尾加压素Ⅱ对大鼠心功能的影响及电生理机制探讨

目的探讨尾加压素Ⅱ（UⅡ）对大鼠心功能的影响及可能的电生理机制。方法在Langendorff离体心脏灌注的模型上,观察给予不同浓度的UⅡ后大鼠心功能的变化;利用全细胞膜片钳技术,观察给予不同浓度的UⅡ灌流5min后,大鼠心肌细胞L-型钙电流（ICa-L）密度的变化。结果给予不同浓度的UⅡ（10-9 mol/L～10-6 mol/L）灌注大鼠心脏后,左心室压最大上升速率（＋dp/dtmax）分别降低25.60%、31.48%、34.36%、37.47%,左心室压最大下降速率（-dp/dtmax）分别降低33.61%、46.10%、51.76%、58.32%。运用全细胞膜片钳技术,在单个心肌细胞上给予不同浓度的UⅡ（10-9 mol/L～10-5 mol/L）灌流5min后,ICa-L峰值分别下降为（6.70±1.78）pA/pF、（5.93±2.02）pA/pF、（5.40±2.15）pA/pF、（4.54±2.00）pA/pF、（3.80±1.82）pA/pF,与对照组（8.03±1.20）pA/pF相比,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论 UⅡ呈浓度依赖性的抑制大鼠心功能并减弱心肌细胞L-型钙电流强度;UⅡ可能通过抑制心肌细胞L-型钙电流而发挥其心功能抑制作用。     

中药甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜L型钙通道的影响

目的 研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜L型钙通道的影响,探讨甘松挥发油在离子通道水平抗心律失常的作用机制.方法 用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术,观察不同浓度的甘松挥发油对L型钙通道的影响.结果 浓度为3,5,10,20,50 μg/g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制L型钙电流,在浓度为10μg/g时,给药后电流密度抑制约为(45.7±3.5)%(n=5,P＜0.01), 可使心肌细胞L型钙电流-电压曲线上移,但激活电位、峰电位及反转电位无改变;使激活曲线向正电位方向变化,V1/2从(-5.47±0.50)mV右移至(-2.77±0.49)mV(n=5,P＜0.05);使失活曲线向负电位方向变化, V1/2从(-20.82±0.48)mV左移至(-29.44±1.03)mV(n=5,P＜0.05).结论 甘松挥发油可通过浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞膜L型钙通道电流,使I-V曲线上移;使激活曲线右移,使失活曲线左移.     

参附注射液对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

目的：观察参附注射液对大鼠心室肌细胞L型钙通道的作用。方法：采用急性酶解法获得单个心肌细胞,全细胞膜片钳技术记录钙电流。结果：参附注射液浓度依赖性阻断L型钙通道电流,其IC50为原液2.5%稀释。参附注射液（0.3%,3%）能够上移I-U曲线,但不改变峰电位和反转电位;3%参附注射液对L型钙通道激活曲线失活曲线无明显影响,但可使通道电流从失活中恢复的时间明显延长,时间常数由给药前的82ms增至给药后的139ms。结论：参附注射液对心肌细胞L型钙通道电流有抑制作用。     

金雀花碱对大鼠心室肌细胞钠通道的影响

目的研究金雀花碱(Cy)对大鼠心室肌细胞钠离子通道电流(I_(Na))的影响,探索Cy在离子通道水平抗心律失常的作用机制。方法使用Langendorff恒温恒压灌流装置,单酶解法分离SD大鼠心室肌细胞,将心室肌细胞分为对照组、100μmol/L Cy组和300μmol/L Cy组。应用全细胞膜片钳记录技术,观察Cy对大鼠心室肌细胞I_(Na)的影响。结果 Cy(≥100μmol/L)能显著抑制I_(Na),其作用呈浓度依赖性。与对照组比较,100μmol/L和300μmol/L Cy可使I_(Na)Ⅰ～Ⅴ曲线明显上移,I_(Na)峰值由(-32.81±3.93) pA/pF依次降为(-21.77±4.07) pA/pF和(-14.8±2.99) pA/pF (P0.01),但不改变其激活电位、峰电位和反转电位;使稳态失活曲线显著左移,半数失活电压V_(1/2)降低(P0.05,P0.01);失活后恢复曲线显著右移,恢复时间常数γ延长(P0.05,P0.01)。结论 Cy对大鼠心室肌细胞的I_(Na)呈浓度依赖性的抑制作用,并可改变其失活及失活后恢复动力学特征,可能是其抗心律失常的作用机制。     

甘松挥发油对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流的影响

目的 研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜瞬时外向钾电流(Transient outward potassium current,Ito)的影响,探讨甘松挥发油抗心律失常作用的离子机制.方法 用急性酶解分离法获得单个大鼠心室肌细胞,采用标准的全细胞膜片钳技术记录大鼠心室肌细胞膜瞬时外向钾电流(Ito).结果 甘松挥发油可呈浓度依赖性和电压依赖性抑制Ito.在+70mV时,3 μg/g,6 μg/g,10 μg/g和20μg/g甘松挥发油分别抑制Ito峰值电流的抑制率为 (27.01±6.93)%(n=5),(51.13±9.82)%(n=5),(80.86±4.63)%(n=5)和(94.81±4.30)%(n=5).甘松挥发油对Ito的电流密度-电压关系曲线(current density-voltage curve,I-V曲线)的影响:在+70 mV时,6μg/g甘松挥发油使Ito峰电流从(23.081±0.74)pA/pF减少到(11.232±1.47) pA/pF (n=5,P<0.05),给药后电流密度减少约50%,给药前后电流密度变化有统计学意义.甘松挥发油对Ito激活和失活曲线的影响:在甘松挥发油6 μg/g灌流法给药后,激活曲线显示给药前后半数激活电压(V1/2)为:(36.063 ±1.792)mV vs (34.788±3.029)mV(P> 0.05,n=5);斜率因子(S) 为:(22.972±1.491)mV vs (30.791±2.899)mV(P<0.05,n=5).给药前后半数激活电压变化无显著差异.失活曲线显示甘松挥发油使失活曲线明显左移,差异有显著统计学意义:给药前后半数失活电压(V1/2)为(-33.738±0.476)mV vs (-40.536±0.696)mV (n=5, P<0.01);斜率因子(S)为:(5.001±0.396) mV vs (8.420±0.620) mV (n=5, P<0.01) .结论 甘松挥发油可呈浓度和电压依赖性抑制大鼠心室肌细胞Ito,使I-V曲线下移,但对激活曲线无明显影响,同时,使失活曲线明显左移,使心室肌细胞复极化减慢,这可能是其抗心律失常作用的重要机制之一.     

采用膜片钳技术观察3种中药复方含药血清对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的作用

目的:采用膜片钳技术观察3种中药复方含药血清对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的作用,探索膜片钳技术和血清药理学实验相结合的的可行性和分析方法。方法:采用血清药理学方法获得大鼠空白血清和3种中药复方制剂(芪苈强心胶囊、参松养心胶囊和莲松异搏停片)含药血清,应用急性酶解分离法获得大鼠的单个心肌细胞,使用膜片钳技术记录L-型钙通道电流,观察给药这些血清灌流前后L-型钙通道电流的变化。结果:(1)给予不同稀释浓度(1:10;1:5;1:4;1:2)的空白血清前后,钙通道电流峰值无明显变化。(2)与空白血清比较,芪苈强心胶囊(0.37g/kg灌胃,以下同)含药血清可明显增高电流峰值幅度,而参松养心胶囊(0.8g/kg灌胃)和莲松异搏停片(0.8g/kg灌胃)含药血清可明显降低电流峰值幅度。(3)空白血清可使钙通道电压电流曲线和稳态激活曲线左移;与空白血清比较,芪苈强心含药血清可使电压电流曲线下移,稳态激活曲线左移。(4)空白血清灌流后钙通道稳态失活曲线和失活恢复时间曲线皆无明显改变,芪苈强心含药血清可以提高了钙通道失活后恢复幅度和恢复时间常数,对稳态失活曲线无明显影响。结论:采用膜片钳技术和血清药理学实验相结合的方法能够观察中药复方对心肌细胞L-型钙通道的作用和作用特点。     

丹酚酸B和延胡索乙素对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响

目的 观察单独及联合使用丹酚酸B和延胡索乙素对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响.方法 采用急性酶解分离法获得大鼠的单个心肌细胞,使用全细胞膜片钳技术记录钙通道电流.观察给药前后钙通道电流峰值(钙电流活化后峰值点与完全失活后电流轨迹的垂直距离)的变化.结果 单独使用丹酚酸B(1,10,100 μmol/L)对钙电流峰值的抑制率分别为:(25.3±16.4)％(n=4),(44.6±24.0)％(n=6),(86.0±20.4)％(n=4).单独使用延胡索乙素(10,30,100 μmol/L)对钙电流峰值的抑制率分别为:(22.2±6.4)％(n=5),(27.4±1.6)％(n=3),(51.0±23.0)％(n=9);联合使用丹酚酸B(1μmoL/L)和延胡索乙素(10 μmol/L)对钙通道电流峰值的抑制作用强于单独使用丹酚酸B(1 μmol/L)或延胡索乙素(10μmoL/L),差异有统计学意义(P＜0.05);盐酸阿托品(14 mmoL/L)能够逆转延胡索乙素对L-型钙通道的抑制作用,而加强丹酚酸B的抑制作用.结论 丹酚酸B和延胡索乙素对大鼠心室肌细胞L-型钙通道均有抑制作用,两者之间能够产生协同效应,并且这两种有效成分调控L-型钙通道的作用机制不同.     

甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响

目的 研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响,探讨甘松挥发油在离子通道水平抗心律失常的作用机制.方法 用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术,观察不同浓度的甘松挥发油对钠通道的影响.结果 ①浓度为1,3,5,10,20,100 μg /g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制钠电流;②可使心肌细胞钠电流-电压曲线上移,但激活电位、峰电位及反转电位无改变;③使激活曲线向正电位方向变化,V_(1/2)从(-43.65±0.98)mV右移至(-40.25±1.01)mV(n=6,P<0.05);④使失活曲线向负电位方向变化, V_(1/2)从(-100.92±0.68)mV左移至(-111.20±0.86)mV(n=6,P<0.05).结论 甘松挥发油可通过浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞膜钠通道电流,在不同膜电位水平对钠通道电流具有均匀一致的抑制作用;使激活曲线右移,使失活曲线左移.     

甘松挥发油对大鼠心室肌细胞Ik和Ik1的影响

目的 研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜延迟整流钾电流(delayed rectifier K+ current,Ik)和内向整流钾电流(inward rectifier K+current,Ik1)的影响,探讨甘松挥发油抗心律失常作用的离子机制.方法 用急性酶解分离法获得单个大鼠心室肌细胞,采用标准的全细胞膜片钳技术记录大鼠心室肌细胞膜延迟整钾钾电流(Ik)和内向整流钾电流(Ik1).结果 (1)浓度为1,3,5,10,20 μg/g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制Ik,使Ik+的电流密度-电压关系曲线(current density-voltage curve,Ⅰ-V曲线)下移,但激活电位,失活电位及翻转电位无影响.在-90 mV时,5μg/g甘松挥发油使Ik峰电流在给药后电流密度减小约45％,甘松挥发油对Ik激活和失活曲线的影响:甘松挥发油使激活曲线右移,给药前后半数失活电压(V1/2):(23.65±0.65) mV vs (28.19±0.57) mV (P＜0.05,n=6),使失活曲线左移,给药前后V1/2:(-64.46±1.02)mVvs(-82.84±1.27)mV (n =6,P＜0.05);(2)浓度为1,3,5,10,20,50 μg/g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制Ik1.在-60 mV时,5μg/g甘松挥发油使Ik1峰电流在给药后电流密度减小约50％.结论 (1)甘松挥发油可呈浓度依赖性抑制大鼠心室肌细胞Ik,使Ⅰ-V曲线下移,使激活曲线右移、失活曲线左移;(2)甘松挥发油可呈浓度依赖性抑制大鼠心室肌细胞Ik1.甘松挥发油对两者的效应可使心肌细胞复极化减慢,这可能是其抗心律失常作用的重要机制之一.     

参麦注射液对大鼠膈肌细胞L型钙通道的影响

目的：探讨参麦注射液对大鼠膈肌细胞L型钙通道电流(Ica-L)的影响。方法：采用急性酶消化分离法,获取单个大鼠膈肌细胞,用标准的全细胞膜片钳技术,记录7只大鼠膈肌细胞Ica-L的峰值及电流-电压关系曲线,并观察不同浓度的参麦注射液对其影响。结果：当维持电位为-80mV,刺激频率为0．5Hz,钳制时间为300ms,步进电压为10mV,去极到+60mV时,10μl/ml的参麦注射液仅使大鼠腑肌细胞的平均内向峰值Ica-L由(-6．9±0．6)pA／pF增加到(-7．5±0．7)pA／pF,增加的幅度为(9．2±2．8)％,用药前后差异无显著性(P>0．05)。50μl/ml、100μl／ml的参麦注射液使大鼠膈肌细胞的平均内向峰值Ica-L由(-6．9±0.6)pA／pF分别增加到(-8．4±0．6)pA／pF和(-9．2±0．6)pA／pF,其增加的幅度分别为(22．4±1．7)％和(34．6±4．6)％,与用药前比较,差异均有显著性(均P<0．05)。给药前后Ica-L的最大激活电位和翻转电位均不变。结论：参麦注射液可激活大鼠膈肌细胞膜的钙通道,增加Ca^2+内流,而使膈肌细胞的收缩力增强,该作用可能是参麦注射液在临床上用于治疗膈肌疲劳的离子通道机制之一。     

葛根素对大鼠心肌细胞L型钙离子通道的影响

目的 :观察葛根素对大鼠L型钙离子通道的作用。方法 :恒流Langendorff灌流 ,I型胶原酶解分离 ,全细胞膜片钳技术记录离子电流。结果 :2.4 mmol·L^-1葛根素可以抑制单个大鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流 ,且成时间依赖性 ;葛根素可以促进L型钙通道电流 电压 (I-V)曲线的上移。结论 :葛根素可以抑制大鼠心室肌细胞的L型钙离子通道电流 ,并提示葛根素的抗心肌缺血和抗心律失常作用可能与抑制L型钙离子通道电流有关。     

福辛普利对缺氧复氧豚鼠心室肌细胞动作电位及其离子通道的影响

 目的观察福辛普利预处理对缺氧复氧豚鼠心室肌细胞动作电位(AP)、L-型钙通道电流(ICa-L)和ATP敏感钾通道电流(I_K-ATP)的影响,探讨其抗再灌注性心律失常的电生理机制。方法采用全细胞电流钳和膜片钳技术分别记录AP和ICa-L,I_K-ATP。结果缺氧复氧使心室肌细胞AP时程(APD₅₀,APD₉₀)缩短;ICa-L峰值降低,I-V曲线上移,激活曲线右移,半数激活电压(V_1/2)增大,失活曲线左移,失活V_1/2减低;ATP敏感钾通道由正常关闭状态到完全开放。与缺氧复氧组相比,福辛普利预处理使APD₅₀,APD₉₀相对延长;ICa-L峰值增加,I-V曲线上移幅度减小,激活曲线左移,失活曲线右移,激活与失活V_1/2均接近正常,ATP敏感钾通道进一步开放,电流明显增加。结论福辛普利预处理能显著改善缺氧复氧状态下L-钙通道的抑制状态,促进动作电位参数的恢复,减少有效不应期的离散度及折返形成;通过药物预适应机制,进一步开放ATP敏感钾通道,增加ATP敏感钾电流,而发挥抗再灌注心律失常的作用。     

Effects of saponin monomer 13 of dwarf lilyturf tuber on L-type calcium currents in adult rat ventricular myocytes

The saponin monomer 13 of dwarf lilyturf tuber (DT-13), one of the saponin monomers of dwarf lilyturf tuber, has been found to have potent cardioprotective effects. In order to investigate the effect of DT-13 on L-type calcium currents (I(Ca,L)), exploring the mechanisms of DT-13's cardioprotective effects, we directly measured the I(Ca,L) in the adult rat cardiac myocytes exposed to DT-13 using standard whole-cell patch-clamp recording technique. Our results showed that DT-13 exerted inhibitory effects on the I(Ca,L) of the single adult rat cardiac myocytes. The current density was reduced by about 38% after exposure of the cells to DT-13 (0.1 microM) for 10 minutes, from the control value of 7.46 +/- 1.31 pA/pF to 4.25 +/- 0.35 pA/pF (n = 6, p < 0.05). This I(Ca,L)-inhibiting action of DT-13 was concentration-dependent. DT-13 up-shifted the current-voltage (I-V) curve, but did not significantly affect the half activation potential (V0.5). V0.5 was from -11.8 +/- 0.9 mV in the control to -12.6 +/- 1.9 mV in the presence of DT-13 at 0.1 micromol/L. DT-13 at 0.1 microM did not markedly affect the activation of I(Ca,L), but shifted the inactivation curve of I(Ca,L) to the left. In combination with previous reports, these results suggest that there might be a close relationship between the cardioprotective effects of dwarf lilyturf tuber and the inhibitory effects of DT-13 on L-type calcium currents.     

西洋参茎叶皂苷对大鼠心肌细胞Ca2+内流的影响

目的:研究西洋参茎叶皂苷(PQS)对大鼠心肌细胞Ca2 内流的影响.方法:应用钙离子荧光指示剂Fura-2/AM检测.结果:PQS(1.5mg/ml)和维拉帕米(0.5μmol/L)对静息状态下心肌细胞内Ca2 浓度均无明显影响,但PQS使心肌细胞内Ca2 浓度有下降趋势;两药可明显抑制高钾(50mmol/L)引起的心肌细胞内Ca2 浓度的升高.结论:PQS对心肌细胞电压依赖性钙通道有阻断作用.     

甲磺酸酚妥拉明抗心律失常的初步研究

目的:通过观察甲磺酸酚妥拉明(PM)对正常大鼠心室肌细胞钠电流(INa)的影响,以探讨其抗心律失常的作用机制。方法:采用膜片钳全细胞记录技术记录了PM对单个大鼠心室肌细胞钠电流的影响。结果:动物实验表明PM降低正常心室肌细胞INa电流密度峰值,钠离子通道失活加速,失活后再恢复时间延迟。结论:PM对心室肌细胞0相动作电位快钠电流有抑制作用,能使快速性室性心律失常的发生率降低。     

宣导泻肺饮对大鼠心肌细胞L型Ca~（2＋）通道电流影响及机制研究

目的用血清药理学的方法研究宣导泻肺饮含药血清对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响。方法采用全细胞膜片钳技术记录L-型钙离子通道电流（Ica-L）,观察不同浓度的宣导泻肺饮对它们的影响。结果宣导泻肺饮含药血清对心肌细胞L-型钙离子通道的开放有抑制作用,在浓度10%时Ica-L峰值降低15%,浓度30%时Ica-L峰值降42%,均呈浓度依赖性;随着药物浓度的增加,电流-电压关系曲线逐渐上移,但出现电流峰值的电压不变。结论宣导泻肺饮含药血清抑制心肌细胞钙离子通道的开放,具有明显的浓度依赖关系,可能是其抗心律失常的分子基础。     

丹参酮对肥大心肌细胞中电生理特征和钙调神经磷酸酶活性的作用

目的观察丹参酮对肥大心肌细胞中电生理特征和钙调神经磷酸酶(CaN)活性的作用。方法通过膜片钳、胞内钙测定和分子生物学技术,观察丹参酮对"一肾一夹"手术导致的肥厚心肌细胞膜上动作电位时间、L型钙通道电流(ICa,L)、胞内钙离子浓度以及CaN活性的影响。结果丹参酮可以显著缩短肥厚心肌细胞中存在的动作电位时间延长(P<0.001)、降低膜电容和ICa,L峰值幅度(P均<0.001),但不影响ICa,L密度,并能够显著减少胞内钙离子浓度。丹参酮能显著抑制肥厚心肌中CaN的表达(P<0.05)。结论丹参酮可以有效地减少肥大细胞中的Ca2+浓度并抑制L-型钙通道,并使肥大心肌细胞中的CaN活性降低,从而改善肥大心肌细胞中存在的电生理异常和减轻心肌肥厚的发生。     

三七皂甙单体Rg1对心肌细胞膜钙离子通道的影响

目的 :探讨Rg1对豚鼠心肌细胞膜L 型电压依赖性钙通道的影响。方法 :采用标准全细胞膜片钳技术。结果 :在保持电位 -40mV ,细胞去极化至 4 0mV ,刺激频率 0 .5Hz,时程 1 5 0ms条件下Rg11 0 μmol·L- 1和 30 μmol·L- 1对BayK86 4 4和Nifedipine敏感的钙内向电流均无明显影响 (P >0 .0 5 ,n =5 )。结论 :Rg1对L 型钙通道无抑制作用