VEGF基因表达载体的构建及其表达

为构建血管内皮生长因子(VEGF)基因的表达载体,以人胎肝cDNA库为模板,应用多聚酶链反应(PCR)技术,扩增全长的VEGF165cDNA序列,定向连接进质粒pcDNA3.1/Zeo( )的多克隆位点中,以重组质粒转染体外培养的293细胞,收集不同时相细胞裂解液进行蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳,以抗人VEGF165单克隆抗体行Westen blotting检测,观察VEGF基因的表达情况。结果显示选择合适的退火温度和引物,可以自人胎肝cDNA库中特异性地扩增VEGF165的cDNA序列。所构建的pcDNA3.1/Zeo( )-VEGF165真核表达载体系统能较好地转染体外培养的293细胞,Westen blotting检测到特异性表达条带。提示重组的VEGF165基因表达载体能够成功转染哺乳动物细胞,并表达目的基因,为解决组织移植中血运重建问题提供了一条基因治疗途径。     

VEGF真核表达载体构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

目的构建血管内皮生长因子（vascu lar endothelial growth factor,VEGF）真核表达载体,并研究其在骨髓间充质干细胞（m esenchym al stem cells,MSCs）中的表达情况。方法运用DNA重组技术,构建VEGF真核表达载体pcDNA3.1（-）/hVEGF165,将载体转染大鼠MSCs,RT-PCR,ELISA及免疫细胞化学等方法检测VEGF在大鼠MSCs中的表达情况,MTT法检测转染后细胞上清液中VEGF的生物活性。结果成功构建VEGF真核表达载体pcDNA3.1（-）/hVEGF165,其转染后的大鼠MSCs中VEGF表达水平明显增高,转染后细胞培养上清液具有促使内皮细胞增殖的生物活性。结论VEGF真核表达载体转染大鼠MSCs后能有效增加VEGF表达,并表现出较强的促内皮细胞增殖作用。     

HTK基因对脐静脉内皮细胞相关基因表达的影响

目的利用已经构建好的腺相关病毒-人组织激肽释放酶基因重组体（rAAV-HTK），感染体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC），观察HUVEC细胞中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、凋亡蛋白酶（caspase-3）、内皮素-1（ET-1）、血管内皮生长因子（VEGF）、内皮素B1受体（ETR-B1）以及缓激肽B1受体、缓激肽B2受体的mRNA表达量变化情况，探讨利用rAAV-HTK治疗高血压、缺血性心脏病的可行性。方法将已经构建好的rAAV-HTK重组质粒感染体外培养的HUVEC细胞，应用半定量RT-PCR方法检测感染rAAV-HTK前后HUVEC中eNOS、caspase-3、ET-1、VEGF、ETR-B1以及缓激肽B1受体、缓激肽B2受体的mRNA表达量变化情况。结果转染有rAAV-HTK的HUVEC细胞内其细胞内eNOS的mRNA合成量增加，caspase-3的mRNA表达量降低，VEGF、ET-1、ETR-B1、缓激肽B1受体、缓激肽B2受体的mRNA表达量没有变化。结论rAAV-HTK重组体感染HUVEC细胞能够使HUVEC细胞内eNOS的mRNA表达量增高，caspase-3的mRNA表达量减低，提示HTK能够改善内皮细胞功能，转HTK能够应用于高血压等血管内皮功能异常的心血管疾病的基因治疗。     

联合基因治疗体系pcDNA3.1(-)-shVEGF/yCDglyTK对胃癌细胞增殖的影响

目的:观察由磷酸钙纳米颗粒介导的联合基因治疗体系pcDNA3.1(-)-shVEGF/yCDglyTK对胃癌细胞增殖的影响.方法:以磷酸钙纳米颗粒为载体,介导pcDNA3.1(-)Null,pGenesil-1-hVEGF4-shRNA,pcDNA3.1(-)-CV-yCDglyTK,pcDNA3.1(-)-shVEGF/yCDglyTK转染胃癌细胞SGC7901,RT-PCR检测细胞中yCDglyTK及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA的表达情况.Western blot分析yCDglyTK及VEGF蛋白的改变.MTT法检测融合基因对转染细胞的杀伤作用.流式细胞术检测转染细胞的凋亡情况.结果:SGC7901细胞转染pcDNA3.1(-)-shVEGF/yCDglyTK质粒后有yCDglyTKmRNA及相关蛋白表达,VEGF表达受抑制达30.3%.相对于转染pcDNA3.1(-)-CV-yCDglyTK质粒组,联合基因体系对胃癌细胞的抑制作用更强(P<0.05).pcDNA3.1(-)-shVEGF/yCDglyTK组细胞凋亡率达到67.9%±4.78%.结论:联合基因治疗体系pcDNA3.1(-)-shVEGF/yCDglyTK较单独的RNA干扰或自杀基因可更有效的杀伤胃癌细胞.     

血管内皮生长因子对骨髓间充质干细胞分离培养的诱导分化作用

目的　结合骨髓间充质干细胞与血管内皮生长因子（VEGF）的优点,探讨VEGF对其体外诱导分化的作用。为缺血性疾病的治疗提供新思路。方法　成人新鲜骨髓,Percoll梯度分离法培养,单克隆培养法分离传代扩增骨髓基质细胞（MSCs）。在大肠杆菌DH5α中扩增和提取,纯化、克隆pcDNA3.0-VEGF165质粒。脂质体法转染MSCs。流式细胞术检测诱导前后MSCs免疫表型变化。一抗VEGF和CD31（1∶50）,FITC标记的VEGF二抗和cy3标记的CD31二抗与细胞共同孵育,甘油封片,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞染色情况。结果　转染前表达CD44（75.86%）、CD31（5.63%）。转染后CD44表达明显下调（40.18%）,CD31则明显上调（56.20%）。FITC标记后VEGF抗体使细胞显现绿色荧光,cy3标记的CD31抗体使细胞显红色荧光。结论　转染VEGF后骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化且有分泌VEGF的功能,为干细胞植入及血管再生起到指导作用。     

Smad4基因对人类胃癌细胞株血管生成相关因子影响的研究

目的 研究Smad4基因对人类胃癌细胞株血管生成相关因子的影响.方法 构建Smad4 真核表达载体pcDNA3.1(-)-Smad4质粒,并用脂质体介导转染方法将pcDNA3.1(-)-Smad4质粒和空载质粒pcDNA3.1(-)导入培养的Smad4基因表达缺失的胃癌MKN28细胞株中,经G418筛选,获得稳定表达Smad4基因的Smad4+-MKN28细胞和作为对照的Smad4--MKN28 细胞.分别应用逆转录(RT)-PCR法和Western印迹法检测体外培养亲本细胞、Smad4+-MKN28 细胞和Smad4--MKN28细胞的血管内皮生长因子(VEGF)和凝血酶敏感蛋白1(TSP1)基因的mRNA和蛋白的表达.结果 RT-PCR结果显示,VEGF在稳定转染pcDNA3.1(-)-Smad4重组质粒的Smad4+-MKN28细胞(0.41±0.14)较亲本细胞(0.71±0.45)和转染空载质粒的Smad4--MKN28细胞(0.76±0.28)表达明显下降(P<0.05),而TSP1的表达明显增高(分别为0.71±0.45、0.41±0.14和0.76±0.28,P值均<0.05),Western印迹结果示其编码蛋白也出现相应的变化.结论 恢复Smad4表达后此细胞株促进血管生成的基因表达下降,抑制血管生成的基因表达上调,提示Smad4基因可能通过抑制肿瘤血管生成而使肿瘤的生长受到抑制.     

辛伐他汀通过磷酸化作用增强内皮一氧化氮合酶活性

目的建立含人内皮一氧化氮合酶(eNOS)基因的人胎肾细胞株,研究他汀类药物对eNOS活性的影响。方法用脂质体转染的方法将含有eNOS基因的质粒pcDNA3.1-eNOS导入人胎肾细胞(293细胞),利用G418筛选二次,以免疫印迹法鉴定并筛选出稳定表达eNOS的阳性克隆。将辛伐他汀(10μmol/L)加入eNOS阳性细胞系培养2h后,收获细胞并用同位素二步色谱法检测eNOS的活性,同时用Western Blot蛋白检测eNOS、磷酸化的eNOS表达水平和细胞内信号分子Akt、AMPK水平以探讨辛伐他汀调节eNOS活性的机制。结果Western Blot显示经转染pcDNA3.1-eNOS并筛选后的后的293细胞20%的克隆能稳定有效表达eNOS蛋白;辛伐他汀处理2h后eNOS活性明显升高(P<0.05)。结论成功建立了具有G418抗性的禽pcDNA3.1-eNOS基因的人胎肾细胞株,并且证明辛伐他汀可通过调节eNOS的活性来调节NO的生成,这可能为心血管疾病的治疗提高一种新的思路。     

ICAP-1对脐静脉内皮细胞PI3K表达及细胞增殖的影响

目的 研究整合素胞浆结构域关联蛋白-1(ICAP-1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及PI3K信号通路表达的影响,以进一步研究其生物学作用及其在血管形成中的作用机制.方法 通过构建PCDNA3.1-ICAP-1质粒并转染HUVEC,采用MTT法测定HUVEC增殖化,Western Blot检测ICAP-1及PI3K表达.结果 PCDNA3.1-ICAP-1转染组ICAP-1和PI3K表达明显增加,PCDNA3.1-ICAP-1转染组与正常对照组、PCDNA3.1-GFP转染组比较表达差异有统计学意义(P<0.05).PCDNA3.1-ICAP-1转染组较PCDNA3.1-GFP转染组和正常对照组细胞增殖能力增强,差异有统计学意义(P<0.05).结论 ICAP-1具有促进内皮细胞增殖的作用,ICAP-1可能通过上调PI3K表达,促进内皮细胞增殖达到促进血管新生的作用.     

血管内皮生长因子基因修饰对内皮细胞前列腺环素合成影响的研究

目的 :观察血管内皮生长因子 (VEGF)基因转染对内皮细胞前列腺环素 (PGI2 )合成的影响 ,了解VEGF基因修饰对内皮细胞抗凝作用的影响。方法 :用脂质体转染的方法 ,将含有人VEGF基因的真核表达质粒pCD -hVEGF16 5体外转染人脐静脉内皮细胞。原位杂交、免疫组化法检测VEGF基因的表达 ,Elisa法检测培养上清液中VEGF及 6 -keto -PGF1α的含量。应用细胞计数法观察VEGF基因对内皮细胞生长的影响。结果 :外源性VEGF基因能被脂质体有效的导入内皮细胞并呈稳定表达。在高表达VEGF的同时 ,对PGI2 的合成和分泌较对照组明显增高 (p <0 .0 5 )。导入VEGF基因明显促进内皮细胞的分裂增殖。结论 :VEGF的高表达可显著提高内皮细胞对PGI2 的释放 ,可能增强内皮细胞的抗凝功能。     

依泽替米贝抑制大鼠血管平滑肌细胞荷脂

背景和目的治疗性血管新生在缺血性疾病包括对动脉粥样硬化的干预中具有实际意义,我们近年研究发现,生理性微电场可介导血管内皮细胞血管新生样反应,但其机制尚待深入研究。本研究拟探讨微电场影响内皮细胞血管新生相关基因的表达及其机制。方法应用微电场对血管内皮细胞进行刺激;利用显微成像系统及共聚焦显微镜研究内皮细胞的形态与结构;用ELISA法和/或RT-PCR测定内皮细胞血管新生相关基因的表达;用特异抑制剂研究血管内皮生长因子/血管内皮生长因子受体(VEGF/VEGFR)介导的细胞信号通路在内皮细胞血管新生及其基因表达中的作用。结果生理性微电场可刺激血管内皮细胞变长和定向排列,以及细胞定向移动。这些细胞行为在微血管内皮细胞(HMEC-1)和大血管内皮细胞(HUVEC)的反应存在明显差异。微电场刺激血管内皮细胞使VEGF165、VEGF121和白细胞介素8(IL-8)表达上调,而对其他血管新生相关分子如碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子β(TGF-β)以及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)等mRNA表达影响不明显。VEGFR抑制剂作用于血管内皮细胞后,抑制微电场对内皮细胞VEGF和IL-8的表达及内皮细胞定向排列...     

表皮角质细胞与血管内皮细胞共培养对血管内皮生长因子水平的影响

目的探讨人表皮角质细胞与血管内皮细胞共同培养对血管内皮生长因子(VEGF)作用的机制。方法购制人表皮角质细胞和血管内皮细胞进行体外培养,采用双腔通透性测定试剂盒建立细胞共培养模型,应用浓度为15 ng/ml的重组人血管内皮生长因子(VEGF)121和VEGF165作为对照组。利用荧光酶标仪测定不同时间段FITC-dextran量变化,观察血管内皮细胞单层通透性的改变。采用Griess法测定血管内皮细胞产生氧化氮(NO)的变化。结果共培养模型中,血管内皮细胞、表皮角质细胞生长良好,以连续单层形式存在;内池中VEGF121水平在5、30 min、1、2、3、4、5、6 h显著高于VEGF165(P0.05);在0、1、5、10 min,共培养模型内池中NO的含量低于VEGF121刺激组(P0.05),但高于VEGF165刺激组(P0.05)。结论 (1)表皮角质细胞分泌VEGF有时间依赖性,其中VEGF121含量较VEGF偏多。(2)表皮角质细胞分泌物可诱导NO产生,其能力介于VEGF121和VEGF165,因此考虑表皮角质细胞分泌物中引起NO产生增加的主要成分为VEGF。(3)表皮角质细胞分泌物可引起血管内皮通透性增加,其能力介于VEGF121和VEGF165,且数值接近于VEGF121,因此考虑表皮角质细胞分泌物中VEGF121较VEGF165含量高,且VEGF121较VEGF165引起血管通透性能力强。     

血管内皮生成因子165诱导血管形成中镁离子作用的研究

目的探讨血管内皮生成因子165（VEGF165）对人脐带静脉内皮细胞（HUVEC）内游离镁离子浓度（[Mg^2＋];）的调节机制及镁离子（Mg^2＋）与血管形成的相关性。方法采用荧光指示剂mag-fura-2,运用PTi阳离子测定系统动态测HUVEC内的[Mg^2＋];。新鲜脐带内灌注胶原酶消化,获得内皮细胞,用含20％胎牛血清的M199液进行培养,当细胞外Mg^2＋浓度分别为0、1和2mmol/L时,观察VEGF。65促进HUVEC血管形成的能力。结果VEGF。65诱导的[Mg^2＋]i增加与细胞外Mg^2＋浓度无关。在细胞外无Mg^2＋时,VEGF165能剂量依赖性地增加[Mg^2＋]i。VEGF165诱导的[Mg^2＋];增加与细胞外Na^＋浓度和细胞内Ca^2＋浓度无关。经VEGF的受体亚型2（KDR）阻断剂SU1498预处理,能明显阻断VEGF165诱导的[Mg^2＋]i增加。当细胞外Mg^2＋为0mmol/L时,HUVEC血管形成作用受到明显抑制,VEGF165也不刺激血管形成。当细胞外Mg^2＋为1或2mmol/L时,HUVEC能形成血管,两组间差异无统计学意义,VEGF165则可促进HUVEC形成血管,两组间差异无统计学意义。当细胞外Mg^2＋为1或2mmol/L时,KDR阻断剂SU1498明显抑制VEGF165促进HUVEC血管形成的作用。结论VEGF165通过KDR信号传递途径使细胞内的Mg^2＋库释放Mg^2＋,从而增加HUVEC的[Mg^2＋]i,并对促进血管形成起重要作用。     

重组腺相关病毒介导人血管内皮生长因子165基因在培养大鼠心肌细胞中的表达

目的探讨2型腺相关病毒载体介导的人血管内皮生长因子165基因在离体心肌细胞中的表达及表达产物的生物活性。方法构建携带人血管内皮生长因子的2型腺相关病毒载体(rAAV-2/hVEGF165),感染大鼠原代心肌细胞,采用逆转录聚合酶链反应、免疫印迹法和酶联免疫吸附测定等方法检测心肌细胞人血管内皮生长因子165的表达,应用MTT法检测转染后细胞上清液中血管内皮生长因子165的生物学活性。结果逆转录聚合酶链反应检测结果发现感染的心肌细胞可表达人血管内皮生长因子165 mRNA;免疫印迹法检测结果表明感染的心肌细胞中有人血管内皮生长因子165,酶联免疫吸附测定法检测到血管内皮生长因子蛋白分泌水平为546.5±15.6pg/L,未转染组未检测到血管内皮生长因子蛋白的分泌;还发现感染的心肌细胞上清具有明显的促人内皮细胞增殖作用。结论2型腺相关病毒载体介导的人血管内皮生长因子165可有效转染大鼠心肌细胞,且表达产物具有促内皮细胞增殖作用。     

慢性粒细胞白血病血管新生的体外研究

目的：探讨K562细胞上清液对人脐静脉内皮细胞（HuVEc）增殖、迁移、体外小管形成的作用。方法：运用MTT法、Transwell室及体外小管形成实验观察K562细胞上清液对HUVEC增殖、迁移及体外分化的影响。Westernblot、ELISA法检测K562细胞血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达。结果：K562细胞系表达和分泌VEGF和bFGF。细胞培养上清液能明显促进HUVEC的增殖、迁移、体外小管形成,其作用随着细胞培养上清液浓度的增加而增强。结论：体外实验表明慢性粒细胞白血病患者存在血管新生,通过分泌血管新生正调控因子VEGF和bFGF,促进HUVEC的增殖、迁移、分化。     

活血益气方促缺氧人脐静脉内皮细胞迁移及其相关调控基因mRNA表达的拆方研究

目的 观察活血益气方及其拆方药物血清对缺氧损伤后人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移的影响,探讨其促血管新生可能的作用机制及配伍规律。方法 采用三气培养箱建立HUVEC缺氧损伤模型,另设正常对照组常规培养。活血益气方、活血方及益气方组分别给予相应药物血清培养,缺氧组及正常对照组给予正常对照血清培养。干预24h后,采用TranswellInsert检测细胞迁移,实时荧光定量PCR法检测细胞粘着斑激酶(FAK)、应激活化蛋白激酶-2(p38)、MAP激酶活化蛋白激酶(MAPKAPK)、热休克蛋白27(HSP27)mRNA表达水平。结果 与正常对照组比较,缺氧组细胞迁移数显著减少(P<0.01);FAK、p38、MAPKAPK、HSP27mRNA表达水平显著下调(P<0.01)。与缺氧组比较,活血益气方、活血方及益气方可增加缺氧细胞迁移数(P<0.05或P<0.01),其中活血益气方组细胞迁移数显著高于活血方组,差异有统计学意义(P<0.05);活血益气方可上调细胞FAK、p38、MAPAPK、HSP27mRNA表达水平(P<0.05或P<0.01),活血方可上调细胞FAK、p38mRNA表达水平(P<0.05),而益气方则可上调细胞FAK、p38、MAPKAPKmRNA表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论 活血益气方及其拆方可不同程度地促进缺氧后HUVEC迁移,其作用机制可能与上调FAK及p38/MAPKAPK/HSP27信号通路活性有关;活血益气方的促迁移效应最显著,活血方和益气方发挥协同作用。     

益气活血法对脑出血大鼠脑内血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的观察脑出血大鼠脑组织中血管内皮生长因子（VEGF）表达,探讨益气活血法治疗脑出血的分子生物学机制。方法Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型,分别以补阳还五汤及该方的拆方益气方和活血方灌胃,Western印迹法观察出血后1、4、7、14、21、28d鼠脑VEGF蛋白表达。结果模型组、益气组、活血组和益气活血组造模后1d均可检测到VEGF蛋白阳性信号,益气活血组于14d达高峰（P〈0.01）,早于其他3组（21d）;益气活血组第7～28天均高于模型组、益气组、活血组水平（P〈0.01）。结论脑出血大鼠脑VEGF蛋白表达上调;益气活血法能增强脑出血大鼠脑VEGF蛋白表达,促进VEGF峰值提前,并维持在较高水平,以促进脑出血损伤修复。     

β-神经生长因子基因转染对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究β-神经生长因子(β-NGF)基因转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对细胞增殖、单克隆形成、细胞周期、细胞凋亡、细胞迁移相关功能的影响。方法将人源β-NGF基因重组的真核表达质粒(p EGFP-N1/β-NGF)转染至HUVEC,同时设置p EGFP-N1空载组、正常组(未转染质粒)、酪氨酸激酶受体A(Trk A)抑制剂组(β-NGF基因转染组加入1∶1000的K252a)。观察转染前后细胞形态学变化,利用real-time PCR和Western blot检测β-NGF基因转染表达效果,MTT法检测β-NGF基因转染对细胞增殖的影响,平板单克隆实验检测β-NGF基因转染对细胞单克隆形成能力的变化,流式细胞术检测β-NGF基因转染对细胞周期和细胞凋亡率的影响,Transwell方法检测转染前后细胞迁移能力的变化,Western blot检测β-NGF基因转染前后Trk A和血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化。结果β-NGF基因成功转染HUVEC 48 h后能够显著提高β-NGF mRNA和蛋白的表达水平(P0.05),同时促进细胞增殖、单克隆形成、细胞迁移能力,并影响细胞周期抑制细胞凋亡率(P0.05)。β-NGF基因转染HUVEC后Trk A和VEGF表达水平也随之显著上升(P0.05),但受到Trk A抑制剂的抑制。结论β-NGF基因能够成功转染HUVEC并显著表达,进而促进细胞增殖、单克隆形成、细胞迁移能力,并影响细胞周期抑制细胞凋亡率,而其发挥作用与Trk A结合诱导VEGF表达上调有关。     

VEGF165正反义表达载体的构建及其对人胃癌细胞VEGF表达的调节

目的构建VEGF165(vascular endothelial growth factor,血管内皮生长因子)正、反义表达载体,将其转染人胃癌细胞,观察其对胃癌细胞VEGF在mRNA和蛋白质水平表达的调节作用.方法用限制性内切酶将VEGF165 cDNA从pGEM-hVEGF165克隆载体上切下来,以正、反方向插入质粒pCDNA3中,构建VEGF165正、反义真核表达载体;用限制性内切酶和Sanger双脱氧终止DNA测序法证明VEGF165正、反义表达载体目的基因的序列和方向的正确性;用脂质体将VEGF165正、反义表达载体转染人胃癌细胞,用RNA斑点杂交及免疫荧光流式细胞仪检测VEGF mRNA和蛋白质的表达水平.结果酶谱分析及DNA测序表明VFGF165正、反义真核表达载体目的基因的序列及方向正确;转染正义表达载体后VEGF mRNA和蛋白质表达水平增加(蛋白免疫强度为75.4%;P＜0.05vs对照组,31.6%),转染反义表达载体后VEGF mRNA和蛋白表达水平降低(蛋白免疫强度为8.9%;P＜0.05vs对照组).结论成功地构建了VEGF165正、反义真核表达载体;构建的载体能在胃癌细胞内有效表达,调节血管内皮生长因子的水平.     

分泌性内皮抑制素真核质粒治疗小鼠肝癌的初步研究

目的 构建并表达分泌性内皮抑制素真核表达质粒,以此对肝癌进行基因治疗。方法 人工合成Ig κ信号肽序列,和内皮抑制素编码序列一起克隆入pcDNA3.1质粒。重组质粒转染上清液作用于ECV304内皮细胞,MTT法检测内皮细胞的增殖。局部注射重组质粒治疗接种在小鼠腿部肌肉内的H_(22)肝癌瘤株,疗程结束后解剖称取瘤重。结果 构建的内皮抑制素真核表达质粒转染上清液可以抑制内皮细胞的增殖抑制率为29.2％。经质粒裸DNA注射治疗后,治疗组瘤重[(1.34±0.96)g]比空载体组[(2.70±0.82)g]和生理盐水组[(3.73±1.41)g]明显减小(P<0.05)。结论 分泌性内皮抑制素真核表达质粒用于H_(22)肝癌的基因治疗有一定效果。     

血管抑制素基因抑制结肠癌细胞增殖及肿瘤血管生成的研究

目的:研究血管抑制素基因体外对结肠癌细胞增殖的抑制及体内对肿瘤血管生成的抑制,探讨血管抑制素基因对结肠癌的抑制作用。方法:构建重组质粒pcDNA3.1( )／angio,用脂质体转染法将重组质粒、空白载体导入结肠癌细胞Colo205,培养细胞观察细胞生长,绘制细胞生长曲线,计算增殖抑制率,然后将pcDNA3.1( )／angio、pcDNA3.1( )／Colo205、Colo205分别接种至裸鼠右侧颈部皮下,观察肿瘤的生长,测量肿瘤体积,计算抑瘤率,免疫组化检测肿瘤组织中微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:体外pcDNA3.1( )／angio组细胞的生长速度略慢于pcDNA3.1( )／Colo205、Colo205组,但差异无统计学意义(P>0.05);体内pcDNA3.1( )／angio组细胞的致力显著降低,瘤体增长缓慢,抑瘤率较高(P<0.01),瘤体组织中MVD及VEGF的表达较低(P<0.05);pcDNA3.1( )／Colo205、Colo205两组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在体外血管抑制素不直接影响结肠癌细胞Colo205的生物学特性,但在体内可强烈抑制肿瘤的生长,其机制可能是通过降低血管生成因子而抑制肿瘤的新生血管生成,发挥抑制肿瘤作用。