动员人外周造血祖细胞定向诱导树突状细胞

目的 探讨由动员人外周造血祖细胞体外培养扩增获得的树突状细胞（DC）的生物学特性, 为临床应用肿瘤树突状细胞疫苗建立制备方法。方法 用CS-3000血细胞分离机分离预经干细胞动员的患者外周血单个核细胞（PBMC）,去除淋巴细胞和单核细胞,阴性选择得到外周造血祖细胞,加入rhGM-CSF和rhIL-4培养10~14 d成为树突状细胞,然后进行形态学检测、细胞表型和T细胞刺激能力分析。结果 由外周造血祖细胞来源的树突状细胞可以达到(0.5~1.0)×108数量级;高倍镜和电镜照片显示典型的树突状细胞形态和超微结构;流式细胞仪分析显示细胞高表达HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原和共刺激分子CD80、CD86;同种混合淋巴细胞反应显示细胞具有高效的刺激静止T淋巴细胞活化增殖的能力。结论 用血细胞分离机分离动员外周造血祖细胞体外定向诱导制备树突状细胞可以作为制备肿瘤疫苗的新途径。     

人外周血树突状细胞的诱导及其生物学特性的研究

目的：建立体外诱导和扩增人外周血树突状细胞（ＤＣ）的方法,并分析其生物学特性。方法：造血动员后外周血单个核细胞经贴壁去除悬浮细胞,加入细胞因子（ＩＬ－４,ＧＭ－ＣＳＦ和ＴＮＦ＿α）培养８８天。用流式细胞仪分析细胞的表型,经ＥＬＩＳＡ法测定其培养上清中的ＩＬ－１２,并将诱导的树突状细胞与脐带血原始Ｔ细胞混合培养,用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定细胞的增殖指数。结果：贴壁的造血动员后外周血单个核细胞在体外经     

人外周血树突状细胞的诱导及其生物学特性的研究

目的：建立体外诱导和扩增人外周血树突状细胞（ＤＣ） 的方法,并分析其生物学特性。方法：造血动员后外周血单个核细胞经贴壁去除悬浮细胞,加入细胞因子（ＩＬ－４、ＧＭ－ ＣＳＦ和ＴＮＦ－α）培养８ 天。用流式细胞仪分析细胞的表型,经ＥＬＩＳＡ法测定其培养上清中的ＩＬ－ １２ ,并将诱导的树突状细胞与脐带血原始Ｔ（ｎａｉｖｅ Ｔ） 细胞混合培养,用３Ｈ－ ＴｄＲ掺入法测定细胞的增殖指数。结果：贴壁的造血动员后外周血单个核细胞在体外经细胞因子诱导培养后,高表达人树突状细胞分化抗原ＣＤ１ａ（８９ ．１％ ）、ＣＤ４０（９９ ．８％ ）、ＣＤ８０（９５ ．１％ ）、ＣＤ８３（４５ ．７％ ）、ＨＬＡ－ ＤＲ（９７．６％ ）,同时所获的ＤＣ能分泌ＩＬ－１２ 和可有效地激活脐带血原始Ｔ细胞并促其增殖（ＳＩ＝ ６．９２） 。结论：采用造血动员的外周血经体外贴壁去除非粘附细胞,再经过细胞因子序贯培养,无需纯化ＣＤ３４ ＋ 细胞,能获得高纯度（ ＞８０％ ）和具有功能性的ＤＣ细胞。     

转化生长因子β1对鼠造血祖细胞产生树突状细胞的调控作用

目的 研究转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）对造血祖细胞（ＨＰＣ）产生树突状细胞（ＤＣ）的调控作用及其分子机理。方法 分离高纯度小鼠骨髓Ｌｉｎ,Ｃ－ｋｉｔ,ＨＰＣ经粒细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）干细胞因子（ＳＣＦ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）培养,诱导产生ＤＣ。采用流式细胞仪,逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和同种异基因混合淋巴细胞反应（Ａｌｌｏ－ＭＬＲ）分析ＴＧＦ－β１对ＤＣ产生的调节作用及     

IL—1影响L—细胞造血调节作用的实验研究

目的：研究白细胞介素－１与Ｌ－细胞在造血调控中的可能关系,丰富造血调控理论。方法：在体外祖细胞培养中以不同浓度的ＩＬ－１诱导和未经诱导的Ｌ－细胞条件培养液替代造血生长因子,观察集落产率的变化,并与ＩＬ－１和ＬｃＣＭ共同作用后的集落产率作比较。结果：ＩＬ－１在１２．５￣１００ｕ／ｍｌ浓度范围内,ＬｃＣＭＩＬ－１作者后的粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）,早期红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ）,晚期红系祖细胞（ＣＦ     

外周血造血干细胞体外定向诱导树突状细胞及功能鉴定

目的：以实体瘤患外周造血干细胞（PBSC）为来源，建立体外诱导扩增树突状细胞（DC）的方法，工进行表型鉴定及功能检测。方法：以血细胞分离机分离经动员的外周造血干细胞，加入rhGM-CSF,rhIL-4和nrhTfNF-α培养7－9d成为树突状细胞，进行细胞形态学、表型及刺激T细胞增殖能力分析。结果：PBSC经诱导培养后，倒置显微镜和电镜显示典型的树突状细胞形态和超微结构；流式细胞术分析显示细胞表面抗原高表达，其中CD1a 38.28%,CD11c 66.77%,共刺激分子CD80和CD86分别为51．05％，67．58％，MHCⅡ类分子HLA－DR为72．09％，为典型的DC表型特征，同种混合淋巴细胞反应结果显示DC具有高效的刺激T淋巴细胞活化增殖的能力。结论：实体瘤患PBSC可成功诱导为具有典型形态特征及功能的树突状细胞。     

异基因外周血干细胞的动员,检测及临床移植的应用研究

目的：探讨异基因外周血干细胞移植（ａｌｌｏ－ＰＢＳＣＴ）供者经Ｇ－ＣＳＦ或Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ动员后,采集的外周血干细胞（ＰＢＳＣ）移植物中的幼稚粒细胞与单个核细胞（ＭＮＣ）、ＣＤ３４＾＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ之间的相关性和移植的剂量标准及临床应用效果。方法：对１１例ａｌｌｏ－ＰＢＳＣＴ供者用Ｇ－ＣＳＦ（９例）或Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ（２例）进行动员,于动员前及动员后,分别对外周血及ＭＮＣ惧物中的幼稚粒细胞、ＣＤ３４＾＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ进行检测计数,预处理方法主要用大剂量环磷酰胺（ＣＴＸ）＋全身照射（ＴＢＩ）。结果：动员后外周血中的幼稚粒细胞与ＣＤ３４＾＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ同步增加,外周血ＭＮＣ中的幼稚粒细胞数与ＣＤ３４＾＋细胞数及ＣＦＵ－ＧＭ有较好的相关性。１１例患者全部植活和恢复造血功能,并为染色体核型     

三七总皂甙对粒单系造血祖细胞增殖调控机理的研究

采用造血祖细胞体外培养与造血生长因子生物活性检测等实验血液学技术,研究三七总皂甙（ＴＳＰＮ）,对小鼠粒单系造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）增殖凋控的影响及其机理。结果表明：在有粒单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）存在的条件下,ＴＳＰＮ能促进正常或贫血小鼠ＣＦＵ－ＧＭ的集落形成;经ＴＳＰＮ诱导制备的肌条件培养液,Ｌ细胞条件培养液和脾细胞条件培养液能显著提高ＣＦＵ一ＧＭ的集落产率。研究提示,ＴＳＰＮ可能通过诱导机体产生造血凋控因子或协同这些因子促进机体单系血发生。     

肺泡巨噬细胞培养上清液对小鼠粒—单系造血祖细胞和造血干细胞的…

目的：观察肺泡巨噬细胞培养上清液（ＡＭψＳ）对粒－单系造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）和造血干细胞的影响。方法：采用脾集落形成和造血祖细胞体外培养技术。结果：ＡＭψＳ对ＣＦＵ－ＧＭ的增殖具有双向调控作用，即低浓度有促进作用，高浓度有抑制作用，但它对ＣＦＵ－Ｓ无明显影响。结论：ＡＭψＳ中含有粒－单系集落刺激因子（ＣＳＦ－ＧＭ）和前列腺素样活性物质，这些物质浓度的变化可以调控ＣＦＵ－ＧＭ的增殖，大肠杆菌脂多     

小鼠颌下腺组织培养上清液影响红系造血的实验研究

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类,进一步研究颌下腺对血发生的调控,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示,小鼠颌下腺组织培养上清液（ＳＧＣＭ）在体外培养中,对早期和晚期红系造血祖细胞有促进增殖和分化的作用,实验组集落数远远高于阴性对照组（Ｐ〈０．０５）;晚期红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）培养体系雄性小鼠颌下腺组织培养上清液组集落数明显高于雄性组（Ｐ〈０．０５）,早期红系祖 细胞（ＢＦＵ－Ｅ）培养体系没有明显差异（Ｐ〉０．０５）,贫血模型小鼠颌下腺促进ＢＦＵ－Ｅ和ＣＰＵ－Ｅ增殖和分化的活性高于正常小鼠（Ｐ〈０．０５）,ＩＬ－３与ＳＧＣＭ有协同刺激作用,说明小鼠颌下腺确能合成和分泌促进红系造血的细胞因子,雄性小鼠颌下腺促进ＣＦＵ－Ｅ增殖和分化细胞因子的活性高于雌性小鼠。本     

外周血造血干细胞最佳采集时机的快速判断方法

目的：探讨一种快速、简捷判断外周血造血干/祖细胞最佳采集时机的方法。方法:使用Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪上的未成熟细胞信息(IMI)通道，对5例异基因外周血造血干细胞移植(Allo-PBSCT)的健康供者,在动员过程中采集外周血进行外周血造血祖细胞（HPC）检测。同时应用流式细胞术(FCM)和集落培养法分别对上述外周血中的CD34+ 细胞、粒-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）进行分析，动态监测外周血造血干/祖细胞(HSC/HPC)的变化。结果：HPC与CD34+ 细胞及CFU-GM呈良好的正相关，相关系数分别为0.82和0.85。动员后第4天HPC与CD34+ 细胞和CFU-GM同时明显上升，于动员后第5天同时达到高峰，但HPC较CD34+ 细胞和CFU-GM变化幅度大（5~20倍）。结论：Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪能快速简便地动态监测外周造血干/祖细胞的变化，为外周血造血干/祖细胞最佳采集时机的判断提供了一种快捷经济的参考方法。     

小鼠骨髓基质细胞系QXMSC1促进骨髓移植后的造血重建

目的：观察骨髓基质细胞系ＱＸＭＳＣ１在骨髓移植后早期能否加速造血重建。方法：用脾克隆形成单位测定ＱＸＭＳＣ１对造血干细胞的影响。计数每根股骨有核细胞数，用半固体琼脂克隆形成法测定粒单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ），微量甲基纤维素法测定红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ及ＢＦＵ－Ｅ）。结果：ＱＸＭＳＣ１细胞可明显增加ＣＦＵ－Ｓ克隆数。在骨髓移植后第１０天，ＱＸＭＳＣ１可增加骨髓有核细胞数，增加ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ     

人脐带／外周血树突状细胞的培养及特性研究

利用人脐带血单个核细胞，联合粒／巨噬细胞集落刺激因子和肿瘤坏死因子－ａ，经２周左右可培养出大量树突状细胞，来自在正常人外周的单个核细胞，经ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－４作用，８－１０天后亦可培养出大量ＤＣｓ。     

HX-97方案对外周血造血干细胞动员、采集和移植后造血重建的作用

为提高外周血造血干细胞动员、采集、和移植后造血重建的效率,作者从１９９７ 年４ 月至１９９９ 年６月,进行了２２ 例异基因或自体外周血造血干细胞移植,对外周血造血干细胞动员、采集和移植后造血重建方案（ＨＸ－９７ 方案）作了系统观察。ＨＸ－９７方案的主要内容是：①外周血造血干细胞动员,采用ｒｈＧ－ＣＳＦ３００μｇ／天,皮下注射,共６ 天,第６ 剂在干细胞采集前９０分钟用; ②自体外周血造血干细胞动员采用大剂量化疗加造血刺激因子,化疗强度务必使外周血ＷＢＣ计数＜ １．０×１０９ ／Ｌ,待外周血ＷＢＣ计数从最低点刚显示回升时,开始使用ｒｈＧ－ＣＳＦ;③移植后恢复造血序贯使用ｒｈＧＭ－ＣＳＦ和ｒｈＧ－ＣＳＦ。造血干细胞动员后用ＣＯＢＥＳｐｅｃｔｒａ 血细胞分离机连续采集外周血单个核细胞。结果：２２ 例移植中１６ 例一次采集即成功,６ 例作了第二次采集。按受者体重计,采集后计数ＭＮＣ细胞数２．５～１０．７×１０８／ｋｇ;ＣＤ３４＋ 细胞２．５～２０．０×１０６／ｋｇ;ＣＤ３４＋ ＣＤ３３－ 早期造血干细胞１．８～７．５×１０６／ｋｇ;ＣＤ３４＋ ＣＤ３３＋ 晚期造血祖细胞０．７～１２．５×１０６ ／ｋｇ;ＣＦＵ－ＧＭ 集落３．５～６．３×     

mIL-12基因转染促进小鼠树突状细胞混合淋巴细胞反应

目的 观察ｍＩＬ－１２基因转染的小鼠树突状细胞（ＤＣ）功能的改变。方法 分离小鼠骨髓单个核细胞与ｒｍＧＭ－ＣＳＦ和ｒｍＩＬ－４培养１周,对培养的细胞进行形态学观察,ＦＡＣＳ检测细胞表面ＤＥＣ２０５、ＣＤ８６表达。以ｍＩＬ－１２重组腺病志染培养的ＤＣ,ＥＬＩＳＡ测定培养上清中ｍＩＬ－１２的水平。混合淋巴细胞反应检测转染细胞的功能。结果培养１周后,得到具有典型ＤＣ形态的细胞,以ｍＩＬ－１２重组腺病毒为     

体外扩增造血细胞重建小鼠造血功能的实验研究

目的 探讨体外扩增造血祖儿定向诱导功能血红细胞生成的条件及扩增细胞重建长期造血能力的维持。方法 应用免疫磁珠法（ＭＡＣＳ）分离纯化脐带血ＣＤ３４＾＋造血干或祖细胞,在体外液体培养体系中经不同细胞因子的组合进行扩增和定向诱导,并将扩增细胞移植经亚致死剂量照射的ＳＣＩＤ小鼠。结果 ＦＬ、干细胞因子血小板生成素（ＴＰＯ）等细胞因子的不同组合可分别扩增细胞总数、粒系及巨核系造血祖细胞、ＣＤ３４＾＋ＣＤ３８     

脐血造血干细胞特性研究

应用造血祖细胞体外培养和流式细胞术（ＦＣＭ），观察了脐血中粒一单系祖细胞（ＣＰＵ－ＧＭ）、红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ）的数量和特性，并对其细胞增殖周期和骨贿及成人外周血做了比较，实验提示脐血中含丰富的ＣＦＵ－ＧＭ和ＢＦＵ－Ｅ，其数量低于成人骨髓而大大超过外周血水平，脐血红系祖细胞对ＥＰＯ、ＢＰＡ表现出更高的敏感性，而粒系祖细胞对ＣＳＦ的敏感性和骨髓比较似无明显差别．脐血Ｓ期、Ｇ２＋Ｍ期，及Ｓ＋Ｇ２Ｍ期细胞数均明显低于骨髓，虽略高于外周血各期细胞数，但差别无显著性意义．     

WEHI－3细胞的自我刺激作用

采用体外液体培养和琼脂半固体培养方法，观察ＷＥＨＬ－３细胞的生长特点。结果表明，种入的细胞浓度越高，细胞增殖越快；ＷＥＨＩ－３细胞条件培养液对ＷＥＨＩ－３细胞的生长、集落形成及小鼠粒－单系造血祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）产率均有明显的刺激作用（Ｐ＜０．０１）。提示ＷＥＨＩ－３条件培养液具有ＧＭ－ＣＳＦ活性。     

胎肝造血基质细胞条件液对WEHI_3细胞增殖分化的影响

采用体外液体培养法，观察不同浓度及不同胎龄人胎肝造血基质细胞条件培养液（ＨＦＬＳＣ－ＣＭ）对ＷＥＨＩ＿３细胞增殖与分化的影响。结果表明：５月龄ＨＦＬＳＣ－ＣＭ能促进ＷＥＨＩ＿３细胞增殖与分化；７月和９月龄ＨＦＬＳＣ－ＣＭ抑制ＷＥＨＩ＿３细胞增殖，促进分化。文中讨论了人胎肝造血基质细胞与造血的关系以及不同时期造血基质细胞的作用。     

脐血血清对正常及白血病骨髓粒－单祖细胞生长的影响

利用粒－单祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）的体外培养，观察脐血血清（ＵＣＳ）对正常及白血病骨髓造血祖细胞生长的影响，结果表明：ＵＣＳ对正常及急性白血病（ＡＬ）患者完全缓解的骨髓ＣＦＵ－ＧＭ形成有一定增殖作用，而对初发／复发未治ＡＬ患者的骨髓ＣＦＵ－ＧＭ形成无类似作用。