洋葱总黄酮透过血脑屏障抑制脑胶质瘤的作用研究

目的:研究采用热水浸提和乙醇冷浸两种方法从洋葱中提取的总黄酮对血脑屏障(BBB)透过作用以及对人脑胶质母细胞瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法:共培养原代鼠脑微血管内皮细胞(BMVEC)和星形胶质细胞(AC),建立血脑屏障(BBB)体外模型,通过透射电子显微镜观察和跨膜电阻值(TEER)测量验证;采用高效液相色谱(HPLC)检测黄酮类提取物对血脑屏障的透过率。两组提取物分别处理U251细胞,MTT法观察细胞的增殖抑制、彗星电泳(SCGE)分析DNA损伤及流式细胞术(FCM)分析细胞周期分布情况。结果:透射电镜及跨膜电阻仪鉴定BBB体外模型构建成功;HPLC检测证实两组黄酮类提取物尤其是乙醇冷浸法产物能有效透过血脑屏障;该提取物80μmol/L浓度即对人胶质母细胞瘤U251细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用,并使U251细胞阻滞于G2/M细胞周期检查点。结论:采用乙醇冷浸法从洋葱中提取的黄酮类物质可有效透过血脑屏障,并对人胶质母细胞瘤U251细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用。     

洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察两种不同提法的洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用热水浸提法和乙醇抽提法从洋葱中提取黄酮类物质,MTT法测定其对人结肠癌细胞HCT116增殖的影响,免疫细胞化学染色检测Caspase-3蛋白的表达,TUNEL法观察细胞凋亡,并通过基因组DNA电泳观察凋亡特征性“梯状“条带。结果:MTT法结果显示两种不同方法提取的黄酮类物质对HCT116细胞的增殖均有抑制作用,呈现时间和剂量依赖性,而热水浸提法和乙醇抽提法相比,后者提取的物质抑制作用优于前者,发挥作用的起始浓度也较低;基因组DNA琼脂糖凝胶电泳显示黄酮类物质作用于HCT116细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带;免疫细胞化学染色和TUNEL结果均表明在一定药物浓度作用后,细胞出现凋亡。结论:洋葱中的黄酮类物质对体外培养的人结肠癌HCT116细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导的作用,其中乙醇抽提法提取的黄酮类物质作用更强。     

洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影晌

目的:观察两种不同提法的洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用热水浸提法和乙醇抽提法从洋葱中提取黄酮类物质,MTT法测定其对人结肠癌细胞HCT116增殖的影响,免疫细胞化学染色检测Caspas-3蛋白的表达,TUNEL法观察细胞凋亡,并通过基因组DNA电泳观察凋亡特征性"梯状"条带.结果:MTT法结果显示两种不同方法提取的黄酮类物质对HCT116细胞的增殖均有抑制作用,呈现时间和剂量依赖性,而热水浸提法和乙醇抽提法相比,后者提取的物质抑制作用优于前者,发挥作用的起始浓度也较低;基因组DNA琼脂糖凝胶电泳显示黄酮炎物质作用于HCT116细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带;免疫细胞化学染色和TLINEL结果均表明在一定药物浓度作用后,细胞出现凋亡.结论:洋葱中的黄酮类物质对体外培养的人结肠癌HCT116细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导的作用,其中乙醇抽提法提取的黄酮类物质作用更强.     

洋葱提取物对人结肠癌细胞凋亡及周期的影响

目的研究洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株凋亡及细胞周期的影响。方法采用水提取和乙醇提取洋葱后,用紫外可见分光光度仪检测提取物中黄酮类化合物含量。体外培养结肠癌细胞株(LoVo cells、SW480 cells、HT-29 cells、HCT-8 cells),采用含黄酮类化合物浓度40 mg/L和60 mg/L的提取物对其进行干预,流式细胞仪检测洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株凋亡影响,检测含黄酮类化合物浓度为40 mg/L的水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞周期的影响。结果洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株的凋亡具有剂量依赖性,其中水提取物引起SW480、HCT-8细胞株凋亡率较乙醇提取物高。而乙醇提取物引起HT-29细胞株凋亡率较水提取物高。洋葱提取物能将结肠癌细胞株的细胞周期阻滞在G1期,阻碍其向S期转换,以抑制细胞增殖。结论洋葱水提取物和乙醇提取物能够诱导结肠癌细胞株的凋亡,并能够对结肠癌细胞周期产生影响,其具体机制需进一步探讨。     

菥蓂子乙醇提取物对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究菥蓂子乙醇提取物对H2O2诱导损伤的PC12细胞保护作用及其作用机制。方法:用H2O2作用PC12细胞建立氧化应激损伤模型,采用MTT法测定细胞活力,活性氧检测试剂盒(DCFH-DA)检测细胞内活性氧,线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:菥蓂子乙醇提取物能够保护H2O2诱导的PC12细胞活力损伤,抑制H2O2所致胞内ROS水平升高,抑制H2O2导致的线粒体膜电位下降,减少细胞凋亡的发生。结论:菥蓂子乙醇提取物能够抑制H2O2诱导PC12细胞氧化损伤,在神经细胞氧化损伤保护方面具有较好的应用价值。     

鱼腥草总黄酮对人肿瘤细胞的抗肿瘤活性作用

目的探究鱼腥草黄酮类提取物对人子宫颈癌细胞株SiHa增殖和凋亡的影响。方法①采用20倍60%乙醇进行回流提取,大孔树脂分离提取纯化鱼腥草中黄酮类化合物;②应用四甲基偶氮唑蓝法检测黄酮类化合物对SiHa的细胞抑制率;③采用流式细胞术检测其对SiHa细胞凋亡的影响。结果①鱼腥草黄酮提取物有抑制SiHa细胞生长的作用,半数抑制浓度值为0.825 g/L;②鱼腥草黄酮提取物能以浓度依赖性诱导SiHa细胞的凋亡。结论鱼腥草黄酮提取物能抑制SiHa肿瘤细胞生长,诱导凋亡的作用,为鱼腥草的抗子宫颈癌的药效学效应提供了实验依据。     

菟丝子黄酮类组分对H2O2损伤PC12细胞的保护作用

目的：探讨菟丝子中黄酮类组分（CF）对氧化损伤的肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞（Pheochromocytoma，PC12）的保护作用及其可能的作用机制。方法：从菟丝子中提取纯化黄酮类活性成分（CF），采用MTT法检测细胞活力，DPPH测定CF在无细胞体系中对自由基的清除能力，利用Hoechst 33258染色和流式细胞仪技术对凋亡细胞进行形态观测和比例测定。结果：0．3～0．5mmol／L H2O2能够剂量与时间依赖性降低PC12细胞的存活率，诱导细胞凋亡。不同剂量CF预处理可提高PC12细胞存活率，明显抑制细胞的凋亡，降低细胞的凋亡比率；CF对DPPH自由基的清除率呈剂量依赖性增强。结论：CF对氧化应激损伤PC12细胞具有保护作用，其机制可能是通过清除自由基、提高抗氧化酶活性从而抑制细胞的凋亡。     

洋葱黄酮类提取物对大鼠脑出血后血肿周围活化小胶质细胞及炎症因子的抑制作用

目的研究洋葱黄酮类提取物对不同时间点脑出血模型大鼠血肿周围活化小胶质细胞数量及脑组织促炎性因子释放的影响,探讨洋葱黄酮类提取物治疗脑出血的可能机制。方法 100只Wistar大鼠用于制备脑出血动物模型,造模成功90只。其中脑出血组(40只)、洋葱黄酮类提取物干预组(简称干预组,40只)和假手术组(10只)。造模过程中脑出血组和干预组均向大鼠定位部位注射自体血100μL,同时干预组予洋葱黄酮类提取物(0.2 m L/10 g体重,每日2次)灌胃给药;脑出血组和假手术组未进行药物干预。造模后各组再以6、24、48、72 h和7 d为时间点分5个亚组,干预组和脑出血组每个亚组8只,共10组,假手术组每个亚组2只,共5组。采用Garcia JH评分法观察大鼠不同时间点的神经功能;采用HE染色观察各时间点大鼠脑组织的损伤程度;采用免疫组织化学染色法观察不同时间点大鼠血肿周围活化的小胶质细胞;采用ELISA法检测不同时间点大鼠血肿脑组织促炎因子TNF-α与IL-1β表达。结果脑出血组注入自体血后,血肿周围出现变性坏死区,细胞排列不整齐,核形态不整,部分核皱缩、髓质均片状间质水肿,且随着时间推移,变性坏死区域扩大外,细胞周围出现空白区,细胞分布不均匀,神经元细胞数减少,同时有淋巴细胞及中性粒细胞浸润;洋葱黄酮类提取物干预后,对应时间点的细胞坏死,细胞排列及核形态明显减轻,炎性细胞浸润减少。与假手术组比较,脑出血组5个时间点行为学评分均降低,活化的小胶质细胞数目增多,血肿脑组织中TNF-α及IL-1β表达升高,差异均有统计学意义(P0.01)。与脑出血组比较,干预组大鼠出血后48、72 h和7 d时间点行为学评分升高,小胶质细胞的活化数目减少,TNF-α及IL-1β表达降低,差异均有统计学意义(P0.01)。结论采用乙醇回流法从洋葱中提取的黄酮类物质可能通过抑制脑出血后血肿周围小胶质细胞的活化及促炎因子的释放,而改善脑出血模型大鼠的症状。     

升清降糖合剂对H_2O_2诱导凋亡的胰岛β细胞周期和Caspase-3的影响

目的：探讨升清降糖合剂（以下简称SQ）对氧化损伤的胰岛β细胞凋亡的保护作用。方法：以H2O2诱导建立胰岛细胞凋亡模型,采用半仿生提取法提取复方有效成分,以10μg/ml作用于胰岛细胞凋亡模型,采用TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,分光光度法检测凋亡蛋白Caspase-3的活性。结果：H2O2可诱导胰岛β细胞凋亡,加用SQ后细胞凋亡现象明显下降。与正常组比较,模型组RINm5F细胞在G2/M期比例减少（P〈0.01）,保护组RINm5F细胞在G0/G1的比例减少（P〈0.05）,在G2/M期细胞比例上升（P〈0.01）。模型组RINm5F细胞Caspase-3活化增强,模型组原代胰岛细胞Caspase-3活化增强,保护组Caspase-3活性下降,与模型组比较,有统计学差异（P〈0.01）。结论：SQ对氧化损伤诱导的胰岛β细胞凋亡具有保护作用,其机制与调节胰岛β细胞的细胞周期和调节凋亡相关蛋白Caspase-3表达有关。     

鼠尾草酸稳定性及对H_2O_2损伤神经元的保护作用

目的:评价鼠尾草酸对H2O2损伤神经元的保护作用,并检测鼠尾草酸在不同保存条件下稳定性。方法:鼠尾草酸预处理体外培养C57小鼠胎鼠神经元,加入H2O2继续培养,神经元标志性抗体Tuj1染色,显微镜观察细胞状态并采用细胞活性(CCK-8)检测神经元的活性,生化法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量和丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测神经元凋亡相关基因Caspase-3 mRNA的表达。同时,HPLC测定0~120 h不同保存条件下鼠尾草酸含量。结果:与模型组比较,20、80μmol/L浓度鼠尾草酸预处理组细胞状态好于模型组,细胞活性增强,培养液中LDH的漏出量降低,细胞内MDA的生成减少,SOD活性增强,caspase-3 mRNA表达显著下调;不同保存条件下鼠尾草酸含量随时间延长呈递差性降低。结论:鼠尾草酸对H2O2所致神经元的损伤具有保护作用,但稳定性差。     

不同提取方法测定当归芍药散中芍药苷和阿魏酸含量的比较研究

目的:对不同提取方法所得的当归芍药散中芍药苷和阿魏酸成分含量进行比较研究。方法:采用RP-HPLC法,比较了水提法、水提醇沉法、乙醇回流法3种处理方法对芍药苷和阿魏酸含量的影响。结果:乙醇回流法﹥水提法﹥水提醇沉法。结论:3种提取法中,乙醇回流法提取当归芍药散中芍药苷和阿魏酸的含量为最高。     

不同提取方法对黄芪总皂苷含量的影响

目的：优选黄芪总皂苷的提取方法。方法：采用平行试验法,以黄芪甲苷为指标,测定用HPLC-ELSD法测试乙醇回流法和水提醇沉法提取的总皂苷中黄芪甲苷的含量。结果：乙醇回流法比水提醇沉法提取的总皂苷中黄芪甲苷含量高出约40%。结论：乙醇回流法较水提醇沉法提取率高,是黄芪总皂苷的最佳提取工艺。     

超声波提取大蒜总黄酮及鉴别

目的为充分利用大蒜植物资源,探讨大蒜总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从大蒜中提取黄酮类物质,对所提取的黄酮类物质进行验证,并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=3.833%,回收率为101.9%,其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程,无任何污染,是提取大蒜黄酮类物质的有效途径。     

基于去甲肾上腺素诱发原代培养心肌细胞损伤保护作用的太子参药效部位研究

目的:研究太子参对去甲肾上腺素(NE)诱发原代培养心肌细胞损伤保护作用的活性部位.方法:采用系统溶剂分离制备提取太子参石油醚,乙酸乙酯,正丁醇及水层部位.取1～3d的SD大鼠乳鼠制备原代培养心肌细胞,以1×105/mL的细胞密度接种于96孔培养板,以相当于生药0.1～0.25 g·mL-1的太子参不同提取部位作用于原代培养心肌细胞30 min后,以1 μmol· L- NE作用于心肌细胞24 h复制细胞损伤模型,MTT法分析不同提取部位太子参的保护作用.结果:正丁醇和水层提取部位对NE诱导原代培养心肌细胞损伤吸光度(A570)降低具有显著的提高作用;进一步分析提示0.1 g·mL-1和0.25 g·mL-1太子参25％乙醇洗脱正丁醇部位和多糖物质群对NE诱导心肌细胞A570的降低保护作用显著(与模型组比较,差异显著,P＜0.01,P＜0.05).结论:初步的活性筛选发现太子参的正丁醇部位和水层部位对NE诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,进一步的活性追踪确定正丁醇部位经25％乙醇洗脱物质群及水层中的粗多糖为太子参防治NE诱导的心肌细胞损伤的主要活性物质群.     

�๦�ܰ����Ա������֬������Ʊ�������Խ�����ϸ��������ЧӦ

??OBJECTIVE To develop a kind of multifunctional targeting epirubicin liposomes for the treatment of brain tumor, to characterize their physicochemical properties, and to observe their targeting effects on the brain microvascular endothelial cells(BMVECs)and on the brain glioma cells.METHODS The 2-amino-2-deoxy-??-D-glucopyranose(NH₂-Glu)was used as a targeting molecule and conjugated with a cholesterol-polyethylene glycol derivative (Chol-PEG₂₀₀₀-NHS) for obtaining the targeting functional material aimed at targeting to glucose transporter-1(Glut-1)on the BMVECs of blood-brain barrier and further targeting to the glioma cells. To prepare the multifunctional targeting epirubicin liposomes, the targeting functional material was modified onto the surface of liposomes, and epirubicin was loaded into the core of liposomes as the anticancer drug. The encapsulation efficiency, particle size, polydispersity indexes and Zeta potential of the liposomes were measured, their cellular uptakes were performed on the BMVECs and the glioma cells. The inhibitory effect was performed on the glioma cells. RESULTS The analysis by MALDI-TOF-MS demonstrated that the targeting functional material, Chol-PEG₂₀₀₀-Glu, was successfully synthesized. The multifunctional targeting epirubicin liposomes were prepared, and had an average particle size of approximately 125 nm, and were negatively charged. The encapsulation efficiency of epirubicin in the liposomes was about 93%. Results from flow cytometry indicated that the multifunctional targeting epirubicin liposomes had the highest cellular uptakes by BMVECs and by two kinds of brain glioma cells as compared with no-targeting epirubicin liposomes. The cytotoxic study showed that the multifunctional targeting epirubicin liposomes had the strongest inhibitory effect to brain glioma cells as compared with free epirubicin or no-targeting epirubicin liposomes. CONCLUSION A new targeting material (Chol-PEG₂₀₀₀-Glu) and the multifunctional targeting epirubicin liposomes are developed, and the multifunctional targeting epirubicin liposomes exhibit the potential fortransporting across the blood-brain barrier (BBB), and selectively inhibiting the brain glioma cells.
     

夏王散结胶囊提取工艺研究

目的:确定夏王散结胶囊的提取工艺,保证其安全性和有效性。方法:根据处方中各药味有效成分的性质,分别采用煎煮法提取和乙醇回流法提取。以有效成分提取量、乙醇可溶物的量和正丁醇可溶物的量为指标,用正交试验法考察、优选最佳提取工艺条件。结果:夏枯草、王不留行、浙贝母、山慈菇、柴胡用70%乙醇回流提取两次,分别加10倍量和8倍量溶剂,每次提取3 h;莪术、白术、香附提取挥发油后的药渣与牡蛎、昆布加水浸泡1 h,煎煮两次,分别加8倍量和6倍量水,每次2 h。结论:确定的提取工艺较好地提取了有效成分,可保证制剂的有效性和安全性。     

王不留行总皂苷提取工艺优选

目的：优选王不留行总皂苷的提取工艺。方法：以总皂苷质量分数和干粉得率为综合评价指标,采用正交试验考察料液比、乙醇体积分数、超声时间、超声功率对超声波提取工艺的影响,考察提取时间、乙醇体积分数、料液比和提取次数对乙醇回流提取工艺的影响。结果：最佳超声提取工艺为加15倍量70%乙醇在640 W功率下超声提取2次,每次40 min;干粉得率7.34%,总皂苷质量分数10.92%。最佳乙醇回流提取工艺为加14倍量60%乙醇在微沸状态下提取2次,每次2 h;干粉得率7.17%,总皂苷质量分数9.01%。结论：王不留行总皂苷超声波辅助法的提取效果优于乙醇回流法,且工艺稳定可靠。