微结构,以及经冰冻超薄切片和染色后,通过透射电镜观察和分析裸鼹鼠心脏的超微结构.结果 光学显微镜观察发现,裸鼹鼠心脏体积较小鼠大,心壁也明显较厚,心肌细胞体积也略大,血管分布更为丰富广泛;透射电镜观察显示,裸鼹鼠心肌中线粒体较小鼠丰富,而体积较小,线粒体结构正常,但肌小节略有类似缺血的病变.结论 裸鼹鼠长期低氧的洞道生活史使其心脏形态结构发生了许多适应性变化,从而使其在对抗衰老和肿瘤方面有着独特的积极影响.     

裸鼹鼠胸腺、脾脏及淋巴结解剖学、组织学与超微结构的初步观察

目的 探讨裸鼹鼠脾脏、胸腺、肠系膜淋巴结的组织结构及超微结构特点.方法 分别取裸鼹鼠脾脏、胸腺、肠系膜淋巴结组织进行HE染色和透射电镜观察.结果 裸鼹鼠胸腺退化明显,脂肪化程度较高;脾脏被膜和小梁较厚,脾小体较小,数量少,边界清晰;肠系膜淋巴结与C57BL/6J小鼠肠系膜淋巴结并无太大差异.结论 明确了裸鼹鼠脾脏、胸腺、肠系膜淋巴结组织解剖学、组织学与超微结构特点,为今后裸鼹鼠开展相关研究奠定了基础.     

氯化钴诱导低氧对裸鼹鼠肝星形细胞增殖及凋亡的影响

目的 比较研究氯化钴(CoCl2)对裸鼹鼠及C57BL/6J小鼠肝星形细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用活细胞计数试剂盒(CCK8)法和流式细胞术分别检测不同浓度CoCl2对裸鼹鼠和小鼠肝星形细胞增殖活力以及和凋亡水平的影响.采用蛋白印迹测定CoCl2处理后裸鼹鼠肝星形细胞低氧诱导因子1α(HIF-1α)和凋亡相关蛋白(BCL2、BAX)的表达水平.结果 低浓度(50 μtmol/L)CoCl2对C57BL/6j、鼠肝星形细胞增殖活性具有明显的抑制作用,并能显著提高其凋亡率,然而同样剂量的CoCl2能够显著提高裸鼹鼠肝星形细胞的增值活性,对细胞凋亡率亦无明显影响.高剂量CoCl2(＞200 μtmol/L)虽能导致裸鼹鼠肝星形细胞增殖活力的降低,及凋亡率的升高,但裸鼹鼠肝星形细胞的变化幅度明显小于小鼠.同时CoCl2处理后,裸鼹鼠肝星形细胞HIF-1α的表达或累积显著升高(P＜0.05),BCL2/BAX比率显著上调(P＜0.05).结论 与C57BL/6J小鼠相比,裸鼹鼠肝星形细胞具有更强的抵抗CoCl2引起的化学性低氧损伤的能力.同时HIF-1α可能参与调控裸鼹鼠抵抗化学性低氧环境造成的损伤.     

应用荧光标记PCR对散发性结直肠癌进行微卫星不稳定性检测

目的 检测散发性结直肠癌微卫星情况并探讨其临床意义.方法 对41例散发性结直肠癌患者,应用荧光标记PCR检测国际通用的5个微卫星位点,分析微卫星不稳定性(MSI)与临床病理参数的关系.结果 MSI检出率为24.39%(10/41),其中MSI-H为9.76%(4/41),荧光标记PCR与多重荧光PCR检出率接近;散发性...     

裸鼹鼠外周血白细胞免疫相关因子mRNA表达水平的检测

目的 检测生长期和成年期裸鼹鼠外周血白细胞免疫相关因子mRNA表达水平,以了解裸鼹鼠的正常免疫水平.方法 通过眼眶静脉丛采集6月龄和12月龄裸鼹鼠外周血,提取外周血白细胞mRNA,反转录成cDNA后,实时定量PCR检测各组裸鼹鼠外周血中白细胞IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-12、TN F-α、IFN-γ的mRNA表达水平.结果 除了IFN-γ、IL-4各组间无显著差异,6月龄裸鼹鼠的IL-2、TNF-α显著高于12月龄裸鼹鼠,尤其是6月龄雄性裸鼹鼠的表达水平显著较高.而细胞因子IL-1,IL-6中,6月龄雄性裸鼹鼠的表达水平也显著高于12月龄裸鼹鼠.另外,对细胞因子IL-8、IL-12表达检测结果表明,12月龄雌性裸鼹鼠的IL-8表达水平最低,而12月龄雄性裸鼹鼠的IL-12表达最低.结论 生长期雄性裸鼹鼠的细胞免疫水平和体液免疫水平均高于同龄的雌性动物和成年动物.     

裸鼹鼠与C57BL／6J小鼠骨骼肌结构与摄氧能力比较

目的分析比较裸鼹鼠与C57BL／6J小鼠的骨骼肌结构和摄氧能力。方法采集裸鼹鼠与小鼠的腓肠肌经石蜡切片苏木精-伊红染色,以及经冰冻超薄切片和染色后,然后用光学显微镜和投射电镜观察两个物种骨骼肌的形态结构;同时对骨骼肌组织进行CD34免疫组化染色,将骨骼肌匀浆后取上清用分光光度法对肌红蛋白的含量进行测定,观察两个分析两个物种摄氧能力的高低。结果裸鼹鼠骨骼肌肌原纤维比C57BL／6J小鼠粗大,而且肌块、肌束甚至肌原纤维外围都有较多结缔组织;肌细胞中线粒体数目明显大于C57BL／6J小鼠,而体积则较小,其线粒体的表面积大于C57BL／6J小鼠;骨骼肌组织中微血管密度明显大于C57BL／6J小鼠;骨骼肌中肌红蛋白的含量是C57BL／6J小鼠的1．5倍。结论裸鼹鼠骨骼肌比C57BL／6J小鼠发达和粗壮,结缔组织较C57BL／6J小鼠丰富,肌肉更为柔软和灵活;线粒体总表面积、微血管密度和肌红蛋白含量都较C57BL／6J小鼠高,其摄氧能力比后者更为强大。     

阳春砂实时荧光定量PCR内参基因的筛选

【目的】筛选稳定表达的内参基因,用于阳春砂不同发育时期的果皮和种子团中基因表达量实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测的校正。【方法】以阳春砂3个不同发育时期的果实(分为果皮和种子团)为材料,根据高通量测序得到的转录组和表达谱数据,选择5个表达稳定的常用内参基因β-actin、EF-1α、GAPDH、PGK和TUA作为候选基因,并利用qPCR技术检测它们在不同样品中表达水平的变化,使用GeNorm和NormFinder软件对基因的稳定性进行分析。【结果】5个内参基因在不同发育时期的果皮和种子团中的表达稳定性有明显的差异,其中GeNorm分析得到的内参基因的稳定顺序为:EF-1α=TUAPGKGAPDHβ-actin,NormFinder的分析结果中稳定性最好的是EF-1α,其次为TUA,其他3个内参基因稳定性的排列顺序与GeNorm软件的结果一致。【结论】可选用EF-1α和TUA作为阳春砂果实发育过程中基因表达量差异分析的双内参基因。