沙利度胺对系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨沙利度胺(Thd)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的免疫凋节作用.方法 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测Thd对SLE患者外周血T淋巴细胞增殖的影响,用流式细胞术检测T淋巴细胞早期凋亡及CD3~+CD28~+和CD8~+CD152~+的表达,用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测T淋巴细胞白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-a mRNA的表达,采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 在体外,500 μg/ml Thd组CD3~+CD28~+表达为(48±9)%显著低于对照组(57±9)%(P<0.05)、500μg/ml Thd组T淋巴细胞凋亡率为(36±8)%显著高于对照组(23±5)%(P<0.05);100、300、500μg/ml Thd组A_(570nm)值分别为:0.39±0.05、0.34±0.04、0.30±0.03较对照组(0.51±0.07)均有明显下降(P<0.05);100、500 μg/ml Thd组CD8~+CD152~+表达分别为(5.0±0.6)%、(7.8±0.7)%,明显高于对照组(4.2±0.6)%(P<0.05);500μg/ml Thd能抑制IL-6 mRNA的表达,各剂量组均抑制IL-10、TNF-a mRNA表达.结论 Thd可能通过抑制T淋巴细胞增殖、CD28的表达、IL-6、IL-10、TNF-a mRNA的表达和促进T淋巴细胞凋亡、CD152表达来下调SLE患者的免疫反应.     

原发性胆汁性肝硬化模型中淋巴细胞增殖及活化诱导凋亡机制研究

目的 通过检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)动物模型肝脏和脾脏淋巴细胞增殖及活化诱导凋亡(AICD),了解PBC模型小鼠的免疫耐受情况.方法 聚肌苷酸胞嘧啶核苷酸(polyI:C)5 mg/kg剂量注射C57BL/6小鼠建立PBC模型,分离肝、脾淋巴细胞并纯化CD4~+T淋巴细胞,然后以M2蛋白及刀豆蛋白A(ConA)结合抗-CD3刺激细胞增殖及AICD,定量PCR和免疫印迹技术检测凋亡相关基因及信号蛋白.结果 ①M2蛋白刺激后,空白对照组和PBS组的细胞增殖能力(分别为0.1988±0.0111和0.2068±0.0115)差异无统计学意义(P>0.05),但是PBC组小鼠细胞增殖能力(0.358±0.022)与以上两组相比显著增强,且PBC组小鼠肝内淋巴细胞增殖能力强于脾淋巴细胞(P<0.01).②空白对照组和PBS组之间AICD情况差异无统计学意义(74.70%±4.58%比74.20%±4.44%,P>0.05),但均显著高于PBC组(44.85%±6.47%,P<0.01),同时PBC组小鼠肝内CD4~+T细胞的凋亡率显著低于脾脏(P<0.01).③PBC组小鼠肝脾淋巴细胞FasL、TRAIL基因的表达较PBS组均明显降低(P<0.01),而Fas表达无明显改变.④PBC组小鼠CD4~+T细胞长构型Fas相关死亡区域样白细胞介素-1β转化酶抑制蛋白(FLIP_L)表达明显升高,且肝内T细胞表达较脾脏显著增加(P<0.01).结论 FLIP_L表达增高可能是AICD受到抑制的重要原因,同时FasL和TRAIL mRNA表达降低可能也起到一定的作用.     

特发性血小板减少性紫癜患者CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞凋亡率的研究

目的:通过检测CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的凋亡率,探讨T淋巴细胞凋亡在特发性血小板减少性紫癜(ITP)免疫发病机制中的作用。方法:应用流式细胞仪检测ITP患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的凋亡率;分离ITP患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC),分成A、B 2组,A组加入白介素2(IL-2),B组加入IL-2和地塞米松共培养,分别于24和48 h收获细胞,应用流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的凋亡率。结果:①ITP患者组CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞凋亡率均明显低于正常对照(均P<0.01);②细胞培养24 h时ITP患者组A、B 2组间CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞凋亡率间均差异无统计学意义(均P>0.05),而48 h时B组CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的凋亡率均明显高于A组(P<0.05或0.01);正常对照组24和48 h B组CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞凋亡率均明显高于A组(均P<0.05);③ITP患者组细胞培养24 h后A、B 2组间CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞凋亡率的差值均明显低于正常对照组(P<0....     

异基因骨髓间充质干细胞对类风湿关节炎患者淋巴细胞的影响

目的 探讨在体外环境中,异基因骨髓间充质干细胞(BMSCs)对类风湿关节炎(RA)患者T、B淋巴细胞的增殖和功能成熟的影响.方法 采集健康供者的骨髓标本,经密度梯度离心分离、纯化获得其BMSCs,进行体外培养扩增.同时采集RA患者的外周血,分离单个核细胞.将来源于健康供者的BMSCs与来源于RA患者的单个核细胞在体外进行共培养,同时分别加入T淋巴细胞和B淋巴细胞刺激物.分别检测异基因BMSCs对RA患者T、B淋巴细胞增殖的影响;正常BMSCs对RA患者T淋巴细胞增殖周期和凋亡的影响;BMSCs对RA患者外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8、CD25表达的影响;以及BMSCs对B细胞分泌IgG的影响.结果 正常骨髓来源的BMSCs对RA患者T、B淋巴细胞增殖均有抑制作用,并且这种抑制作用与BMSCs的剂量呈依赖性;与BMSCs共培养组的T细胞主要处于G0/G1期,而进入细胞增殖周期的细胞比例减少,同叶与BMSCs共培养组的凋亡比例(15.2±0.6)%明显低于单纯T细胞活化组(28.2±1.8)%;与BMSCs共培养后CD3+CD4+T细胞表达阳性率(34±6)较对照组(44±7)降低(P<0.05),CD25+的表达下降,但CD4+CD25+调节性T细胞数(4.9±2.3)增加(P<0.05).在SAC刺激下,健康人BMSCs与RA患者外周血淋巴细胞共培养后IgG分泌升高.结论 异基因BMSCs对RA患者T、B淋巴细胞的增殖和功能成熟均有影响,BMSCs可能在RA发病和病情进展中起一定的作用,同时证明利用MSCs来调节RA的免疫功能紊乱进行生物治疗是可行的.     

细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导小鼠脾细胞亚群的变化

目的 探讨细粒棘球绦虫(Eg)转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化.方法 热絮凝法提取转基因苜蓿叶蛋白,用无菌双蒸水将叶蛋白提取液配成20 g/L,同时提取转空质粒(pBI121)苜蓿叶蛋白及正常苜蓿叶蛋白作对照.32只雌性Balb/c小鼠按体质量随机分为4组,每组8只.口服灌胃组:灌胃接种100 μl转基因苜蓿叶蛋白提取液;鼻腔黏膜接种组:滴鼻接种10 μl转基因苜蓿叶蛋白提取液;空质粒对照组:滴鼻接种10μl转空质粒苜蓿叶蛋白提取液;正常蛋白对照组:灌胃接种100μl正常苜蓿叶蛋白提取液.小鼠每3天免疫1次,连续免疫2个月.末次免疫后第8周,各组小鼠用Eg原头节腹腔注射攻击感染(50个/只),感染后第24周剖杀小鼠,分离脾细胞,用流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群百分比.结果 口服灌胃组小鼠脾CD4+T细胞亚群百分比(0.286±0.009)、CD8+ T细胞亚群百分比(0.102±0.004)和CD4+/CD8+比值(2.814±0.014)均显著高于正常蛋白对照组(0.166±0.018、0.083±0.006、2.019±0.369,P<0.01或<0.05);鼻腔黏膜接种组小鼠脾CD4+T细胞亚群百分比(0.269±0.016)和CD4+/CD8+比值(2.955±0.986)与正常蛋白对照组比较明显升高(P均<0.01);口服灌胃组小鼠脾CD4+T细胞亚群百分比高于鼻腔黏膜接种组(P<0.05);空质粒对照组小鼠脾CD4+、CD8+T细胞百分比和CD4+/CD8+比值(0.169±0.018、0.093±0.019、1.852±0.188)与正常蛋白对照组比较,差异无统计学意义(P均>0.05).结论 CD4+T细胞亚群可能与细粒棘球绦虫转Eg95-Eg31融合基因苜蓿疫苗诱导的小鼠抗Eg原头节攻击感染的保护力有关.疫苗灌胃接种可能是一种较好的免疫途径.     

多房棘球蚴感染小鼠脾CD4~+T细胞亚群及其功能耗竭的变化

目的研究不同数量多房棘球蚴感染对小鼠脾CD4~+T细胞亚群及其免疫功能的影响。方法60只C57BL/6小鼠随机分为4组,每组15只,分别为假手术组、低数量感染组(50个原头节)、中数量感染组(500个原头节)和高数量感染组(2 000个原头节)。小鼠麻醉后经肝门静脉部位穿刺,注射不同数量原头节,假手术组注射等量生理盐水。于感染后2、 12和24周各组分别取5只小鼠,取脾组织研磨分离淋巴细胞。流式细胞术检测各组小鼠脾CD4~+T细胞记忆表型、不同亚群比例、免疫抑制性分子淋巴细胞活化蛋白3 (LAG3)表达。采用GraphPad Prism 6.0软件进行作图和统计学分析。结果感染后2周,低数量和中数量感染组小鼠脾CD4~+IFN-γ~+T细胞比例分别为(7.54±1.44)%、(7.58±3.17)%,高于假手术组的(3.52±1.03)%(P 0.05);CD4~+TNF-α~+T细胞比例分别为(39.34±4.19)%、(39.53±10.74)%,高于假手术组(22.62±1.50)%(P 0.01)。感染后12周,低数量和中数量感染组小鼠脾CD4~+IFN-γ~+T细胞比例分别为(16.52±0.77)%、(22.98±4.32)%,高于假手术组(16.88±2.49)%(P 0.05); CD4~+TNF-α~+T细胞比例分别为(27.26±2.12)%、(28.36±5.24)%,高于假手术组(19.72±3.87)%(P 0.05); CD4~+IL17A~+T细胞比例分别为(10.70±1.81)%、(11.52±2.68)%,高于假手术组(5.40±1.32)%(P 0.01);同时,低数量和中数量感染组小鼠脾CD4~+IL-4~+T细胞比例分别为(2.87±0.84)%、(3.50±0.77)%,高于假手术组(1.75±0.83)%(P 0.01); CD4~+IL-10~+T细胞比例分别为(4.63±0.78)、(7.09±2.42)%,高于假手术组(3.03±0.79)%(P 0.01)。感染后24周,中数量、高数量感染组小鼠脾CD4~+IFN-γ~+T、 CD4~+TNF-α~+T、 CD4~+IL-4~+T、 CD4~+IL-10~+T和CD4~+IL17A~+T细胞的比例均高于假手术组(P 0.05),且高数量组小鼠脾Treg细胞的比例高于假手术组(P 0.01),各感染组小鼠脾效应记忆性CD4~+T细胞比例高于假手术组;各感染组小鼠脾CD4~+LAG3~+T细胞比例分别为(16.45±4.89)%、(14.54±4.96)%、(14.62±2.43)%,高于假手术组(8.43±3.46)%(P 0.05)。感染后24周,高数量组小鼠脾CD4~+T细胞中分泌IFN-γ和TNF-α的LAG3阳性群细胞比例分别为(1.67±0.66)%、(0.69±0.27)%,低于阴性群的(5.11±1.81)%、(31.7±12.1)%(P 0.01)。结论低、中数量多房棘球蚴感染后,小鼠可能利用T1型和T17型免疫应答优势对虫体起到杀伤和清除;而高数量感染诱导脾T1/T2型和T17/Treg型免疫应答失衡,以及CD4~+T细胞上调LAG3分子表达,导致功能耗竭,造成棘球蚴慢性寄生。     

pcIL-18-MAGE-1共表达基因疫苗对肝癌细胞株SMMC-7721、Hepal-6增殖的影响

目的观察pc IL-18-MAGE-1共表达基因疫苗接种小鼠所引起的免疫应答情况以及对肝癌细胞株SMMC-7721、Hepal-6增殖抑制情况,探究pc IL-18-MAGE-1共表达基因疫苗抗肿瘤作用。方法用pc IL-18-MAGE-1基因疫苗免疫小鼠,同时设空白对照组和阴性对照组,免疫后收集脾细胞作为效应细胞,分别作用于靶细胞即肝癌细胞株SMMC-7721、Hepal-6。应用流式细胞仪(FCM)检测小鼠T细胞亚群情况及自然杀伤(NK)细胞活性,MTT法检测肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对靶细胞的杀伤作用。结果与对照组比较,共表达pc IL-18-MAGE-1基因疫苗对靶细胞均有明显的杀伤作用(P<0.01);对SMMC-7721细胞杀伤作用高于Hepal-6细胞(P<0.05)。免疫组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均高于阴性对照组(P<0.05)。结论 pc IL-18-MAGE-1共表达基因疫苗通过同时激活CD4+T细胞及CD8+T细胞、增加NK细胞活性及诱导肿瘤特异性CTL直接杀伤肿瘤细胞,发挥抗肿瘤作用。     

4-1BB单克隆抗体对免疫性肝损伤治疗及CD4+CD25+T淋巴细胞影响研究

目的 探讨4-1BB单克隆抗体(4-1BBmAb)对免疫性肝损伤治疗及对CD4+CD25+T淋巴细胞影响.方法 建立小鼠刀豆蛋白A(ConA)肝损伤模型,检测4-1BB表达,ConA注射后2 h给予4-1BBmAb(100μg/只),观察肝功能及病理学变化,流式细胞仪检测CD4+CD25+T淋巴细胞.结果 丙氨酸转氨酶(ALT)模型组(139±22)U/L,对照组(32±12)U/L,天冬氨酸转氨酶(AST)分别(130±16)U/L及(29±11)U/L,两组差异有统计学意义(P<0.01);模型组4-1BB表达(8.1±2.6)比对照组(5.3±2.6)升高(P<0.01).4-1BBmAb治疗后ALT(98±14)U/L,AST(89±11)U/L降低(P<0.01).模型组CD4+CD25+T淋巴细胞(2.9±0.8)低于对照组(3.6±1.2)(P<0.05),4-1BBmAb组(8.3±3.0)高于生理盐水组(3.0±0.8)(P<0.01).结论 4-1BBmAb对免疫性肝损伤有治疗作用,影响CD4+CD25+T淋巴细胞达到治疗肝损伤目的 .     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子编码基因对乙型脑炎DNA疫苗细胞免疫增强效应的影响

目的 研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)编码基因对乙型脑炎(JE)DNA疫苗细胞免疫应答的影响.方法 套式RT-PCR法获取BALB/c小鼠GM-CSF编码基因,构建含乙型脑炎病毒(JEV)前膜(prM)-包膜(E)蛋白与GM-CSF编码基因以及单纯GM-CSF编码基因的重组质粒,分别命名为pJME/GM-CSF和pGM-CSF.脂质体法转染上述质粒入中华仓鼠卵巢细胞(CHO),免疫荧光法检测编码蛋白的表达与分布.流式细胞仪检测经不同组合的免疫原免疫后小鼠脾T淋巴细胞亚群及Th细胞内细胞因子(IFN-γ、IL-4)变化,LDH法测定CTL活性.数据行单因素方差分析及最小显著差数法比较.结果 重组质粒pJME/GM-CSF与pGM-CSF经鉴定构建正确,所编码的蛋白主要分布于胞质,少量分布于胞膜.pJME/GM-CSF组CD4+T淋巴细胞比例为(33.90±0.79)%,明显高于其他组(t值分别为9.818、6.804、6.594、10.061、9.380和17.675,均P<0.05).pJME+pGM-CSF同时注射组及pGM-CSF注射3 d后接种pJME组CD4+T淋巴细胞比例分别为(29.83±0.61)%、(29.70±0.51)%,高于pJME注射3 d后接种pGM-CSF组的(27.69±0.50)%(t=3.466、t=3.255,P<0.05).pJME/GM-CSF组与pJME+pGM-CSF同时注射组CD8+T淋巴细胞比例较空载体(pcDNA3.1+)组及JE灭活疫苗组升高(t值分别为3.811、2.627、10.537和3.811,均P<0.05).pJME/GM-CSF组CTL活性为(51.48±0.10)%,明显高于其他组(t值分别为22.868、13.823、5.377、32.287、34.632和53.795,均P<0.05).pJME/GM-CSF组、pJME+pGM-CSF同时注射组及pGM-CSF注射3 d后接种pJME组IFN-γ/IL-4比值分别为19.13±1.36、12.32±0.82、7.05±0.43,明显高于其他组(P<0.05).结论 GM-CSF编码基因可增强JE DNA疫苗的细胞免疫应答效应.     

细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的动态观察

目的 动态观察细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化.方法 将120只Balb/c小鼠按体质量随机分为3组:鼻腔内接种组、口服灌胃组、对照组.将疫苗分别采用鼻腔内接种和口服灌胃免疫实验组小鼠,对照组单次接种10μl磷酸盐缓冲液(PBS)于小鼠鼻腔黏膜.在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18周各剖杀4只小鼠,取脾脏,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的百分比.结果 不同组的小鼠脾细胞CD4+、CD8+亚群百分比比较差异有统计学意义(F值分别为21.56、22.08,P＜0.05),不同周数的小鼠脾细胞CD4+、CD8+亚群百分比比较差异有统计学意义(F值分别为5.75、6.29.P＜0.01).鼻腔内接种组的脾CD4+、CD8+T细胞亚群分别在免疫后6-18、12周升高,在免疫后10、12周达最高水平,其值分别为0.348±0.013、0.090±0.003.与0周(0.230±0.022、0.069±0.015)比较差异有统计学意义(q值分别为7.32、5.32,P＜0.01或＜0.05);口服灌胃组脾细胞CD4+、CD8+T细胞亚群分别在免疫后6～16、8-18周增加,分别在免疫后10、16周达最高水平,其值分别为0.405±0.006、0.096±0.004,与0周(0.230±0.022、0.069±0.015)比较差异有统计学意义(q值分别为7.53、5.35,P＜0.01或＜0.05).结论 CD4+、CD8+T细胞亚群在细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗诱导的小鼠免疫应答中起重要作用.     

MF59佐剂增强热灭活卡介苗的免疫原性

目的 研究MF59佐剂[一种由角鲨烯、山梨糖醇三油酸酯（Span85）、吐温80和柠檬酸缓冲液组成的水包油乳剂]对热灭活BCG（hBCG）免疫小鼠诱导免疫应答的影响,验证自制MF59增强hBCG诱导细胞免疫反应的作用.方法 BALB/c （SPF级）小鼠分成A～G组,每组8只,于第0、2、4周皮下注射0.2 ml MF59、低剂量hBCG（0.025 mg/ml）、中剂量hBCG（0.25 mg/ml）、高剂量hBCG（2.5 mg/ml）、MF59＋低剂量hBCG、MF59＋中剂量hBCG、MF59＋高剂量hBCG.末次免疫2周,解剖小鼠.取小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞,并在体外经BCG PPD刺激培养,ELISA检测培养上清γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-1β、Ib-2、IL-4、IL-12含量,酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测脾细胞分泌IFN-γ、IL-2和IL-4的斑点形成细胞数（SFCs）.所有试验组的平均值比较采用一元方差分析、每两组平均值比较采用最小显著差异法,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 MF59作为高剂量hBCG的佐剂（G组）免疫小鼠,其脾细胞体外经BCG PPD刺激培养,分泌IFN γ的SFCs[（151.3±66.6）个]、IL-2的SFCs[（247.8±58.0）个]和IL-4的SFCs[（65.8±24.6）个]显著高于其他组[其他组IFN-γ、IL-2和IL-4的SFCs的最高平均值分别为（30.4±13.0）个、（37.1±10.8）个和（16.4±9.7个）]（分泌IFN-γ的SFCs比较,t=3.2,P=0.007;分泌IL-2的SFCs比较,t=3.6,P=0.003;分泌IL-4的SFCs比较,t=3.0,P=0.01）.MF59与不同剂量hBCG联合免疫小鼠,其腹腔巨噬细胞体外经BCG PPD刺激培养,培养上清IL-1β水平分别为（663.3±177.5） pg/ml、（813.8±193.4）pg/ml和（742.3±316.1）pg/ml,均显著高于A、B和C组[分别为（104.7±65.8）pg/ml、（82.9±54.8） pg/ml和（66.5±53.5） pg/ml]（E、F和G与A组比较：t=2.9,P=0.01;t=3.5,P=0.004;t=2.5,P=0.031.E、F和G与B组比较：t=3.1,P=0.007;t=3.6,P=0.003;t=2.6,P=0.024.E、F和G与C组比较：t=3.0,P=0.01;t=3.5,P=0.004;t=2.5,P=0.031）.A、C和G组小鼠的腹腔巨噬细胞体外经BCG-PPD刺激培养,培养上清IL-12水平[分别为（36.3±20.5）pg/ml、（94.5±20.6）pg/ml和（128.2±54.6） pg/ml]均显著低于E和F组[（545.7±97.2） pg/ml和（665.5±295.4） pg/ml]（A、C和G组与E组比较：t=-5.1,P=0.000;t=-4.5,P=0.000;t=-3.7,P=0.002.A、C和G组与F组比较：t=-4.4,P=0.001;t=-3.7,P=0.002;t=-2.9,P=0.012）.结论 MF59与高剂量hBCG联合免疫小鼠,可以增强脾细胞体外分泌BCG-PPD特异的IFN-γ、IL-2和IL-4;MF59与低、中剂量hBCG联合免疫小鼠,可以增强腹腔巨噬细胞体外分泌BCG-PPD特异的IL-1β和IL-12.     

普伐他汀对病毒性心肌炎小鼠缝隙连接蛋白43的调节

目的 通过比较普伐他汀不同剂量干预组和模型对照组小鼠的缝隙连接蛋白43(connexin43,Cr43)及细胞因子干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-10的表达水平,探讨普伐他汀对急性病毒性心肌炎及其心律失常的作用,不同剂量疗效的差别及其作用机制.方法 取雄性4周龄Balb/c小鼠,分为模型对照组、普伐他汀40 mg·kg-1·d-1组、普伐他汀80 mg·kg-1·d-1组[以上3组均予以腹腔接种柯萨奇病毒B组3型(CVB3)],空白对照组和毒性实验组(以上2组均予以Eagle's 液腹腔注射).接种病毒当天(第O天),即开始给药.模型对照组和空白对照组给予生理盐水灌胃,毒性实验组用药同普伐他汀80 mg·kg-1·d-1组,持续2周.第14天处死存活鼠.ELISA、实时定量PCR法和免疫组织化学法检测Cx43、IFN-γ和IL-10改变.结果 模型对照组Cx43 mRNA明显少于普伐他汀40 mg·kg-1·d-1组和普伐他汀80 mg·kg-1·d-1组(1.000±0.127比1.320±0.096和1.550±0.126,P均＜0.05),免疫组织化学染色结果基本一致(0.16±0.06比4.55±0.73和5.21±0.42,P均＜0.01).普伐他汀40 mg·kg-1·d-1组、普伐他汀80 mg·kg-1·d-1组IL-10 mRNA表达明显高于模型对照组(1.810±0.029和2.140±0.032比1.000±0.031,P均＜0.05),而IFN-γ mRNA 模型对照组则高于普伐他汀40 mg·kg-1·d-1组、普伐他汀80 mg·kg-1·d-1组(1.000±0.061比0.603±0.063和0.333±0.071,P均＜0.01),血清IFN-γ、IL-10蛋白水平的改变与其核酸水平的改变基本一致.结论 普伐他汀对病毒性心肌炎有一定的疗效.普伐他汀能减轻Cx43基因及蛋白表达的降低,维持IFN-γ、IL-10基因的平衡表达,表明它可通过调节细胞因子的平衡和维持缝隙连接蛋白的正常表达发挥抗病毒性心肌炎及抗心律失常的作用.     

糖皮质激素对支气管哮喘豚鼠模型嗜酸粒细胞趋化因子、CC趋化因子受体3和白介素5作用的实验研究

目的 观察支气管哮喘(简称哮喘)豚鼠外周血、肺和骨髓组织嗜酸粒细胞(EOS)百分比和肺组织嗜酸粒细胞趋化因子(Eotaxin)、CC趋化因子受体3(CCR3)和白介素5(IL-5)的表达及激素对其影响,探讨在气道-骨髓-循环-气道是否存在着调控EOS定向迁移的信号环路及激素干预的机制.方法 健康雄性豚鼠40只,以卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作哮喘模型,随机分为正常组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松干预组(C组)和布地奈德干预组(D组),每组10只,在末次激发6 h后处死豚鼠,取豚鼠颈动脉血、骨髓和肺组织,分别制备血涂片、骨髓涂片和肺组织切片;外周血和骨髓涂片用Wright染色,光学显微镜下计数细胞总数和EOS百分比;肺组织切片HE染色,光学显微镜下计数细胞总数和EOS百分比;肺组织切片用Eotaxin、CCR3和IL-5多克隆抗体免疫组织化学染色,光学显微镜下分别计数阳性细胞百分比.结果 豚鼠外周血、骨髓和肺组织中.EOS百分比分别为:A组(1.33±0.52)%、(1.17±0.41)%,(1.67±0.52)%;B组(4.83±0.98)%、(3.17±0.75)%、(4.00±0.89)%;C组(2.68±1.03)%、(1.67±0.82)%、(2.83±0.75)%;D组(2.67±0.52)%、(1.83±0.75)%、(2.67±0.52)%;B组与A、C、D组比较差异有统计学意义(P<0.05),A组与C、D组比较差异有统计学意义,C组与D组比较差异无统计学意义,但C组较D组降低骨髓EOS百分比似乎更明显;豚鼠肺组织Eotaxin、CCR3和IL-5多克隆抗体免疫组织化学染色阳性细胞百分比分别为:A组(2.29±0.35)%、(2.07±0.15)%、(1.92±0.09)%;B组(3.27±0.42)%,(3.66±0.47)%、(3.03±0.33)%;C组(2.80±0.22)%、(2.98±0.45)%、(2.54±0.32)%,D组(2.75±0.31)%、(2.65±0.25)%、(2.32±0.12)%,B组与A、C、D组比较差异有统计学意义(P<0.05),A组与C、D组比较差异有统计学意义(P<0.05),C组与D组比较差异无统计学意义;相关性分析结果提示哮喘豚鼠肺组织中EOS百分比和Eotaxin、CCR3和IL-5在肺组织的表达均呈正相关(r=0.852,P<0.001)、(r=0.671,P<0.001)、(r=0.663,P<0.001).结论 哮喘豚鼠外周血、骨髓和肺组织EOS均明显增加,并与肺内Eotaxin、CCR3和IL-5的表达相一致,说明EOS浸润和上述因子有密切联系,并且激素可通过抑制Eotaxin、CCR3和IL-5的表达和活性,有效发挥抗EOS炎症作用,是激素控制哮喘发病的重要机制.     

两种心肌保护液在婴幼儿心脏手术中心肌保护临床效果的比较

目的:比较两种心肌保护液在婴幼儿术中心肌保护的效果。方法:36例体质量小于15 kg先天性心脏病患儿，随机分为A、B两组:A（n=18）组采用晶体:血液=1∶1冷血停跳液作为心肌保护液，B组（n=18）采用晶体:血液=1:4温血停跳液作为心肌保护液，分别于麻醉诱导前（T1）、升主动脉阻闭后5 min（T2）、开放后5 min（T3）、停机后5 min（T4）、术后1 h（T5）、术后24 h（T6）采集两组患者动脉血行炎性因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-8（IL-8）检测；于T1、T5、T6、术后48 h（T7）采集两组患者动脉血行心肌酶谱及心肌损伤标记物检测。记录两组患儿术后呼吸机带机时间、转出ICU时间及手术死亡率、术后并发症发生情况。结果:两组患儿年龄、体质量、预充液组成、心肌保护液用量、体外循环时间、升主动脉阻闭时间、心肌保护液灌注次数等比较，均无显著性差异；B组患儿心肌保护液的血浆胶体渗透压明显高于A组［(14.9±0.8) mmHg vs.(8.0±0.5) mmHg，P<0.01）；B组患儿心肌保护液的灌注压力明显低于A组〔(51±5) mmHg vs.(107±8) mmHg，P<0.01〕；开放升主动脉后心脏自动复跳率略高于A组（94% vs. 89%），B组自动复跳时间明显短于A组〔(0.86±0.15) s vs.(8.63±0.95) s，P<0.01〕；体外循环期间，B组患儿尿量多于A组〔(43±6) ml vs.(29±11) ml，P<0.05〕；两组患儿围术期心肌损伤标记物血浆含量、TNF-α血浆含量无显著差异。炎性因子IL-8血浆含量在T2、T3、T4、T5、T6时，B组浓度明显低于A组，组间比较均有显著性差异（P<0.05，P<0.01）；术后呼吸机辅助时间、ICU滞留时间两组比较无显著性差异。结论:温血心肌保护液可能会在一定程度上改善婴幼儿术中心肌保护效果，但是临床转归未达到显著差异。     

硒对氟中毒鸡淋巴细胞亚群及脾淋巴细胞凋亡的影响

目的 观察硒对慢性氟中毒鸡血液、脾脏CD4~+,CD8~+淋巴细胞亚群以及脾淋巴细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 将8日龄海蓝褐雏鸡180只按体质量随机分为3组:对照组、氟中毒组、硒拮抗组,每组60只,分别饲以含氟195、1000、1000 ms/kg、含硒0.08、0.08、4.00 mg/kg的全价日粮.于30、60、90 d用流式细胞术检测外周血和脾脏中CD4~+、CD8~+淋巴细胞水平,TUNEL法检测脾淋巴细胞凋亡情况.结果 与对照组比较,30、60、90 d氟中毒组外周血CD4~+淋巴细胞水平降低[(35.36±4.27)%vs(24.29±2.96)%、(47.65±5.42)%vs(41.62±3.96)%、(49.58±3.98)%vs(42.35±6.03)%,P<0.05或<0.01],CD4~+/CD8~+比值也明显降低[(1.701±0.145)%vs(1.393±0.163)%、(2.712±0.345)%vs(1.781±0.201)%、(2.438±0.356)%vs(1.973 ±0.229)%,P<0.05或<0.01];与氟中毒组比较.30、60、90 d硒拮抗组外周血中CD4~+淋巴细胞水平升高[(29.40±3.38)%、(45.40 ±6.01)%、(46.85 ±5.25)%,P<0.05或<0.01],60、90 d时CD4~+/CD8~+比值明显回升[(2.004±0.314)%、(2.211±0.229)%,P均<0.01].与对照组比较,30、60、90 d氟中毒组脾脏中CD4~+淋巴细胞水平降低[(47.33±5.35)%vs(41.91±4.83)%、(49.28±5.24)%vs(41.26 ±4.56)%、(34.31±4.15)%vs(29.33 ±2.89)%,P均<0.01],CD4~+/CD8~+比值也明显降低[(1.927±0.244)%vs(1.525±0.265)%、(1.847±0.224)%vs(1.640±0.198)%、(1.265±0.174)%vs(0.878 ±0.092)%,P<0.05或<0.01];与氟中毒组比较,60、90 d硒拮抗组脾脏中CD4~+淋巴细胞水平升高[(44.87±5.43)%、(32.62 ±3.37)%,P均<0.05],而30、60、90 d时CD4~+/CD8~+比值明显回升[(1.703 ±0.201)%、(1.772±0.215)%、(0.991±0.124)%,P<0.05或<0.01].30、60、90 d时氟中毒组鸡脾淋巴细胞凋亡指数[(2.31 ±0.36)%、(2.76±0.22)%、(3.04 ±0.29)%]明显高于对照组[(1.14 ±0.21)%、(1.23±0.23)%、(1.29 ±0.20)%],而60、90 d时硒拮抗组[(2.42 ±0.32)%、(2.73±0.39)%]低于氟中毒组,差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01).结论 一定程度的硒摄入能减少氟中毒鸡淋巴细胞的凋亡、改善失衡的淋巴细胞亚群来拮抗氟的毒性.     

缬沙坦与U0126对大鼠心房纤维化和缝隙连接蛋白40重构的影响

目的 探讨缬沙坦与U0126对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导的大鼠心房纤维化和缝隙连接蛋白40( connexin 40,Cx40)重构的影响.方法 将32只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(A组)、盐酸异丙基肾上腺素( isopreterenol,ISO)+二甲基亚砜(DMSO)组(B组)、ISO+U0126组(C组,U0126溶于DMSO中)、ISO+缬沙坦+DMSO组(D组).给药28 d后处死大鼠取心肌组织,放射免疫法测Ang Ⅱ含量;HE和Masson染色法观察纤维化程度即胶原容积分数(CVF);免疫组化法测定磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2(P-MEK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2( P-ERK1/2)以及Cx40的表达.结果 B、C、D组中Ang Ⅱ含量较A组明显升高[分别为(368.243±6.283)ng/L、(357.175±5.944) ng/L、(359.908±2.496) ng/L比(250.380±4.261) ng/L,P＜0.01];A组CVF(9.025 ±0.456)％,显示无心房纤维化;C组和D组较B组心房纤维化程度明显减弱[CVF分别为(10.260±0.525)％、(10.238 ±0.524)％比(78.710±1.587)％,P＜0.01],C组和D组之间差异无统计学意义(P＞0.05);B组较A组中P-MEK1/2(0.311±0.007比0.203±0.009,P＜0.01)和P-ERK1/2含量明显增加(0.259±0.003比0.173±0.006,P＜0.01),而C组和D组中含量较B组明显减少(P-MEK1/2分别为0.212±0.004、0.213±0.005比0.311±0.007,P＜0.01;P-ERK1/2分别为0.178±0.004、0.175 ±0.007比0.259±0.003,P＜0.01),C组和D组之间差异无统计学意义(P＞0.05);B组较A组Cx40含量明显减少(0.199±0.007比0.241±0.004,P＜0.01)且分布紊乱,C组和D组中含量较B组减少程度明显减轻(分别为0.239±0.037、0.235±0.006比0.199±0.007,P＜0.01)且部分呈线性分布于闰盘,C组和D组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 心肌组织中Ang Ⅱ含量长期升高可能参与心房纤维化的形成和Cx40重构,缬沙坦与U0126通过抑制ERK通路的不同位点,在改善心房纤维化程度和Cx40重构方面发挥相似的作用.     

内毒素诱导致敏小鼠建立支气管哮喘动物模型的实验研究

目的 评价用内毒素(LPS)诱导卵清白蛋白(OVA)激发、OVA致敏的小鼠,建立支气管哮喘(简称哮喘)模型的方法.方法 采用随机数字表法将120只BALB/c小鼠分为PBS对照组(A组,PBS致敏PBS激发)、OVA组(B组,OVA敛敏OVA激发)、LPS/LPS小剂量组(C1组,50 μg内毒素致敏50 μg内毒素激发)、LPS/LPS大剂量组(C2组,100μg内毒素敛敏100 μg内毒素激发)、OVA/LPS小剂量组(D1组,OVA致敏、OVA雾化吸入激发结合50 μg内毒素滴鼻诱导)、OVA/LPS大剂量组(D2组,OVA致敏、OVA雾化吸入激发结合100 μg内毒素滴鼻诱导).观察小鼠哮喘急性发作症状,检测BALF细胞分类计数,测定乙酰胆碱激发条件下气道反应性(以肺阻力R_L表示);HE染色观察肺组织病理变化.结果 (1)D1组与D2组小鼠喘息症状加重其中D2组更严重.(2)D1组与D2组BALF中细胞总数、巨噬细胞、淋巴细胞、嗜酸粒细胞、中性粒细胞均明显高于A组(均P<0.05).D1组的白细胞总数、淋巴细胞、嗜酸粒细胞、中性粒细胞均明最高于B组(均P<0.01),D2组的白细胞总数、巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞均明显高于B组(均P<0.05).(3)以5 g/L乙酰胆碱激发时,D1组RL[(9.32 4±1.51)cm H_2O·ml~(-1)·s~(-1)(1 cm H_2O=0.098 kPa)]和D2组R_L[(44.21±2.88)cm H_2O·ml~(-1)·s~(-1)]明显高于A组RL[(2.41±0.35)cm H_2O·ml~(-1)·s~(-1)]和B组R_L[(5.96±1.83)cm H_2O·ml~(-1)·s~(-1)],均P<0.01.(4)D1组与D2组呈现较为严重的支气管哮喘病变,其中D2组病变程度明显加重.结论 用内毒素诱导OVA致敏小鼠建立支气管哮喘模型的方法可产牛更严重支气管炎症改变以及明显的气道高反应性.     

树突状细胞DNA多价疫苗抗日本血吸虫感染作用机制的研究

摘 要：目的 探讨树突状细胞（DC）DNA混合多价疫苗抗日本血吸虫感染保护性免疫作用机制。方法 BALB/c小鼠耳廓分别注射Sj26、Sj23和Sj14基因转染DC（A组）、Sj26基因转染DC（B组）、Sj23基因转染DC（C组）、Sj14基因转染DC（D组）、pcDNA3转染DC（E组）、未处理DC（F组）和RPMI-1640（G组）,共免疫3次,间隔2周,末次免疫后第2周,每鼠经皮肤感染40条日本血吸虫尾蚴。ELISA法检测血清特异性IgG抗体、干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）水平,双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经ConA和可溶性虫卵抗原（SEA）刺激后培养上清中IFN-γ和IL-4水平,噻唑蓝（MTT）法检测脾淋巴细胞的增殖。结果 A组小鼠末次免疫后第2周血清特异性IgG抗体水平显著升高（与G组比较,P<0.001）。A组小鼠免疫后血清IFN-γ水平明显升高(P<0.01),而血清IL-4的水平,各组小鼠免疫前、后无明显变化。A组小鼠脾淋巴细胞经ConA和SEA刺激后诱生的IFN-γ水平显著增高,而IL-4水平显著降低(与G组比较,P<0.001)。A组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数高于其他各组（与G组比较,P<0.001）。结论 体液免疫和细胞免疫共同参与了DC DNA混合多价疫苗诱导的保护性免疫作用,其中Th1型免疫应答在抗日本血吸虫感染的保护性免疫中起主要作用。 关键词：日本血吸虫;树突状细胞;DNA疫苗;保护性免疫     

白介素-10与血小板衍生生长因子-BB对肝星状细胞表达细胞间黏附分子-1 mRNA的影响

目的 :探讨白介素 10 (IL 10 )、血小板衍生生长因子 BB (PDGF BB)对体外活化的培养大鼠肝星状细胞(HSC)表达细胞间黏附分子 1(ICAM 1)mRNA的影响。方法 :体外培养激活的HSC (细胞系rHSC 99)随机分为 4组 :对照组 (A组 )、IL 10 2 0ng/ml干预组 (B组 )、PDGF BB 2 0ng/ml干预组 (C组 )及IL 10 2 0ng/ml PDGF BB2 0ng/ml共干预组 (D组 )。加药后 2 4小时 ,采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR )方法 ,检测各组ICAM 1mRNA表达情况。结果 :B组ICAM 1mRNA的表达较A组明显降低 (P <0 0 1) ;C组ICAM 1mRNA的表达较A组明显增强 (P <0 0 1) ;D组ICAM 1mRNA的表达较A组与C组均降低 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,但与B组相比较其ICAM 1mRNA的表达则增强 (P <0 0 1)。结论 :PDGF BB促进肝纤维化与其引起HSC表达ICAM 1增强有关 ,IL 10通过下调HSCICAM 1表达 ,可在抑制肝纤维化中发挥作用。