钙蛋白酶抑制剂3对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的探讨钙蛋白酶抑制剂3（MDL 28170）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的保护作用及机制。方法将新生7dSD大鼠随机分为对照组、HIBD组及钙蛋白酶抑制剂．3治疗组（MDL组）,分别于HI后6、24、72h取材,采用实时荧光定量PCR技术检测μ-calpain mRNA变化,免疫印迹法检测μ-calpain及caspase-3活性蛋白表达,TUNEL法观察大脑皮质凋亡细胞数;并计数HI后24h海马CA1区神经元死亡数。结果脑缺氧缺血后μ-calpain mRNA在6h即增高,24h达到高峰（P〈0．05）;μ-calpain蛋白质的活化片段76000与总片段80000比值6h即高于对照组（P〈0．05）,24h达到高峰（P〈0．01）,72h仍处于较高水平（P〈0．05）;caspase-3活性蛋白质在HI后24h达到高峰（P〈0．01）,72h降至对照组水平（P〉0．05）;损伤侧大脑皮质凋亡细胞随着时间延长逐渐增多,24h达到高峰,72h与对照组差异仍有统计学意义（P〈0．01）;24h时HIBD组CA1区神经元死亡数显著高于对照组（P〈0．01）。予MDL 28170干预后,MDL6h及24h组μ-calpain及caspase-3活性蛋白质表达、凋亡细胞数均较同时间点HIBD组减少（P〈0．05）,同时24h CA1区神经元死亡数明显减少（P〈0．05）;MDL28170虽然能降低μ-calpain mRNA的表达量,但与HIBD组相比差异不明显（P〉0．05）。结论HI后μ-calpain基因及蛋白质表达增加,参与了HIBD的发生;钙蛋白酶抑制剂-3可通过抑制μ-calpain及caspase-3蛋白质表达,对抗细胞坏死和凋亡,发挥脑保护作用。     

骨髓间充质干细胞移植改善缺氧缺血性脑损伤大鼠空间学习记忆的最佳时间

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)移植治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的最佳时间点.方法 体外培养rMSCs传代至4～5代,同时建立新生鼠HIBD模型,分别在HIBD后2、24、72、144 h进行腹腔注射移植,5周后行水迷宫行为学检测.结果 水迷宫实验中,HIBD后2 h移植组(A组)、HIBD后24 h移植组(B组)、HIBD后72 h移植组(C组)、HIBD后144 h移植组(D组)、假手术组(E组)、HIBD PBS对照组(F组)逃避潜伏时间组间比较,E组及各移植组逃避潜伏时间均明显低于F组(P＜0.05),A组低于B、C、D组(P＜0.05),D组低于B组、C组(P＜0.05).各组平台象限泳距占总泳距的比例组间比较,E组及各移植组均明显高于F组(P＜0.05),D组低于E组(P＜0.05)、高于B组和C组(P＜0.05).结论 rMSCs移植可明显改善HIBD大鼠的空间学习记忆功能,在HIBD后2 h进行移植效果较其他时间点好.     

缺氧缺血I生脑损伤新生大鼠脑神经细胞凋亡及脑组织中Rho GDP解离抑制因子和Bcl-2表达的变化

目的研究RhoGDP解离抑制因子（Rho GDP dissociation inhibitor 2,RhoGDI2）mRNA及Bcl-2mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）中的作用和机制。方法30只新生7日龄SD大鼠按照完全随机化方法分为假手术组及HIBD6h和48h组,每组10只。采用流式细胞仪检测脑细胞凋亡情况,并用Real—timeRT—PCR方法测定脑组织中RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平。结果（1）新生大鼠HIBD后48h结扎侧大脑半球脑水肿明显。（2）HIBD6h出现典型的凋亡细胞峰,细胞凋亡率为（1．40±0．12）％。HIBD48h凋亡峰更为明显,细胞凋亡率达到（15．86±0．98）％。缺氧缺血后与假手术组相比,差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）假手术组大鼠RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平较高（4．12±0．74、2．55±0．65）,在HIBD6h后二者表达开始下降（3．19±0．77、1．96±0．36）,48h降低更加明显（1．04±0．18、1．06±0．17）,与假手术组比较,HIBD各时间点RhoGDI2和Bcl-2mRNA的表达均明显降低,差异有统计学意义（P〈0．01）。（4）缺氧缺血后各时间点RhoGDI2mRNA的表达和Bcl-2mRNA的表达呈正相关（r=0．831,P〈0．05）。结论脑缺氧缺血后,随着凋亡的出现,RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平降低,提示RhoGDI2表达失衡可能通过Bcl-2参与新生大鼠HIBD中凋亡的发生。     

神经生长因子对新生鼠缺氧缺血性脑损伤神经修复作用的研究

目的研究神经生长因子（NGF）对新生鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后，神经干细胞巢蛋白（nestin）及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响，探讨其神经修复作用机制。方法7日龄新生SD大鼠84只，建立HIBD模型后，随机分为假手术组、缺氧缺血组及NGF干预组各28只。神经生长因子干预组腹腔内注射NGF（6000U／kgJd），缺氧缺血组同步注射等量生理盐水。采用免疫组化法检测NGF对新生大鼠HIBD后不同时间内Nestin及VEGF表达的影响。结果缺氧缺血性脑损伤后12、24h，3、7、14d，NGF干预组在大脑皮质、海马和室旁区的Nestin表达高于缺氧缺血组（P〈0．05），且高峰提前到3d。HIBD后即刻、3、12、24h及3d，NGF干预组在大脑皮质、海马区VEGF的表达高于缺氧缺血组（P〈0．05），且高峰提前到3h。结论NGF对HIBD具有神经修复作用可能是通过上调nestin及VEGF的表达而实现的。     

AQP-4 mRNA在新生鼠缺氧缺血损伤脑组织的表达及与脑水肿的关系探讨

目的 观察水通道蛋白4mRNA（aquaporin-4，AQP-4mRNA）在新生鼠缺氧缺血损伤脑组织的表达，探讨其变化及与脑水肿发生的可能关系。方法 健康7日龄SD大鼠共240只，随机分为对照组120只和缺氧缺血性脑损伤模型组（HIBD组）120只。HIBD组经右侧颈总动脉结扎后，吸入8％O21h，建立HIBD模型。对照组仅行假手术，不予颈总动脉结扎和缺氧。两组均于HIBD模型制成后0、6、24、48h和72h分别处死动物（各时间点动物24只），进行脑含水量观察，ReahimePCR检测脑组织AQP4mRNA表达。结果 HIBD组6、24、48h和72h脑组织含水量均较对照组增加，差异有统计学意义（P〈0．05）；与对照组比较，HIBD组脑组织AQP4mRNA表达在48h内呈下降趋势，72h出现恢复，但仍低于对照组（P〈0．05）。结论 AQP4mRNA在脑组织表达下降可能与脑水肿的发生有关，我们推测AQP4可能参与了HIBD时脑水肿的调节机制。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠核因子κB表达与脑细胞凋亡的关系

目的观察核因子κB（NF—κB）在缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑细胞凋亡中的表达，探讨其HIBD后NF—κB与细胞凋亡的关系。方法新生7日龄SD大鼠48只，随机分为2组：假手术组和缺氧缺血（HI）模型组，各24只。HI组大鼠采用Rice方法建立新生大鼠HIBD模型，分别于手术后6、24、48、72h取脑组织切片，用免疫组织化学方法检测NF—κB在海马区的表达、TUNEL方法检测神经细胞凋亡。假手术组不作缺氧缺血处理，采用同样方法检测NF—κB。结果假手术组海马区有少量NF—κB表达，且有少量凋亡细胞，各时间点无明显变化（Pa〉0．05）；HI组NF—κB的表达在6h后开始增加，48h达高峰，并持续至72h（P〈0．05），与假手术组相比较差异有统计学意义（Pa〈0．05）；细胞凋亡在6h即开始增加，在24、48、72h逐渐增加，随时间变化差异有统计学意义（Pa〈0．05），与假手术组相比差异有统计学意义（Pa〈0．05）；直线相关回归分析HI组NF—κB表达与细胞凋亡呈显著正相关（各时点的r=0.478，0.552，0.641，0.627 Pa〈005．缩诊HTBn后NF—κB在海马区的持续活化对促进神经细胞凋亡起重要作用。     

持续去甲肾上腺素输注对早期脓毒症大鼠肾脏的保护作用及其机制研究

目的探讨持续去甲肾上腺素输注对早期脓毒症大鼠肾脏是否存在保护作用及其可能机制。方法30只SPF级健康雄性SD大鼠采用随机数字表法随机分为5组（6只／组）。对照组：腹腔注射生理盐水,并开始持续输注生理盐水1ml／h。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）组和低剂量、中剂量和高剂量去甲肾上腺素组：腹腔注射LPS10mg／kg,LPS组持续输注生理盐水1ml／h,低、中、高剂量组分别持续输注0．06、0．30、0．60μg／（kg·min）去甲肾上腺素溶液1ml／h,均持续输注24h处死大鼠。检测2、6h大鼠血清炎症因子肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α、白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-6及IL-10水平,24h大鼠血清C-反应蛋白（CRP）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平,膜电位和氧化应激相关指标,电镜观察肾脏线粒体肿胀程度,显微镜观察肾脏病理变化。结果与对照组比较,2hLPS组TNF—α浓度为（2203．3±1028．7）pg／ml、IL-1β（2214．5±457．0）pg／ml、IL-6（7784．7±248．2）pg／ml及IL-10（1076．1±368．4）pg／ml,均明显升高（P〈0．05）;24hCRP（0．35±0．24）mg／L,Cr（30．8±11．5）μmol／L,BUN（7．7±1．8）mmol／L,一氧化氮（1057．4±172．9）μmol／gprot,均明显升高（P〈0．01）,肾脏线粒体膜电位0．0464±0．0185,明显下降（P〈0．01）。与LPS组比较,2h低剂量组TNF-d浓度为（506．8±301．7）pg／ml、IL-1β（415．6±178．0）pg／ml及IL-α（381．7±171．0）pg／ml,均明显下降（P〈0．05）,24hBUN下降为（5．2±1．4）mmol／L（P〈0．05）,线粒体膜电位上升为0．3474±0．1526（P〈0．05）;2h中剂量组TNF-α浓度为（323．9±227．9）pg／ml、IL-1β（700．0±246．2）pg／ml,IL-10（282．6±134．4）pg／ml,均明显下降（P〈0．05）,24hCRP下降为（0．17±0．08）mg／L（P〈0．05）,线粒体膜电位上升为0．3775±0．1437（P〈0．05）;高剂量组2hTNF-α浓度为（378．7±89．8）pg／ml、IL-1β（945．7±264．4）pg／ml,明显下降（P〈0．05）,24hCRP（0．19±0．12）mr／L、Cr（23．2±3．4）μmol/L均明显下降（P〈0．05）。电镜观察显示LPS组线粒体包膜模糊及基质空泡化、凝固,显微镜观察显示LPS组肾组织间隙水肿,单核-巨噬细胞浸润,肾小球皱缩,肾小管上皮细胞肿胀、空泡变性等,中剂量组病理损伤明显减轻。结论持续去甲肾上腺素输注对早期脓毒症大鼠肾脏有一定的保护作用,其机制与降低炎症因子风暴的水平、减轻氧化应激损害、改善线粒体功能相关。     

新生大鼠缺氧缺血性脑病模型中己酮可可碱的干预作用研究

目的观察不同时间给予己酮可可碱（pentoxifylline，PTX）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）模型的影响。方法建立新生大鼠HIBD模型，120只出生7d的Wistar大鼠随机分为假手术（Sham）组、HIBD模型组和3种PTX（50mg／kg腹腔注射）给药组，即缺血末均给药（I＋PTX）组、缺氧末给药（H4-PTX）组及缺血和缺氧末均给药（I，H＋PTX）组，各组均于缺血缺氧处理后72h取出左脑，测定脑组织水含量、大脑皮层神经组织游离钙离子浓度、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮合酶（NOS）及一氧化氮（NO）。结果HIBD模型组与Sham组相比，脑组织含水量、游离钙离子浓度、MDA、NOS及NO水平显著升高（均P〈0．01），SOD水平明显降低（P〈0．01）。3种PTX给药组与HIBD模型组相比，脑组织含水量、游离钙离子浓度、MDA、NOS及NO水平均显著降低（均P〈0．01），SOD水平明显升高（P〈0．01）。以上作用尤以（I，H＋PTX）组明显。结论PTX对新生大鼠缺氧缺血后脑组织有保护作用，其机制可能与PTX改善能量代谢及减少局部细胞毒性物质有关。     

高压氧干预新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的时间窗研究

目的探讨新生大鼠缺氧缺血性（HI）脑损伤后HBO干预的最佳时间窗。方法84只7日龄SD大鼠随机分为7组：假手术组（sham）、HI组、HI（1h）＋HBO组、HI（3h）＋HBO组、HI（6h）＋HBO组、HI（12h）＋HBO组、HI（24h）＋HBO组,应用单次高压氧（2．5ATA,1．5h）进行干预。观察大鼠HI后48h皮质区和海马CA1区神经元密度的改变以及大鼠在5周龄的感觉运动功能和6周龄的记忆功能的改变。结果HI后48h,HI（1h）＋HBO组、HI（3h）＋HBO组、HI（6h）＋HBO组3组大鼠皮质区和海马CAl区的神经元密度明显高于HI组（P〈0．05）;HI（12h）＋HBO组和HI（24h）＋HBO组与HI组比较差异没有统计学意义（P〉0．05）。在5周龄的感觉运动功能测试中,HI（1h）＋HBO组、HI（3h）＋HBO组、HI（6h）＋HBO组3组在握力试验和转杆试验中,各组的抓握时间和停留时间均明显长于HI组（P〈0．05）;而HI（12h）＋HBO组和HI（24h）＋HBO组与HIBD组比较,差异没有统计学意义（P〉0．05）。在6周龄的记忆功能测试中,HI（1h）＋HBO组、HI（3h）＋HBO组、HI（6h）＋HBO组3组在测试期的跳台潜伏期明显长于HI组（P〈0．05）,而HI（12h）＋HBO组和HI（24h）＋HBO组与HI组比较,差异没有统计学意义（P〉0．05）。结论单次高压氧（2．5ATA,1．5h）治疗新生大鼠HIBD的最佳时间窗在HIBD后的6h之内。     

高压氧对新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型脑组织神经细胞凋亡及超氧化物歧化酶和脂质过氧化物的影响

目的探讨高压氧（HBO）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型脑组织神经细胞凋亡和超氧化物歧化酶（SOD）、脂质过氧化物（MDA）的影响。方法新生7d龄健康SD大鼠随机分为4组：空白对照组（n=68），假手术组（分离左颈总动脉后不结扎直接缝合皮肤，n=66），HIBD组（模型制作采用经典的Rice法，n=60），HBO组（HIBD后行HBO治疗，1h／次／d，最长治疗7d，n=66）。TUNEL试剂盒检测脑组织凋亡的神经细胞，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力（nU／m1）和化学比色法测定MDA含量（μmol／L）。结果（1）缺氧缺血后不同时间HIBD组皮质和海马神经细胞凋亡明显增多，24h达高峰后逐渐下降；HBO组凋亡细胞数较HIBD组明显减少，但仍较空白对照组和假手术组高，差异有统计学意义（P〈0．05）；（2）缺氧缺血后HIBD组SOD含量下降，HBO治疗后SOD的含量较HIBD组升高，且随着治疗时间的延长SOD的水平逐渐升高，24h达高峰，然后逐渐下降，各组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；（3）缺氧缺血后HIBD组MDA含量明显升高，18至24h达高峰，随着时间的推移逐渐下降；HBO治疗后MDA含量较HIBD组明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HBO治疗可减轻HIBD后神经细胞凋亡，机制可能与HBO诱导脑组织SOD的表达，增强组织的抗氧化应激损伤有关。     

白藜芦醇甙对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠学习记忆和海马突触素表达的影响

目的 探讨白藜芦醇甙(PD)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠空间学习记忆的影响及海马CA1区突触素表达的变化.方法 7日龄SD大鼠37只随机分为假手术组、HIBD自然恢复组和PD治疗组,采用经典的Rice方法制备缺氧缺血性脑损伤动物模型,分别在生后28 d(缺氧缺血后21 d)进行Morris水迷宫测试,评价其学习记忆能力,用免疫组织化学方法来观察各组大鼠海马CA1区突触素的变化.结果 HIBD后3周Morris测验,假手术组、HIBD自然恢复组和PD治疗组大鼠4 d的平均逃避潜伏期分别为(39.55±8.08)s、(52.37±8.03)s、(43.29±7.63)s,PD治疗组大鼠逃避潜伏期明显短于HIBD自然恢复组(P＜0.05),且3组大鼠在4 d内的逃避潜伏期均逐渐变短;3组大鼠穿过平台次数分别为(5.29±2.62)次、(2.36±1.80)次、(4.25±1.66)次,PD治疗组大鼠穿过平台次数显著多于HIBD自然恢复组(P＜0.05);3组大鼠在目标象限内游泳时间分别为(15.74±3.85)s、(10.63±3.66)s、(14.32±2.52)s,PD治疗组在目标象限内游泳时间明显多于HIBD自然恢复组(P＜0.05).3组大鼠海马CA1区突触素的平均密度值分别为0.1674±0.0111、0.261 2±0.0323和0.295 2±0.044 3,PD治疗组大鼠海马CA1区突触素表达明显多于HIBD自然恢复组(P＜0.05).结论 白藜芦醇甙能减轻新生大鼠缺氧缺血引起的脑损伤,提高新生大鼠缺氧缺血后远期的学习记忆能力.这种保护作用与白藜芦醇甙能促进HIBD后神经元重塑的突触素表达有关.     

药物干预幼大鼠缺氧缺血性脑损伤与p53蛋白表达的研究

目的通过检测缺氧缺血性脑损伤(HIBD)幼大鼠脑组织中p53蛋白的表达和一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,探讨HIBD的发病机制;了解神经节苷酯(GM1)和胞二磷胆碱干预对HIBD的影响。方法80只Wistar幼大鼠随机分四组;对照组、缺氧缺血组、GM1组、胞二磷胆碱组。17日龄制作HIBD模型,24 h后处死检测脑组织中p53蛋白的表达和NO、NOS、SOD含量及组织形态学的变化。结果缺氧缺血组NO、NOS含量高于其他三组(P<0.05);缺氧缺血组与胞二磷胆碱组SOD含量低于对照组和GM1组(P<0.05);缺氧缺血组p53蛋白表达高于其他三组(P<0.01),GM1和胞二磷胆碱组p53蛋白表达高于对照组(P<0.01);组织形态学改变显示,缺氧缺血组变性、坏死严重,GM1组与胞二磷胆碱组次之,对照组正常。结论NO和自由基引起的组织损伤可能诱导p53蛋白表达导致HIBD。GM1和胞二磷胆碱能改善脑组织NO、NOS、SOD含量和p53的表达,提示GM1和胞二磷胆碱对HIBD有一定的保护作用。     

人脐带间充质干细胞移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的 探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的保护作用及可能机制。方法 10 日龄 Sprague-Dawley 大鼠随机分为假手术组、HIBD 组和 MSCs 组,建立新生大鼠HIBD 模型,建模后 24 h MSCs 组侧脑室注入 hUC-MSCs。移植后 24、48 h 应用 TUNEL 及 Western blot 分别检测细胞凋亡及 Caspase-3 的表达;移植后 1、2、3 周应用 Longa 评分评价大鼠的神经行为,免疫荧光观察 hUC-MSCs 的存活、分化情况。结果 移植后 24、48 h,MSCs 组大鼠的细胞凋亡及 Caspase-3 的表达较 HIBD 组减少（PPPP结论 hUC-MSCs 移植治疗新生大鼠 HIBD 时,早期可抑制 Caspase-3的表达,减少细胞凋亡;后期存活的 hUC-MSCs 可分化为神经样细胞,并促进内源性神经样细胞的分化,发挥脑保护作用。     

米诺环素对未成熟新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的作用

目的 研究米诺环素(minocycline,MN)对未成熟新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的作用.方法 生后2 d(P2)Sprague-Dawley(SD)大鼠192只,随机分成正常对照组、假手术组、HIBD组、HIBD+MN组,每组48只.通过结扎左侧颈总动脉及8%氮氧混合气缺氧4 h,制作未成熟新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型.假手术组只分离左侧颈总动脉,正常组未予任何处理.HIBD+MN组动物于HI后腹腔注射米诺环素45 mg/kg,此后2 d每24小时腹腔注射1次.HI后3 d,1、2、4周,行常规HE染色及病理评分,HI后3 d及2周,行抗O4、抗O1免疫组化及髓鞘脂碱性蛋白(MBP)免疫组化.HI后4周行神经行为学检测.结果 HIBD组病理可见脑室周围白质损伤,HIBD+MN组病变较轻;O4阳性细胞计数:HIBD+MN组与正常组差异无统计学意义,P＞0.05,而HIBD组较正常组,假手术组、HIBD+MN组减少,差异有统计学意义(23.67±12.00 vs 52.89±10.68,39.28±11.78,41.63±8.41,P＜0.05);O1阳性细胞计数:正常组,假手术组、HIBD组、HIBD+MN组组间差异无统计学意义,P=0.093;MBP阳性纤维束计数:HIBD+MN组与正常组、假手术组差别有统计学意义,P＜0.05,而HIBD组较正常组、假手术组、HIBD+MN组减少,差异有统计学意义(14.71 ±7.42 vs 36.67±6.50,35.50±3.24,26.33±5.92,P＜0.05);HIBD组HI后4周出现明显远期行为学异常,在斜坡试验、悬吊试验及Cylinder试验中,HIBD+MN组与正常组、假手术组差别无统计学意义,P＞0.05;HIBD组与正常组、假手术组及HIBD+MN组差异有统计学意义,P＜0.05;在旷场试验中,HIBD+MN组与HIBD组差异无统计学意义,P=0.772,两组与正常组,假手术组差异均有统计学意义,P＜0.05.结论 米诺环素对未成熟新生大鼠缺氧缺血性脑损伤有早期及远期保护作用.     

脑源性神经营养因子及神经干细胞移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究

目的 观察脑源性神经营养因子(BDNF)及神经干细胞(NSCs)联合移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的治疗效果.方法 取新生24 h的Wistar大鼠海马NSCs进行培养、鉴定.选7日龄Wistar大鼠制备HIBD动物模型,模型制备后7 d行损伤侧侧脑室移植.将实验大鼠随机分为6组:正常组、模型组、假移植组、NSCs移植组、BDNF组、BDNF+NSCs移植组(联合移植组).移植后4周进行功能实验,取脑组织进行免疫组化免疫荧光检测.结果 从新生大鼠海马可成功培养出NSCs.Y迷宫实验结果:NSCs移植组达到学会的次数及正确记忆次数(163±11.60,5.00±1.13)n;BDNF组(150.00±8.94,5.17±1.47)n;BDNF+NSCs移植组(111.25±13.56,6.23±1.60)n.悬吊实验结果:NSCs移植组平均(30.10±11.8)s;BDNF组(36.25±10.98)s;BDNF+NSCs移植组(43.6±10.56)s.斜坡试验结果:NSCs移植组(20.3±8.25)s;BDNF组(14.33±2.88)s;BDNF+NSCs移植组(11.17±2.48)s.表明联合移植组大鼠学习记忆能力及神经功能与NSCs移植组比较明显改善(P＜0.05),而NSCs移植组大鼠学习记忆能力及神经功能与HIBD组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).联合移植组损伤侧额叶皮层、海马存活的NSCs数量(9.31±0.71个,10.10±1.65个)与NSCs移植组(3.33±0.24个,4.22±0.33个)比较差异具有统计学意义(P＜0.01),且NSCs分化为神经元的比例明显增多,与NSCs移植组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BDNF与NSCs联合移植较单独NSCs移植对HIBD有更好的疗效.     

雄激素对HIBD新生大鼠脑保护作用的量效关系及副作用研究

目的 探讨雄激素对HIBD新生大鼠脑保护作用及量效关系,初步揭示雄激素的远期副作用.方法 3日龄SD大鼠72只随机分为:假手术组(n=8)、HIBD对照组(n=32)、雄激素组(n=32).雄激素组和HIBD对照组各分为4个剂量组,每个剂量组8只.3日龄时雄激素组每个剂量组每只大鼠分别腹腔注射30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg和240 mg/kg的丙酸睾酮,HIBD对照组每个剂量组每只大鼠腹腔注射相应毫升数的花生油,每日1次,连续3 d.7日龄时雄激素组和HIBD对照组制作HIBD模型.所有动物饲养至成年后进行水迷宫实验以测定空间学习记忆能力;成年雌鼠每日做阴道涂片,明确每只大鼠的完整发情周期,对于处于发情期的雌鼠及时与雄鼠合笼,次日晨雌鼠做阴道细胞涂片检查,并观察有无阴栓,以查到精子或观察到阴栓作为受孕成功标志,记录各组雌鼠的妊娠率以及妊娠胚胎数目,进行统计学处理,比较组间差异.计算成年雄鼠睾丸系数和附睾系数.结果 水迷宫实验中,HIBD对照组较假手术组平均潜伏期(27.71±3.19)s和首次穿越平台时间(5.34±0.83)s明显延长,HIBD对照组较假手术组穿越目标象限次数(18.88±1.89)明显减少,均有统计学意义(P均＜0.01,P=0.0005＝.雄激素组中各相应剂量组平均潜伏期(34.89±3.68,33.71±3.38,33.84±3.45,35.43±2.43)和首次穿越平台时间(5.39±1.51,6.28±2.07,5.09±1.61,5.85±0.87)较HIBD对照组明显缩短,穿越目标象限次数(12.75±2.05,14.88±3.36,14.88±2.36,14.38±1.60)较HIBD对照组明显增加,均有统计学意义(P均＜0.01,P=0.0001＝.雄激素组各剂量组以上指标相比均无统计学意义(P均＞0.05,P=0.159).雄激素各剂量组雄性大鼠睾丸系数(0.89 ±0.07,0.92±0.08,0.88±0.11,0.87±0.09)和附睾系数(0.25±0.02,0.24±0.05,0.26±0.04,0.23 ±0.05)与假手术组和HIBD组相比,差异均无统计学意义(P＞均0.05,P=3.207),雄激素组各剂量组间相比无统计学差异(P＞0.05,P=6.663);雄激素各剂量组雌性大鼠的怀孕率(均100%)及妊娠胚胎数(14.52±3.34,14.69±2.28,14.98±2.67,15.38±3.07)与假手术组和HIBD组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05,P=5.085).结论 HIBD对大鼠的空间学习记忆能力有影响,可降低其空间学习记忆能力.雄激素干预后可明显降低HIBD对大鼠学习记忆能力的影响.雄激素的早期干预对成年后大鼠的生殖能力无影响.

Abstract：

Objective To explore brain-protective effect of androgen, its dose-effect relationship and long-term adverse reaction. Method Seventy two 3-day-old SD rats were randomized into androgen group( n = 32) , HIBD model group ( n = 32 ) and sham operated group ( n = 8 ). The androgen group and HIBD model group were further randomized into 30 mg/kg group, 60 mg/kg group, 120 mg/kg group and 240 mg/kg group, respectively. In androgen group and HIBD group, every rat was given testosterone or peanut oil, one time a day. Three days later, HIBD model was established by occlusion of the left common carotid artery and inhalation of 8% oxygen plus 92% nitrogen for 2.5 hours. Adult rats' ability of learningand memory was determined by water maze test. Escape latencies were recorded and analyzed by statistics.Vaginal cells of all female rats were examined everyday for identifying their estrous cycle. Female rats were allowed to live with normal adult male rats if the female rats were in estrous period. Vaginal cells were examined everyday until sperm was seen, which was the signal of gestation. Pregnancy rate and the number of embryos were recorded and analyzed by statistics. Acropetal coefficient was calculated. The testes and epididymis were taken from adult male rats, histopathological sections were made, and the structure of testis and epididymis were studied under light microscope. Result In Morris experiment, escape latencies (EL)of HIBD group were much longer than those of sham operation group( 27.71 ± 3.19)s, time of first enter target ( 1st ET) was later than that of sham operation group(5.34 ±0.83)s, times of target cross (TC) was less than that of sham operation group ( 18.88 ± 1.89 ) ( P ＜ 0.01, P = 0. 0005 ). EL of androgen group (34.89 ± 3.68,33.71 ± 3.38,33.84 ± 3.45, 35.43 ± 2.43 ) were much shorter than that of HIBD group,1st ET (5.39 ± 1.51,6.28 ±2.07,5.09 ± 1.61, 5.85 ±0.87)was earlier than that of HIBD group, TC ( 12.75 ± 2.05,14.88 ± 3.36,14.88 ± 2.36,14.38 ± 1.60) was more than that of HIBD group ( P ＜ 0.01,P=0.0001). Among the four doses groups of androgen group, EL, 1st ET and TC had no statistical significance (P ＞0.05, P =0.159). There were no statistical significance between male rats of androgen group [Testes acropetal coefficient ( 0.89 ± 0.07,0.92 ± 0.08, 0.88 ± 0.11,0.87 ± 0.09 ), epididymis acropetal coefficient ( 0.25 ± 0.02,0.24 ± 0.05,0.26 ± 0.04,0.23 ± 0.05 )], HIBD group and sham operation group( P ＞ 0.05, P = 3.207 ). Among the four doses groups of androgen group had no statistical significance ( P ＞ 0.05, P = 6.663 ). There were no statistical significance between female rats of androgen group( pregnancy rate, 100%; times, 14.52 ± 3.34,14.69 ± 2.28,14.98 ± 2. 67, 15.38 ± 3.07 ), HIBD group and sham operation group in pregnancy rate and times. Conclusion The intellectual ability of rats decreased after HI. Androgen could reduce the effect of HI on intellectual ability. Androgen had no adverse reaction to the reproductive capacity of adult rats.     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤大鼠海马突触超微结构及突触素表达的影响

目的 探讨高压氧(HBO)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马CA3区神经元突触超微结构和突触素(p38)表达的影响.方法 按Bjelke法制作HIBD新生大鼠动物模型,随机分为HIBD组、HIBD+HBO组、单纯HBO组和对照组四组,每组10只.HBO组大鼠于术后24 h开始给予2ATA的高压氧治疗,1 h/d,持续14 d.于大鼠4周龄时采用水迷宫试验检测各组大鼠的学习记忆功能,而后取大鼠海马组织通过透射电镜观察各组海马CA3区锥体神经元超微结构,免疫组化和图像分析技术检测p38的表达.结果 HIBD组大鼠学习记忆能力[(15.5±4.9)次]明显低于对照组[(10.6±3.4)次](P<0.01),经HBO干预后,测试成绩明显提高[(11.3±2.6)次],与对照组间差异无统计学意义(P>0.05).与对照组比较,HIBD组海马CA3区锥体细胞见部分核膜消失、线粒体嵴模糊、神经元突触间隙增宽,突触前囊泡减少,突触后致密物变薄;HIBD+HBO组神经元和突触无明显异常.HIBD组海马CA3区始层、辐射层、腔隙分子层及齿状回分子层突触素光密度值(0.41±0.19、0.21±0.11、0.08±0.03、0.38±0.16)明显低于HIBD+HBO组(0.77±0.17、0.67±0.16、0.46 ±0.13、0.86±0.14)和对照组(0.82±0.16、0.70 ±0.16、0.53±0.15、0.91±0.17)(P<0.01),而HIBD+HBO组和对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 高压氧发挥治疗作用的机制可能与阻止或减轻HIBD后突触超微结构的损伤、促进突触的重建有密切关系.     

缺氧诱导因子-1α及下游因子在缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺内的表达研究

目的 通过了解缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、内皮素-1（ET-1）及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的mRNA及蛋白质在缺氧性肺动脉高压（HPH）新生大鼠肺组织中的表达以及和肺动脉压力的关系,探讨三种因子在HPH发病机制中的作用.方法 建立HPH新生大鼠模型;分别在缺氧3、5、7、10、14、21天检测平均肺动脉压力（mPAP）;通过RT-PCR、免疫组织化学和Western blot方法分别对肺组织中上述三种因子的mRNA、蛋白质表达强度及蛋白质表达量进行分析;进行三因子和肺动脉压力的相关性分析.结果 缺氧3、5、7、10天HIF-1 αmRNA及蛋白质表达强度均明显高于对照组（P＜0.05）;缺氧5、7天其蛋白质表达量明显高于对照组（P＜0.05）.缺氧3天ET-1mRNA表达明显高于对照组（P＜0.05）;缺氧3、5、7天ET-1蛋白质表达强度及蛋白质表达量均高于对照组（P＜0.05）,缺氧10天其蛋白质表达量仍高于对照组（P＜0.05）.缺氧3、5、7天iNOSmRNA及蛋白质表达均高于对照组（P＜0.05）.缺氧组在缺氧21天内HIF-1α表达总体与mPAP变化呈正相关（P ＜0.001）;缺氧7天内ET-1、iNOS表达总体与mPAP变化呈正相关（P＜0.05）.结论 HIF-1α、ET-1和iNOS在HPH新生大鼠肺组织中表达增加,与肺动脉压力呈正相关,三种因子在该病发病机制中可能具有重要作用.