类风湿关节炎血瘀证大鼠模型的制备及评价

目的 :建立一个稳定可靠的类风湿关节炎(RA)血瘀证动物模型,为后续实验提供基础。方法:选用雌性SD大鼠,在Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型(CIA)的基础上,结合小剂量长期注射盐酸肾上腺素和4℃冷水应激的方法,建立RA血瘀证动物模型并对其进行评价。结果:同正常组对比,模型组一般精神状况较差,足趾肿胀度在各个时间点比较差异有统计学意义(P<0.01)。模型组大鼠造模后第7天至第28天关节炎指数(AI)值持续增高,在各个时间点与正常组对比差异有统计学意义(P<0.01)。模型组大鼠外周血血清类风湿因子(RF)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、血栓素A2(TX-A2)、超敏C反应蛋白(hs CRP)的浓度水平较正常组升高(P<0.01),且4周内呈持续升高趋势。模型组大鼠高中低切变率下的全血黏度及血浆黏度均高于正常组(P<0.05或P<0.01);模型组红细胞压积高于正常组(P<0.01);模型组血沉快于正常组(P<0.01)。光镜下可见模型组大鼠关节软骨表面不光整,浅表层可见增生纤维化,部分可见裂纹。软骨全层细胞减少,细胞排列紊乱,分布不均,部分细胞核坏死,部分软骨陷窝消失。软骨基质染色浅且不均匀。潮线模糊、不规则,附近有血管穿过。模型组病理评分分值较正常组升高(P<0.01)。结论:本研究在CIA模型的基础上,结合盐酸肾上腺素小剂量长期注射复合4℃冷水应激,制备的模型更符合RA血瘀证久病、慢性的特点,更能接近临床血瘀证的发病过程,符合中医证候特点。     

类风湿关节炎病证结合动物模型的研究进展

本文归纳总结结合风寒湿证、风湿热证、血瘀证、肾虚证和脾虚证RA模型的研究,特别是在病证结合动物模型研究出一种与中医证候更贴近,操作更为便捷、经济,更加全面反应中医痹病特色的动物模型,以便风湿病科研人员在今后的研究中选择合适的动物模型,也是今后研究RA病证结合动物模型的重要内容之一.     

类风湿关节炎动物模型研究进展

在类风湿关节炎的基础实验研究中,复制接近人类类风湿关节炎的动物模型是实验成功的关键。基于类风湿关节炎的西医病理和中医证候变化,当前的模型复制方法主要包括疾病动物模型与病证结合模型两大类。疾病模型主要包括胶原诱导性模型、佐剂性模型、卵清蛋白模型和降植烷模型等,病证结合模型包括风寒湿痹证与风湿热郁证模型、肾虚证模型和脾虚证模型等。梳理当前常用的模型复制方法与模型评价指标,阐明各自的优缺点,可为类风湿关节炎的研究提供参考。     

慢性阻塞性肺病复合肾虚证大鼠模型的建立

目的建立慢性阻塞性肺病复合肾虚证大鼠模型的方法.方法采用二氧化硫气体熏吸合并腺嘌呤饲料喂饲复制慢阻肺复合肾虚证模型.分别进行病理图像描述,病理图像分析以进行细支气管内径、外径测量和内外径比值的计算,放射免疫法检测血清睾酮和雌二醇含量.采用SPSS统计软件进行单因素方差分析.结果复合模型组实验动物肺脏组织病理表现出慢性阻塞性肺病（COPD）特征性改变.与正常组相比复合模型组细支气管内径减少、外径增加以及内外径比值减少,具备了COPD的病理基础;同时还较正常组出现了血浆雌二醇和睾酮含量的下降,具有肾虚证的实验室改变.结论本造模方法可以复制出慢性阻塞性肺病复合肾虚证的动物模型.     

类风湿关节炎病证结合研究进展

类风湿关节炎是一种自身免疫性疾病,是临床常见病、多发病,虽然目前诊治该病有较多方法,但因诸多原因,部分患者仍不能达到很好的疗效。如何更好的降低类风湿关节炎疾病活动度及使患者维持在临床缓解或低疾病活动度是目前的难点。病证结合诊治该病是目前治疗的趋势。《类风湿关节炎病证结合诊疗指南》已于2017年由中华中医药学会发布。故该文将近年来类风湿关节炎病证结合治疗方法进行总结和分析,为临床更好的遣方用药做铺垫和借鉴。     

小鼠类风湿关节炎动物模型的建立

目的建立一个稳定的、可靠的类风湿关节炎动物模型,为RA的发病机制研究和药物筛选提供必要手段.方法用牛Ⅱ型胶原加佐剂免疫动物.结果实验组小鼠后肢体积增大率为80%,有病理改变者为89.8%.结论用牛Ⅱ型胶原加佐剂免疫DBA/1小鼠可成功的建立类风湿关节炎动物模型.     

病证结合组方治疗类风湿关节炎湿热痹阻证的临床疗效评价

目的 观察基于辨证论治和中药药理研究的病证结合治疗方案治疗类风湿关节炎湿热痹阻证的有效性和安全性.方法 选择类风湿关节炎湿热痹阻证患者64例,随机分为治疗组和对照组,每组32例,对照组给予洛索洛芬钠片、甲氨蝶吟片口服;治疗组在此基础上加服病证结合组方的中药治疗.2组疗程均为12周,以美国风湿病学会(ACR)疗效评价指标作为整体疗效评价标准.结果 治疗12周后,与本组用药前比较,2组患者各项指标改善均有统计学差异(P＜0.01).2组用药前后差值比较,在疼痛评分(VAS评分)、晨僵时间、关节肿胀个数、关节肿胀指数、关节压痛个数、关节压痛指数、握力、28处关节疾病活动度评分(DSA28评分)、健康评估问卷调查(HAQ)、患者评价、红细胞沉降率(ESR)等方面治疗组的改善明显优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组ACR20,ACR50,ACR70分别为23.34%(7/30)、40.00%(12/30)、23.34%(7/30),对照组分别为40.63%(13/32) 、28.13 %(9/32)、9.38%(3/32),2组差异有统计学意义,治疗组优于对照组(P＜0.05)0 2组不良反应发生率比较对照组高于治疗组(P＜0.05).结论 病证结合组方治疗类风湿关节炎湿热痹阻证疗效显著且能降低西药不良反应.     

大鼠肾虚型颈椎病模型的建立

目的：采用病、证模型复合的方法建立大鼠肾亏型颈椎病动物模型。方法：选择3月龄雌性SPF级SD大鼠30只,随机分为正常组、颈椎病模型组和肾虚型颈椎病模型组,每组10只。采用动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型复合去卵巢肾虚亏模型的方法建立肾虚型颈椎病模型。通过检测大鼠子宫及附件形态和质量、血清雌二醇（estradiol,E2）含量验证肾虚证;通过颈椎间盘组织病理学、Ⅱ型和Ⅹ型胶原的免疫组化检测及聚集蛋白聚糖（aggrecan-1,Agc1）、Ⅱ型前胶原基因（typeⅡprocolla-gen gene,Col2a1）、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）和基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TI MP-1）的基因表达情况评判椎间盘退变。结果：与正常组和颈椎病模型组相比,肾虚型颈椎病模型组动物子宫及附件形态萎缩、质量减轻,血清雌二醇含量降低,颈椎间盘组织病理学退变更加明显,Ⅱ型胶原蛋白表达减少,Ⅹ型胶原表达增高,Agc1和Col2a1基因表达降低,MMP-13基因表达增高。结论：通过病、证模型复合的方式建立了肾虚型颈椎病模型,肾虚可以加重颈椎间盘的退变。     

大鼠血瘀型颈椎病模型的建立

目的：采用病、证模型复合的方法建立血瘀型颈椎病病证结合动物模型。方法：选择3月龄雌性SPF级sD大鼠30只,随机分为正常对照组、颈椎病模型组和血瘀型颈椎病模型组,每组10只。颈椎病模型采用动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型,血瘀型颈椎病模型在动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型基础上复合肾上腺皮质激素加肾上腺素法血瘀模型制成。通过动物体征、血液流变学、CD62p验证血瘀证;通过颈椎间盘组织病理学、Ⅱ型和X型胶原的免疫组织化学检测及Agc0、Col2a1、MMP-13和TIMP-1的基因表达评判椎间盘退变程度证实颈椎病模型的成立。结果：血瘀型颈椎病模型组动物舌质瘀紫、瘀斑,尾色瘀青;血液流变学指标及CD62p均有不同程度增高,颈椎间盘组织病理学观察可见退变更加明显,Ⅱ型胶原蛋白表达减少,X型胶原表达增高,与正常组和颈椎病组相比差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）;Agc1、Col2a1和TIMP-1的基因表达降低,MMP-13基因表达增高,Agc1、Col2a1的差异与正常组比较有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）,与颈椎病组比较无统计学意义。结论：通过病、证模型复合的方式建立了大鼠血瘀型颈椎病模型,血瘀可以加重颈椎间盘的退变。     

大鼠气虚型颈椎病模型的建立

目的：建立大鼠气虚型颈椎病动物模型。方法：选择3月龄雌性SPF级SD大鼠30只,随机分为正常组、颈椎病模型组和气虚型颈椎病模型组,每组10只。颈椎病模型采用动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型,气虚型颈椎病模型采用动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型复合疲劳加饥饱失常法制造的气虚模型而制成。通过动物的行为、体征、体质量、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）、乳酸脱氢酶（LDH）来验证气虚证;通过颈椎间盘组织病理学、Ⅱ型和X型胶原的免疫组织化学检测及聚集蛋白聚糖（Agcl）、Ⅱ型前胶原基因（Col2a1）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）和基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的基因表达评判椎间盘退变程度,以证实颈椎病模型的成立。结果：与正常组和颈椎病组比较,气虚型组动物出现明显的精神委靡、倦怠、少动、喜卧、毛乱无光泽、眼睑下垂等气虚证的表现,体质量下降;cAMP、cGMP升高,cAMP／cGMP降低（P〈0．05,P〈0．01）,LDH升高（P〈0．05）;颈椎间盘组织病理学退变更加明显,Ⅱ型胶原蛋白表达减少,X型胶原表达增高,Agcl、Col2al和TIMP-1基因表达降低,MMP-13表达增高（P〈0．05,P〈0．01）。结论：通过病-证模型复合的方式可建立大鼠气虚型颈椎病模型,气虚可以加重颈椎间盘的退变。     

大鼠气虚血瘀肾虚型颈椎病模型的建立

目的：采用病、证模型复合的方法建立大鼠气虚血瘀肾虚型颈椎病模型。方法：选择3月龄雌性SPF级SD大鼠30只,随机分为正常组、颈椎病模型组和气虚血瘀肾虚型颈椎病模型组,每组10只。颈椎病模型采用动静力失衡大鼠颈椎间盘退变模型,气虚血瘀肾虚型颈椎病模型采用动静力失衡大鼠颈椎间盘退变模型复合疲劳加饥饱失常法制造的气虚模型、肾上腺皮质激素和肾上腺素法制造的血瘀模型及去卵巢肾虚模型而制成。通过对大鼠行为体征观察和血液流变学、血小板表面α-颗粒膜糖蛋白（alpha-granular membrane protein,CD62p）、血清雌二醇（estradiol,E2）含量等检测,并用放射免疫法检测血浆环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）与环磷酸鸟苷（cyclic guanosine monophosphate,cGMP）含量,验证气虚、血瘀、肾虚证;通过椎间盘组织病理学观察,免疫组织化学法检测椎间盘组织中Ⅱ型、Ⅹ型胶原蛋白含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测颈椎间盘聚集蛋白聚糖（aggrecan-1,Agc1）、Ⅱ型前胶原基因（typeⅡprocollagen gene,Col2a1）、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）和基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TI MP-1）的基因表达等评判椎间盘退变情况。结果：病证结合模型大鼠出现精神萎靡、倦怠、舌质瘀紫、尾色瘀青,体质量下降等气虚、血瘀证的表现,cAMP/cGMP降低,低切还原黏度增高,CD62p表达增高,血清E2含量降低。病理提示颈椎间盘组织结构发生退变,Ⅱ型胶原蛋白表达减少,Ⅹ型胶原表达增高,Agc1、Col2a1和TI MP-1的基因表达降低,MMP-13表达增高。结论：建立了大鼠气虚血瘀肾虚型颈椎病模型,气虚血瘀肾虚加重了颈椎间盘退变。     

肾阴虚抑郁症大鼠模型的建立及评价

目的建立肾阴虚抑郁症大鼠模型。方法将50只大鼠随机分为正常组、单纯应激组、温燥组、甲状腺素组及激怒组;采用慢性温和不可预见性慢性应激建立抑郁症"病"模的同时,正常组、单纯应激组灌胃生理盐水,甲状腺素组灌胃甲状腺素,温燥组灌胃温燥药;激怒组采用长期激怒法并灌胃生理盐水。使大鼠在抑郁的基础上表现出一定的阴虚"证,"以大鼠一般状态、敞箱试验、液体消耗试验、血清雌二醇(E2)、睾酮(T)及血浆环腺苷酸(cAMP)、环鸟苷酸(cGMP)作为检测指标,对各模型进行比较。结果与正常组比较,各模型组的体质量、水平得分、垂直得分、中央格停留时间、糖水消耗、总液体消耗各指标测值减少,温燥组、甲状腺素组及激怒组普遍出现活动减少,大便干燥,毛湿无光泽,易惊怒以及血浆cAMP含量升高,其中甲状腺素组和激怒组大鼠血清E2、E2/T比值显著升高。结论甲状腺素合并应激抑郁模型所致的肾阴虚抑郁,更符合临床实际,简单易行,可作为肾阴虚抑郁症造模方法之一。     

肾虚证相关基因的研究

本文提出研究肾虚证的相关基因可以从单一病证入手，应用基因芯片、RDA方法、基因序列分析等现代分子生物学技术筛选肾虚证患者的差异基因，最后研究这些基因与肾虚证表型的内在联系，只有证实某些基因能对肾虚证的病理生理状态施加影响，才可确定此基因是肾虚证的相关基因。此研究思路与方法还可用于其他中医证候相关基因的研究。     

Eye disease in a patient with rheumatoid arthritis

We report the case of a 40-year-old woman with diffuse uveitis, sensorineural hearing loss and cerebrospinal fluid pleocytosis as features of Vogt-Koyanagi-Harada syndrome who developed symmetric polyarthritis and stiffness of small and large joints, in addition to rheumatoid arthritis. Although their target tissues are distinct, both diseases have a possible autoimmune origin strongly associated with HLA-DRB4.     

益气化瘀补肾方对大鼠肾虚型颈椎病的作用机制

目的：研究益气化瘀补肾方对大鼠肾虚型颈椎病的作用机制。方法：选择3月龄雌性SPF级SD大鼠30只，随机分为正常对照组、肾虚型颈椎病模型组（简称模型组）和益气化瘀补肾方组，每组10只。除正常对照组不施加任何手术外，采用由动静力失衡大鼠颈椎间盘退变模型和去卵巢肾虚模型复合法建立肾虚型颈椎病模型。手术3个月后，益气化瘀补肾方组大鼠予益气化瘀补肾方灌胃治疗1个月。放射免疫法检测血清雌二醇（estradiol，E2和血浆环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）、环磷酸鸟苷（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）含量；锥板法检测血液流变学；流式细胞仪检测血小板表面α-颗粒膜糖蛋白（alpha—granular membrane protein，CD62p）表达；HE染色观察颈椎间盘组织病理学改变，免疫组织化学检测颈椎间盘Ⅱ型胶原蛋白表达情况，并通过实时荧光定量聚合酶链式反应法检测聚集蛋白聚糖（aggrecan-1，Agcl）、Ⅱ型前胶原基因（type Ⅱ procollagen gene，Col2al）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）mRNA表达。结果：与模型组比较，益气化瘀补肾方组大鼠血清E2含量升高（P〈0．05）；血浆cAMP、cGMP含量有所升高，但差异无统计学意义；全血低切黏度、低切还原黏度和CD62p表达百分率下降（Pd0．05或P〈0．01）；颈椎间盘退变有所改善，Miyamoto评分下降（P〈0．05），11型胶原表达增加；Agcl、Col2al和TIMP-1 mRNA表达增加（P〈0．05，P〈0．01），MMP-13 mRNA表达下降（Pd0．01）。结论：益气化瘀补肾方可通过调节免疫系统、代谢系统、凝血系统和内分泌系统等指标，改善肾虚型颈椎病证候指标，并延缓椎间盘退变。     

脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠模型的建立与评价

目的：建立符合中医证候特点的脾虚湿困型溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis,UC）大鼠模型。方法：60只大鼠随机分为正常对照组、三硝基苯磺酸（trinitrobenzenesulfonicacid,TNBS）模型组,内外因加TNBS模型组及健脾化湿防治组。正常对照组给予普通喂养;TNBS模型组采用TNBS与乙醇复合物进行造模,内外因加TNBS模型组大鼠给予环境与饮食因素干预结合TNBS与乙醇复合物进行造模,健脾化湿防治组在内外因加TNBS模型复制过程中给予参苓白术散煎剂灌胃。观察各组大鼠症状、体征、病理改变,并检测血清白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）、白细胞介素8（interleukin-8,IL-8）及肿瘤坏死因子a（tumornecrosisfactor-α,TNF-α）的浓度。结果：内外因加TNBS模型组大鼠出现嗜睡懒动、蜷缩,饮少纳呆,精神萎靡,毛发疏松粗糙、晦暗无光泽,腹泻及黏液血便症状;大鼠体质量明显下降,摄食饮水量明显降低,小便量明显减少,大便湿重增加,自发活动次数明显减少,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;镜下观察黏膜见水肿、充血、大量炎症细胞浸润,伴有溃疡灶形成;大鼠结肠组织损伤程度评分及IL-6、IL-8和TNF-α的浓度与正常对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。健脾化湿防治组大鼠经治疗后体质量明显增加,摄食饮水量明显增多,小便量明显增加,大便湿重减少,自发活动次数明显增多,与TNBS模型组及内外因加TNBS模型组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;结肠黏膜见轻度充血、水肿,仅有少量炎性细胞浸润,其结肠组织损伤程度评分及IL-6、IL-8和TNF-α的浓度与内外因加TNBS模型组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：环境与饮食因素干预结合TNBS与乙醇复合物建立的脾虚湿困型UC大鼠模型,符合人类自然发生的UC病变特点和中医证候特点,是较理想的脾虚湿困型UC模型。     

益气化瘀补肾方治疗气虚血瘀肾虚型颈椎病大鼠的机制研究

目的：研究益气化瘀补肾方治疗气虚血瘀肾虚型颈椎病大鼠的作用机制。方法：选择3月龄雌性SPF级SD大鼠30只,随机分为正常组、模型组和益气化瘀补肾方组,每组10只。气虚血瘀肾虚型颈椎病模型通过病、证模型复合而成。益气化瘀补肾方组采用益气化瘀补肾方治疗1个月。通过放射免疫学、组织病理学、免疫组织化学和分子生物学等技术研究益气化瘀补肾方的作用机制。结果：与正常组比较,模型组动物出现精神萎靡、少动,舌质、尾色瘀紫,体质量减轻,子宫及附件质量降低,环磷酸腺苷与环磷酸乌苷及其比值无明显差异,血黏度、血小板表面α-颗粒膜糖蛋白（alpha-granular membraneprotein,CD62p）增高,血清雌二醇（estradiol,E2）降低。益气化瘀补肾方组与模型组比较,除子宫及附件质量外,上述指标均有不同程度改善。HE染色显示模型组颈椎间盘高度降低,纤维环出现裂隙,胶原纤维排列紊乱,髓核减少,软骨终板变薄;益气化瘀补肾方组椎间盘高度正常,纤维环排列稍紊乱,髓核结构良好,软骨终板变化不明显。与正常组比较,模型组Ⅱ型胶原表达减少;益气化瘀补肾方组Ⅱ型胶原在纤维环的表达比模型组有所增加。模型组与正常组比较Ⅱ型前胶原基因和基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissuein—hibitorofmetallopr。teinase1,TIMP1））基因表达降低（P〈0．01）,益气化瘀补肾方组与模型组比较,Ⅱ型前胶原基因和TIMP-1基因表达增高,基质金属蛋白酶-13基因表达降低（P〈0．05,P〈0．01）。结论：益气化瘀补肾方通过调节免疫、凝血和内分泌系统等改善模型动物气虚血瘀肾虚状态,通过调节椎间盘细胞外基质以及相关金属蛋白酶延缓椎间盘退变。     

糖皮质激素对哮喘模型大鼠肾阴阳虚证候演变的影响

目的：观察地塞米松干预哮喘模型大鼠的不同阶段（撤停前、撤停中、撤停后）对阴阳虚证候及下丘脑一垂体一肾上腺皮质（hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA）轴的影响。方法：通过雾化吸入1％卵清白蛋白建立大鼠慢性哮喘模型。腹腔注射地塞米松模拟激素干预过程,观察不同阶段大鼠的症状表现,根据阴虚、阳虚证计量标准,判断阴虚、阳虚证候属性;酶联免疫吸附测定法检测血清皮质酮（corticosterone,CORT）含量,放射免疫测定法检测血浆促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone,ACTH）、下丘脑匀浆液促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropin—releasing hormone,CRH）及血浆骨钙素（bone Gla—protein,BGP）含量。结果：激素干预组大鼠于激素撤停前阶段属阴虚证,撤停中阶段属阴亏、阳虚证,撤停后阶段属阴阳两虚证。激素撤停前阶段及撤停中阶段,对HPA轴（CORT、ACTH、CRH含量）有显著抑制作用,激素撤停后HPA轴的功能有所恢复;激素应用的各个阶段,均存在BGP的明显抑制。结论：激素干预哮喘模型大鼠在激素应用的不同阶段具有不同的证候特点,激素干预后动物呈现明显的肾虚表现。     

大鼠类风湿性关节炎动物模型制备及血沉和组织学检测

目的:探讨大鼠类风湿性关节炎(RA)动物模型的制备及血沉和组织学检测。方法:以实验大白鼠为对象,Ⅱ型胶原(CⅡ)和不完全弗氏佐剂(IFA)混合注射,不同时间点实验组大鼠(0、2、4、6周)所获得血样用于做血沉检测,踝关节标本进行组织病理学研究。结果:实验组与正常对照组血沉指标进行统计学比较分析,差异有统计学意义(P<0.05),而且在急性期增快明显,病情稳定后血沉下降。在大鼠关节炎标本组织学中观察到滑膜组织增生,其局部骨吸收破坏明显,软骨表层胶元纤维松解断裂、软骨细胞变性坏死,软骨表面凸凹不平,可见骨吸收破坏陷窝。结论:采用异种Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂可以成功制备的类风湿关节炎模型,可以用于RA炎性吸收破坏机理及治疗方面的研究。