染锰大鼠血清和睾丸LDH活性的变化

目的研究锰对大鼠血清和睾丸乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的影响。方法将正常雄性SD大鼠48只,随机分为1个对照组和2个染锰组,给予各组大鼠腹腔注射生理盐水和15、30 mg/kg氯化锰。分别染锰4wk和6wk,随机处死各组大鼠8只。应用化学比色法测定血清和睾丸LDH活性。结果①与空白对照组比较,染锰6wk 30mg/kgMnCl2组血清LDH活性显著升高（P〈0.01）,染锰4wk 30mg/kg MnCl2组,6wk 15mg/kg MnCl2组,6wk30mg/kg MnCl2组睾丸LDH活性均降低（P〈0.01）。②染锰时间相同,染锰6w 30mg/kg MnCl2组与15mg/kg MnCl2组比较,血清LDH活性显著升高（P〈0.01）,染锰4wk和染锰6wk,30mg/kg MnCl2组与15mg/kg MnCl2组相比较,睾丸LDH活性均降低（P〈0.05）。③染锰剂量相同,染锰6wk组与染锰4wk组相比较,血清LDH活性显著升高（P〈0.01）,睾丸LDH活性显著降低（P〈0.01）。结论过量锰可诱发大鼠睾丸LDH活性降低,这是生精障碍的重要原因;睾丸LDH活性可作为预测生精障碍的一个客观指标;过量锰诱发大鼠血清LDH活性升高,提示过量锰对心肌、骨骼肌、肾和肝等具有毒性效应。     

锰对大鼠睾丸毒性效应的研究

目的研究氯化锰对大鼠睾丸形态学及精子的毒性效应,探讨锰对大鼠生精功能损伤作用的机理。方法雄性SD大鼠48只,随机分为6组：空白对照组,15mg／kg和30mg／kgMnCl2组,8只／组。15mg／kgMnCl2组和30mg／kgMnCl2组分别染锰（MnCl2·4H2O）4wk和6wk,空白对照组给予等容生理盐水,给锰与生理盐水途径均为腹腔注射,5d／wk,1次,d,大鼠分别于第4wk末和第6wk术处死,取睾丸作以下检测：①观察睾丸形态学改变;②检测睾丸脏器系数;③精子数量。结果①与空白对照组比较,染锰15mg／kg、4wk即可对大鼠生精小管形态结构造成损伤,且随染锰剂量和时间的增加生精小管损伤越严重;染锰4w30mg／kgMnCl2组睾丸脏器系数显著降低（P〈0．01）,各染锰组精子数量均显著降低（P〈0．01）;②染锰剂量相同,染锰6wk组与染锰4wk组比较,精子数量均显著降低（P〈0.01）;③染锰时间相同,30mg／kgMnCl2组与15mg／kgMnCl2组比较,精于数量均显著降低（P〈0．01）。结论染锰15mg／kg、4wk即可对大鼠睾丸形态学和精子生成造成损伤,并存在一定的剂量-效应和时间-效应关系,证实了过量锰对雄性大鼠睾丸具有明冠毒性效应。     

染锰鼠28天与56天生精功能相关指标比较研究

目的研究染锰28d与56d小鼠生精功能相关指标的变化,探讨锰生殖毒性的时间-效应关系。方法将雄性小鼠随机分为2个染锰组（MnCl215、30mg/kg）和1个对照组。分别于染锰28、56d随机处死各组小鼠5只。测定睾丸脏器系数,计数精子,精子活动度,精子畸形率,采用免疫组化和图像分析法检测小鼠睾丸组织增殖细胞核抗原（proliferation cell nucleus antigen,PCNA）和热休克蛋白70（heat-shock protein70,HSP70）的表达。结果①染锰28d和56d,各染锰组精子数量和精子活动度均降低,但28d与56d比较无明显差异（P〉0.05）。②染锰28d和56d,各染锰组睾丸脏器系数均降低,精子畸形率均升高,且28d与56d比较有明显差异（P〈0.01,P〈0.05）。③染锰28天与56天比较,15mg/kg染锰组睾丸组织PCNA平均吸光度值有明显差异（P〈0.01）,15mg/kg组和30mg/kg组睾丸组织HSP70表达均有明显差异（P〈0.01）,28d达高峰,56d明显回落。结论①染锰15mg/kg 28d可造成小鼠睾丸生精功能损伤,但可能是可逆性损伤。②染锰15mg/kg 28d,小鼠睾丸PCNA表达增高,表明染锰15mg/kg 28d小鼠睾丸增殖能力强于56d,提示PCNA表达可作为评价雄性生殖功能的指标之一。③各染锰组睾丸组织HSP70表达于28d达高峰,提示可能是生精细胞的一种自我保护机制,56d明显下降,可能为生精细胞过应激反应后的抑制状态和生精细胞减少的双重结果。     

基础理论

071393锰对大鼠睾丸抗氧化能力及生精细胞凋亡的影响研究/张先平…∥中国计划生育学杂志·—2007,15(7)·—408~410目的:研究氯化锰对SD大鼠睾丸抗氧化能力和生精细胞凋亡的影响。方法:24只健康雄性SD大鼠随机分为3组。染锰组给予MnCl2·4H2O(15mg/kg、30mg/kg)4周,对照组给予生理盐水,各组给药途径均为腹腔注射,每天1次,每周5天。应用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记技术检测睾丸生精细胞凋亡;化学比色法检测睾丸组织超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果:生精细胞凋亡指数染锰组明显高于对照组,且随染锰剂量的增加…     

生殖激素及LDH在染锰大鼠生精细胞凋亡蛋白表达中的作用

目的研究锰对大鼠体内生殖激素和乳酸脱氢酶（LDH）水平的影响,探讨锰对大鼠生精细胞caspase-3表达与生殖激素和LDH水平之间的关系。方法48只雄性SD大鼠,体质量（120-4-10）g随机分为6组：空白对照组,低剂量（15mg／kg MnCl2）和高剂量（30mg／kg MnCl2）组,8只／组。MnCl：组分别染锰4W和6W,空白对照组给予等量NS,给药途径均为腹腔注射,5d／w,1次／d。大鼠分别于第4w末和第6w末处死。免疫组化法检测睾丸组织中caspase．3表达,放射免疫法测定血清T、FSH和LH含量,化学比色法测定血清和睾丸LDH活性。结果与空白对照组比较,各染锰组caspase-3阳性细胞率均显著升高,血清T含量显著降低,FSH和LH含量显著升高,6W30mg／kg组血清LDH活性显著升高,各染锰组睾丸LDH活性显著降低（P〈0．01）。染锰剂量相同,6W与4W比较,caspase-3阳性细胞率和血清FSH、LH含量显著升高（P〈0．01）,血清和睾丸LDH活性分别显著升高和降低（P〈0．01）。染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,caspase-3阳性细胞率和血清FSH、LH含量均显著升高（P〈0．01）,血清和睾丸LDH活性分别显著升高和降低（P〈0．01）。结论染锰15mg／kg4W即可诱发大鼠血清T含量降低,FSH和LH含量升高及睾丸LDH活性降低和血清LDH活性升高,可能是促进生精细胞caspase-3表达的重要原因。     

氯化锰对小鼠睾丸组织形态学的影响

目的研究锰对小鼠睾丸组织形态学的影响,探讨其时间-效应关系和剂量-效应关系。方法将雄性小鼠随机分为3个染锰组和1个对照组,分别给予腹腔注射7.5、15.0、30.0mg/kg氯化锰和生理盐水,于染锰第3、7、14、28、56天处死小鼠5只/组。观察小鼠睾丸组织学的变化和染锰56d各计量组曲细精管横截面积及生精上皮细胞数量。结果与对照组比较睾丸组织的损伤随染锰剂量的增加和时间的延长而逐渐加重;染锰56d与对照组比较,曲细精管横截面积和生精上皮细胞数差异均有统计学意义(P<0.01)。结论各剂量的MnCl2对雄性小鼠睾丸组织形态结构均有损害作用,以染锰56d,30mg/kg对小鼠的损害最为严重,染锰56d,7.5mg/kg对小鼠睾丸曲细精管横截面积和生精上皮细胞明显减少,证实7.5mg/kg的锰对小鼠睾丸曲细精管横截面积和生精上皮细胞有明显的损害。     

锰对大鼠精子形态的影响及意义

目的 研究锰对大鼠精子形态的影响及意义,探讨锰对大鼠生精功能损伤作用的机理。方法雄性SD大鼠48只,随机分为6组：空白对照组,15mg／kg和30mg／kgMnCl2组。8只,组。15mg／kgMnCl2组和30mg／kgMnCl2组分别染锰（MnCh&#183;4H2O）4wk和6wk,空白对照组给予等容生理盐水,给锰与生理盐水途径均为腹腔注射,5d／w,1次,d,大鼠分别于第4wk末和第6wk末处死,取附睾作以下检测：①精子数量;②精子活动度;③精子畸形率。结果①与空白对照组比较,各染锰组精于数量和精子活动度均显著降低（P〈0．01）,精子畸形率均显著升高（P〈0．01）;②染锰剂量相同,染锰6wk组与染锰4wk组比较,精子数量和精子活动度显著降低（P〈0．01）,精子畸形率无显著性差异（P〉0．05）;③染锰时间相同,30mg／kgMnCI2组与15mg／kgMnCl2组比较,精子数量和精子活动度均显著降低（P〈0．01）,染锰6wk,30mg／kgMnCh组与15mg／kgMnCl2组比较,精子畸形率显著升高（P〈0．01）。结论染锰15mg／kg、4wk即可对大鼠精子造成损伤,并存在一定的剂量-效应和时间-效应关系,锰对雄性大鼠具有遗传学毒性效应。     

长期低剂量锰染毒对子代大鼠睾丸生精细胞线粒体状态和细胞凋亡的影响

目的 探讨长期低剂量氯化锰染毒对子代大鼠睾丸生精细胞线粒体形态和凋亡的影响.方法 健康雌性SD大鼠32只分为对照组、低、中、高剂量组.腹腔注射2、4和8 mg/kg MnCl2·4H2O或生理盐水,1次/天,5天/周,共8周,并在妊娠期和哺乳期继续染毒.每组8只12周龄子代大鼠断头处死后,观察睾丸生精小管结构和生精细胞线粒体形态、视神经萎缩蛋白1(Opa1)、动力相关蛋白1(Drp1)、半胱氨酸蛋白酶9(Caspase9)表达和细胞凋亡情况.结果 随锰染毒剂量增加,生精细胞层数逐渐减少,细胞排列紊乱、数量减少;中、高剂量组可见线粒体分离、肿胀等表现;中、高剂量组Opa1显著降低(P＜0.05,P＜0.01),Drp1、Caspase9则随锰染毒剂量增加而递增(P＜0.05,P＜0.01);锰染毒组生精细胞凋亡指数随锰染毒剂量增加而上升(P＜0.05).结论 长期低剂量锰染毒可调节Opa1/Drp1基因表达而影响线粒体功能,导致子代大鼠生精细胞凋亡.     

PCNA和Ki-67在染锰大鼠生精细胞中的表达及研究

目的研究氯化锰对生精细胞PCNA和Ki-67表达的影响,比较二者作为细胞增殖指标的差异。方法雄性sD大鼠（体重120±10g）48只,随机分为6组：空白对照组,低剂量（15mg／kgMnCl2）和高剂量（30mg／kgMnCl2）组,8只／组。MnCl2组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等量NS,给药途径均为腹腔注射,5d／周,1次／d,分别于第4周末和第6周末处死,免疫组化（SABC法）法检测睾丸PCNA和Ki-67表达。结果与空白对照组比较,染锰4周PCNA阳性细胞率显著降低,染锰6周反而升高（P〈0．01）。各染锰组Ki-67总阳性细胞率显著降低,细胞核阳性细胞率显著升高（P〈0．01）。染锰剂量相同,6周与4周组比较,PCNA阳性细胞率显著升高,Ki-67总阳性细胞率显著降低,Ki-67细胞核阳性细胞率显著升高（P〈0．01）。染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,PCNA阳性细胞率和Ki-67总阳性细胞率均显著降低（P〈0．01）,Ki-67细胞核阳性细胞率在4周组和6周组分别显著升高和显著降低（P〈0．01）。结论15mg／kg氯化锰即可抑制大鼠生精细胞的增殖能力,PCNA和Ki-67互相结合可以更加准确地反映细胞周期。     

锰锌联合作用下大鼠生精细胞caspase-3和cyto-c的表达变化

目的研究锰和锌对生精细胞caspase-3、cyto-c表达的影响。方法健康雄性SD大鼠80只随机分为10组,空白对照组,ZnCl2对照组,15 mg.kg-1和30 mg.kg-1MnCl2组;15 mg.kg-1MnCl2＋ZnCl2组和30 mg.kg-1MnCl2＋ZnCl2组。锰组分别给予MnCl2.4H2O腹腔注射4周和6周;ZnCl2对照组给予100 mg Zn2＋.kg-1饲料口服;锰加锌组分别染锰4周后再给予含锌饲料口服。各组大鼠分别于第4周末和第6周末处死,免疫组化法检测睾丸caspase-3、cyto-c表达。结果与空白组比较,各锰组和锰加锌组caspase-3阳性细胞率均升高,cyto-c阳性细胞率均降低（P〈0.01）。与同剂量组比较,染锰6周caspase-3和cyto-c阳性细胞率分别较4周升高和降低（P〈0.01）。与同时间组比较,30 mg.kg-1组caspase-3和cyto-c阳性细胞率分别较15 mg.kg-1组升高和降低（P〈0.01）。与同剂量锰组比较,锰加锌组caspase-3和cyto-c阳性细胞率分别降低和升高。各组caspase-3和cyto-c阳性细胞率呈负相关（r=-0.817,P〈0.01）。结论 15 mg.kg-1和30 mg.kg-1氯化锰均可诱发大鼠生精细胞caspase-3和cyto-c表达,并随染锰时间和剂量的增加而分别增加和降低,存在一定的时间-效应和剂量-效应关系,摄入含锌100 mg.kg-1的食物可抑制锰所诱发的caspase-3表达。     

敌百虫亚急性染毒对雄性小鼠的生殖毒性作用

目的探讨有机磷农药敌百虫对雄性小鼠的生殖毒性作用。方法选用雄性ICR小鼠40只,随机分为低剂量染毒组（2mg／kg敌百虫）、中剂量染毒组（10mg／kg敌百虫）、高剂量染毒组（50mg／kg敌百虫）和对照组（等容积生理盐水）,每组10只进行灌胃染毒,每天1次,连续30d后脱椎处死小鼠,比较各组小鼠的精子活动度、精子畸形率以及睾丸组织的病理学改变,并分析染毒剂量与精子活动度和畸形率的关系。结果与对照组比较,各染毒组小鼠的精子活动度均下降,其中精子活动度Ⅲ、Ⅳ级所占比例明显上升,且高剂量染毒组精子活动度为I、Ⅱ级所占比例明显下降,差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。低剂量、中剂量和高剂量染毒组的精子畸形率分别为1．00％、2．06％和3．39％,均显著高于对照组的0．38％,差异有统计学意义（P〈0．05）。精子活动度和畸形率均与染毒剂量显著相关（P〈0．05,P〈0．05）。组织病理学观察发现,中剂量和高剂量染毒组小鼠的睾丸曲细精管中各级精母细胞数量减少。结论敌百虫暴露可对雄性小鼠产生一定的生殖毒性作用。     

母鼠孕期暴露双酚A对子代雌性大鼠性发育的影响

目的：研究母鼠孕期暴露双酚A（BPA）对子代雌性大鼠的性发育影响。方法：选择SPF级12周龄的健康成年SD大鼠,按雌∶雄为2∶1比例合笼。将妊娠大鼠20只,随机分成4组,于妊娠第5天至第20天,分别按0,10,50,250mg/（kg·d）进行灌胃染毒。母鼠正常分娩,雌性仔鼠出生28天开始观察阴道开口,第一次发情周期,此后连续观察动情周期变化,在第10周确定发情间期后处死动物。称量肝脏、肾脏、子宫、卵巢的重量,计算脏器系数;用ELISA法测血清中卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、孕酮（P4）、雌二醇（E2）及睾酮（T）水平。结果：各剂量组肝脏和肾脏重量与对照组相比有增加趋势,50 mg/kg组的肾脏重量和250 mg/kg组的肾脏系数有统计学意义（P〈0.05）;与对照组比较,10 mg/kg组阴道开口延迟,而250 mg/kg组阴道开口日龄提前,各剂量组阴道开口时体重增加（P〈0.05）;与对照组相比,BPA各剂量组子代雌性大鼠性周期均无明显影响;各剂量组与对照组相比,T水平明显下降（P〈0.05）;50mg/kg组与对照组相比,LH、FSH、E2水平明显减少（P〈0.05）,且P4水平有升高趋势;而250 mg/kg组上述指标与对照组比较差异无显著性（P〉0.05）。结论：母鼠孕期暴露BPA可能导致子代雌性大鼠下丘脑-垂体-性腺轴的调节功能障碍,对其性发育功能造成一定影响。     

丙泊酚对癫痫持续状态大鼠抑制作用的NMDA受体机制研究

目的观察丙泊酚对癫痫持续状态（SE）大鼠皮层NMDA受体亚型（2A,2B）表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为空白对照组（BLK组）、SE组、丙泊酚50mg／kg组（PPF组）、安定10mg／kg组（DZP组）、东莨菪碱10mg／kg组（SCOP组）及MK-801（2mg／kg）组。匹鲁卡品30mg／kg诱发SE模型,待SE出现后30min,各实验组分别腹腔注射丙泊酚等药物,BLK组和SE组腹腔注射等容量0．9％氯化钠注射液。24h后每组取4只断头取脑,快速剥离皮层提取组织蛋白。采用Western Blot法观察丙泊酚对SE大鼠发作24h后皮层NR2A、NR2B亚型表达的影响。结果SE发作后24h,SE组大鼠皮层NR2A、NR2B亚型表达与BLK组相比显著增加fP〈0．05）;PPF组NR2B表达显著降低（与SE组相比,P〈0．05）;NR2A亚型表达无明显变化。MK-801（2mg／kg）可显著降低皮层NR2A、2B亚型的表达（与SE组相比,P〈0．05）,但安定（10mg／kg）和东莨菪碱（10mg／kg）对NR2A和NR2B亚型表达无明显影响。结论丙泊酚可显著降低大鼠SE发作后皮层NR2B亚型表达。     

妊娠期染毒 PFOS 对子代成年雄性大鼠生殖系统的影响

目的：研究妊娠期染毒全氟辛烷磺酸盐（perfluorooctane sulfonate,PFOS）对子代成年雄性大鼠生殖系统的影响。方法：对妊娠第12天的SD大鼠采用灌胃方式染毒不同剂量PFOS（5、10mg／kg）。每天1次,连续8d。出生后第65（PDN56）天,检测子代成年雄性大鼠体质量及睾丸重量。采用实时荧光聚合酶链式反应检测睾丸间质细胞（adult Leydig cell,ALC）类固醇激素合成急性调节蛋白（steroidogenic acute regulatory protein,StAR）mRNA的相对表达量。结果：与对照组相比,5mg／kg剂量染毒组子体质量显著性降低（P〈0．001）,睾丸系数下降（P〈0．05）;睾丸组织中StAR mRNA的相对表达量下调（P〈0．05）。结论：妊娠期染毒PFOS可通过抑制ALC合成睾酮途径中StAR mRNA的表达水平,对子代成年雄性大鼠的生殖系统产生毒性作用。     

燃煤型氟中毒对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的：观察燃煤型氟中毒对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。方法：5月龄SD雄性大鼠18只,按体质量随机分为染氟组、染氟＋大豆组和对照组,各组大鼠自由饮用自来水（含氟〈0.5 mg/L）;各染氟组采用含氟量为69.33 mg/kg的煤烘玉米饲食,染氟＋大豆组的大豆重量比为20%,对照组采用含氟为9.37 mg/kg的常食玉米饲食,实验期间动物自由进食、进水;染氟第90天,处死大鼠,使用H-E染色法和TUNEL方法对大鼠睾丸切片进行染色,观察细胞凋亡情况,结果：染氟组生精细胞凋亡个数高于对照组[（278.17±25.47）个,（129±21.02）个,P〈0.05];染氟＋大豆组生精细胞凋亡个数高于对照组[（141.5±5.24）个,（129±21.02）个,P〈0.05];染氟＋大豆组生精细胞凋亡数低于染氟组[（141.5±5.24）个,（278.17±25.47）个],P〈0.05。结论：燃煤型氟中毒可造成大鼠生精细胞凋亡增加,增加营养后可有效减少氟中毒造成的生精细胞的凋亡。     

小檗碱抑制胰岛素抵抗-高血压大鼠心室重构作用

目的观察小檗碱（berberine,Ber）和卡托普利（captopril,Cap）对高糖-高盐-高果糖诱导胰岛素抵抗-高血压（IRH）模型大鼠血压、血糖、胰岛素抵抗和心室重构作用。方法 Sprague-Dawley大鼠,雌雄各半,除空白对照组食用标准饲料外,其余动物随机喂饲富含高盐（4%）、高脂肪（25%）和高蔗糖（10%）饲料,并交替饮用5%蔗糖-1%食盐水与6%果糖水造模8周;当造模动物出现高血压、糖耐量减退,即建立IRH病理模型。然后将大鼠随机分为模型对照、卡托普利（Cap）25 mg/kg和Ber 300 mg/kg、150 mg/kg两个剂量组;分别灌胃给药或蒸馏水,每天1次共4周,测定大鼠血压及血清胰岛素（Fins）、血糖（FSG）,并计算胰岛素敏感指数（ISI）;计算心脏重量系数（CMI）和心肌增殖系数（MPI）以及作左心室组织学检测。结果 IRH大鼠血压升高,FPG和Fins含量增高,ISI减弱,MPI升高,与正常对照组比较,差异有显著性（P〈0.05或P〈0.01）,以及左心室组织呈心肌肥厚、重构和纤维化等病理改变。Ber 300 mg和150 mg/kg或Cap处理IRH大鼠后,降低IRH大鼠血压和FSG,纠正高胰岛素血症,增强ISI,差异有高度显著性（P〈0.01）;降低MPI（P〈0.01）,以及不同程度地改善左心室组织的病理改变。结论 Ber和Cap能对抗IRH大鼠胰岛素抵抗、增强胰岛素敏感性、纠正高胰岛素血症,降低血糖,降低血压,抑制心室重构。Ber上述效应呈量效关系。