骨髓间充质干细胞与血管内皮生长因子联合移植对大鼠创伤性脑损伤修复的研究

目的探讨联合移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)和血管内皮生长因子(VEGF)对创伤性脑损伤(TBI)大鼠脑组织中脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法 SD大鼠2只,取股骨骨髓体外培养BMSCs。SD大鼠40只,随机分为单独移植BMSCs组、单独应用VEGF组、联合移植BMSCs与VEGF组及对照组,每组10只。采用改良的Feeny自由落体撞击方法建造中度创伤性脑损伤模型。造模后1周,在立体定向仪下分别将等量BMSCs、VEGF、BMSCs加VEGF及PBS液注入相应大鼠的损伤脑组织周边。养育2周后处死取脑。采用HE及尼氏染色法观察脑组织病理学变化;采用免疫组化染色,应用Image pro-Plus6.0软件测量半暗带及健侧对称部位BDNF阳性表达区域的总和累积光密度,应用SPSS 11.3软件进行统计学分析。结果除BMSCs组外,其余各组对称部位BDNF含量均较半暗带高(P<0.05);联合移植组半暗带的BDNF含量明显高于对照组(P<0.05)。结论联合移植BMSCs与VEGF可有效抑制TBI大鼠半暗带中BDNF含量的降低,有利于神经功能的恢复。     

缬沙坦对自发性高血压大鼠心肌凋亡及bcl-2、bax蛋白的表达的影响

目的　探讨自发性高血压大鼠 (SHR) ,左心室肥厚过程中 ,心肌组织凋亡情况及凋亡调节蛋白bcl 2、bax表达的变化 ,AT1受体拮抗剂缬沙坦对心肌细胞凋亡的影响。方法　实验动物为 8周龄分为缬沙坦治疗组和非治疗组(SHR无药组 ) ,以Wistar鼠作为正常血压对照组 ,观察期限为 8周。采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)判定心肌细胞凋亡 ,并行免疫组化、Western印迹等方法检测实验动物心肌组织凋亡调节蛋白bcl- 2、bax的表达情况。结果　SHR心肌组织中存在细胞凋亡现象 ,并有bax高表达。缬沙坦治疗 8周后 ,SHR心肌组织bax蛋白表达显著降低至接近Wistar组。Bcl 2蛋白在SHR治疗组及Wistar组表达较SHR非治疗组有增高趋势 (P >0 0 5 )。前两组bax/bcl 2比值较后者显著降低 (P <0 0 5 )。结论　心肌细胞凋亡是代偿性心肌肥厚可能机制之一。高血压病早期缬沙坦在降压同时可有效抑制心肌细胞凋亡 ,具有积极的抗心室重建作用。     

缺血-再灌注诱导家兔房室结细胞凋亡的研究

为探讨缺血 再灌注对在体家兔房室结细胞凋亡的作用 ,以及凋亡相关调控基因蛋白 (Fas、bcl 2、bax)的表达 ,以家兔为实验对象 ,麻醉后开胸暴露心脏 ,结扎右冠状动脉 ,建立房室结缺血 再灌注模型。于预定时间处死动物 ,快速取出房室交界区组织 (3mm× 2mm× 1mm) ,10 %福尔马林磷酸盐缓冲液固定。采用TUNEL法检测房室结细胞凋亡 ;免疫组化法检测Fas、bcl 2、bax基因蛋白表达。结果 :①对照组及单纯缺血 10 ,30min组均未检测到细胞凋亡 ,缺血 6 0min组可见少量散在的凋亡细胞 ,缺血 12 0min房室结可见大量的细胞凋亡 ;②缺血 再灌注组 :不同缺血时间组均出现细胞凋亡 ,凋亡细胞数随缺血时间的延长而增加 (P <0 .0 5 ) ;③随缺血时间的延长 ,Fas、bax的表达明显增加 (P <0 .0 1) ,而bcl 2的表达则无明显增加 (P >0 .0 5 ) ;④缺血 再灌注组较相应时间单纯缺血组细胞凋亡数、Fas、bax表达均明显增加 (P <0 .0 1)。结论 :单纯缺血及缺血 再灌注均可诱导房室结细胞发生凋亡 ,这可能与该条件下Fas、bax基因蛋白的过量表达有关。     

温阳活血退黄方对阴黄证大鼠肝细胞凋亡及bcl-2和bax蛋白表达的影响

目的：观察温阳活血退黄方对阴黄证大鼠肝细胞凋亡，相关调控基因bcl—2、bax蛋白表达的影响。方法：72只大鼠随机分为6组：正常对照组，阴黄证模型组，阳黄对照组，阴黄证模型加温阳活血退黄方高、低剂量组，菌陈术附汤组。采用TUNEL和免疫组化法检测大鼠肝细胞凋亡和bcl—2、bax蛋白表达。结果：阴黄模型组大鼠肝细胞凋亡程度明显高于阳黄模型组及正常对照组(P＜0．01)，温阳活血退黄方高剂量组肝细胞凋亡程度明显低于阴黄模型组(P＜0．05)。温阳活血退黄方高、低剂量组肝组织bcl—2蛋白表达明显高于阴黄模型组(P＜0．0l，＜0．05)，且其bax蛋白表达明显低于阴黄模型组(P＜0．01，＜0．05)，体现较好量效关系。结论：温阳活血退黄方可能通过促进bcl—2蛋白表达抑制bax蛋白表达阻断阴黄证大鼠肝细胞凋亡，可能是其治疗阴黄证的机制之一。     

联合应用骨髓间质细胞与bcl-2基因治疗对局灶性脑缺血大鼠脑bFGF表达的影响

目的 探讨联合应用骨髓间质细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)与bcl-2基因治疗脑缺血的疗效,及其对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响.方法 40只Wistzx大鼠制作大脑中动脉闭塞模型,随机分为生理盐水对照组、bcl-2组、BMSC组和BMSC+bcl=2组,每组10只;每组再分为缺血再灌注后3 d和14 d亚组,每组5只.BMSC用溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine,BrdU)标记;实验大鼠行神经功能评分;脑内BMSC分布及数量、bFGF和Bcl-2蛋白表达采用免疫组化检测,凋亡细胞采用TUNEL染色检测.结果 BMSC+bcl-2组再灌注后3 d神经功能评分显著低于生理盐水对照组(P<0.05),14 d评分显著低于其余3组(P均<0.05).BMSC+bcl-2组和BMSC组梗死半球侧可见大量BrdU阳性BMSC细胞,BMSC+bcl-2组再灌注后3 d、14 d BrdU阳性细胞数均显著多于BMSC组(P均<0.05).BMSC+bcl-2组再灌注后3 d、14 d梗死侧Bcl-2蛋白表达水平显著高于其余3组(P均<0.05).BMSC+bcl-2组bFGF表达水平在各时间点均较其余3组显著增加(P均<0.05).BMSC+bcl-2组各时间点脑内凋亡细胞数量均较其余3组显著减少(P均<0.05).结论 BMSC与bcl-2基因均有治疗脑缺血作用,二者联合应用的效果显著优于二者单独应用,可显著改善大鼠神经功能,提高bFGF表达,其机制可能是bcl-2基因在脑内抗凋亡的同时,也抑制了BMSC凋亡.     

健脾理气方对小鼠HAC肝癌细胞凋亡和bax基因蛋白表达影响的实验研究

目的探讨健脾理气方对HAC肝癌细胞凋亡及bax基因蛋白表达的影响.方法建立小鼠HAC肝癌荷瘤模型,随机分3组,称瘤重,计算抑瘤率.用TUNEL法和电镜检测肿瘤细胞凋亡,用免疫组化法检测bax基因蛋白表达水平.结果中药组和化疗组瘤重均低于对照组(P＜0.01),抑瘤率分别为41.6%和43.0%.其凋亡指数较对照组明显升高(P＜0.01).电镜检测发现凋亡细胞发生特征性形态学改变.对照组bax基因蛋白无强阳性表达,中药组和化疗组均强阳性.结论健脾理气方能诱导HAC肝癌细胞凋亡并上调肿瘤细胞bax基因蛋白表达,可能是该方抗癌机制之一.     

自身免疫性甲状腺疾病甲状腺组织中bcl-2家族蛋白的表达

目的研究凋亡相关基因bcl鄄2家族蛋白bcl鄄2、mcl鄄1、bcl鄄XL和bax在自身免疫性甲状腺疾病(AITD)甲状腺组织中的表达特征及与AITD发病机制之间的内在联系。方法以甲状腺腺瘤旁正常甲状腺组织为对照(C组,20例),采用免疫组织化学ElivisionTM二步染色法检测凋亡相关蛋白bcl鄄2、mcl鄄1、bcl鄄XL和bax在桥本甲状腺炎(HT组,33例)和Graves病(GD组,28例)患者甲状腺组织中的表达与分布。结果bcl鄄2蛋白表达强度GD组>C组>HT组(P<0.01);mcl鄄1蛋白表达强度GD组>C组>HT组(P<0.01);bcl鄄XL蛋白表达强度HT组和GD组强于C组(P<0.01),但HT组和GD组间差异无统计学意义(P>0.05);bax蛋白的表达强度HT组>GD组和C组(P<0.01),但GD组和C组间差异无统计学意义(P>0.05);HT组中,在淋巴细胞浸润区域附近的甲状腺滤泡上皮细胞(TEC)bcl鄄2表达弱,bax和mcl鄄1表达强;远离淋巴细胞浸润区域的TECbcl鄄2表达强,bax和mcl鄄1表达弱(P<0.05)。结论(1)抗凋亡bcl鄄2和mcl鄄1蛋白在HT中表达的减弱以及在GD中表达的增强对于HT甲状腺滤泡细胞凋亡的增加和GD甲状腺滤泡细胞的增殖可能起一定作用;(2)bax蛋白在HT中表达增强所起的促凋亡的作用对疾病的发生发展起一定作用;(3)bcl鄄2与bax表达强度的比值对于凋亡的调控起重要作用;(4)bcl鄄2家族蛋白bc     

骨髓间充质干细胞体外对H_2O_2损伤大鼠心肌细胞的保护

目的:观察骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSC)对过氧化氢(H2O2)诱导乳鼠心肌细胞凋亡蛋白Bcl-2家族的影响。方法:培养新生大鼠的心肌细胞,分为3组,即对照组、模型组和BMSC处理组。用Transwell小室建立心肌细胞与BMSC共培养体系,分别于培养12、24和48h,采用MTT比色法检测单孔细胞的存活率;用Western blot法检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:模型组细胞和BMSC处理组细胞在H2O2的诱导下出现细胞凋亡。造模12h后,模型组细胞的存活率明显低于对照组(P0.05);BMSC处理组细胞的存活率与模型组相比无明显差异。造模24h和48h后,BMSC处理组细胞的存活率与模型组差异明显(P0.05)。造模12h后,Bax和Bcl-2蛋白的表达无明显变化。造模24h后,BMSC处理组细胞中Bax蛋白的表达明显低于模型组(P0.05),Bcl-2蛋白的表达虽有变化,但无统计学意义。结论:BMSC可调控心肌细胞线粒体凋亡途径,减轻氧自由基对心肌细胞的损伤,其抑制凋亡的作用可能是通过下调Bax蛋白的表达而实现的。     

~(125)Ⅰ粒子植入联合内皮抑素对A549肺腺癌裸鼠移植瘤生长抑制作用

目的研究放射性125I粒子植入联合重组人血管内皮抑素(Endostatin,ES)对A549肺腺癌移植瘤生长的抑制作用。方法建立移植瘤模型,24只裸鼠随机分成治疗组:单纯粒子内照射组,单纯内皮抑素组,内照射+内皮抑素联合组和空白对照组。治疗结束,免疫组化检测微血管内皮CD31及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,蛋白免疫印迹方法测定VEGF的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果治疗15天后,内皮抑素组、125Ⅰ粒子组及联合治疗组瘤体积抑制率依次为69.65%、92.64%、116.4%;联合治疗组MVD较粒子组下降明显(P0.05);联合治疗组的细胞凋亡明显增多;内皮抑素对VEGF表达的影响无显著差异(P0.05)。结论 125Ⅰ粒子植入近距离放疗联合内皮抑素能较早抑制A549移植瘤的生长,通过减少放射治疗后肿瘤血管的再生及增加细胞的凋亡起到抑瘤作用。     

曲美他嗪与雷米普利对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及bax、bcl-2蛋白表达的影响

目的观察曲美他嗪与雷米普利单用及联合用药对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌细胞凋亡程度及凋亡相关蛋白bax、bcl-2蛋白表达的影响。方法雄性Wistar大鼠50只,随机分为模型组、曲美他嗪组、雷米普利组、联合用药组,用腹主动脉缩窄法复制CHF模型,另取假手术组作为对照,每组10只大鼠。观察和比较各组大鼠左心室重量指数(LVMI)及心功能,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡指数,SP免疫组化法检测各组大鼠bax、bcl-2蛋白的表达情况,用RT-PCR法测定各组大鼠bax mRNA及bcl-2 mRNA的表达水平。结果与模型组比较,药物干预组大鼠心功能明显改善,凋亡指数明显降低,bcl-2阳性表达及其mRNA水平显著升高,bax阳性表达及其mRNA水平显著降低,其中以联合用药组变化最显著。结论曲美他嗪与雷米普利单用及联合应用均可有效改善心功能、抑制细胞凋亡、延缓CHF,联合用药在抗心肌细胞凋亡方面的疗效优于单独用药。     

苦参素注射液联合顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响

目的探讨苦参素注射液(MI)联合顺铂(DDP)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响。方法分别采用MI、顺铂及MI联合顺铂干预SMMC-7721细胞。TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR法检测c-myc、bcl-2和bax mRNA表达,二步法免疫组化检测c-myc、bcl-2和bax蛋白表达。结果苦参素组、顺铂组和联合用药组细胞凋亡率显著上升,与对照组(不干预)比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),联合用药具有单纯相加或协同作用;联合用药组的细胞凋亡率显著增加,bax mRNA和蛋白表达显著升高,c-myc、bcl-2 mRNA和蛋白表达显著减少,与DDP单药组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论苦参素注射液联合顺铂具有单纯相加或协同诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡作用,其机制可能与bax基因表达上调和c-myc、bcl-2基因表达下调有关。     

索拉非尼联合奥曲肽对HepG2细胞的抑制作用

目的 观察索拉非尼联合奥曲肽在体外对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用,并探讨其机制. 方法 采用不同浓度梯度的索拉非尼、奥曲肽单独和联合作用于人肝癌细胞株HepG2,分别于24、48、72 h用CCK-8试剂盒测定各组细胞的杀伤效应,流式细胞术检测HepG2细胞的凋亡率,荧光显微镜观察细胞的凋亡情况;并用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中血管内皮生长因子(VEGF)的水平,Western blot法测定细胞中髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、细胞外信号调节激酶(ERK) 1/2、磷酸化ERK1/2的表达.数据采用均数±标准差((x)±s)表示,用SPSS17.0软件对数据进行单因素方差分析. 结果 索拉非尼、奥曲肽单独使用和联合使用均对HepG2细胞具有抑制作用,并诱导其凋亡,联合用药组抑制效果优于单独用药组F=200.398,(P＜0.05).荧光显微镜观察显示,联合用药组和单独用药组细胞膜上均出现代表细胞早期凋亡的标志物磷脂酰丝氨酸.联合用药组VEGF表达水平为(10.31±4.69) pg/ml,低于索拉非尼组[(22.73±5.88)pg/ml]、奥曲肽组[(25.46±3.45) pg/ml]及正常对照组[(57.15±6.32) pg/ml],F=1019.725,P值均＜0.05.Western blot 法结果显示,各组ERK1/2表达水平差异并无统计学意义(P＞0.05);与正常对照相组比,索拉非尼、奥曲肽及联合用药组的磷酸化ERK1/2表达均减少(F=2.401,P＜0.05),联合用药组表达水平低于单独用药组(P值均＜0.05);奥曲肽组Mcl-1的表达水平与对照组差异无统计学意义,索拉非尼组和联合用药组的表达水平低于正常对照组(P值均＜ 0.05),联合用药组的Mcl-1表达水平低于各单独用药组(P值均＜ 0.05).结论 索拉非尼、奥曲肽均可抑制人肝癌细胞HepG2增殖,并诱导其凋亡,联合应用效果更为显著;其机制可能与二者协同抑制VEGF的表达,并下调抗凋亡蛋白Mcl-1及磷酸化ERK1/2的表达有关.     

同种异体骨髓源干细胞蛛网膜下腔移植联合中药治疗对缺血性脑卒中大鼠脑脊液中VEGF含量的影响

目的研究和比较中药联合蛛网膜下腔移植骨髓单个核细胞(BMNC)或骨髓间充质干细胞(BMSC),对缺血再灌大鼠脑脊液(CSF)中血管内皮生长因子(VEGF)含量的影响。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌2 h模型(MCAO),24 h后通过蛛网膜下腔注射法移植密度梯度法分离纯化的BMSCs和BMNCs,同时进行中药灌胃,应用定量ELISA法于联合治疗后4 d(早期)、28 d(后期)检测脑脊液内VEGF含量。结果各治疗组在治疗4 d2、8 d时CSF中VEGF含量均较模型组升高,BMNC组28 d时水平高于BMSC组,且水平较4 d无明显回落。中药联合BMNC组和中药联合BMSC组在治疗4 d2、8 d时均较单纯细胞移植组含量增高,两组间差异无统计学意义。结论 BMSC和BMNC经蛛网膜下腔移植可在治疗早期和后期明显提高MCAO大鼠CSF中VEGF含量,BMNC移植在治疗后期更显优势,中药联合BMNC或BMSC移植治疗可使CSF中VEGF水平更高,效果持久,具有明显的协同作用。     

缬沙坦对自发性高血压大鼠心肌凋亡及bcl-2、bax蛋白的表达的影响

目的探讨自发性高血压大鼠(SHR),左心室肥厚过程中,心肌组织凋亡情况及凋亡调节蛋白bcl-2、bax表达的变化,AT1受体拮抗剂缬沙坦对心肌细胞凋亡的影响.方法实验动物为8周龄分为缬沙坦治疗组和非治疗组(SHR无药组),以Wistar鼠作为正常血压对照组,观察期限为8周.采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)判定心肌细胞凋亡,并行免疫组化、Western印迹等方法检测实验动物心肌组织凋亡调节蛋白bcl-2、bax的表达情况.结果 SHR心肌组织中存在细胞凋亡现象,并有bax高表达.缬沙坦治疗8周后,SHR心肌组织bax蛋白表达显著降低至接近Wistar组.Bcl-2蛋白在SHR治疗组及Wistar组表达较SHR非治疗组有增高趋势(P>0.05).前两组bax/bcl-2比值较后者显著降低(P<0.05).结论心肌细胞凋亡是代偿性心肌肥厚可能机制之一.高血压病早期缬沙坦在降压同时可有效抑制心肌细胞凋亡,具有积极的抗心室重建作用.     

静脉注射人脐血间充质干细胞对大鼠脑损伤细胞凋亡的影响

目的观察脑损伤后静脉注射人脐血间充质干细胞(HUCBMSC)对大鼠脑损伤细胞凋亡的影响,探讨其脑保护的作用机制。方法清洁级健康雄性SD大鼠90只,随机分为假伤组、损伤组和注射HUCBMSC治疗组(治疗组)。每组30只。每组按时间再分为注射后3、7、14、21和28d,每个时间点6只。采用改进的Feeney自由落体法制作大鼠创伤性脑损伤模型。治疗组尾静脉注入3×106个HUCBMSC,损伤组及假伤组注入等体积的PBS液。在不同时间点,采用HE染色、免疫组织化学法、原位杂交法对大鼠脑组织形态学变化、5-溴脱氧尿核苷标记、细胞凋亡情况进行检测。结果假伤组细胞凋亡呈弱阳性表达。与假伤组比较,损伤组在相同时间点脑组织凋亡细胞明显增多,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与损伤组比较,治疗组在相同时间点脑组织凋亡细胞明显减少,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论在创伤性脑损伤中,静脉注射HUCBMSC可以减少损伤局部细胞凋亡,改善局部微环境,促进神经元的修复。     

压力超负荷下bcl-2、bax蛋白对兔左室细胞凋亡的影响

目的探讨压力超负荷时兔左室心肌细胞bcl-2和bax蛋白表达对兔左室心肌细胞凋亡的影响.方法采取末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP-生物素平移末端标记(TUNEL)技术和链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组化方法,观察持续压力超负荷下兔左室心肌细胞凋亡的动态变化及bcl-2和bax蛋白的表达.结果对照组出现极少量凋亡细胞,表达少量bcl-2蛋白,不表达bax蛋白.术后凋亡阳性心肌细胞数和bcl-2蛋白阳性表达心肌细胞数迅速增加,两者在心衰组最高.凋亡阳性心肌细胞数在术后第3天多于术后第7天.左室心肌细胞仅在术后第1天组和心衰组表达bax蛋白. 结论在持续压力超负荷所致心力衰竭的全过程, bcl-2蛋白都参与了抑制心肌细胞凋亡的调节, bax蛋白可能只参与了心肌细胞凋亡的启动.     

小儿急性白血病bcl—2、bax蛋白的表达及临床意义

目的：检测小儿急性白血病bcl-2、bax蛋白的表达，探讨其与临床诊治、预后的关系及两基因间的相互作用。方法：采用免疫细胞化学技术分析患儿骨髓单个核细胞bcl-2、bax蛋白的表达。结果：初治组bcl-2蛋白表达较CR一和正常组显著增高；bax表达显著降低；bcl－2表达与影响预后因素间无显著相关。结论：bcl-2抑调亡作用增强和bax促凋亡作用减弱在小儿白血病的发生发展中具有重要作用，bcl－2表达可能与疗有关，bcl-2、bax共同调控白血病细胞凋亡。     

Klotho基因转染骨髓间充质干细胞移植对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的观察Klotho基因(抗衰老基因)修饰的骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法分离、培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞。慢病毒介导Klotho转染至BMSC中,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测BMSC中Klotho mRNA的表达。制备大鼠慢性心力衰竭模型,随机分为正常对照组、模型对照组、增强型绿色荧光蛋白-BMSC组(EGFP-BMSC组)、EGFP-Klotho-BMSC组。细胞移植28天后多普勒超声检测心功能,荧光显微镜观察细胞存活及分布,HE染色观察心肌组织病理变化。Masson染色检测心肌胶原沉积含量和心肌纤维化程度。结果 Klotho转染BMSC后,BMSC中Klotho mRNA表达明显增多(P0.05)。移植28天后超声心动图结果显示,与EGFP-BMSC组及模型对照组比较,EGFP-Klotho-BMSC组左心室射血分数(LVEF)提高(P0.05)。EGFP-BMSC组及EGFP-Klotho-BMSC组心肌纤维化程度较模型对照组减轻(P0.05),EGFP-KlothoBMSC组较EGFP-BMSC组心肌纤维化改善更为明显(P0.05)。结论 Klotho基因联合BMSC治疗可进一步抑制心肌纤维化,减少心肌间质胶原沉积,改善心功能。     

黄芪皂甙Ⅳ联合BMSCs移植对大鼠脑缺血再灌注海马神经细胞凋亡及Livin、Caspase-9蛋白的影响

目的 探讨黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对缺血再灌注大鼠海马Livin、Caspase-9蛋白及神经细胞凋亡表达的影响.方法 实验动物随机分为假手术组、模型组、BMSCs组、联合组.采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,假手术组不予处理.BMSCs组于造模后3 h移植BMSCs.联合组既移植BMSCs,又给予黄芪皂甙Ⅳ治疗.观察缺血72 h后,各组神经功能评分,PKH-26标记的移植BMSCs分布,采用Western blot和免疫组化方法检测大鼠海马Livin、Caspase-9蛋白的表达,TUNEL方法检测细胞凋亡指数.结果 PKH-26标记的BMSCs在海马有表达.各组中联合组神经功能恢复最为明显(P<0.05).与模型组比较,联合组和BMSCs组均可上调Livin蛋白表达(P<0.05),下调Caspase-9蛋白表达(P<0.05),降低神经元细胞凋亡指教(P<0.05),以联合组作用更为显著(P<0.05).结论 黄芪皂甙Ⅳ联合BMsCs移植对脑缺血再灌注神经元细胞凋亡有协同抑制作用,其作用机制可能与黄芪皂甙Ⅳ促进BMSCs上调Livin蛋白表达,下调Caspase-9蛋白表达,抑制细胞凋亡有关.     

兔甲亢性心肌病不同左室构型心肌细胞的凋亡

目的:观察兔甲亢性心肌病不同左室构型心肌细胞的凋亡情况及相关bcl 2、bax蛋白表达的变化。方法: 将30只新西兰纯种白兔分为实验组(n=20)和对照组(n=10),实验组兔每日腹腔注射左旋甲状腺素(45 μg/kg体质量)共4周建立甲亢动物模型,对照组兔每日腹腔注射同等剂量的生理盐水共4周。4周后,对两组兔行常规超声心动图参数测定。实验组依据超声参数又分为向心性肥厚亚组(CH亚组)和离心性肥厚亚组(EH亚组)。第4周末处死所有兔,取心肌组织,在透射电镜下观察心肌细胞,应用原位末端标记法标记凋亡的心肌细胞,应用免疫组织化学染色法检测bcl 2、bax蛋白的表达。结果: ①透射电镜观察CH亚组和EH亚组均有大量的凋亡细胞,且凋亡指数(AI)显著高于对照组(均P<001),EH亚组的AI又显著高于CH亚组(P<001)。②CH亚组和EH亚组bcl 2蛋白的表达显著低于对照组(均P<001),EH亚组又显著低于CH亚组(P<001);CH亚组和EH亚组bax蛋白的表达显著高于对照组(均P<001),EH亚组又显著高于CH亚组(P<001)。CH亚组和EH亚组bcl 2/bax的比值显著低于对照组(均P<001)。结论: 兔甲亢性心肌病不同左室构型具有不同程度的心肌细胞凋亡,说明细胞凋亡机制参与了该病的病理过程,其作用与下调bcl 2蛋白的表达、上调bax蛋白的表达有关。