内源性急性肺损伤大鼠模型的建立

目的 建立大鼠肺内源性急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)模型.方法 大肠杆菌[O111B4,(4.0～6.0)×1012 CFU/L]3 ml/kg气管注射制作大鼠肺内源性ALI模型.分别于注射大肠杆菌后12、24、36、48、72 h共5个时间点给予机械通气,监测氧合指数(PaO_2/FiO_2)及胸肺动态顺应性(Cdyn).肺组织常规固定进行病理学检查.结果 12、24、36、48、72 h大鼠PaO_2/FiO_2分别为(30.71±7.95)kPa、(21.66±5.34)kPa、(21.09±4.75)kPa、(25.01±8.78)kPa、(33.82±8.02)kPa.均低于正常组(63.82±3.03)kPa(P＜0.01).12、24、36、48、72 h大鼠Cdyn分别为(4.23±0.13)ml/(kg·kPa)、(4.19±0.96)ml/(kg·kPa)、(4.28±0.69)ml/(kg·kPa)、(4.44±0.62)ml/(kg·kPa)、(4.58±0.35)ml/(kg·kPa),均低于正常组(8.16±0.78)ml/(kg·kPa)(P＜0.01).12、24、36、48、72 h大鼠ALI发生率分别为71.4%、100%、100%、83.3%、57.1%;ARDS发生率分别为28.6%、85.7%、83.3%、66.7%、14.3%.病理学改变方面,随着感染时间延长,由肺内少量渗出液到肺泡壁明显水肿.肺泡腔内出现大量渗出液和炎症细胞,可见透明膜形成以及严重肺泡萎陷,但在72 h炎症已明显减轻.结论 本实验经气管滴入大肠杆菌建立了肺内源性ALI/ARDS动物模型,分时间点观察了病情演变,为有效利用动物模型提供了资料.     

急性肺损伤新生大鼠肺组织水通道蛋白5的变化及意义

目的 探讨早期急性肺损伤(ALI)肺组织水通道蛋白5(AQP 5)的变化及意义.方法 70只新生SD大鼠随机分为生理盐水对照组及内毒素(LPS)急性肺损伤组(LPS组,7个亚组).LPS组新生大鼠腹腔注射5 mg/kg LPS,各亚组分别在注射后0.5、1、2、4、8、16 h和24 h处死,收集肺组织行病理学观察及测肺湿/干重比值,用免疫印迹法测肺组织AQP 5的表达,观察其动态变化.结果 注射LPS后0.5 h病理可见针尖样肺出血,随时间延长,肺出血从局灶性向弥漫性发展;注射后2、4 h新生大鼠肺湿/干重比值较对照组增高(P＜0.05),之后回落;注射后0.5 h,肺组织AQP 5表达开始下调,1～2 h达到最低,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),随后AQP 5表达逐渐升高,8 h时AQP 5表达接近正常水平,8 h后又出现下调直至24 h,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 新生大鼠ALI早期即出现明显的AQP5表达下调,并与肺组织湿/干重比值呈负相关,可能是导致肺泡水肿的重要因素之一.     

内毒素致新生大鼠急性肺损伤IL-18的变化

目的 探讨内毒素致新生大鼠急性肺损伤与IL-18水平的关系.方法 内毒素5 mg/kg腹腔注射7日龄SD新生大鼠致急性肺损伤模型,同时设腹腔内注射生理盐水对照组,每组12只.注射后1、4、8 h采集血,1、4 h采集肺组织,检测血浆,肺组织匀浆IL-18水平.结果 内毒素注射后新生大鼠1 h,血浆IL-18水平就显著上升(6.38±1.62)pg/ml,4 h达到高峰(34.28±17.89)pg/ml,8 h后明显回落(14.61±2.16)pg/ml,仍高于生理盐水对照组(1.63±1.18)pg/ml;4 h组肺组织匀浆IL-18水平(508.96±105.38)pg/ml显著高于1 h组(346.08±21.23)pg/ml(P＜0.01),且肺组织匀浆IL-18水平高于同时点血浆IL-18水平(P＜0.01).结论 IL-18是一种早期的致炎因子,在急性肺损伤的发生中起重要的作用,可作为急性肺损伤的诊治指标之一.     

小剂量糖皮质激素对大鼠肺内源性急性肺损伤的保护作用

目的 观察小剂量氢化可的松对大肠埃希菌导致的大鼠肺内源性急性肺损伤(ALI)的保护作用.方法 大肠埃希菌气管注射制作大鼠肺内源性ALI模型,设氢化可的松干预组(HC组)、模型对照组(C组)及正常对照组(N组).给药后12、24、36 h予机械通气,监测血压、血气、胸肺动态顺应性(Cdyn),计算肺指数,测支气管肺泡灌洗液(BALF)总蛋白含量及IL-8、IL-10、TNF-α浓度.结果 HC组各时间点血压均明显高于C组(P<0.05).HC组病死率为21%,与C组(23%)相比差异无显著性(P>0.05).HC组12 h肺指数为(0.333±0.082)%,明显低于C组[(0.432±0.137)%].HC组24、36 h BALF总蛋白含量为(874.55±426.97) mg/L、(735.95±244.33) mg/L,明显低于C组[(1 468.52±433.38) mg/L、(1 350.95±681.66) mg/L];HC组BALF中IL-8浓度[(69.66±13.07) ng/L、(61.49±15.27) ng/L]明显低于C组[(91.37±24.59) ng/L、(98.97±17.77) ng/L];HC组36 h BALF中IL-10浓度为(173.92±38.28) ng/L,明显高于C组[(136.46±34.00) ng/L];HC组12、24、36 h BALF中TNF-α浓度[(343.13±50.19) ng/L、(277.92±84.51) ng/L、(305.87±61.59) ng/L]均明显低于C组[(467.51±76.09) ng/L、(360.12±34.69) ng/L、(375.26±25.79) ng/L].结论 单次小剂量糖皮质激素治疗大肠埃希菌导致的大鼠肺内源性ALI能维持血压稳定,可短时间减轻肺水肿,抑制促炎因子的释放.     

内毒素致新生大鼠急性肺损伤IL-18的变化

目的探讨内毒素致新生大鼠急性肺损伤与IL-18水平的关系。方法内毒素5mg/kg腹腔注射7日龄SD新生大鼠致急性肺损伤模型,同时设腹腔内注射生理盐水对照组,每组12只。注射后1、4、8h采集血,1、4h采集肺组织,检测血浆,肺组织匀浆IL-18水平。结果内毒素注射后新生大鼠1h,血浆IL18水平就显著上升(6.38±1.62)pg/ml,4h达到高峰(34.28±17.89)pg/ml,8h后明显回落(14.61±2.16)pg/ml,仍高于生理盐水对照组(1.63±1.18)pg/ml;4h组肺组织匀浆IL-18水平(508.96±105.38)pg/ml显著高于1h组(346.08±21.23)pg/ml(P<0.01),且肺组织匀浆IL-18水平高于同时点血浆IL18水平(P<0.01)。结论IL18是一种早期的致炎因子,在急性肺损伤的发生中起重要的作用,可作为急性肺损伤的诊治指标之一。     

抗氧化剂对急性肺损伤大鼠肺表面活性物质的影响

目的 探讨急性肺损伤(ALI)时血中中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、肺组织肺表面活性物质蛋白A(SP-A)的变化及抗氧化剂的影响效应.方法 健康、成熟Wistar大鼠60只随机均分为2组,模型组和治疗组,2组均以大肠杆菌腹腔注射建立ALI动物模型.治疗组在注射大肠杆菌30 min后,经大鼠尾静脉注射还原型谷胱甘肽.分别于注射大肠杆菌后3、6、12 h测定血中NE及肺组织SP-A的变化.结果 模型组注射大肠杆菌后3 h出现ALI症状,6 h更为明显,12 h口吐粉红色分泌物.肺组织大体病理检查可见双肺有明显水肿及出血点.治疗组3h无明显变化,6h呼吸稍促,12h肺组织仅轻度水肿.治疗组3、6、12 h测得血中NE水平低于模型组,在6、12 h差异有显著性(P<0.05);3、6、12 h测得肺组织SP-A阳性表达细胞数均高于模型组,差异均有显著性(P<0.05).结论 ALI时肺表面活性物质功能失常是继发性变化,其中原因之一就是SP-A被降解,应用抗氧化剂--还原型谷胱甘肽后可有效抑制NE分解细胞外基层弹性蛋白、破坏表面活性蛋白的作用,对ALI具有保护效应.     

对LPS诱导的急性肺损伤幼鼠肺组织SP-A变化的研究

目的：SP-A在维持肺表面活性物质（PS）功能和肺局部免疫功能方面起着重要作用。该文旨在探讨急性肺损伤（ALI）时肺组织SP-A随时间的变化规律。方法：无病原体的21日龄Sprague-Dawley幼鼠110只被随机分为正常对照组和ALI组（每组又分为6个亚组）。腹腔注射脂多糖（LPS，4 mg/kg）建立ALI模型，正常对照组注射等量生理盐水。LPS注射后6，12，24，36，48和72 h每亚组各处死8只大鼠。 用Western blot方法测定肺组织SP-A的相对含量。结果：与正常对照组相比，ALI时肺组织SP-A的变化在12 h内无明显变化(P＞ 0.05)； 在24 h 至48 h处于上升阶段（P＜ 0.01）， 于36 h达最高点（6.94±0.80）；到72 h时SP-A下降(P＜0.01)。结论：肺组织SP-A在LPS诱导的ALI中的变化为时间依赖性。肺组织SP-A一过性升高，表现出SP-A在某种程度上的代偿能力较强。     

急性肺损伤大鼠肺Clara细胞蛋白的变化及相关因素研究

目的 研究急性肺损伤(ALI)大鼠肺Clara细胞蛋白(CCSP)的变化及相关影响因素.方法 将6周龄雄性SD大鼠随机分成4 h实验组及对照组、12 h实验组及对照组(各8只);实验组腹腔注射(IP)脂多糖(10 mg/ks),对照组IP等量牛理盐水;于实验第4、12小时观察肺泡灌洗液(BALF)中WBC及分类、肺组织湿/干重比(W/D)、肺组织病理学评分(LIS);检测肺组织γ干扰素(IFN-γ)、白介素8(IL-8)、巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)含量及BALF中CCSP含量、肺组织CCSP mRNA表达.结果 腹腔注射脂多糖4 h后,肺部病理改变显著,BALF中CCSP及CCSP mRNA显著减少,肺组织MIP-2增高;12 h后,进一步出现肺组织IFN-γ、IL-8显著增高.结论 ALI大鼠肺CCSP减少并与急性炎症反应有关.     

急性肺损伤新生大鼠血清及支气管肺泡灌洗液CC16的变化及意义

目的 探讨急性肺损伤(ALI)早期Clara细胞蛋白CC16的变化及意义.方法 70只健康新生SD大鼠随机分为无菌生理盐水对照组(NS组)及内毒素急性肺损伤组(LPS组,又按注射LPS后处死时间分为7个亚组).LPS组新生大鼠经腹腔注射5 ms/kg LPS,注射后按时间点收集肺组织标本行病理学观察及测定肺湿/干重比值,并收集血清.另取70只健康新生SD大鼠按上述方法分组(NS组及LPS组),收集支气管肺泡灌洗液(BALF),以双抗体夹心ELISA法检测血清及BALF中的CC16含量变化.结果 LPS注射0.5 h后新生大鼠即出现针尖样肺出血,随着时间延长,从局灶性向弥漫性发展;注射2、4 h新生大鼠肺湿/干重比明显增高,差异有非常显著性(P＜0.01),之后回落;BALF中CC16水平在注射LPS后迅速下降,各时点较NS组差异有非常显著性(P＜0.01);血清中CC16水平较NS组上升.以LPS 4 h达高峰,8、16 h组较前下降,但较NS组差异仍有非常显著性(P＜0.01).结论 ALI早期BALF与血清CC16浓度即发生改变,BALF中CC16下降,血清中CC16上升,血清CC16浓度与肺泡上皮及血管内皮完整性相关,血清CC16可作为早期诊断ALI的外周性生物学标志物.     

肺表面活性物质对急性肺损伤大鼠生存率的影响

目的 观察急性肺损伤(ALI)大鼠早期补充肺表面活性物质(PS)对大鼠生存率的影响.方法 建立细菌感染导致肺内源性ALI动物模型,并分两步进行:(1)建立大鼠ALI模型,经气管滴入大肠杆菌液[3 ml/kg,(4.4～5.6)×109 CFU/ml],动态观察72 h大鼠病情演变(n=24)和模型稳定性;并将100 h划分为5个连续时间段:第1时间段(正常大鼠,n=11),第2～5时间段分别为感染后0～6 h(n=10)、7～18 h(n=14)、19～52 h(n=87)、53～100 h(n=34),观察机械通气15min(n=156)后血气、胸肺有效动态顺应性、肺病理改变情况.(2)大鼠感染后3～6 h,PS组(n=16)和NS(n=16)组分别经气管滴入肺表面活性物质或生理盐水,观察生存率.结果 (1)本模型较稳定,PaO2/FiO2可从正常(533±16)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)降到(175±121)mm Hg.在第4时间段肺大体标本呈现明显肝样变和弥漫性出血、坏死灶;肺组织切片见肺泡壁明显水肿,大量炎症细胞浸润,严重实变、肺透明膜形成.(2)PS组生存率(26.7%)较NS组(12.5%)明显提高(Log Rank P=0.014,Breslow P=0.002 8).结论 在ALI早期补充PS可以延长大肠杆菌致肺内源性ALI大鼠生存时间,提高生存率.     

N-乙酰半胱氨酸对新生大鼠急性高氧性肺损伤的保护作用

目的评价N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对新生鼠高氧肺损伤的保护作用并探讨其机制。方法将出生3～5 d的SD大鼠随机分为4组:①高氧 NAC组(NAC治疗组);②高氧 生理盐水组(高氧组);③空气 NAC组(NAC对照组);④空气 生理盐水组(空气组)。分别于实验3、7 d检测肺组织匀浆液中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的含量;比较肺湿/干重(W/D)以及肺组织病理改变;用ELISA法检测血清中α-肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量;用免疫组化法对肺组织细胞黏附分子-1(ICAM-1)的表达进行定量研究。结果实验3 d时,高氧组的MDA、TNF-α以及ICAM-1的表达与空气组相比有显著升高(P<0.05),而GSH-Px活性降低;NAC治疗组与高氧组相比GSH-Px活性升高,其余各项指标均有明显的下降(P<0.01)。7 d时,与空气组相比,高氧组的W/D、MDA、TNF-α、ICAM-1均显著增高,而GSH-Px活性继续下降,NAC治疗组中以上各项指标的改变明显减轻。病理切片显示,3 d时高氧组肺即有炎性改变,7 d时损伤进一步加重,NAC治疗组病理改变明显减轻。结论NAC用于新生鼠高氧肺损伤的治疗,可以减轻肺水肿,减轻炎症反应,起到有效的保护作用。     

Transfusion-related acute lung injury treated with surfactant in a neonate

A term, male neonate suddenly developed respiratory distress and severe cyanosis while undergoing exchange transfusion for hyperbilribinaemia. Transfusion-related acute lung injury was diagnosed. Because of persistent hypoxaemia despite aggressive treatment, two doses of surfactant were administered, resulting in marked improvement.     

高氧致新生大鼠肺损伤过程中T淋巴细胞动态变化的研究

目的探讨高氧致新生大鼠肺损伤过程中T淋巴细胞的动态变化。方法新生12 h内的SD大鼠随机分为对照组、高氧组,对照组置于正常空气中喂养,高氧组持续暴露于80%～85%氧浓度下。两组分别于第1、4、7、14、21天时提取肺脏、脾脏和胸腺,以常规组织学方法观察肺脏形态结构变化;运用常规计数法检测脾脏中淋巴细胞数量变化;采用流式细胞术检测脾脏中CD4+、CD8+T细胞的百分比变化;以混合淋巴细胞反应检测脾淋巴细胞对植物血凝素(PHA)和自身肺组织的增殖反应;用常规组织学和免疫组织化学法观察胸腺形态结构变化及增殖细胞核抗原表达和CD4+、CD8+细胞分布。结果实验4 d时,高氧组CD4+、CD8+淋巴细胞百分比较对照组明显增多(P<0.01),7 d时CD4+淋巴细胞百分比明显高于对照组(P<0.01),此后CD4+、CD8+淋巴细胞百分比逐渐下降,到实验21 d时接近对照组。淋巴细胞活检发现,实验4～7 d时,脾淋巴细胞对自身肺组织和对PHA刺激的增殖反应活性较对照组均明显增高(P均<0.01);14～21 d时,脾淋巴细胞对自身肺组织刺激的增殖反应活性逐渐下降,但均明显高于对照组(P均<0.01),而对PHA刺激后...     

新生儿急性肺损伤的诊断与治疗策略

急性肺损伤(ALI)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是新生儿临床的常见危重症,随着对ALI/ARDS实验与临床研究的不断深入,人们对新生儿ALI/ARDS的认识明显提高,文章提出了新生儿ALI/ARDS诊断依据与治疗策略,在控制原发疾病基础上,应用肺保护性通气策略、加强液体管理、降低肺动脉压力和给予抗炎治疗等,对提高新生儿ALI/ARDS抢救成功率具有重要意义.     

粒细胞减少脓毒症急性肺损伤大鼠CD40表达研究

目的 建立粒细胞减少脓毒症大鼠急性肺损伤模型,研究其炎症反应特点及肺泡巨噬细胞CD40表达.方法 实验大鼠随机分4组,即粒细胞减少感染组、粒细胞减少对照组、粒细胞正常感染组和正常对照组,每组10只.动物处死后留取肺组织,观察病理形态,测定肺湿/干重比,计数支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)细胞总数;外周血计数白细胞数;ELISA方法测定BALF及血清肿瘤坏死因子-α含量;流式细胞仪测定BALF肺泡巨噬细胞CD40表达.结果 (1)粒细胞正常组大鼠处死前平均体重(181.13±16.94)g,平均外周血白细胞数(9.54±1.25)×109/L,粒细胞减少组处死前平均体重(168.56±5.03)g,平均外周血白细胞数(2.56±1.12)×109/L,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)感染组(粒细胞减少感染组和粒细胞正常感染组)的BALF细胞总数明显高于正常对照组,差异有统计学意义[(3.33±0.26)×106/L,(3.23±0.06)× 106/L,(1.68±0.23)× 106/L,P＜0.05].(3)感染组(粒细胞减少感染组和粒细胞正常感染组)血清肿瘤坏死因子-α浓度明显较正常对照组升高,差异有统计学意义[(2 337.08±1 148.85) pg/ml,(2 274.01±1 569.37) pg/ml,(96.20±93.69) pg/ml,P＜0.05].(4)粒细胞减少感染组、粒细胞减少对照组CD40表达率明显较正常对照组增加,差异有统计学意义[(42.06±11.90)％,(46.38 ±7.42)％,(21.62±4.86)％,P＜0.01].结论 在粒细胞减少脓毒症大鼠肺损伤模型,感染早期外周血和肺泡巨噬细胞具有分泌细胞因子功能,可能与CD40高表达相关.     

肺复张手法对急性肺损伤幼猪肺表面活性物质的影响

目的 研究肺复张手法(RM)对急性肺损伤(ALI)时肺表面活性物质表达的影响,探讨RM产生肺泡复张效应的机制.方法 健康雄性幼猪12只,静脉注射内毒素(LPS)构建ALI模型,随机分为常规潮气量通气组(对照组)和小潮气量联合肺复张手法通气组(RM组),观察8 h,酶联免疫吸附法检测血浆、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的肺表面活性蛋白(SP)-A浓度,分析BALF中的磷脂成分[总磷脂(TPL)、活性磷脂(DSPC)及总蛋白(TP)],并采用RT-PCR和免疫组织化学染色测定肺组织中SP-A、SP-B、SP-C、SP-D的mRNA及SP-A的蛋白表达水平.结果 与对照组相比,RM组中SP-A、SP-B、SP-C、SP-D的mRNA水平明显升高,对照组与RM组SP-A平均灰度值为97.8±6.4与106.3±8.5,差异有非常显著性(P＜0.01),并且采用RM后BALF中DSPC/TP、DSPC/TPL比例升高,血浆中SP-A浓度降低,而BALF中的SP-A浓度明显上升.结论 肺复张手法可以改善ALl幼猪肺表面活性物质相关蛋白的合成及肺部表达,增加肺表面活性物质的活性,调节SP-A的浓度,有助于促进肺复张后的肺泡开放,并减轻呼吸机相关肺损伤.