冠心病患者外周血内皮祖细胞数量及生物学功能与肝细胞生长因子的关系

目的观察冠心病患者外周血内皮祖细胞（EPCs）数量及生物学功能的变化,进一步探讨肝细胞生长因子（HGF）对其影响,为临床应用HGF提供理论依据。方法收集50例非冠心病患者（对照组）、50例冠心病患者（冠心病组;每例分为HGF干预组和非HGF干预组）外周血,应用流式细胞仪和ELISA法分别检测各组CD133＋／CD34＋细胞的数量和HGF水平;采用密度梯度离心法分离培养各组外周血中EPCs,通过MTT法、Transwell迁移试验、黏附能力测定试验及PI—AnnexinV双重染色法来分别检测EPCs的增殖、迁移、黏附能力和凋亡水平。结果与对照组比较,冠心病组外周血中CD133＋／CD34＋细胞数量减少[（2．15±0．69）％1）S（5．26±1．16）％,P〈0．011,血浆中HGF浓度升高[（6．80±1．22）w（2．62±0．83）gg／L,P〈0．01],EPCs增殖、迁移、黏附等生物学功能减弱（P〈0．05）;HGF干预组EPCs增殖、迁移、黏附等生物学功能显著改善（P〈0．05）。各组细胞凋亡水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论外周血中CD133＋／CD34＋细胞数量和血浆中HGF水平的变化可能成为冠心病患者新的危险评估因素。     

PCI患者术后24 h内外周血CD34＋细胞、内皮细胞数量的变化

目的 观察不稳定型心绞痛患者接受经皮冠状动脉介入治疗术（PCI）后24h内不同时间点外周血中CD34＋细胞、内皮祖细胞（EPCs）细胞数量的变化.方法 选择不稳定型心绞痛患者20例,采用流式细胞术双色分析法分别检测PCI术前及术后（从第1次球囊扩张开始计时）1、3、5、7、24h外周血中CD34＋细胞、CD34＋/KDR＋细胞数量,EPCs以CD34＋/KDR＋双标记阳性确定.结果 与PCI术前比较,CD34＋细胞在术后7h明显增加（P＜0.05）,术后24h显著增加（P ＜0.01）;EPCs在术后24h明显增加（P＜0.05）.结论 球囊扩张及雷帕霉素洗脱支架植入过程中,短暂的心肌缺血和血管内皮的局部损伤促进了骨髓CD34＋细胞、EPCs的早期动员、归巢,CD34＋细胞、EPCs均参与了损伤血管内皮的早期修复过程.     

罗格列酮钠对中年男性糖尿病患者外周血内皮祖细胞的影响

目的观察罗格列酮钠对中年男性糖尿病患者血管内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的影响。方法本实验纳入血糖控制良好（HbA1c〈7%）的30例中年男性糖尿病患者。体内实验：将上述患者随机分成罗格列酮钠组和常规治疗组。所有患者在用药前后均采集空腹静脉血,分离并培养EPCs,采用流式技术、免疫荧光双染法、MTT比色法、30 min贴壁方法、改良型Boyden小室法对EPCs进行计数、鉴定、增殖、黏附和迁移等功能检测。体外实验：随机抽取上述患者20例,提取其空腹静脉血单个核细胞,培养6 d后收集贴壁细胞,将收集到的每份贴壁细胞各分成药物干预组和对照组,用上述方法观察体外药物干预对EPCs数量和功能的影响。结果罗格列酮钠组用药后较用药前,CD3＋4/CD1＋33、vWF＋细胞数量增加,细胞增殖、黏附、迁移功能增强（P〈0.05或〈0.01）;较常规治疗组用药后,CD3＋4/CD1＋33、CD1＋33/KDR＋、vWF＋细胞数量增加,增殖、黏附、迁移功能增强（P〈0.01）。药物干预组EPCs增殖、黏附、迁移功能较对照组增强（P〈0.01）。结论罗格列酮能增加糖尿病患者EPCs数量,并能改善其增殖、黏附和迁移功能,且此作用独立于降糖、降压作用之外。     

2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞数量和功能的变化

目的观察2型糖尿病（DM）患者外周血内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的改变。方法选择2型DM患者16例和对照组19例，密度梯度离心法收集外周血单个核细胞（MNCs），诱导分化培养7d后，荧光染色和流式细胞术分别鉴定贴壁细胞为EPCs。采用二苯基四氮唑嗅盐（MTT）比色法、黏附能力测定实验和体外血管生成实验检测EPCs的增殖能力、黏附能力和体外血管生成能力。结果2型DM患者外周血EPCs数量明显减少[（3．1±1．2）×10^5]：[（3．9±1．1）×10^5]，P〈0．05。且2型DM患者外周血EPCs黏附能力[（50±15）：（60±11）细膨×200视野，P〈0．05]，增殖能力[（0．170±0．056）：（0．225±0．071）OD值，P〈0．05]，体外血管生成能力均明显受损。结论2型DM患者外周血EPCs的数量减少，且其增殖、黏附和血管生成能力受损。     

利用内皮祖细胞制备组织工程血管的实验研究

目的:观察内皮祖细胞（endothelial progen itor cells,EPCs）在去细胞血管段上的再内皮化效果,探讨其组织工程学应用前景。方法:采用贴壁选择法培养人外周血EPCs,VEGF扩增分化,流式细胞仪分析培养细胞CD34、VE-Cadherin的表达,D iI-ac-LDL吞噬试验、Ⅷ因子相关抗原免疫组化及细胞形态观察证实培养细胞的内皮属性。采用球囊损伤法制备去内膜兔腹主动脉段,去内皮兔腹主动脉段体外培养3周使之去细胞,与人外周血EPCs共孵育制备再内皮化异种去细胞血管段。结果:体外成功培养出人外周血内皮祖细胞,EPCs与去细胞血管段共培育使之再内皮化,形成新内膜。结论:体外培养EPCs可制备再内皮化的异种去细胞血管段,提供了一种制备组织工程血管的新方法。     

老年稳定型心绞痛患者外周血中内皮祖细胞变化及其影响因素

目的观察老年稳定型心绞痛（SA）患者外周血中内皮祖细胞（EPCs）数量及功能的变化,初步探讨心血管危险因素对其影响。方法选择老年SA患者和年龄匹配的对照者各20例,用密度梯度离心法从外周血中分离单个核细胞,用流式细胞仪测量外周血中CD＋细胞以鉴定EPCs,并进一步用倒置荧光显微镜鉴定FITC标记荆豆凝集素Ⅰ（FITC—UEA—Ⅰ）和DiⅠ标记的乙酰化低密度脂蛋白（DiLDL）双染色阳性细胞为正在分化的EPCs。采用黏附能力测定试验、改良Boyden小室和体外血管生成试剂盒分别观察EPCs的黏附能力、迁移能力和体外生成血管能力。结果老年SA患者外周血中EPCs数量明显低于对照组,其黏附能力、迁移能力和体外生成血管能力也明显受损。SA组患者EPCs数量与收缩压、空腹血糖水平呈负相关。结论老年SA患者外周血中EPCs数量降低且功能减退,其数量降低与高血压、糖尿病有关。     

颈动脉硬化病人内皮祖细胞增殖和分化能力改变及其临床意义

目的观察颈动脉硬化病人外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖和分化能力的改变,探讨其在颈动脉硬化发生发展中的意义。方法选择颈动脉硬化病人和同年龄组正常人各20例,密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,接种在培养板内,培养7d后对贴壁细胞进行鉴定,激光共聚焦显微镜鉴定FITC标记荆豆凝血素-Ⅰ(FITC-UEA-I)和DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)双染色阳性细胞为正在分化的EPCs细胞。四氮唑溴盐比色法(MTT)测定EPCs的增殖能力,流式细胞仪检测细胞表面CD14 ,CD64 和vWF ,测定EPCs向内皮分化能力。结果颈动脉硬化病人外周血EPCs增殖能力较正常对照组显著降低(P<0.05);与正常对照组比较颈动脉硬化组EPCs早期标志物CD14 和CD64 百分比明显升高(P<0.05),而内皮细胞分化的特异性标志物vWF 显著降低(P<0.05)。结论动脉硬化组较正常组外周血EPCs增殖能力和分化为内皮细胞的能力明显减退,血管的再内皮化的过程受损,促进颈动脉硬化的发生发展。     

通心络和他汀类药物对人内皮祖细胞数量与功能的影响

目的：观察中药通心络和他汀类药物对外周血内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的影响。方法：采用密度梯度离心法分离培养人外周血EPCs,经FITC—UEA—I和Dil-acLDL双染色鉴定后,并进一步通过流式细胞仪检测其表面标志CD34、CD133．将贴壁细胞随机分为：对照组、阿托伐他汀组（终浓度10μmol／L）、通心络组（终浓度0、50、100、200、500、750和1000μg／m1）,作用不同时间（0、12、24、48、60和72h）后,检测细胞形态及计数,再采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）、Transwell小室、黏附功能检测评价其增殖、迁移和黏附能力。结果：不同浓度通心络组、阿托伐他汀组均能较对照组明显提高EPCs数量,显著改善其增殖、迁移、黏附能力,通心络在500μg／ml时对细胞数量及功能改善最为显著。采用500μg／ml的通心络进行时效作用的研究,各组呈时间依赖性增强,EPCs的数量和功能在72h达到高峰。结论：通心络和阿托伐他汀均能在体外提高内皮祖细胞的数量及功能。     

原发性肝细胞癌患者CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的频率、表型及功能

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）在HCC患者外周血及肿瘤组织中的频率、抑制功能及临床意义。方法收集18例原发性HCC患者的PBMC、肝癌组织及相应的癌旁组织标本,以及10例CHB患者和15名健康对照的外周血标本,以三色与四色流式分析法分析PBMC以及肿瘤浸润的淋巴细胞中CD4^＋CD25^＋Treg的频率及表型,并同时分析其与HBV持续感染、肿瘤TNM分期和其他临床指标的关系,用BrdU掺入法评价CD4^＋CD25^＋Treg的免疫抑制功能。结果与健康对照组相比HCC患者、慢性HBV感染者外周血中CD4^＋CD25^＋Treg频率明显上升（P＜0．01）,且HCC患者肿瘤浸润的淋巴细胞中CD4^＋CD25^＋Treg的频率也明显上调（P＜0．01）;随着肿瘤的进展HCC患者外周血中CD4^＋CD25^＋Treg呈上升趋势（P＜0．05）; HCC患者CD4^＋CD25^＋Treg可非特异性地抑制自身活化的CD4^＋CD25^- T淋巴细胞,并呈剂量依赖性,且抑制能力与健康对照组相比差异无统计学意义。结论HCC患者外周血中及肿瘤组织中CD4^＋CD25^＋Treg的频率升高,增多的CD4^＋CD25^＋Treg可能参与抑制抗HCC的免疫应答,从而使肝癌细胞逃脱机体的“免疫监视”作用。     

内皮祖细胞及造血祖细胞在心血管疾病中的意义及研究进展

1 关于内皮祖细胞在心血管疾病中的研究 1.1 内皮祖细胞定义、表型特征及来源 内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是一类具有特异性归巢于损伤区域并能分化增殖为成熟内皮细胞的一群干细胞.研究表明,EPCs可能来源于骨髓,在脐带血和外周血中也有存在.EPCs的表面标志尚未明确,一般认为CD34+KDR+细胞代表EPCs,而CD34(-)CD133(+)KDR(+)细胞代表更早期循环EPCs,具有更强的参与血管新生能力.1997年,Asahara等[1]首次在中分离出CD34+及ilk-l-的单个核细胞,研究证明这些细胞在体外能够参与成年动物血管的形成,具有EPCs的功能.此后,Shi等[2]也在人的骨髓、脐带血、10 ～ 15 w胎肝及外周血中分离了较高纯度的CD34(+)细胞.随后的一些研究中研究者又从异基因骨髓移植手术后的受者外周血中分离出单个核细胞,处理后观察发现具有内皮细胞特征的梭形细胞.种种实验研究表明,EPCs来源于骨髓、脐带血及外周血液等.     

急性冠脉综合征患者内皮祖细胞及C反应蛋白的变化

目的:观察急性冠脉综合征(ACS)患者外周血中内皮祖细胞(EPCs)及C反应蛋白的变化。方法:入选40例ACS(不稳定型心绞痛18例、急性心肌梗死22例)患者与20例行冠状动脉造影术排除冠心病的正常人(正常对照组),取所有研究对象外周血100μl分别加入CD34-PE、AC133-异硫氰酸荧光素(FITC)荧光抗体使与EPCs表面CD34、AC133抗原结合,通过流式细胞仪检测PE、FITC阳性细胞的数量。同时检测高敏C反应蛋白(hsCRP)浓度。结果:与正常对照组比较,不稳定型心绞痛、急性心肌梗死患者外周血中EPCs数量显著增多[(0.48±0.04)%比(0.84±0.31)%比(1.57±0.62)%,P<0.001],hsCRP浓度明显升高[(0.63±011)mg/L比(7.8±0.59)mg/L比(11.2±0.46)mg/L,P<0.001],且上述指标在急性心肌梗死组明显高于不稳定心绞痛组(P<0.001),所有患者外周血中EPCs数量与hsCRP浓度正相关(r=0.82,P<0.001)。结论:急性冠脉综合征患者外周血中内皮祖细胞数量显著增多,可能与炎症因子激活骨髓干细胞分化为内皮祖细胞,参与血管修复有关。     

通心络体外促进人外周血内皮祖细胞的增殖、迁移、黏附的研究

目的：研究中药通心络对体外培养的人外周血内皮祖细胞（EPCs）增殖、迁移、黏附的影响。方法：采用密度梯度离心法分离培养人外周血单个核细胞,经FITC—UEA—I和Dil—acLDL双染色鉴定为正在分化的EPCs。进一步采用流式细胞仪检测其表面标志CD34、CD133,采用MTT比色法、transwell小室、细胞计数法分别观察50、100、200、500、750和1000μg／ml通心络超微粉溶液和500μg／ml通心络超微粉溶液作用0、6、12、24和36h后,对EPCs增殖、迁移、黏附的影响。结果：不同水平的通心络均改善了EPCs的增殖、迁移、黏附的功能,且在500μg／ml时作用最为显著。采用500μg／ml的通心络进行时效作用的研究显示,通心络呈时间依赖性地增强EPCs增殖、迁移、黏附能力,在36h达到高峰（P〈0．01）。结论：通心络能显著改善外周血内皮祖细胞增殖、迁移、黏附能力,这可能是通心络防治心脑血管疾病的新机制。     

Human CD34+AC133+VEGFR-2+ cells are not endothelial progenitor cells but distinct, primitive hematopoietic progenitors

OBJECTIVE: Endothelial progenitor cells (EPCs) are used for angiogenic therapies or as biomarkers to assess cardiovascular disease risk. However, there is no uniform definition of an EPC, which confounds EPC studies. EPCs are widely described as cells that coexpress the cell-surface antigens CD34, AC133, and vascular endothelial growth factor receptor-2 (VEGFR-2). These antigens are also expressed on primitive hematopoietic progenitor cells (HPCs). Remarkably, despite their original identification, CD34+AC133+VEGFR-2+ cells have never been isolated and simultaneously plated in hematopoietic and endothelial cell (EC) clonogenic assays to assess the identity of their clonal progeny, which are presumably the cellular participants in vascular regeneration. METHODS: CD34+AC133+VEGFR-2+ cells were isolated from human umbilical cord blood (CB) or granulocyte colony-stimulating factor-mobilized peripheral blood and assayed for either EPCs or HPCs. RESULTS: CD34+AC133+VEGFR-2+ cells did not form EPCs and were devoid of vessel forming activity. However, CD34+AC133+VEGFR-2+ cells formed HPCs and expressed the hematopoietic lineage-specific antigen, CD45. We next tested whether EPCs could be separated from HPCs by immunoselection for CD34 and CD45. CD34+CD45+ cells formed HPCs but not EPCs, while CD34+CD45- cells formed EPCs but not HPCs. CONCLUSIONS: Therefore, CD34+AC133+VEGFR-2+ cells are HPCs that do not yield EC progeny, and the biological mechanism for their correlation with cardiovascular disease needs to be reexamined.     

兔外周血与骨髓源性内皮祖细胞培养鉴定及生物学特性的研究

目的:探索并建立兔内皮祖细胞(EPCs)的体外培养、鉴定方法。方法:采用密度梯度分离法分别从兔外周血和骨髓中分离出单个核细胞,接种于预包被明胶的培养瓶,并应用培养基(EBM-2)诱导培养,诱导分化为EPCs;在倒置显微镜下观察两种源性细胞生长过程;台盼蓝法测定细胞传代成活率;通过绘制生长曲线法、MTT法、DNA周期检测比较两种源性获得的EPCs增殖情况;采用免疫荧光染色观察EPCs相关抗原CD34、CD31、CD133及vWF因子的表达。结果:两种源性EPCs均于培养3～4d完全贴壁,呈克隆样生长,7～9d形成类似成熟血管内皮细胞形态,细胞数量逐渐增多,细胞成活率均为95%。两种源性获得的第2代细胞生长曲线近似"s"形、MTT法显示3～5d细胞增殖较明显,外周血源性EPCs G0-G1期和S+G2+M期所占比例分别为96.48%和3.52%,骨髓源性EPCs G0-G1期和S+G2+M期所占比例分别为97.11%和1.84%。第2代EPCs进行免疫荧光鉴定结果显示:两种源性内皮祖细胞均阳性表达CD34、CD133、vWF因子,CD31弱阳性表达。结论:两种源性的EPCs均可高效获得且在体外稳定培养。与传统的骨髓源性EPCs相比较,从外周血源获得的EPCs是一种可靠、简便的培养方法,为组织工程学提供理想的细胞来源。     

Endothelial precursor cells promote angiogenesis in hepatocellular carcinoma

AIM:To investigate the role of bone marrow-derived endothelial progenitor cells(EPCs) in the angiogenesis of hepatocellular carcinoma(HCC).METHODS:The bone marrow of HCC mice was reconstructed by transplanting green fluorescent protein(GFP) + bone marrow cells.The concentration of circulating EPCs was determined by colony-forming assays and fluorescence-activated cell sorting.Serum and tissue levels of vascular endothelial growth factor(VEGF) and colony-stimulating factor(CSF) were quantified by enzyme-linked immunosorbent assay.The distribution of EPCs in tumor and tumor-free tissues was detected by immunohistochemistry and real-time polymerase chain reaction.The incorporation of EPCs into hepatic vessels was examined by immunofluorescence and immunohistochemistry.The proportion of EPCs in vessels was then calculated.RESULTS:The HCC model was successful established.The flow cytometry analysis showed the mean percentage of CD133CD34 and CD133VEGFR2 double positive cells in HCC mice was 0.45% ± 0.16% and 0.20% ± 0.09% respectively.These values are much higher than in the sham-operation group(0.11% ± 0.13%,0.05% ± 0.11%,n = 9) at 14 d after modeling.At 21 d,the mean percentage of circulating CD133CD34 and CD133VEGFR2 cells is 0.23% ± 0.19%,0.25% ± 0.15% in HCC model vs 0.05% ± 0.04%,0.12% ± 0.11% in control.Compared to the transient increase observed in controls,the higher level of circulating EPCs were induced by HCC.In addition,the level of serum VEGF and CSF increased gradually in HCC,reaching its peak 14 d after modeling,then slowly decreased.Consecutive sections stained for the CD133 and CD34 antigens showed that the CD133+ and CD34+ VEGFR2 cells were mostly recruited to HCC tissue and concentrated in tumor microvessels.Under fluorescence microscopy,the bone-marrow(BM)-derived cells labeled with GFP were concentrated in the same area.The relative levels of CD133 and CD34 gene expression were elevated in tumors,around 5.0 and 3.8 times that of the tumor free area.In frozen liver sections from HCC mice,cells co-expressing CD133 and VEGFR2 were identified by immunohistochemical staining using anti-CD133 and VEGFR2 antibodies.In tumor tissue,the double-positive cells were incorporated into vessel walls.In immunofluorescent staining.These CD31 and GFP double positive cells are direct evidence that tumor vascular endothelial cells(VECs) come partly from BM-derived EPCs.The proportion of GFP CD31 double positive VECs(out of all VECs) on day 21 was around 35.3% ± 21.2%.This is much higher than the value recorded on day 7 group(17.1% ± 8.9%).The expression of intercellular adhesion molecule 1,vascular adhesion molecule 1,and VEGF was higher in tumor areas than in tumor-free tissues.CONCLUSION:Mobilized EPCs were found to participate in tumor vasculogenesis of HCC.Inhibiting EPC mobilization or recruitment to tumor tissue may be an efficient strategy for treating HCC.     

出血性卒中患者急性期外周血CD34阳性细胞不同亚群的变化及意义

目的探讨出血性卒中患者急性期外周血CD34、KDR/CD34、CD133/CD34和CD117/CD34阳性细胞水平变化及其意义。方法回顾性纳入2013年9月—2014年4月江苏省海门市人民医院神经外科收治的急性出血性卒中患者30例,同时选取20名健康者作为对照组,利用FACSCalibur流式细胞仪分别于急性出血性卒中患者脑出血后第1~7天和对照组体检当天对外周血中CD34+、KDR+/CD34+、CD133+/CD34+和CD117+/CD34+细胞水平进行检测,使用CELLQuest软件获取数据并进行分析。结果外周血CD34+细胞与KDR+/CD34+、CD133+/CD34+、CD117+/CD34+细胞在出血性卒中后1~7d时均低于对照组,差异均有统计学意义(均P0.05)。CD34+和CD117+/CD34+在1~2d时先下降,后逐渐上升;KDR+/CD34+和CD133+/CD34+细胞在1~5 d时逐渐升高,均在5 d达到最大值,分别为(14.8±3.5)×105和(16.7±3.3)×105。与1 d时相比,CD34+细胞在5、6 d时分别为(27.4±6.3)×105和(25.4±5.7)×105,KDR+/CD34+、CD133+/CD34+细胞在4、5、6d时分别为(10.2±3.1)×105、(14.8±3.5)×105、(12.1±3.4)×105和(14.3±3.6)×105、(16.7±3.3)×105、(13.1±4.0)×105,CD117+/CD34+细胞在5d时为(21.3±4.2)×105,均高于脑出血后第1天,差异均有统计学意义(均P0.05)。在CD34+群体中,与对照组相比,KDR+/CD34+细胞比例在1~7 d时均降低,差异均具有统计学意义(均P0.05);CD133+/CD34+细胞比例在4d时为(65±4)%,高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);与1 d相比,KDR+/CD34+细胞比例在5 d时为(55±6)%,CD133+/CD34+细胞比例在4 d时为(65±4)%,CD117+/CD34+细胞比例在4d和5d时,分别为(69±6)%和(72±6)%,均出现升高,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论出血性卒中患者急性期外周血CD34+细胞及其细胞亚群发生了变化,推测不同细胞亚群可能具有不同的功能与潜能,KDR+/CD34+和CD133+/CD34+可能是急性出血性卒中的早期敏感指标,而CD117+/CD34+则在早期即被大量动员。     

糖基化终末产物对人外周血内皮祖细胞数量及功能的影响

目的观察糖基化终末产物(AGEs)对体外培养的人外周血内皮祖细胞(EPCs)数量及功能的影响。方法体外培养的人外周血EPCs根据不同AGEs-人血白蛋白(HSA)浓度分为对照纽、正常组(终浓度7.5 mg/L)、干预1组(终浓度1 5 mg/L)干预2组(终浓度30 mg/L)和干预3组(终浓度60 mg/L)。采用密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞;激光共聚焦显微镜检测其对FITC标记荆豆凝集素-1的吸附和Dil-标记乙酰化低密度脂蛋白进行细胞功能鉴定;加入AGEs后,分别采用MTT法、Boyden小室测定EPCs的增殖、迁移能力;人纤维连接蛋白检测EPCs的黏附能力;用体外血管生成分析试剂盒检测不同浓度AGEs HSA作用后的EPCs成血管能力。结果高浓度AGEs可减少EPCs贴壁细胞数量(P<0.01),减弱EPCs的黏附(P<0.01)、增殖(P<0.01)、迁移(P<0.05)和成血管能力(P<0.01)。结论 AGEs可减少人外周血EPCs的数量并使用其功能受损。     

成人骨髓源内皮祖细胞的体外分离培养及鉴定

目的探讨成人骨髓源内皮祖细胞（EPCs）体外分离培养的可行性。方法抽取成年男性骨髓,体外全骨髓培养,传代后采用免疫微珠分选方法收集CD南细胞,EGM—MV2条件培养基诱导培养EPCs,观察细胞形态、生长情况;采用流式细胞技术检测分选细胞纯度,免疫荧光法检测EPCs特殊分子标志物CD34,CD133和VE-cadherin表达,透射电子显微镜观察分选细胞超微结构,UEA-1和Dil-ac-LDL双染色法检测分选细胞的吞噬功能。结果分选后细胞培养第3天出现集落样生长,集落边缘细胞形态伸展呈梭形或多边形,传代后呈现串珠样排列;培养至5～6d,细胞连接成大片条索状结构;CD34^＋、CD133^＋细胞百分率分别为24．13％、93．29％,其表面特异性表达CD133、CD34、VE-cadherin,具有EPCs形态特征,能吞噬Dil-ac-LDL并结合UEA-1。结论成人骨髓来源的EPCs经体外培养后形态、增殖率、生存能力、表面标志表达、功能等均较为稳定,可作为心血管组织工程种子细胞或用于干细胞治疗。     

Clonogenic assay of endothelial progenitor cells

In stem cell biology, CD34⁺ or CD133⁺ hematopoietic stem cells (HSCs) give rise to two types of endothelial progenitor cell (EPC) colonies: primitive and definitive EPC-colony forming units (primitive EPC-CFU and definitive EPC-CFU), which can be morphologically defined. Based on their morphology, an evaluation of the number or the ratio of each EPC colony constitutes the Endothelial Progenitor Cell Clonogenic Forming Assay (EPC-CFA), a novel assay to quantify the differentiation of colony forming EPCs. This assay system allows us to practically evaluate the vasculogenic potential of primary or cultured stem cell populations, i.e., mononuclear cells or fractionated stem cells (CD34⁺ or CD133⁺ cells) in peripheral blood, bone marrow, or umbilical cord blood. EPC-CFA can be used not only for basic research in vascular biology but also for evaluating the vascular reparative activity of patients with cardiovascular diseases. This review summarizes the underlying concepts and significance of the EPC-CFA in vascular biology.