GM1对帕金森病治疗作用的实验研究

研究单唾液酸四己糖神经节苷脂（ＧＭ１）对帕金森病（ＰＤ）的治疗作用。运用选择性偏侧（右侧）ＰＤ大鼠模型,观察正常对照组、ＰＤ组（造模后１４ｄ）、ＰＤ生理盐水（ＮＳ）治疗组和ＧＭ１治疗组（１０ ｎｍ／ｋｇＩＰｑｄ、连续１４ｄ）,阿朴吗啡（ＡＰＯ）诱发的旋转行为改变和纹状体线粒体钙（ＭＣａ）、钙调素（ＣａＭ）含量改变。ＰＤ组表现明显的ＡＰＯ诱发的旋转行为（≥６ｒ／ｍｉｎ）,黑质损伤侧（右侧）纹状体ＭＣ     

Nesfatin-1对帕金森病模型多巴胺能神经元的保护作用及其机制研究

【立论依据】 帕金森病(PD)是一种严重危害中老年人健康的神经退行性疾病,但至今尚无有效的药物或方法能阻止或逆转PD的病情发展。Nesfatin-1是2006年发现的,由82个氨基酸组成的能够抑制摄食的脑肠肽。研究发现nesfatin-1可通过抗凋亡及抗炎机制发挥神经保护作用,但是nesfatin-1能否对多巴胺(DA)能神经元发挥保护作用尚不清楚。本室前期研究证实nesfatin-1能够改变DA能神经元的放电频率,因此,本研究拟在鱼藤酮制备的PD模型上,观察nesfatin-1对DA能神经元的保护作用,并探讨其机制。 【设计思路】 鱼藤酮是一种制备PD模型的环境毒素,是线粒体复合物I的特异性抑制剂,通过损伤线粒体途径导致细胞凋亡。因此本实验拟在鱼藤酮诱导的PD细胞和大鼠模型上,观察nesfatin-1对鱼藤酮诱导的线粒体功能损伤及其介导的细胞凋亡的影响,并进一步研究其分子机制,阐明nesfatin-1可能通过Gs-cAMP-PKA通路影响Bad蛋白的磷酸化水平从而发挥其保护线粒体及抗凋亡的作用。 【实验内容】 在鱼藤酮制备的PD细胞模型上,应用MTT法、流式细胞仪技术、激光共聚焦显微镜等方法,检测nesfatin-1对鱼藤酮所致的细胞存活率、线粒体复合物I的活性、线粒体跨膜电位差、活性氧、PKA蛋白水平、Bad蛋白磷酸化、线粒体细胞色素C的释放、caspase-3活性及细胞凋亡形态学变化的影响。此外,在鱼藤酮制备的PD大鼠模型上,应用免疫组织化学,蛋白质印迹、TUNEL染色等方法进一步研究nesfatin-1对黑质DA能神经元的保护作用。 【材料】 MTT、罗丹明123、H2DCFDA、PKA抗体、磷酸化Bad蛋白抗体、TH抗体(Sigma公司),细胞色素C单克隆抗体(Clontech公司),Caspase-3抗体凋亡试剂盒(BD公司),Hoechst33258(Beyotime公司),TUNEL试剂盒(Roche公司)。 【可行性】 前期研究已证实500 nmol/L鱼藤酮处理MES23.5细胞24 h后,细胞存活率降低,线粒体跨膜电位差降低,nesfatin-1预孵育能拮抗鱼藤酮诱发的改变。实验所在学科为国家生理学重点(培育)学科,具备完成实验所需实验技术和设备。 【创新性】 证实nesfatin-1对DA能神经元的损伤具有保护作用,并阐明了介导的细胞信号转导通路和分子机制,为研制新的预防和治疗PD的药物提供一定的实验依据。     

GM1对新生鼠缺氧缺血脑损伤的保护作用

目的　研究外源性单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)对新生鼠缺氧缺血脑损伤 (HIBD)的保护作用 .方法　结扎新生 7d龄 SD大鼠左颈总动脉后吸入 80 m L· L- 1 浓度氧 2 h,建立 HIBD模型 .观察腹腔注射 GM1对 HIBD模型鼠的体质量增长和脑水肿的影响 ,并用苏木素 -伊红 (HE)染色、原位缺口末端 (TUNEL )标记 DNA片段 ,检测凋亡细胞在大鼠海马和皮质的动态变化及 GM1对其的影响 .结果　外源性 GM1治疗促进了 HIBD模型鼠体质量增长 ,明显减轻了脑水肿及海马和皮质神经细胞凋亡 .结论　外源性 GM1对 HIBD后的脑组织确有保护作用 .     

NGF,GM—1对脊髓缺血损伤的治疗作用

目的 探讨神经生长因子（ＮＧＦ）、神经节甘酯（ＧＭ－１）对脊髓损伤的治疗作用。方法：家兔３２只,随机分为：生理盐水（ＮＳ）组、ＮＧＦ组、ＧＭ－１组、ＮＧＦ＋ＧＭ－１组。采用清醒家兔肾动脉下腹主动脉（ＩＲＡ）阻断血流,造成脊髓缺血损伤,观测脊髓血流量（ＳＣＢＦ）、运动诱发电位（ＭＥＰ）和感觉诱发电位（ＳＥＰ）的变化。结果：ＮＧＦ＋ＧＭ－１组在伤后１、４ｈ的ＳＣＢＦ较ＮＧＦ组、ＧＭ－１组和ＮＳ组明显增     

细胞凋亡在帕金森病发病中的作用

帕金森病(PD)是中老年人较常发生的中枢神经系统变性疾病，病变主要累及黑质和黑质纹状体通路，其发病机制虽未明确，但普遍认为是多因素包括遗传、环境、毒物共同作用引起中脑黑质的多巴胺能神经元变性、退化，使通过黑质纹状体束作用于纹状体的递质多巴胺(DA)减少，导致纹状体内多巴胺     

GM1对缺氧缺血新生大鼠脑损伤的保护作用

目的研究外源性单唾液酸四已糖神经节苷脂(monosialotetrahexosylgangtliosicle,GM1)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic—ischemic brain damage，HIBD)的保护作用。方法建立HIBD模型，观察腹腔注射GM，对HIBD模型鼠体重增长、脑水肿的影响，并用免疫组化及苏木素-伊红(HE)染色方法检测缺氧缺血(hypoxic—ischemic，HI)和GM1干预后不同时间点脑海马组织HSP70阳性细胞及病理学改变。结果HI后新生大鼠海马CA1区仅能检出少量阳性HSP核蛋白(仅在核内表达的蛋白)，海马CA1区神经元呈较严重的缺血损伤性改变。而GM1组体重增加、脑水肿减轻、可见应激蛋白HSP70明显表达。结论GM1可使新生大鼠海马CA1区HSP70表达上调，减轻脑水肿、减轻脑缺氧缺血后病理损伤，对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用。     

Synphilin-1寡核苷酸对帕金森病caspase-8表达影响的实验研究

目的利用动物模型探讨Synphilin-1对帕金森病(PD)caspase-8蛋白表达的影响。方法50只SD大鼠随机分成5组,每组10只,第一组立体定向将6-羟多巴注入右侧黑质制作PD模型,术后每周用阿朴吗啡诱发旋转30 min,至第四周旋转大于6次/min者定为成功的PD模型,第二至第四组利用立体定向将Synphilin-1反义、同义、错义寡核苷酸分别注入到各组大鼠的右侧黑质,然后用与第一组相同的方法制作PD模型,第五组注入生理盐水作为对照组,取鼠的术侧中脑黑质利用免疫组化(IH)检测Synphilin-1,利用IH、原位杂交(ISH)检测caspase-8的表达。结果IH检测Synphilin-1蛋白,与正常对照组比较,PD组显著增加;IH、ISH检测caspase-8蛋白和mRNA表达,与正常对照组比较,PD组显著增多,与PD组比较,反义组表达显著减少。结论Synphilin-1在PD的重要发病机制之一可能通过影响caspase-8的表达来实现。     

Wnt6过表达改善PINK1突变转基因帕金森病果蝇的生物学行为

目的:探讨Wnt6基因对PINK1突变型帕金森病果蝇运动能力的影响,为帕金森病的研究与治疗提供新思路.方法:利用GAL4-UAS系统构建转基因果蝇,分别为正常对照组(W1118/+;MHC-GAL4/+)、PINK1B9帕金森疾病组(UAS-PINK1B9/y;MHC-GAL4/+)和Wnt6过表达干预组(UAS-PI...     

帕金森病与线粒体的相关性研究进展

帕金森病(parkinson disease)是以震颤、强直、运动减少三大症状为临床表现的神经系统原发性病变,多发生于中老年期,病理改变主要是黑质神经元变性,是一种缓慢进展的神经系统退行性疾病.近年来的统计资料显示帕金森病的发病率占总人口的0.1%～0.2%,而在55岁以上人口中占1.4%,在75岁以上人口中占3.4%,已经成为一种严重危害人类健康的神经系统疾病.目前围绕帕金森病的发病原因一直有不少争论,随着遗传学和分子生物学的发展,人们对帕金森病的发病机制进行了更深一步的研究,而其中线粒体与帕金森病的相关性研究成为近年来的研究热点之一,现就其研究进展作如下综述.     

模式生物斑马鱼在帕金森病研究中的应用

斑马鱼(Danio rerio)一直作为模式生物研究脊椎动物的发育,在此过程中,斑马鱼的实验操作技术也得到了广泛发展.了解斑马鱼中枢神经系统(central nervous system,CNS)多巴胺能(dopaminergic,DA)神经元的定位及其投射对DA神经元功能的研究及利用斑马鱼建立人神经退行性疾病模型至关重要.此外,还能够更好地研究人神经退行性疾病的发病机制和探寻治疗方法.本文提供了很多证据证明斑马鱼CNS是构建人神经退行性疾病最适合的模型之一,还从发育学的角度阐释了DA神经元的发生及神经通路的形成在帕金森病(Parkinson's disease,PD)发病机制研究中的作用,并且对转基因斑马鱼模型在PD研究中的作用也做了较为详细的阐述.     

左旋千金藤啶碱在帕金森病猴模型中的应用

左旋千金藤啶碱是新型中枢多巴胺受体阻滞剂,且有激动剂性质。作者将左旋千金藤啶碱应用于1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶制备的偏侧帕金森病猴模型,通过对实验动物行为症状的观察,阐明左旋千金藤啶碱可以定性检侧偏测帕金森病猴模型建立成功与否及其镇静安定作用。     

帕金森病伴发抑郁的临床研究

目的 研究帕金森病患者抑郁的发生率及与其严重程度的相关性。方法 用HAMD抑郁量表和Webste，功能评分，对56例帕金森病患者进行抑郁及功能障碍评定。结果 56例帕金森病患者中，有29例伴发抑郁，占51．8％，抑郁与帕金森病症状的严重程度关系密切。结论 抑郁在帕金森病患者中有较高发生率，其与帕金森病症状的严重程度有关。     

GM6001在兔眼滤过性手术中抗瘢痕作用的实验研究

目的:研究基质金属蛋白酶抑制剂GM6001对兔眼滤过性术后抗瘢痕作用。方法:取青紫兰兔24只,双眼行小梁切除术。术后右眼结膜下注射GM6001,左眼注射PBS作为对照,术后测量眼压,观察结膜、角膜、前房、晶状体情况,通过免疫组化方法标记平滑肌肌动蛋白抗体α-SMA阳性细胞数,反映滤过道成纤维细胞增殖情况。结果:术后实验组较对照组眼压低,各时间点实验组α-SMA阳性细胞数均低于对照组(P<0.05),差别有统计学意义。结论:GM 6001具有抑制兔青光眼滤过术后滤过道中成纤维细胞过分增生,减少瘢痕形成的作用,延长了功能性滤过泡存活的时间。     

脑苷肌肽对急性颅脑损伤应用的临床观察

目的　探讨脑苷肌肽 (CM1)在急性颅脑损伤治疗中的应用。方法　对 4 2例急性颅脑损伤患者 ,尽早静脉滴注GM16 4mg/d ,2周后改为 12 8mg肌肉注射 ,2次 /d ,共 10d。结果　 (1)治疗组 :GCS 8～ 15分患者和 3～ 7分患者治疗前、后伤情相比较 ,差异具有显著性 ,P <0 0 5 ;(2 )治疗组恢复良好和中残的病例占总数 87 5 % ,对照组为 6 5 39% ,2组比较有显著性 ,P <0 0 5。结论　GM1具有较好的催醒作用 ,对提高患者生存质量 ,降低死亡率 ,促进脑功能恢复和改善预后具有较好的疗效。     

依达拉奉、神经节苷酯对帕金森病模型大鼠的神经保护作用

目的 探讨依达拉奉(edaravone,Ed)、神经节苷酯(GW1)对帕金森病(PD)大鼠模型的神经保护作用.方法 采用立体定向一侧黑质致密部(SNC)、中脑腹侧被盖部(VTA)两点注射6-OHDA的方法 ,建立单侧PD大鼠动物模型.将老年大鼠分为正常组、生理盐水组(NS)、帕金森病模型组(PD)、PD+GM1组、PD+Ed组、PD+GM1+Ed组.14d后观察大鼠阿朴吗啡(APO)诱导的行为学改变及黑质多巴胺能神经元凋亡的情况.结果 正常组、NS组APO未诱导出大鼠旋行为,SNC未见细胞凋亡.PD各组APO诱导的旋转实验＞7 r/min,旋转次数(次)PD+GM1+Ed组(8.0±0.3)＜PD+Ed组(12.0±0.6)＜PD+GM1组(17.0±1.0)＜PD组(23.0±1.3)(P＜0.01);6-OHDA可诱导细胞凋亡,毁损侧SNC细胞凋亡数(个)PD+GM1+Ed组(27.63±2.38)＜PD+Ed组(38.42±3.54)＜PD+GM1组(49.36±3.12)＜PD组(62.61±4.03)(P＜0.01).结论 6-OHDA可导致大鼠行为改变,诱导SNC神经细胞凋亡,GM1、依达拉奉降低了这种损害,依达拉奉作用强于GM1,联合治疗作用最佳.     

共聚物-1直接免疫MPTP模型小鼠保护多巴胺能神经元

目的探讨共聚物-1(copolymer-1,Cop-1)直接免疫对小剂量1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)持续注射C57BL/6J小鼠黑质多巴胺(dopamine,DA)神经元保护作用的影响。方法雄性C57BL/6J小鼠分为MPTP模型组、造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组、Cop-1免疫组和正常对照组。MPTP模型组动物仅接受MPTP注射,造模后Cop-1免疫组在MPTP连续注射7d后接受Cop-1免疫;造模时Cop-1免疫组在第1次MPTP注射后立即接受Cop-1免疫;造模前Cop-1免疫组在接受Cop-1免疫7d后开始注射MPTP,Cop-1免疫组仅接受Cop-1抗原免疫,正常对照组动物仅接受0.9%氯化钠注射液注射。MPTP连续注射24d后处死动物,取脑、脾。脑切片酪氨酸羟化酶免疫组化定量分析黑质DA神经元数;高效液相色谱法(high performance liquidchrom atography,HPLC)分析纹状体DA及其代谢产物含量;苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察脾病理学变化;分离造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组和Cop-1免疫组动物脾脏并进行Cop-1致敏淋巴细胞培养。结果与正常对照组相比,MPTP模型组、造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组动物脾脏HE染色未见明显差异。与Cop-1免疫组相比,造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组均出现大量Cop-1致敏淋巴细胞。黑质DA神经元定量分析显示,与正常对照组比较,持续低剂量MPTP注射使模型对照组黑质DA神经元减少了65.13%,造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组黑质DA神经元分别减少了31.68%、27.55%和28.29%,各组DA神经元数明显高于模型对照组(P=0.000,P=0.000,P=0.000)。HPLC法测定纹状体内DA及其代谢产物含量结果显示,与正常对照组相比,模型组DA及其代谢产物含量明显减少。造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组类似,但均明显高于模型组。结论在C57BL/6J小鼠慢性MPTP模型中,持续低剂量MPTP注射对小鼠的免疫器官脾的破坏不明显,Cop-1直接免疫可有效对抗MPTP毒性,保护黑质-纹状体系统的DA神经元。     

86例帕金森病患者康复治疗探讨

目的:探究86位帕金森病患者康复治疗的临床疗效。方法:选取我院收治的86位患有帕金森病患者的临床资料进行回顾性分析,对所有患者均采用一定程度的药物治疗和康复治疗,持续两个月后观察患者康复前后的症状积分比较。结果:经康复训练后,患者各症状均有明显改善,治疗有效率可达93.02%。结论:康复训练可提高患者的治疗有效率,明显改善患者症状,减轻患者痛苦,提高患者生存质量。     

帕金森病小鼠前庭神经核内谷氨酸和谷氨酸受体1的表达

目的研究帕金森病(PD)小鼠前庭神经核内谷氨酸(Glu)及其谷氨酸受体(GluR1)的表达。方法采用免疫细胞化学技术检测帕金森病小鼠前庭神经核内Glu及GluR1的表达,利用透射电镜技术检测前庭神经核内神经元超微结构的改变。结果与对照组相比,在PD小鼠前庭神经核内Glu表达增加(P<0.01),同时GluR1表达减少(P<0.01)。透射电镜的结果显示前庭神经核内神经元超微结构呈病理性改变:神经元线粒体肿胀变性、嵴消失、呈空泡状改变,粗面内质网(RER)扩张,星形胶质细胞呈增生状改变。结论PD小鼠前庭神经核内的Glu及GluR1在神经元内表达的变化及其超微结构的改变,推测其变化与临床运动障碍、平衡失调有一定关系,为帕金森病的临床治疗提供了可靠的形态学依据。