蛋白酪氨酸磷酸酶2自身抗体微量平板放射结合检测法的建立与临床应用

目的建立蛋白酪氨酸磷酸酶2自身抗体（IA-2A）的微量平板放射结合检测法（RBA）,并初步评价其临床应用价值。方法经纯化的^35S-IA-2抗原与血清在96孔V形底平板中缓慢振荡孵育24h,而后转入已包被蛋白A的Millipore平板中,洗涤后采用多功能液体闪烁发光仪计数。检测162例1型糖尿病（T1DM）患者、210例新诊2型糖尿病（T2DM）患者和224名健康者血清中IA-2A浓度,初步评价其临床应用效果。结果（1）该法检测IA-2A批内CV4．1％～10．0％,批间CV5．7％～12．8％。（2）国际第4次糖尿病自身抗体检测标准化评估回报结果显示,其灵敏度为72％,特异度为98％。与放射配体法（RLA）结果判定一致率为96．5％,检测值呈显著正相关（r=0．962,P〈0．01）。（3）IA-2A在T1DM患者中阳性率为22．8％,明显高于健康者的0．89％（P〈0．01）;在T2DM患者中阳性率为2．4％,与健康者相比差异无统计学意义。（4）该法检测指血IA-2A与RLA法检测静脉血结果判定一致率为100％。结论微量平板RBA法灵敏度、特异度、重复性好,能适用于末梢血IA-2A检测,具有较好的临床应用价值。     

1型糖尿病患者的临床特点和多种胰岛自身抗体检出情况

目的分析1型糖尿病（T1DM）患者多种胰岛自身抗体的检出情况和不同类型T1DM的临床特征。方法选取2010年11月至2011年11月在中日友好医院住院的67例T1DM患者,分析其临床特征及胰岛细胞抗体（ICA）、胰岛素抗体（IAA）、谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）[酶联免疫吸附试验（ELISA）法和免疫沉淀法（RIP）检测]、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体（IA2A）和锌转运蛋白8抗体（ZnT8A）等6种胰岛自身抗体情况。结果本组T1DM共67例,其中经典型T1DM53例,成人迟发性自身免疫糖尿病（LADA）12例和暴发性1型糖尿病（FT1D）2例。起病年龄2～77岁,体质指数（BMI）（22±4）kg／m2,糖化血红蛋白（HbAlc）9．7％±2．4％,空腹C肽（0．3±O．4）μ／L。GADA（ELISA）阳性51例（76．1％）,GADA（RIP）阳性35例（52．2％）,IA2A阳性19例（28．3％）,ZnT8A阳性16例（23．9％）,IAA阳性16例（23．9％）,ICA阳性10例（14．3％）。前4种抗体检测方法至少1种阳性者共56例（83．6％）。51例ELISA法GADA阳性包括了35例RIP检测GADA阳性中的33例、19例IA2A阳性中15例及16例ZnT8A阳性中的14例。经典1型糖尿病在发病初至半年内需要胰岛素治疗,而LADA平均在发病3．9年后需要胰岛素治疗。2例FT1D患者起病急,发病时血糖分别为41．1和23．1mmol／L,HbAlc分别为7．8％和6．5％,空腹及餐后血C肽均小于0．03μg／L或不能测出。结论ELISA检0n．0GADA对1型糖尿病的诊断有较高敏感性,联合多种抗体检测对T1DM诊断作用有限。FT1D起病急骤,代谢紊乱更为严重。     

胰岛B细胞特异性锌转运蛋白与1型糖尿病

1型糖尿病（T1DM）是胰岛呈进行性破坏的自身免疫性疾病,以表达于胰岛B细胞的分子靶点作为抗原参与自身免疫反应为特征。其中阳离子外流锌转运蛋白8（ZnT8,SLC30A8）是人类T1DM的主要自身抗原之一,T1DM患者中SLC30A8基因位点上氨基酸325的多态性决定了其自身抗体多肽的特异性。ZnT8自身抗体可以在新发T1DM和糖尿病前期患者血清中检测出,在T1DM患者血清中其他自身抗体（谷氨酸脱羧酶抗体、抗酪氨酸磷酸酶抗体、抗胰岛素抗体和抗胰岛细胞抗体）阴性时ZnT8抗体仍有26％的阳性率。对自身抗体ZnT8的检测有助于在人群中筛查糖尿病前期患者,因此检测ZnT8抗体对评估T1DM的发生发展是必要的,ZnT8（SLC30A8）是T1DM的一个重要并独立的预测因子。     

SOX13抗体放射配体检测法的建立与临床应用

目的 建立SOX13抗体的放射配体检测法，初步探讨其对自身免疫糖尿病的诊断价值。方法 采用SOX13质粒，经体外转录与翻译，获得^35S标记SOX13。^35S-SOX13与血清在旋转孵育器中混匀过夜，用蛋白A琼脂糖沉淀抗原抗体复合物。沉淀复合物经TBST缓冲液洗涤后，置液体闪烁计数仪上计数，结果以国际标准化的抗体指数表示。检测162例急性起病、328例隐匿起病糖尿病患者以及120例正常人血清中SOX13抗体指数。结果 （1）方法的批内CV3．9％～9．2％，批间CV5．2％～12．0％，28例标本重复检测3次，结果判断一致；（2）120例正常人的SOX13抗体指数呈偏态分布，取97．5％的百分位点，阳性阈值为0．10；（3）检测急性起病患者162例，阳性15例，阳性率9．3％；隐匿起病患者328例，阳性34例，阳性率10．4％，均显著高于正常组（P〈0．05）。结论 （1）建立的SOX13抗体放射配体检测法灵敏度和重复性好，可应用于临床；（2）SOX13抗体对自身免疫性糖尿病（特别是GAD-Ab、IA-2Ab、CPH-Ab阴性者）具有独特的诊断价值。     

人白细胞抗原DQ单体型对特发性1型糖尿病免疫病因分型的意义

目的 通过对临床特征、锌转运体8自身抗体（ZnT8A）、分泌干扰素γ的谷氨酸脱羧酶65反应性T细胞（GAD65-IFN-γ-T细胞）检测情况的比较,探讨人白细胞抗原（HLA） DQ单体型对初诊特发性1型糖尿病免疫病因分型的价值.方法 将2000年3月至2011年12月收治的52例自发酮症或酮症酸中毒起病,谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体（IA-2A）及胰岛素自身抗体（IAA）均阴性,且依赖胰岛素治疗的湖南省汉族新发1型糖尿病患者纳入本研究.放射配体法检测锌转运体8自身抗体（ZnT8A）,酶联免疫斑点技术（ELISPOT）检测GAD65-IFN-γ-T细胞,聚合酶链反应（PCR）直接测序法测定HLA-DQ基因型.将研究对象分为HLA-DQ易感单体型携带组和HLA-DQ易感单体型不携带组,并以1年为间隔随访3年.比较两组起病初期的临床特征、ZnT8A及GAD65-IFN-γ-T细胞检测情况,随访时胰岛自身抗体的变化.两组间计数资料比较采用x2检验.结果 52例初诊特发性1型糖尿病患者中5例ZnT8A阳性,阳性率9.6％;16例ZnT8A阴性且接受GAD65-IFN-γ-T检测的患者中,2例GAD65-IFN-γ-T阳性,阳性率12.5％.与HLA-DQ易感单体型不携带组相比,携带组起病初期酮症程度更严重（Z=-2.84,P＜0.05）,空腹C肽水平更低（x2 =0.38,P＜0.05）.起病初期,携带组中1例患者GAD65-IFN-γ-T细胞检测呈阳性反应（1/5）,而不携带组未检测到该细胞呈阳性患者.随访时,携带组中1例患者ZnT8A和IA-2A由阴转阳（1/18）,不携带组中未有检测到抗体转阳患者.结论 部分特发性1型糖尿病患者体内存在ZnT8A和GAD65-IFN-γ-T细胞;携带HLA-DQ易感单体型的特发性1型糖尿病患者,较不携带者更加具有自身免疫倾向.胰岛自身免疫是部分初诊特发性1型糖尿病的病因,可能通过HLA-DQ单体型介导.     

TB-SA抗体检测、PPD试验在结核性脑膜炎诊断中的应用价值

目的评价TB-SA抗体检测、结核菌素试验（PPD）对结核性脑膜炎（结脑）的诊断价值。方法对69例结脑患者和69例非结核病患者同时进行血清、脑脊液TB-SA抗体检测和PPD,对两种检测方法的结果进行比较。结果TB—SA抗体在结脑诊断中的敏感性为40．5％,特异性为73．9％;PPD在结脑诊断中的敏感性为45．7％,特异性为45．0％。结脑组TB—SA抗体检测和PPD的阳性率分别为37．7％和44．9％（P=0．487）;非结核组TB-SA抗体检测和PPD的阴性率分别为73．6％和45．8％（P=0．001）;结脑组脑脊液、血清TB—SA抗体检测阳性率分别为30．4％和37．7％（P=0．405）。结论TB—SA抗体、PPD不是诊断结脑有价值的参考指标,两者的诊断敏感性无统计学差异;血清TB—SA抗体特异性高于PPD,在排除结脑诊断中具有显著优势;与血清相比,脑脊液TB-SA抗体检测在诊断结脑中元显著优势。     

蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体放射配体检测法的建立与临床应用

目的　建立蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体 (IA 2A)的放射配体测定法。　方法　经试管内转录与翻译 ,获得3 5 S标记的重组人IA 2抗原。3 5 S IA 2与血清在自制旋转孵育器上混匀过夜 ,用蛋白A 琼脂糖沉淀抗原抗体复合物。沉淀复合物经TBST缓冲液洗涤后 ,置液体闪烁计数仪计数 ,结果以IA 2A指数表示。并检测国人 111例 1型和 113例 2型糖尿病患者 ,以及 12 5名健康志愿者的IA 2A水平 ,评价其敏感性、特异性及临床应用价值。　结果　该方法的批内变异系数 (CV) 3 .2 %～ 9 .7% ,批间CV 5.6%～ 11.7% ;DASP 2 0 0 3回报结果显示其敏感性 64% ,特异性 10 0 % ;该方法检测 45份标本的IA 2A指数与国际标准化实验室结果呈显著正相关 (r =0 .690 ,P <0 .0 1) ,且阴、阳性判断完全一致 ;IA 2A指数阳性阈值 0 .0 0 65(为 12 5名健康者的 99.5%百分位点上限 ) ;该方法检测国人 1型糖尿病患者阳性率 2 3 .4% (2 6/ 111) ,其中病程 <1年的阳性率 3 3 .3 % (17/ 51) ,病程≥ 1年的阳性率 15.0 % (9/ 60 ) ,差异有显著意义 (χ2 =5.17,P <0 .0 5)。 2型糖尿病患者阳性率 1.8% (2 /113 ) ,显著低于 1型糖尿病患者 (χ2 =2 4.0 ,P <0 .0 0 1)。　结论　建立的IA 2A放射配体检测法灵敏、特异性和重复性好 ,可望广泛临床应用     

锌转运体8及其自身抗体

锌是胰岛素储存和分泌机制中的一个重要组分,β细胞需要有效且特异的转运体来累积足够量的锌.锌转运体8(ZnT8)是新近发现的一种1型糖尿病自身抗原,具有高度β细胞特异性,通过影响锌离子浓度而在胰岛素合成和分泌中发挥重要作用.ZnT8自身抗体对自身免疫性糖尿病(尤其对其他自身抗体阴性者)有着重要的诊断与预测价值.ZnT8基因(SLC30A8基因)多态性影响ZnT8自身抗体的特异性.     

检测65KD热休克蛋白抗体对Ⅰ型糖尿病诊断的意义

利用卡介苗（BCG）65KD热休克蛋白作为抗原，ELISA法检测Ⅰ型糖尿病患者血清中64KD抗体。对30例Ⅰ型糖尿病、30例Ⅱ型糖尿病、5例系统性红斑狼疮（SLE）、8例甲状腺机能亢进（甲亢）的患者及44例健康人血清进行检测。结果表明，64KD抗体在Ⅰ型糖尿病中的检出率为83．3％，在Ⅱ型糖尿病中的检出率为13．3％，在SLE及甲亢中均为阴性，健康人仅1例阳性。此方法的批内变异系数为4．57％～8．62％，批间变异系数为5．57％～12．7％。诊断特异性为94．6％，诊断敏感性为83．3％，诊断指数为177．9％。     

自身免疫性糖尿病相关抗体检测的研究进展

自身免疫性糖尿病以T细胞介导的胰岛β细胞特异性损伤及循环中出现胰岛自身抗体为特征,自身免疫是其发病的中心环节,自身抗体是目前最可靠的1型糖尿病（T1DM）生物标志物,临床应用广泛,其中最值得关注的则是其在T1DM的诊断及预测方面的价值。胰岛素自身抗体种类繁多,各有特点,目前临床应用的主要抗体包括谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）、胰岛素自身抗体（IAA）、胰岛素瘤相关蛋白2抗体（IA-2A）和锌离子转运蛋白8抗体（ZnT8A）。联合检测对T1DM的诊断及预测有重要意义。     

Graves病及1型糖尿病患者促甲状腺激素受体抗体、锌转运体8抗体及谷氨酸脱羧酶抗体表达水平比较

目的探讨Graves病患者促甲状腺激素受体抗体、锌转运体8抗体、谷氨酸脱羧酶抗体水平及其相关性。方法招募2009年11月至2011年3月吉林大学白求恩第二医院内分泌科门诊和病房收治的51例Graves病患者（Graves病组;男9例,女42例）及72例1型糖尿病患者（1型糖尿病组;男30例,女42例）,另以70名志愿者为健康对照组。利用放射免疫分析法检测各组血清促甲状腺激素受体抗体水平,采用放射免疫沉淀法检测锌转运体8抗体及谷氨酸脱羧酶抗体水平。Pearson相关分析进行组问相关性分析。结果Graves病组促甲状腺激素受体抗体、锌转运体8抗体、谷氨酸脱羧酶抗体的阳性率分别为90．2％（46／51）、15．7％（8／51）和5．9％（3／51）,1型糖尿病组上述3种抗体的阳性率依次为4．2％（3／72）、45．8％（33／72）和41．7％（30／72）,健康对照组上述3种抗体的阳性率依次为0、1．4％（1／70）和1．4％（1／70）。Graves病组促甲状腺激素受体抗体与锌转运体8抗体呈正线性相关（r=0．278,P〈0．05）;促甲状腺激素受体抗体阳性的Graves病患者促甲状腺激素受体抗体与锌转运体8抗体呈正线性相关（r=0．537,P〈0．01）。1型糖尿病组锌转运体8抗体与谷氨酸脱羧酶抗体呈明显正线性相关（r=0．892,P〈0．01）。结论自身免疫性甲状腺病与自身免疫性糖尿病可能存在一定关联。1型糖尿病患者锌转运体8抗体水平与谷氨酸脱羧酶抗体水平高度相关。     

谷氨酸脱羧酶抗体、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体、锌转运体8抗体与自身免疫性甲状腺疾病的关系

目的探讨自身免疫性甲状腺疾病与谷氨酸脱羧酶抗体、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体和锌转运体8抗体的关系。方法纳入2010年10月至2011年10月在南京医科大学第一附属医院内分泌科就诊的521例自身免疫性甲状腺疾病患者[男107例,女414例,年龄（41±14）岁]、153例非自身免疫性甲状腺疾病患者[男24名,女129例,年龄（50±14）岁]及健康志愿者102名[男52名,女50名,年龄（23±4）岁],应用放射免疫沉淀法检测谷氨酸脱羧酶抗体、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体、锌转运体8抗体水平。采用t检验、x2检验或秩和检验进行数据统计。结果（1）自身免疫性甲状腺疾病患者谷氨酸脱羧酶抗体和锌转运体8抗体的阳性率分别为7．29％（38／521）和16．70％（87／521）,高于正常对照者[均为0．98％（1／102）,）（2值分别为5．794、17．374,均P〈0．05]和非自身免疫性甲状腺疾病患者[分别为2．14％（3／140）、9．93％（15／151）,x2值分别为5．032、4．161,均P〈0．05]。自身免疫性甲状腺疾病患者蛋白酪氨酸磷酸酶抗体的阳性率[4．22％（22／521）]与正常对照者（0,）（2=3．311,P〉0．05）及非自身免疫性甲状腺疾病患者[2．14％（3／140）,x。=1．312,P〉0．05]差异无统计学意义。（2）2个及2个以上胰岛自身抗体阳性的自身免疫性甲状腺疾病患者糖尿病的发生率高于胰岛自身抗体阴性者[21．43％（3／14）VS5．13％（20／390）,Fisher精确概率检验,P〈0．05],仅1种胰岛自身抗体阳性的自身免疫性甲状腺疾病患者糖尿病的发生率与抗体阴性者差异无统计学意义[6．87％（9／131）VS5．13％（20／390）,X2：0．566,P〉0．05]。（3）自身免疫性甲状腺疾病患者中,甲状腺过氧化物酶抗体高滴度（≥600U／m1）者任一胰岛自身抗体的阳性率均高于低滴度者[35．83％（43／120）vs22．93％（86／375）,x2=7．851,P〈0．01]。结论甲状腺过氧化物酶抗体高滴度的自身免疫性甲状腺疾病患者易合并胰岛自身抗体阳性,尤其是锌转运体8抗体的阳性率较高,提示自身免疫性甲状腺疾病和自身免疫性糖尿病在免疫学发病机制上可能存在联系。     

Different role of zinc transporter 8 between type 1 diabetes mellitus and type 2 diabetes mellitus

Diabetes can be simply classified into type 1 diabetes mellitus and type 2 diabetes mellitus. Zinc transporter 8 (ZnT8), a novel islet autoantigen, is specifically expressed in insulin‐containing secretory granules of β‐cells. Genetic studies show that the genotypes of SLC30A8 can determine either protective or diabetogenic response depending on environmental and lifestyle factors. The ZnT8 protein expression, as well as zinc content in β‐cells, was decreased in diabetic mice. Thus, ZnT8 might participate in insulin biosynthesis and release, and subsequently involved deteriorated β‐cell function through direct or indirect mechanisms in type 1 diabetes mellitus and type 2 diabetes mellitus. From a clinical feature standpoint, the prevalence of ZnT8A is gradiently increased in type 2 diabetes mellitus, latent autoimmune diabetes in adults and type 1 diabetes mellitus. The frequency and epitopes of ZnT8‐specific T cells and cytokine release by ZnT8‐specific T cells are also different in diabetic patients and healthy controls. Additionally, the response to ZnT8 administration is also different in type 1 diabetes mellitus and type 2 diabetes mellitus. In the present review, we summarize the literature about clinical aspects of ZnT8 in the pathogenesis of diabetes, and suggest that ZnT8 might play a different role between type 1 diabetes mellitus and type 2 diabetes mellitus.     

糖尿病对老年高血压患者心脏结构和功能的影响

目的探讨糖尿病对老年高血压患者心脏结构和功能的影响。方法将351例60岁以上的住院患者分为3组，即单纯高血压（EH）组149例，高血压合并2型糖尿病（T2DM）组129例和对照组73例，依据超声心动图结果评价心脏的结构和功能。结果与单纯EH组比较，EH＋T2DM组的舒张末期左心室内径（LVD）、左室质量（LVM）、左室质量指数（LVW1）、收缩末期左心房内径（LA）、收缩末期升主动脉内径（AO）、射血分数（EF）、平均左室短轴缩短率（FS）、舒张晚期二尖瓣最大血流速度（A值）、左心室舒张早期二尖瓣最大血流速度（E值）／A值明显升高，EH＋T2DM组E／A小于0．8或大于1．6的例数大于EH组和对照组（P=0．03）；EH＋T2DM组的房颤发生率大于对照组（P=0．012）。结论糖尿病对老年高血斥患者心脏结构、收缩和舒张功能均有一定的影响，高血糖可加重老年高血压患者心脏结构和功能的异常。     

Prevalence of diabetes-associated autoantibodies among patients presenting with type 2 diabetes and related metabolic differences

BackgroundTo explores the prevalence of autoantibodies (zinc transporter 8 autoantibodies (ZnT8A), antibodies to insulin (IAAs), glutamic acid decarboxylase autoantibody (GAD65)), the relation of the type of positive autoantibody and the number of positive autoantibodies with the glycemic and lipid profile of the patients with LADA (Latent Autoimmune Diabetes in Adults) and compares it to the metabolic profile of patients presenting with type 2 diabetes (T2DM).Methods263 patients with T2DM were recruited for this cross-sectional study in Tehran, Iran. Data from patients included complete medical history, GAD65, ZnT8A, IAA and routine metabolic laboratory workup. Assay for autoantibodies were conducted using ELISA kits. The association between autoantibodies and glycemic and lipid profile of patients with diabetes was assessed using univariate and multivariate regression analysis.ResultsOur study revealed that among 263 patients with T2DM, 29 (11%) cases were positive for IAAs, 9 (3.4%) for ZnT8A, and 12 (4.6%) for GAD65. Six (2.3%) of the patients had triple positive antibodies. Patients with positive results were younger, had lower body mass index (BMI), c-peptide, triglyceride, low-density lipoprotein (LDL), and higher high-density lipoprotein (HDL), HbA1c and fasting blood glucose (FBG) levels. Triple antibody positivity was significantly associated with lower levels of C-Peptide, Triglycerides, FBG, and HbA1c compared to triple negative antibodies.ConclusionPatients with LADA positive for either of the autoantibodies (GAD65, ZnT8 and IAA) presented with worse glycemic control. Measurement of these autoantibodies can assist in discrimination of these patients and help with earlier control of glycemic profile.     

糖尿病患者血清抗AT1和α1肾上腺素能受体自身抗体与白蛋白尿的关系

目的探讨糖尿病（DM）患者血管紧张素Ⅱ受体1（AT1受体）和α1肾上腺素能受体（α1受体）自身抗体与白蛋白尿的关系。方法以合成的AT1和α1受体多肽片段为抗原,应用酶联免疫吸附技术,检测171例糖尿病患者（DM组）、60例高血压无肾损患者（HT组）及40例正常人（NC组）血清中抗AT1和α1受体自身抗体及尿白蛋白排泄率（UAER）。DM组根据UAER分为DM1组（UAER≥200μg／min）;DM2组（UAER为20-199μg／min）;DM3组（UAER＜20μg／min）。结果（1）DM组抗AT1和α1受体抗体阳性率分别为53．2％和56．1％,明显高于HT组的13．3％和15．0％及NC组的12．5％和7．5％,差异有统计学意义（P均〈0．01）。（2）DM1组抗AT1和α1受体自身抗体阳性率分别为83．6％和82．O％,明显高于DM2组的66．0％和62．5％及DM3组的11．7％和8．3％,差异有统计学意义（P均〈0．01）,DM2组明显高于DM3组（P〈0．01）。结论血清抗G蛋白偶联型AT1和α1受体自身抗体可能与DM合并肾损害有关,AT1和α1受体自身抗体阳性率与白蛋白尿有关。AT1和α1受体自身抗体在DM合并肾损害发病中起重要作用。     

抗酸染色在结核病病理诊断中的价值

目的探讨抗酸染色在结核病病理诊断中的意义。方法回顾性分析2000--2012年兰州军区兰州总医院病理诊断结核病并有抗酸染色结果的914例（男485例,女429例）患者的病理资料。使用SPSS20．0软件进行统计学处理,以X2检验对计数资料进行统计分析,PG0．05为差异有统计学意义。结果914例结核病患者结核分枝杆菌抗酸染色阳性率为31．95％（292／914）。支气管结核和肠结核患者结核分枝杆菌抗酸染色阳性率分别为48．24％（41／85）和58．06％（18／31）,高于肺结核抗酸染色阳性率（33．33％,72／216）,差异均有统计学意义（矿值分别为5．777、7．159,P值均G0．05）;结核性胸膜炎（19．78％,18／91）、脊柱结核（16．52％,19／115）和关节结核阳性率（12．00％,6／50）低于肺结核患者结核分枝杆菌抗酸染色阳性率（33．33％,72／216）,差异均有统计学意义（X2值分别为5．676、10．640和8．916,P值均G0．05）。男、女患者结核分枝杆菌抗酸染色阳性率分别为30．93％（150／485）和33．10％（142／429）,性别对抗酸染色结果差异无统计学意义（X2=0．494,P〉0．05）。结论抗酸染色仍是诊断结核病的有效确切手段,病变部位不同,抗酸染色阳性率亦有差异。