单采新鲜血小板与冰冻血小板的临床疗效观察

[目的]观察单采新鲜血小板与冰冻血小板的临床疗效.[方法]观察比较输注单采新鲜血小板与冰冻血小板在非血液病患者与血液病患者中24 h后的血小板变化水平及临床疗效.[结果]289例次非血液病输注单采新鲜血小板与冰冻血小板病例,输后血小板上升值与输注前相比有显著性差异（P〈0.05）,两组输注的疗效无明显差异（P＞0.05）;114例次血液病患者输注单采新鲜血小板与冰冻血小板病例,输注单采新鲜血小板后的血小板上升值与输注前相比有明显差异（P〈0.05）,输注冰冻血小板后上升值与输注前相比,无明显差异（P＞0.05）,输注新鲜血小板后上升值明显高于输注冰冻血小板后上升值（P〈0.05）.两组输注的疗效无明显差异（P＞0.05）.[结论]输注单采新鲜血小板或冰冻血小板均能达到控制及预防出血的治疗作用,对于血液病单采新鲜血小板的升外周血血小板的效果优于冰冻血小板,冰冻血小板可作为抢救危重患者时代替单采新鲜血小板.     

不同常规保存血小板冰冻保存效果研究

目的了解常规保存不同时间的机采血小板冰冻前后质量指标变化及输注疗效，探讨血小板冰冻处理前常规保存调控的最佳方案。方法对120袋机采血小板随机分成6组，在（22±2）℃平床振荡条件下，分别保存0、1、2、3、4、5d然后制备冰冻血小板，并对血小板冰冻前与复温后分别计数血小板，检测pH值，跟踪调查输注冰冻血小板的患者，计算回收率。结果有效期内（22±2）℃振荡保存的血小板产品中血小板计数无显著性差异，pH值下降明显；冰冻前后血小板计数有显著性差异，pH值无差异。保存3d内的血小板冰冻后血小板的输注回收率无差异，与保存4d、5d的血小板冰冻后的回收率有显著差异。结论（22±2）℃振荡保存3d内的血小板可以制备冰冻血小板，保存4-5d的血小板可以输注但不宜制备冰冻血小板。     

深低温长期保存红细胞的效果评价

目的 对红细胞在深低温(-70±5)℃下保存12年的效果进行评价.方法 采用ACD-B抗凝全血制备浓缩红细胞,加入冰冻保护剂于(-70±5)℃保存12年.快速解冻后,用Haemonetics215型全自动血液处理机洗涤去甘油.洗涤后制备成红细胞悬液,检测其中的红细胞回收率、残余白细胞、残余血小板、甘油残留含量、游离血红蛋白含量,并进行ATP、2,3-DPG的检测.结果 红细胞在深低温保存12年复苏去甘油后除红细胞回收率(71.40％)略低外,其它各项指标均符合中华人民共和国国家标准.深低温保存12年后的红细胞与新鲜红细胞相比,2,3-DPG含量没有显著性差异,ATP含量下降为新鲜红细胞67.2％.结论 用含甘油的冰冻保护剂深低温长期保存红细胞是一种安全、有效的方法.     

-80℃保存机采浓缩血小板的研究

目的：探讨-80℃冰冻保存机采浓缩血小板的功能及止血效果。方法：随机抽取冰冻保存3个月之内、3～6个月之间、6～9个月之间的冰冻血小板样品于42℃解冻后进行相关实验，比较不同保存时期冰冻血小板的功能及回收率；分血液病组和非血液病组观察患者输注冰冻血小板24h后出血症状的控制及校正血小板增高指数CCI值。结果：冻存3个月内、3～6个月的两组冰冻血小板的黏附功能、聚集功能与新鲜机采血小板相比差异均无显著性（P〉0．05），而冻存6～9个月的冰冻血小板的黏附功能与新鲜机采血小板相比则差异有高度显著性（P〈0．01）。3组冰冻血小板的第Ⅲ因子活性测定与新鲜血小板相比。均在正常范围，平均回收率为85．2％。两组患者在输注冰冻血小板24h后能有效控制出血症状的比率平均为93、3％；而CCI值≥10000／μL的比率，非血液病组显著高于血液病组。结论：5％二甲基亚砜-80℃冰冻保存半年以内的机采浓缩血小板具有良好的止血功能     

深低温保存单采血小板凋亡相关miRNA的差异表达

目的了解单采血小板在深低温保存过程中凋亡相关microRNA(miRNA)的表达改变。方法应用miRNA微孔板芯片技术分析-80℃保存不同时间单采血小板凋亡相关miRNA表达谱的差异,同时利用qRT-PCR技术验证该结果的准确性;采用生物信息学软件预测差异表达miRNA可能的靶基因。结果与新鲜单采血小板相比,凋亡相关miRNA表达谱在血小板-80℃保存5 d时无明显变化、保存7 d时仅有2种明显上调变化的miRNA:miR-216和miR-296。选择表达谱中miR-216 miR-296 miR-7和miR-16共4种miRNA做qRT-PCR验证:以新鲜血小板表达水平为基准值1,-80℃保存5、7 d后miR-216的相对表达量分别为1.81±0.21和2.88±0.23,miR-296的相对表达量分别为2.27±0.20和3.85±0.17,miR-7的相对表达量分别为0.89±0.06和0.76±0.03,miR-16的相对表达量分别为1.12±0.35和1.40±0.32,miR-216和miR-296在7 d保存过程中表达上调(P0.05),miR-7和miR-16的表达未发生明显变化(P0.05)。结论短期(7 d)深低温保存单采血小板凋亡相关miRNA的表达谱接近新鲜单采血小板。     

贮存温度波动与冰冻血小板不可逆聚集发生的相关性研究

目的探讨冰冻血小板保存温度波动与冰冻血小板不可逆聚集情况发生的相关性。方法对2006-2008年共1842袋冰冻血小板在保存期间不同温度波动范围与融化后发生血小板不可逆聚集的情况进行统计分析。结果冰冻血小板保存温度分别在-80-60℃和-80-50℃范围波动,冰冻血小板融化复苏后血小板不可逆聚集发生率分别为6．39％和31．21％,保存温度在-80-70℃范围波动的对照组血小板不可逆聚集发生率为2．25％,前两种保存温度与对照组比较,组间差异均有统计学意义（P〈0．01）;保存温度在-80-50℃范围波动,手采和单采两种冰冻血小板融化复苏后,单采冰冻血小板不可逆聚集的发生率为72．97％,手采冰冻血小板不可逆聚集为18．33％,二者的发生率差异有统计学意义（χ^2=39．33,P〈0．01）;保存温度在-80-60℃范围波动,单采与手采两种冰冻血小板比较,差异无统计学意义（χ^2=0．89,P〉0．05）。结论当冰冻血小板保存温度分别在-80-60℃和-80-50℃波动时,融化复苏后血小板不可逆聚集有较高的发生率,在-80-70℃范围波动时,血小板不可逆聚集发生率较低-80-70℃的温度范围可以作为目前采供血机构保存冰冻血小板选择温度条件的参考。     

采集后6小时与72小时制备的冰冻单采血小板质量研究

目的通过比较采集后6h和72h制备的冰冻单采血小板制品的多项质量参数,为冰冻单采血小板的制备标准提供依据。方法以美国产Trima血细胞分离机配套全密闭7d保存袋采集的单采血小板,分别于采集后6h和72h制备为冰冻血小板制品,1周后复苏留样,分别检测血小板计数（PLT,MPV,PCT,PDW）、血小板粘附性、血小板P选择蛋白、PF3A、PF4、pH值、血块收缩试验（血浆法）。结果采集后6h和72h制备的冰冻单采血小板,两者相比差异无统计学意义（t〈0．01,P〉0．05）。单采血小板在不同保存条件下,PF3A均保持了良好的PF3活性,单采血小板在常规或冰冻保存条件下,PF4及P选择蛋白的表达均明显增加,采集后6h和72h制备的冰冻单采血小板相比,差异无统计学意义（t〈0．01,P〉0．05）;单采血小板在常规保存3d内,粘附功能和血块收缩试验没有明显变化,而冰冻保存的单采血小板这两项指标呈明显减退现象,血小板的活力下降明显。结论以美国产Trima血细胞分离机配套全密闭7d保存袋采集的单采血小板,分别于采集后6h和72h制备的冰冻血小板制品,两者的体外指标分析结果相比差异无显著性,且都能有效的改善和控制急性大出血患者的出血倾向,用于抢救急性大出血患者疗效是可靠的。     

单采新鲜血小板与冰冻血小板的输注效果分析．

[目的]探讨单采新鲜血小板与冰冻血小板的临床输注效果。[方法]76例血小板减少或血小板功能障碍患者输注单采血小板,随机分为两组,48例输注单采新鲜血小板,28例输注冰冻血小板,观察输注前后24h外周血血小板计数及出血止血情况。[结果]输注新鲜血小板组与输注冰冻血小板组在止血效果方面无明显差异,但在提高外周血血小板计数方面,新鲜血小板组明显优于冰冻血小板组。[结论]提倡新鲜血小板输注,冰冻血小板可以用于急救由于血小板减少导致的出血性疾病。     

低温-80℃长期保存单采血小板的功能研究

目的 :为明确长期冰冻保存的单采血小板的功能 ,并对冰冻单采血小板的保存时间进行初步探讨。方法 :对冰冻保存前后的单采血小板进行回收率、粘附率、聚集强度和Ⅲ因子活性进行检测。结果 :冰冻保存后的回收率为 83 8%± 8 3 % ,粘附率为 5 9 0 %± 9 2 % ,聚集强度为 66 1%± 13 2 % ,Ⅲ因子活性为 ( 18± 3 )s。结论 :冰冻保存后的单采血小板仍具有较好的功能活性     

冰冻保存对机采血小板释放5-HT的影响

目的 观察冰冻保存对机采血小板释放5-HT 的影响.方法 常规以二甲基亚砜(DMSO)为冷冻保护剂、-80 ℃冰冻保存机采血小板30 d;采用全自动血细胞分析仪检测并比较冰冻保存前后血小板计数(PLT)、血小板平均体积(MPV)和血小板体积分布宽度(PDW);ELISA法检测冰冻前后及在阳离子没食子酸丙酯(C-PG)、凝血酶(thrombin,THB)、二磷酸腺苷(ADP)、胶原(Collagen)等不同PLT诱导剂激活作用下PLT释放5-HT的数量.结果 冰冻复苏后机采血小板计数变化不大(P>0.05),但MPV和PDW 均增加,血小板制品血浆5-HT含量也显著增高(P<0.01).在不同诱导剂作用下,新鲜血小板释放5-HT均高于冰冻保存的血小板,差异有显著性(P<0.01).结论 (1)机采血小板冰冻保存与解冻过程中,会引起血小板膜形态和生物活性改变.(2)冰冻保存后PLT对不同诱导剂的反应下降.     

利用SCID小鼠模型评价-80℃冷冻人血小板的体内生存能力

为了评估人血小板-80℃冷冻保存后在活体内的生存能力,取新鲜机采血小板加入二甲基亚砜（DMSO）,使其终浓度为5％,于～80℃保存10天后,取出立即放置于37℃水浴箱中快速解冻,并离心浓缩10倍。用带有超细针头的胰岛素注射器抽取浓缩血小板1130μl,经尾静脉注入重症联合免疫缺陷（SCID）小鼠体内,在注入0．5、2、4、6、12、24小时时采集小鼠全血,肝素抗凝,用CD61-PE标记后,流式细胞术计数人血小板,以30分钟时的人血小板计数为100％,计算人血小板存活率。结果表明：冷冻血小板在活体内存活率明显降低,新鲜血小板和冷冻血小板输注SCID小鼠体内4小时时的存活率分别为（79．5±9．1）％和（40．6±6．6）％（P〈0．01）,推算半寿期（T1/2）分别为7小时和2．5小时。结论：血小板-80℃冷冻保存后在活体内的生存能力降低。     

血小板冷冻保存的研究

用终浓度4％二甲基亚砜(DMSO)作为防冻剂,于—30℃和—80℃冷冻保存血小板以开展低温保存血小板的输注。体内外研究结果表明:DMSO对血小板粘附和单一诱聚剂所致的聚集有可逆性抑制作用;洗涤去除DMSO后,粘附、聚集可以恢复。联合诱聚剂所致的聚集不受DMSO影响。冻存后的血小板粘附、聚集和低渗休克反应较冻前有所降低,与保存时间(1和3个月)无关。—80℃保存的血小板质量优于—30℃保存者。输注—80℃保存的血小板可提高患者的血小板数,因而能有效地预防和控制因血小板减少导致的出血。     

二甲亚砜与海藻糖联用对冷冻保存血小板的保护作用

本研究观察二甲亚砜（DMSO）与海藻糖联用对冷冻保存血小板的保护效果。实验分设空白组、海藻糖组、DMSO组、5％DMs0加海藻糖联用组、2．5％DMSO加海藻糖联用组。各组血小板置-80℃冰箱保存,37℃水浴融化。采用血细胞计数仪测定血小板回收率和MPV值、电子显微镜观察血小板超微结构变化和流式细胞仪测定血小板的CD41、CD42b、CD61及CD62p的表达水平。结果表明：海藻糖单独应用对提高回收率的保护作用不强,但海藻糖处理后冷冻保存的血小板的形态接近正常。DMSO在保证冷冻保存血小板的回收率和血小板整体完好性方面作用较为突出,但其血小板形态偏向于肿胀,仍有部分血小板呈异形性改变。DMSO和海藻糖合用对维持血小扳外部形态和内部结构接近正常稳态方面具有保护作用,同时保证冷冻保存血小板具有理想的回收率和较高的CD41、CD42b、CD61、CD62p表达水平。结论：DMSO和海藻糖联合应用对冷冻保存血小板具有协同保护作用,但DMSO和海藻糖单用或合用都较难抑制冷冻保存血小板的活化,两者合用作为血小板冷冻保护剂有望促使冷冻保存血小板临床输注效果的进一步提高。     

A comparison of frozen and fresh platelet concentrates in the support of thrombocytopenic patients

Ten patients scheduled to receive intensive chemotherapy were plateletapheresed and the platelet-rich plasma was frozen with 5 percent dimethyl sulfoxide at -80 to -95 degrees C until needed. Paired comparisons of frozen autologous platelets with fresh single-donor platelets were made in seven patients using corrected platelet increments at 1 and 24 hours, and pre- and posttransfusion bleeding times. In vitro tests of 12 units of platelet-rich plasma before and after freezing included platelet factor 4 (PF4) secretion, malondialdehyde production, and electron microscopic evaluation of morphology. Fresh platelets provided significantly better 1- and 24-hour corrected increments compared with frozen autologous platelets. In only one case of alloimmunization did frozen autologous platelets provide a better increment than fresh platelets. Bleeding times after transfusion showed no consistent improvement regardless of type of transfusion or platelet count. Secretable PF4 remained constant after freezing, but malondialdehyde production fell significantly. Platelets showed considerable structural damage with 33 percent balloon forms counted after thawing, compared to less than 1 percent before freezing. Except in the case of alloimmunization, frozen autologous platelets are inferior to single-donor fresh platelets, and are significantly damaged in the freezing process.     

Cryopreserved platelets have decreased adhesive capacity

The technique of freezing blood platelets has proven very useful in transfusion support of some patients who have become alloimmunized by prior transfusions. Although transfused frozen platelets have an acceptable life span in vivo, functional defects have been found when these cells were tested in vitro. The adhesive properties of frozen platelets were investigated by use of a modified Baumgartner chamber to perform paired perfusion studies of fresh versus frozen platelets or fresh versus 5-day-stored platelets from the same whole blood unit. Platelets were either frozen in liquid nitrogen with dimethyl sulfoxide as the cryopreservative or stored under standard blood bank conditions for 5 days. The freeze-thaw recovery of platelets was 73 +/- 8 percent. Frozen platelets exhibited a significant decrease in platelet adhesion as compared to fresh platelets from the same unit; adhesion of frozen platelets was only 53 percent of that of fresh platelets (p = 0.04). A slight, but insignificant decrease was noted with platelets stored for 5 days (86%, p = 0.197). These findings indicate that frozen-thawed platelets have a significant defect in adhesive capacity as compared to fresh platelets, and that platelets stored under blood bank conditions for 5 days maintain adhesive capacity well.     

超低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存造血干细胞的比较

背景：在造血干细胞整个冷冻保存过程中,受到降温速率、储存温度深浅、冷冻保护剂组合等因素影响,各国学者在提倡选择何种保存方法上面存在不同的主张。目的：比较-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存外周造血干细胞的效果。方法：将采集的造血干细胞分两组,第一组细胞浓度为1×1011L-1,加入10%二甲基亚砜,放入程序冷冻仪内程序设置为室温至-4℃按1℃/min的速率降温,按35℃/min快速降至-45℃,再以15℃/min升至-21℃,然后以5℃/min降至-90℃,取出冷冻管置-196℃液氮罐内。第二组细胞浓度为1×1011L-1,加入5%二甲基亚砜、3%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白,将冷冻管置-80℃冰箱过夜后取出,置-196℃液氮罐内的气相,再过夜后置液氮罐液相内。结果与结论：两组冷冻方法保存细胞的锥虫蓝拒染率、回收率、凋亡率和死亡率差异无显著性意义（P〉0.05）。结果显示用5%二甲基亚砜、4%白蛋白、3%羟乙基淀粉组成的冷冻保护剂,通过-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法冷冻保存造血干细胞与传统10%二甲基亚砜作为冷冻保护剂用程序降温的方法取得一样效果,操作简便易于临床应用。     

冷冻自体血小板在自体干细胞移植患者中的应用

目的观察行自体干细胞移植的淋巴瘤患者输注冷冻自体血小板的效果。方法选择6例行干细胞移植患者,移植前使用血细胞分离机采集患者自体血小板13次。在血小板中加入终浓度5％DMSO,于-80℃保存。当患者血小板小于20×10^9／L时,于37℃水浴箱快速解冻复苏后输注。分别测定冷冻前后血小板回收率以及22℃保存5d血小板的CD42b、CD62p及输注后1h血小板校正增加值（CCI）。结果血小板复苏后回收率为58％～85％,平均回收率为72．5％土8．2％。血小板CD42b由冷冻前的93．2％±6．0％下降到复苏后的80．1％±4．6%,CD62p由冷冻前的1．9oA±0．9％上升到18．1％土10．1％（P〈0．05）,但与22℃保存5d的血小板CD42b、CD62p比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）,在可接受的范围内。13例次的血小板输注中,11次1hCCI〉7．5。结论造血干细胞移植患者输注自体血小板是安全且可行的,可替代异体血小板输注,有助于节约血源、避免输血传播疾病及减少输血引起的同种免疫。     

冰冻血小板与新鲜血小板的疗效比较

目的比较冰冻血小板和新制备的血小板的在临床上的应用效果。方法选268例新制备的血小板与296例冰冻的血小板输注病例,观察两组输注血小板前后的临床表现并进行血小板的计数。结果在564例病案中,输注新制备血小板后的患者外周血血小板上升的程度和总有效率明显高于输注冰冻血小板的患者,两者之间差异有显著性(P<0.05)。结论输注新鲜血小板或冰冻血小板均能达到控制及预防出血的治疗作用,并且提升机体血小板数值,虽然新鲜血小板的疗效优于冰冻血小板,但冰冻血小板可以在抢救危重患者时代替机采新鲜血小板。     

骨髓细胞液氮保存21-25年后的细胞活力体外研究

为探讨适合临床应用的骨髓细胞保存方法,揭示细胞长期低温保存效果,将20人份骨髓加入DMSO-AuP(10%二甲亚砜、10%自体血浆)或DMSO-HES-HuA(5%DMSO、6%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白)保护剂,分装2毫升/管,600-800管/人份,自控程序降温仪或-80℃低温冰箱预冻降温、液氮中保存21-25年。取冷冻骨髓细胞于38℃复温,检测细胞相关指标。结果表明:加保护剂的细胞标本在-80℃低温冰箱中为低速降温,-30℃前,与自控程序降温仪设定1℃/min的低降温速率接近。DMSO-HES-HuA与DMSO-AuP比较,红细胞形态畸形率分别为(3.5±1.5)%和(12.6±4.8)%;溶血率分别为(3.3±1.6)%和(23.1±5.1)%(p0.05);前者渗透性脆性不变,后者减低;红细胞、血小板、粒单系造血祖细胞、长期培养起始细胞回收率,前后者对比分别为(96.1±1.8)%、(70.0±9.5)%、(49.2±10.9)%、(54.2±13.8)%vs(76.3±5.6)%、(52.7±8.1)%、(43.5±12.3)%、(47.2±13.6)%。用上述保护剂配合上述降温法保存后,细胞在间充质干细胞培养上,生长特性良好。同一保护剂用上述两种降温法保存后,细胞各种回收效果差异不显著(p0.05)。结论:细胞在液氮中保存21-25年,其细胞形态和回收活力(率)良好;保存如骨髓这种细胞成分并非单一的标本时,用5%DMSO-6%HES-4%HuA为保护剂的-80℃冰箱预冻降温后液氮保存,方法简便、经济、易操作,适合临床应用。