用抗肽抗体对豚鼠心肌行M2胆碱受体分布的研究

目的:对比观察豚鼠左右心房和心室M2胆碱受体的分布位置及其特性.方法:采用M2胆碱受体自身抗体与用人M2胆碱受体肽段经免疫制备的抗受体抗体在豚鼠心肌进行免疫组织化学研究.结果:M2胆碱受体的免疫反应阳性颗粒主要位于胞膜及周缘胞浆内;心房和心室肌细胞均存在明显的免疫阳性反应物,但其分布密度存在有明显差异,心房免疫阳性颗粒明显多于心室;用阿托品后,心房心室细胞的免疫阳性反应产物明显降低,M2胆碱受体抗体和受体结合的位点可部分被M2胆碱受体拮抗剂阻断.结论:豚鼠心脏M2胆碱受体主要分布于心房和心室肌细胞的表面,心房M2胆碱受体密度明显大于心室.M胆碱受体拮抗剂具有阻滞M2胆碱受体抗体和其受体结合的效应.     

用抗肽抗体对豚鼠心肌行M2胆碱受体分布的研究

目的：对比观察豚鼠左右心房和心室Ｍ２胆碱受体的分布位置及其特性。方法：采用Ｍ２胆碱受体自身抗体与用人Ｍ２胆碱受体肽段经免疫制备的抗受体在豚鼠心肌进行免疫组织化学研究。结果：Ｍ２胆碱受体的免疫反应阳性颗粒主要位于胞膜及周缘胞浆内;心房和心室匀存在明显的免疫阳性反应物,胆其分布密度存在有明显差异,心房免疫阳性颗粒明显多于心室;用阿托品后,心房心室细胞的免疫阳性反应产物明显降低,Ｍ２胆碱受体抗抗体和受体     

大鼠心房与心室胆碱能神经和M2受体的分布比较

目的 探讨大鼠心房,心室以及左室游离壁3层组织胆碱能神经分布及其主要靶受体-M2受体的整体表达模式和特点。方法 实验应用Kamovsky-Roots组化染色结合点计数法,免疫组化SABC法结合图像分析技术,检测胆碱能神经和M2受体的分布,并比较各部位之间神经和受体的密度差异。结果 （1）大鼠心房和心室均有胆碱能神经和M2受体的阳性染色产物,心房的胆碱能神经点计数为心室的4．6倍,M2受体免疫阳性产物面积为心室的3倍;（2）左室游离壁3层组织分析发现：中层心肌组织胆碱能神经纤维点计数明显少于心内膜层和心外膜层：左室游离壁3层心肌组织M2受体密度无显著统计学差异。结论 大鼠心房、心室肌均有胆碱能神经和M2受体,并存在明显的密度差异：左心室游离壁3层之间胆碱能神经分布有跨室壁不均一性,而M2受体密度没有明显差异。     

人胎心房和窦房结心房利钠因子的免疫组织化学研究

用免疫组织化学方法对１８例人胎心（１２～４０周胎）进行了心房利钠因子（ＡＮＤ）分布的研究。结果表明，心房利钠因子免疫反应颗粒存在于大部分心房肌细胞内，少部分心房肌细胞无染色颗粒。ＡＮＦ在心房肌细胞中的染色为颗粒状，分布在核周胞浆中，偶尔可见散在胞浆外周。在心房近心内膜侧的心肌细胞可见染色反应增强。免疫反应在左右心房和房中隔无明显不同。左右心耳有很强的免疫反应且右耳强于左耳。窦房结ＡＮＦ免疫反应亦为阳性，但染色较同时期心房肌弱，较心室肌强。窦房结的头、体、尾无免疫染色强度变化。在１２～２０周胎心室肌中有弱的ＡＮＦ免疫反应。从１２～２０周不同胎龄胎心的染色对比看，ＡＮＦ在人胎心有其发展变化规律，随着胎儿增大出现心室免疫染色减弱而心房免疫染色增强的趋势。对心脏作为内分泌器官可能在调节心脏本身的活动和其他生理活动中的意义进行了讨论。     

心肌M2胆碱受体抗体对大鼠心房及心室肌cAMP含量的影响

目的 :了解心肌M2 胆碱受体抗体 (M2 Ab)对大鼠心房和心室肌cAMP含量的影响 ,并与M2 胆碱受体激动剂卡巴可 (Carb)的作用进行了对比观察。方法 :采用离体生化放射免疫分析法测定M2 Ab及M2 胆碱受体激动剂Carb对心肌cAMP含量的影响。结果 :①M2 Ab及Carb两者均可剂量依赖性抑制异丙肾上腺素 (Isoproterenol,Iso)所刺激的大鼠心房及心室肌cAMP的增加。卡巴可浓度为 2 μmol/L ,10 μmol/L ,5 0 μmol/L时可分别抑制Iso所刺激的cAMP含量 (8.5± 1.2 ) % ,(16 .2± 1.4) % ,(2 9.5± 2 .1) % ,而M2 Ab浓度为 5 0nmol/L ,10 0nmol/L ,40 0nmol/L时 ,可分别抑制 (6 .1± 0 .6 ) % ,(17.3± 1.8) % ,(31.7± 3.1) % (P <0 .0 1)。②Carb(10 μmol/L)及M2 Ab(10 0nmol/L)两者可分别抑制基础cAMP(49.2± 4.3) %和 (6 4.3± 5 .1) %。③M受体阻断剂阿托品 (Atr) (1.5 μmol/L)不但可阻断Carb对Iso的抑制反应 ,亦能阻断M2 Ab的这种反应。而相应的抗原性肽段也能阻断M2 Ab的这种反应。结论 :M2 Ab抑制Iso引起的心室肌细胞cAMP生成量的增加反应 ,类似于M受体激动剂Carb ,两者效应均通过作用于M2 受体途径实现。     

连接蛋白40在成人心肌的表达

目的研究成人心脏不同部位连接蛋白40（Cx40）的表达,探寻其与心律失常发生的内在联系,为临床治疗和药物研发提供形态学基础。方法应用SABC免疫组织化学和图像分析方法,分析和比较成人心脏不同腔室心肌细胞Cx40的表达。全部数据采用SPSS11.5统计软件分析,对心房之间,心室之间,房、室间隔之间以及心房与心室之间连接蛋白的表达进行比较。结果①Cx40在成人心脏4个心腔的壁均有表达,在心房肌阳性颗粒非均质分布于细胞侧面连接处,少量分布于端闰盘处,在心室肌阳性颗粒典型地排列在闰盘处。②Cx40在各心壁的表达存在差异,其中心房多于心室,右房多于左房,左、右心室间无明显差别。③房、室间隔,乳头肌等处亦有Cx40的表达,多见于细胞侧面连接和端闰盘处。房、室间隔处的表达无明显差别。结论成人心脏连接蛋白40的表达主要分布于侧面连接和闺盘处。心房表达多于心室,这种差异可能是引发心律失常的原因之一,也可能与心房和心室之间功能差异有关。     

7种M胆碱受体拮抗剂对腮腺回肠瞳孔心脏阻滞作用强度比较

比较了7种M胆碱受体拮抗剂阻滞大鼠腮腺、豚鼠回肠、小鼠疃孔、大鼠心脏的作用强度,结果不支持肋腺M受体属于不同亚型的设想。7种M受体拮抗齐中QNB阳滞腮腺,回肠、瞳孔M胆碱受体的强度中等,B—7601甚弱;但QNE和B—7601阻滞心脏M胆碱受体的作用为最强,出现作用强度次序的倒转现象。表明QNE和B—7601对大鼠心脏M胆碱受体的阻滞作用具有一定的专一性,支持心脏M胆碱受体可能属于不同亚型的设想。     

体外培养心肌细胞心钠素分泌的动态观察

采用心钠素放射免疫测定法对体外培养的新生大鼠心房和心室肌细胞心钠素的分泌进行了动态观察,并以免疫组织化学方法对心肌细胞内心钠素的定位和含量进行了探讨。结果表明:(1)培养于无血清培养基中的心房和心室肌细胞,在一定时限内以恒定的分泌率分泌心钠素。用此模型研究多种因素对心钠素分泌的影响具有科学性和可行性。(2)培养的新生大鼠心室肌细胞与心房肌细胞相比,虽然前者含有较少的心钠素分泌颗粒,但两者却具有相同的分泌率,提示两型细胞的心钠素分泌机制可能存在差异。     

人心房肌细胞超微结构观察

目的：观察人心房肌细胞的超微结构特征，为进一步研究人心房肌细胞的结构和功能提供形态学依据。方法：心脏手术取右心房组织，共10例（年龄13～35岁），超薄切片，JEM-100SX透射电镜观察和摄片。结果：人心房肌细胞较心室肌细胞短且细，分枝少，肌质网呈泡状多聚集在肌膜下，细胞缺乏典型的横小管。部分心房肌细胞胞质内可见成群聚集的心房特殊分泌颗粒。结论：进一步证明了人心房肌细胞与心室肌细胞之间存在着一定的超微结构差异。     

鼠胚和新生大鼠心房肌心房肽免疫组织化学研究

用免疫组织化学方法研究了鼠胚和新生大鼠含心房肽免疫反应颗粒的心房肌细胞的发生和分布。结果表明,心房肽免疫反应颗粒出现于胚胎13天的少数心房肌细胞。随胚胎发育,含免疫反应颗粒的心房肌细胞增多,胞质内反应颗粒也增多,它们主要位于细胞核周围。大部分含反应颗粒时心房肌细胞分布在心房腔侧的小梁内,而在心外膜侧则逐     

M_2型毒蕈碱受体对离体跳动灌流家兔心房钠尿肽分泌的影响

[目的]建立离体跳动灌流心房模型,并探讨激活M2型毒蕈碱受体对离体跳动灌流心房钠尿肽(ANP)分泌的影响.[方法]利用急性剥离的家兔左心房和放射免疫分析方法观察M2型毒蕈碱受体对离体跳动灌流心房动力学及灌流液中ANP分泌的影响.[结果]记录到的离体跳动灌流心房模型心房内压及每搏搏出量与文献报道基本一致;卡巴胆碱明显抑制心房内压和搏出量,显著增加灌流心房ANP的分泌,此效应被M2型毒蕈碱受体抑制剂Methoctramine阻断.[结论]成功建立离体跳动灌流心房模型;M2型毒蕈碱受体的激活增加心房ANP的分泌.     

Stimulatory activity of anti-peptide antibodies against the second extracellular loop of human M2 muscarinic receptors

Objective To study the activity of anti-peptide antibodies against the second extracellular loop of human M(2) muscarinic receptors on cAMP production and inward calcium currents (I(Ca)) in guinea pig ventricular myocytes.A comparison was also made with those of a muscarinic receptor agonist.Methods cAMP content was determined by radioimmunoassay and the I(Ca) in guinea pig single ventricular cells were recorded by the whole-cell patch clamp technique.Results Both the muscarinic receptor agonist, carbachol (Carb 10 μmol/L), and anti-peptide antibodies (Abs 100 nmol/L) could decrease basal cAMP levels (by 46.9%±4.2% and 60.2%±4.6%, respectively) and basal I(Ca).Both Carb (10 μmol/L) and Abs (100 nmol/L) could also inhibit the isoprenaline-induced (Iso 0.8 μmol/L) increases in cAMP production (from 108.2±7.0 to 88.4±7.2 pmol/mg·protein/min for Carb and 88.6±5.1 pmol/mg·protein/min for Abs, respectively) and the increases in I(Ca).The muscarinic receptor antagonist atropine (Atr) was able to prevent these effects of Carb and Abs.Conclusions Anti-peptide antibodies against an epitope located in the second extracellular loop of human M(2) muscarinic receptors, similar to muscarinic receptor agonist, could decrease the basal I(Ca) and β-receptor agonist stimulated increase of I(Ca) by decreasing the basal and β-receptor agonist stimulated increase of cAMP production, and therefore could have an effect on their target receptor.These results further suggest that autoimmunity may participate in the pathogenesis of human cardiomyopathy and the second extracellular loop of human M(2)muscarinic receptor could be the main immunodominant region.     

乙酰胆碱对白细胞介素2生成的影响

目的：观察乙酰胆碱（ACh)对大鼠淋巴细胞由刀豆素A（ConA)诱导的白细胞介素2（IL-2）生成的影响。方法：取大鼠的脾脏制成单个细胞悬液进行体外培养，用ConA诱导脾细胞的IL-2生成，然后以MTT比色法间接测定IL-2的生成。结果：ACh,M型胆碱能受体激动剂毛果芸香碱和N型胆碱能受体激动剂烟碱在10^-10-10^-6mol/L浓度范围都能显著增强ConA诱导的IL-2生成，M型胆碱能受体阻断剂阿托品（10^-10和10^-9mol/L)能阻断同浓度ACh的增强作用；N型胆碱能受体阻断剂筒箭毒碱（10^-10和10^-9mol/L)可部分阻断同浓度ACh的增强作用。结论：在机体内副交感神经兴奋可导致T淋巴细胞的功能增强，其免疫调节作用由免疫细胞上的M和N受体介导，可能M受体的作用占主导地位。     

抗M2受体的抗肽段抗体对cAMP产生量和钙电流的影响

应用放射免疫分析方法及全细胞膜片钳技术研究了抗M     

用转染m2胆碱受体基因的CHO细胞观察知母皂甙元的作用

目的 观察知母甾体皂甙元（ｓａｒｓａｓａｐｏｇｅｎｉｎ,ＳＡＲ）对Ｍ２受体亚型的调节作用。方法 采用转染了ｍ２胆碱受体基因的ＣＨＯ细胞为模型,以非选择性的＾３Ｈ－ＱＮＢ作点放射配基结合分析。结果 ＣＨＯｍ２细胞受体密度在培养４８ｈ达顶峰,以后呈进行性下降,ＳＡＲ对下降的ＣＨＯｍ２细胞Ｍ２受体有有显的上调作用,这一作用有一定浓度依赖性。结论 ＳＡＲ对下降的Ｍ２受体密度具有上调作用。     

放射自显影技术研究老年大鼠不同脑区M胆碱受体的变化

目的： 观察自然衰老大鼠不同脑区Ｍ 胆碱受体包括Ｍ１ 亚型受体的变化。方法： 采用放射自显影技术显示大鼠脑Ｍ 受体,并用图像分析仪进行灰度分析,以反映Ｍ 受体在不同脑区的相对定量分布。结果： 所得脑切片自显影灰度层次清晰,主要分布在大脑皮质,海马,纹状体等部位,非特异结合灰度很低,图像分析仪分别给出不同脑区的平均灰度值,老年鼠皮质,海马,纹状体部位的灰度显著低于青年鼠,Ｍ 受体分别降低２４８７ ％ ,１４１２ ％ ,１２７６ ％ （ Ｐ＜ ００５） ,Ｍ１ 亚型受体分别降低１５７８ ％ ,８６９ ％ ,１２３６ ％ （ Ｐ＜ ００１） 。结论： 以上３ 个重要脑区Ｍ 胆碱受体密度的改变可能是脑衰老的一个重要机制     

膀胱黏膜毒蕈碱型胆碱能受体密度与前列腺术后膀胱痉挛的相关性研究

目的  探讨膀胱黏膜毒蕈碱型胆碱能受体（M受体）M2、M3亚型的密度与前列腺电切术后膀胱痉挛的相关性。方法  选取2012年5月-2015年5月医院收治的良性前列腺增生（BPH）患者作为研究对象,将其分为合并膀胱过度活动症（OAB）观察组和不合并OAB对照组,再将观察组分为发生膀胱痉挛组及不发生膀胱痉挛组,比较各组M2、M3受体的密度及其相关性。结果  观察组术后膀胱痉挛的发生率高于对照组;观察组M2、M3受体密度均低于对照组;观察组中发生膀胱痉挛患者的M3受体密度低于不发生膀胱痉挛患者的M3受体密度。结论  膀胱黏膜M3受体密度与前列腺术后发生膀胱痉挛存在相关性,提示M3受体可能参与膀胱痉挛的发病机制。