不同治法方药治疗小鼠自身免疫性卵巢功能衰退的比较研究

目的：比较补肾法、活血法、疏肝法对小鼠自身免疫性卵巢功能衰退（premature ovarian failure,POF）的干预作用。方法：以BALB／C雌性小鼠卵巢组织制备卵巢抗原。皮下和两后脚掌多点注射免疫同种雌性小鼠建立自身免疫性卵巢功能衰退模型。六味地黄丸、少腹逐瘀颗粒及柴胡疏肝丸分别治疗3周后,酶联免疫吸附测定法检测血清雌二醇（estradiol,E2）、卵泡刺激素（follicle—stimulating hormone,FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、催乳素（prolactin,PRL）、睾酮（testosterone,T）以及抗卵巢抗体和抗透明带抗体。结果：模型组小鼠血清FSH、LH较正常组明显升高,E2显著下降（P〈0．05）,PRL、T含量与正常组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;模型组小鼠抗卵巢抗体阳性率为84．2％,抗透明带抗体阳性率为78．9％。与正常组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。六味地黄丸显著下调小鼠血清FSH、LH水平,提高E2含量（P〈0．05）;而抗卵巢抗体及抗透明带抗体仅有下降趋势,与模型组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。少腹逐瘀颗粒组小鼠血清FSH、LH含量有下降趋势,E2含量稍有升高,但差异无统计学意义（P〉0．05）;其抗卵巢抗体和抗透明带抗体阳性率与模型组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。柴胡疏肝丸组小鼠抗卵巢抗体和抗透明带抗体阳性率,与模型组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。各种治疗对血清PRL和T含量无明显影响。结论：补肾中药可以显著改善自身免疫性卵巢功能衰退小鼠生殖内分泌轴功能,活血及疏肝中药可以调整自身免疫性卵巢功能衰退小鼠体液免疫功能。     

抗衰复巢颗粒对卵巢早衰大鼠性激素水平影响

目的观察抗衰复巢颗粒对卵巢早衰（POF）大鼠的性激素的影响和卵巢组织形态学的变化。方法采用出生第9日龄SD雌性大鼠幼鼠,连续腹腔注射14天环磷酰胺8 mg/（kg.d）的造模,导致卵巢早衰。随机分为4组,放免法检测雌二醇水平（E2）、卵泡刺激素（FSH）、促黄体生成素（LH）。并进行大鼠卵巢组织形态学观察。结果实验研究表明,中药复方抗衰复巢颗粒对实验性卵巢早衰大鼠模型有性激素调节作用,对早衰的卵巢组织有恢复作用。能提高体内E2水平,减缓POF大鼠外周血FSH升高。结论中药复方抗衰复巢颗粒主要通过纠正紊乱的生殖内分泌轴和恢复部分卵巢功能,对卵巢早衰发挥防治作用。     

育泡饮对小鼠自身免疫性卵巢损伤保护作用的实验研究

目的探讨中药复方育泡饮对实验性自身免疫性卵巢早衰(POF)小鼠卵巢功能的影响。方法以成熟的SD雌性大鼠卵巢组织制备卵巢抗原,皮下多点注射免疫BALB/C雌性小鼠,建立卵巢早衰模型。在3次免疫后连续灌服中药复方,以强的松为阳性对照,酶联免疫法检测外周血雌二醇水平(E2)、卵泡刺激素(FSH)、外周血抗卵巢抗体(AoAb),IL-4、IL-10,观察卵巢的形态学变化,并计数各级卵泡及黄体数目。结果POF小鼠外周血E2下降,FSH升高,AoAb阳性,IL-4、IL-10明显提高,卵巢内有大量淋巴细胞浸润,各级卵泡及黄体数目减少。育泡饮能提高体内E2水平,减缓POF小鼠外周血FSH升高,抑制AoAb产生,降低IL-4与IL-10水平,减轻卵巢内淋巴细胞浸润,使各级卵泡及黄体数增加,育泡饮高剂量组比中剂量、低剂量组作用显著。结论育泡饮能减轻卵巢自身免疫性炎症损伤,对自身免疫性卵巢早衰具有治疗作用。     

左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠性激素的影响

目的 观察左归丸对免疫性卵巢早衰(POF)小鼠外周血抗透明带抗体(AZpAb)、FSH、E₂水平变化的影响,进一步揭示中药补肾养血活血法在调节卵巢功能方面的作用机制。方法 以小鼠透明带3所合成透明带多肽为免疫原,免疫SPF级BALB/C雌性小鼠,建立小鼠免疫性POF模型,随机分为模型组、左归丸高、中、低剂量组,强的松组、己烯雌酚组和对照组,共灌胃给药4周。采用ELISA法检测外周血FSH及E₂、AZpAb值。结果 FSH、AZpAb组间的比较测定值都有显著性差异;各用药组之间对正常组及模型组比较：己烯雌酚组的FSH值有极显著的意义,左归丸高、低剂量组的E2值有显著的意义,左归丸高、中、低剂量组及己烯雌酚组的AZpAb值都有极显著的意义。结论 左归丸能使阴虚小鼠外周血中雌二醇含量增加,减缓POF小鼠外周血FSH的升高,抑制AZpAb产生,改善POF小鼠卵巢免疫性炎症的损伤。     

补肾疏肝法对卵巢早衰模型小鼠的作用研究

目的 探讨补肾疏肝中药复方对实验性的卵巢早衰(POF)的防治作用.方法 将自身免疫性POF模型小鼠分为模型组和中药治疗组,治疗组在3次免疫后连续灌服中药复方,分析灌服中药后阴道脱落细胞涂片,外周血雌二醇(E2)浓度及受试动物卵巢滤泡和黄体数改变情况.结果 中药治疗组小鼠体内血清E2水平均比模型组高.卵巢组织形态学分析显示,中药治疗组生长滤泡和黄体数均比模型组明显增加(P<0.05).结论 补肾疏肝中药复方可使卵巢内残存的少数滤泡得以复苏,恢复部分卵巢功能.     

免疫性卵巢早衰小鼠生殖能力的研究

目的：探讨补肾复方左归丸对免疫性卵巢早衰（POF）小鼠动情周期、卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）、受孕率的影响。方法：以小鼠透明带3为抗原,皮下多点注射免疫BALB/c雌性小鼠建立免疫性卵巢早衰模型。设左归丸低、中、高不同剂量进行治疗,以泼尼松、己烯雌酚为阳性对照,观察动情周期、受孕率,ELISA法检测外周血清FSH、E2水平。结果：模型组小鼠动情周期紊乱,FSH增高,E2降低,受孕率低下。左归丸各剂量组动情周期时间延长,但仍有规律性变化。FSH升高及E2降低均不明显,受孕率也低下。结论：模型组卵巢功能损伤、破坏。左归丸能改善、保护卵巢功能,但对受孕率改善不明显。     

经阴道多普勒超声检测卵巢早衰患者卵巢血流变化与卵巢激素水平的相关性

目的探讨卵巢早衰患者卵巢血流指标与激素水平的相关性。方法研究对象为临床及实验室诊断为卵巢早衰的20例患者（POF组）和正常育龄妇女20例（CTR组）进行彩色多普勒超声检查,并检测两组同时期的血清雌二醇（17β-estradiol,E2）、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone,FSH）和促黄体生成素（luteinizing hormone,LH）。结果POF组FSH、LH、阻力指数（resistive index,RI）、搏动指数（pulsatilityindex,PI）值高于CTR组,E2、收缩期峰流速（peak systolic velocity,PSV）明显低于CTR组,两组间卵巢动脉血流指标、激素水平的差异均有统计学意义（P〈0.05）。POF组卵巢血流PSV与E2呈正相关（r^2=0.93,P〈0.05）,PSV与FSH呈负相关,（r^2=-0.64、-0.55,P〈0.05）。PI、RI与激素无相关性。结论卵巢早衰患者的卵巢动脉血流、激素水平与卵巢功能密切相关,经阴道超声检查卵巢血流变化结合卵巢激素水平为卵巢早衰的早期诊断和预测治疗提供了新的方法。     

仙子益真胶囊对卵巢早衰小鼠外周血清性激素水平的影响

目的观察补肾填精中药仙子益真胶囊对卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)模型小鼠性激素调节作用,初步探讨仙子益真胶囊治疗卵巢早衰的可能机制。方法选用动情周期规律的SPF级雌性C57BL/6J性小鼠随机分为空白对照组、造模组。造模组使用雷公藤多苷片造模成功后,再随机分为模型组,益真低、中、高剂量组和西药组,并予以相应干预。治疗结束后ELISA测定血清中雌二醇(estradiol,E2)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)及黄体生成素(luteinizing hormone,LH)的含量。结果与空白对照组比较,模型组E2含量下降,FSH、LH含量升高,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,益真低剂量组、益真中剂量组、益真高剂量组、西药组E2含量上升,FSH、LH含量下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论补肾填精中药仙子益真胶囊可以提高POF模型小鼠血清E2的含量,降低FSH、LH的含量,改善POF小鼠生殖内分泌环境。     

左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠卵巢Fas、Fas—L表达的影响

目的：探讨免疫性卵巢早衰小鼠（POF）卵巢Fas、Fas-L蛋白的表达及补肾复方左归丸的影响。方法：以小鼠透明带3为抗原，皮下多点注射免疫BALB／C雌性小鼠建立免疫性卵巢早衰模型。设左归丸低、中、高不同剂量进行治疗，以泼尼松、己烯雌酚为阳性对照，免疫组化法检测卵巢卵泡、间质Fas、FasL蛋白的表达。结果：POF小鼠大、小卵泡Fas蛋白表达均明显减少，小卵泡、间质FasL表达均明显增强。左归丸各剂量组大、小卵泡Fas表达明显增强；左归丸低剂量组间质Fas表达也增强，小卵泡FasL表达减弱；左归丸高剂量组问质Fas表达也均增强，与模型组相比差异显著。结论：POF小鼠Fas／FasL系统平衡失调，B细胞凋亡减弱，抗体聚集，抑制免疫应答的效应减低，导致对卵巢的免疫性损伤，卵巢功能的破坏、衰竭。补肾中药复方左归丸可通过调节Fas／FasL系统平衡，调节免疫反应及细胞毒性淋巴细胞功能，促进B细胞凋亡，抑制抗体聚集，减轻卵巢免疫炎性反应，改善卵巢功能。     

超声观察与相关实验室检查在评价育龄妇女卵巢功能的临床应用研究

目的 探讨超声影像学在评价育龄期妇女卵巢功能早衰时的临床应用价值.方法 通过相关实验室检查LH,FSH值的检测作为诊断卵巢功能早衰的诊断依据,观察30例卵巢功能早衰（POF）和30例正常女性卵巢的超声影像特点.结果 超声影像表现：POF组卵巢体积、卵巢窦卵泡数均小于对照组,卵巢动脉、子宫动脉阻力指数高于对照组.相关实验室检查：POF组FSH、LH值增高,对照组FSH、LH值属正常范围;POF组E2值偏高,对照组E2值属正常范围.FSH、LH值与卵巢动脉、子宫动脉阻力指数呈正相关.结论 经阴道三维超声检查可较早评估卵巢储备功能,经阴道三维超声检查与血清学检查的结合对卵巢功能的评价更全面.     

护卵汤配合补佳乐及安宫黄体酮对卵巢早衰模型小鼠卵巢Th17和Treg的影响

目的观察护卵汤配合补佳乐及安宫黄体酮对卵巢早衰(POF)模型小鼠卵巢Th17和Treg表达水平的影响。方法采用透明带多肽(PZP3)及弗氏完全佐剂(CFA)和弗氏不完全佐剂(IFA)建立POF模型小鼠,随机分为空白组、模型组、护卵汤+补佳乐+安宫黄体酮组(护补安组)、补佳乐+安宫黄体酮组(补安组)、护卵汤组,护卵汤分别给药对POF模型小鼠进行干预后,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组小鼠的血清促卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E2)含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测小鼠卵巢的Th17和Treg表达水平;光镜下观察各组卵巢组织形态学变化。结果与模型组比较,护补安组、补安组、护卵汤组对致衰小鼠有治疗作用,差异具有统计学意义(P<0.01);护补安组、补安组在降低小鼠血清FSH含量方面优于护卵汤组(P<0.05);但护卵汤组在降低小鼠卵巢Th17水平上优于补安组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论护卵汤配合补佳乐及安宫黄体酮可通过降低小鼠卵巢Th17而升高小鼠卵巢Treg水平治疗卵巢早衰模型小鼠,且在降低小鼠血FSH含量上优于单纯护卵汤组。     

GnRH激动剂和经血源性干细胞联合治疗对小鼠卵巢功能的影响

目的 探究促性腺激素释放激素（GnRH）激动剂和经血源性干细胞（MenSCs）联合治疗对小鼠卵巢功能的影响。方法 将45只SPF级实验小鼠随机分为Control组（腹腔注射生理盐水）、POF组（腹腔注射120 mg·kg-1·d-1 CTX）、MenSC+POF组（CTX损伤处理后注射移植含2×106 MenSCs的细胞悬浮液）、GnRHa+POF组（造模前14 d注射丙氨瑞林0.1 mg·kg-1·d-1,第15天开始CTX注射）、MenSC+POF+GnRHa组（按MenSC+CTX组和GnRHa+CTX组方案联合用药）,每组9只。HE染色观察小鼠卵巢组织病理变化情况,ELISA法检测小鼠血清中黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、抗苗勒管激素（AMH）和雌二醇（E2）的含量水平,Western blot检测小鼠卵巢颗粒细胞中KI-67、Bcl-2、BAX、caspase 9、caspase 3、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3、p-PI3K、PI3K、p-Akt及Akt蛋白的表达情况。结果 与Control组相比,POF组小鼠卵巢纤维化明显,闭锁卵泡数增多,血清中LH和FSH的含量水平极升高（P<0.01）,AMH和E2含量水平降低（P<0.01）,BAX、cleaved-caspase 9/caspase 9、cleaved-caspase 3/caspase 3蛋白表达水平升高（P<0.01）,KI-67、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平降低（P<0.01）;与POF组比较,GnRH激动剂和经血源性干细胞联合治疗可抑制小鼠卵巢闭锁卵泡的产生,降低小鼠血清中LH和FSH的含量水平（P<0.01）,提高AMH和 E2的含量水平（P<0.05或P<0.01）,抑制小鼠卵巢颗粒细胞中BAX、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3蛋白的表达（P<0.05或 P<0.01）,促进KI-67、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）。结论 GnRH激动剂和经血源性干细胞联合治疗可能通过上调PI3K-Akt信号通路表达,减少卵巢闭锁卵泡的产生,提高小鼠卵巢的储备功能,从而达到对卵巢修复和保护的目的。     

AMH联合FSH检测对拟行辅助生殖技术高龄妇女卵巢储备功能的评估价值

目的:探讨抗苗勒氏管激素(AMH)联合促卵泡刺激素(FSH)检测对高龄拟行辅助生殖技术病人的卵巢储备功能的评估价值.方法:回顾性分析高龄拟行辅助生殖技术病人139例的临床资料,所有病人年龄>35岁.参照2017年波塞冬卵巢低反应分组标准,按照卵巢储备功能检查结果将病人分为正常组51例、卵巢功能减退(DOR)组46例及卵...     

卵巢早衰32例临床分析

目的探讨卵巢早衰的治疗,加深对卵巢早衰的认识及重视程度.方法对1999年10月至2006年10月诊断的32例卵巢早衰患者的临床资料及治疗情况进行回顾性分析.结果卵巢早衰患者血清性激素测定显示E2值低于或等于卵泡期水平,FSH和LH值明显升高,PRL值在正常范围.卵巢早衰患者常伴有情绪异常、不同程度的生殖器和乳房萎缩、骨矿物缺乏和骨质疏松、通过合理的激素替代治疗,临床症状能得到明显改善,但完全恢复正常极困难.结论卵巢早衰病因复杂、治疗困难、治愈率低、值得临床重视和研究.     

补肾活血方对于重组猪组织卵透明带4抗原建立的自免疫性卵巢功能早衰小鼠的治疗作用

Objective: To investigate the efficacy and mechanism of Bushen Huoxue Recipe (补肾活血方, BHR) in the treatment of murine autoimmune premature ovarian failure (POF). Methods: The recombinant porcine zona pellucida 4 (pZP4) was expressed in E. coli BL21 (DE3) strain within prokaryotic plasmid pET28a (+), purified by Ni-affinity chromatography and verified by Western blot. Murine autoimmune POF model was established by immunization with pZP4 of female BALB/c mice. Fifty POF mice were randomly divided into 5 groups, which were respectively given low (3.75 mg/kg), moderate (7.5 mg/kg), and high dose (15.0 mg/kg) of BHR by gastrogavage once daily for 20 days, with 17-β-estradiol (0.13 mg/kg) and normal saline as positive and negative control. Estrous cycles were analyzed through vaginal smears, serum estradiol (E2) levels, and anti-pZP4 antibody titers were detected by ELISA. The proliferative responses in vitro of spleen lymphocytes to pZP4 antigen restimulation were measured by [3H]-thymidine incorporation, and the histomorphology changes of ovary were evaluated by optical microscope. Results: The purified pZP4 was visible as a single lane with 14.4 kD in SDS-PAGE and Western blot. The murine POF model with lengthening estrous cycles, decreased levels of serum E2, high titers of serum anti-pZP4 antibody, and reduced ovarian follicles and corpus lutea were established by immunization with recombinant pZP4. Treatment with moderate and high dosage BHR significantly increased ovarian follicles and reduced the proliferation of spleen lymphocytes to the pZP4 antigen of POF mice (P<0.05). However, only the high dosage BHR administration significantly improved the estrous cycles, elevated the serum E2 levels (P<0.01), and decreased the serum anti-pZP4 antibody titers of model mice (P<0.05). Conclusions: The recombinant pZP4 could evoke the antigen-specific immune response in mice and induce the autoimmune ovarian injury. It has been demonstrated that BHR was able to increase the serum E2 levels and protect ovarian functions from the autoimmune injury in murine POF model.     

抗苗勒管激素在卵巢储备功能不同患者中的表达及相关性研究

目的通过测定卵巢早衰（POF）、多囊卵巢综合征（PCOS）及正常对照组患者血清中抗苗勒管激素（AMH）水平,探讨血清AMH在不同卵巢储备功能患者中的不同表达。方法测定POF组（25例）、PCOS组（32例）和正常对照组（30例）血清中AMH水平,同时测定上述三组人群血清中卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）、睾酮（T）及泌乳素（PRL）水平,并记录受试者的年龄、体重指数（MBI）、空腹血糖及胰岛素水平。结果①三组中POF血清AMH值最低,PLOS最高,且差异有统计学意义（P〈0.05）;②三组血清中FSH、LH、PRL、E2、T及AMH水平差异均有统计学意义（P〈0.05）,而这三组间年龄、MBI差异无统计学意义（P〉0.05）;③PCOS组血清中AMH与LH、T及MBI呈正相关性（P〈0.05）,与FSH和胰岛素抵抗指数无相关性。结论在不同卵巢储备功能患者中血清AMH表达不同,可能参与PCOS发生、发展,并与性激素合成失调有关。