间充质干细胞对狼疮肾炎T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨间充质干细胞(MSCs)在体外对狼疮肾炎(LN)外周血T淋巴细胞的免疫调节作用.方法 从人骨髓中分离培养MSCs,采用流式细胞仪(FCM)分析鉴定MSCs的纯度.在植物血凝素(PHA)刺激下,LN外周血T淋巴细胞与不同数量的MSCs共培养.分组:A组:T淋巴细胞;B组:MSCsI+T淋巴细胞(MSCsl:T=1:5);C组:MSCs2+T淋巴细胞(MSCs2:T=1:20);D组:MSCs3+T淋巴细胞(MSCs3:T=1:100).用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组T淋巴细胞的增殖情况,FCM分析各组T淋巴细胞CD28和CD152的表达及T淋巴细胞调亡情况,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组T淋巴细胞的干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-10、转化生长因子(TGF)-β1基因的水平.结果 在体外,MSCs对由PHA诱导的LNT淋巴细胞的增殖、凋亡均有抑制作用,且抑制作用与MSCs呈剂量依赖性.MSCs抑制T淋巴细胞CD28表达,对CD152的表达无明显影响.MSCs能促进LN患者T淋巴细胞TGF-β1基因的表达,抑制IL-10、IFN-γ基因的表达.结论 MSCs可能通过抑制T淋巴细胞增殖、减少T淋巴细胞凋亡、抑制T淋巴细胞CD28表达和促进T淋巴细胞TGF-β1,基因表达及抑制IL-10、IFN-γ基因表达来下调LN的免疫反应.     

MRL/lpr鼠骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞作用的研究

目的 探讨狼疮鼠（MRL／lpr）及正常鼠（C57BL／6）骨髓间充质干细胞（MSCs）体外生物学特性、对T淋巴细胞作用的影响。方法 采用直接贴壁筛选法分离培养扩增两种鼠系骨髓MSCs，流式细胞术鉴定MSCs表面标记物，观察MSCs生长状况并绘制生长曲线；取C57BL／6鼠脾脏细胞，经尼龙毛柱分选CD3T淋巴细胞．经刀豆蛋白A（ConA）刺激，取正常及狼疮鼠MSCs或MSCs培养上清与T细胞共培养72h，然后羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色测定T细胞增殖，流式细胞术检测共培养前后T细胞活化及T细胞的凋亡率。结果 第2代（P2）后狼疮鼠MSCs生长增殖快于正常鼠MSCs；正常及狼疮鼠MSCs共培养均可抑制正常鼠T细胞的增殖（P〈0．05），与MSCs上清共培养对正常鼠T细胞增殖无抑制作用（P〉0．05）；与两种MSCs或上清共培养均可降低正常T细胞的活化（P〈0．05）及凋亡率（P〈0．05）。对正常T细胞增殖、活化、凋亡的影响，狼疮鼠MSCs与正常鼠MSCs间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 狼疮鼠MSCs在体外生长上存在异常．但对T细胞增殖、活化、凋亡免疫调节无异常。     

NZBWF1/J鼠骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞亚群平衡的免疫调节

目的探讨狼疮鼠(NZBWF1/J)及正常鼠(BALB/c)骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外对T淋巴细胞免疫调节作用的异同。方法采用直接贴壁法分离培养扩增MSCs,流式细胞术检测细胞表面标记物进行MSCs鉴定。经尼龙毛柱分选BALB/c鼠CD3~ T淋巴细胞,经佛波酯(PMA)刺激,与正常及狼疮鼠MSCs共培养24 h后,流式细胞术检测共培养前后T细胞的凋亡及CD3~ T细胞内细胞因子[干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4、IL-12、IL-6]的变化,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定转录因子T-bet和GATA-3。结果NZBWF1/J MSCs生长增殖速度较正常鼠快,而传代时间更短；对T细胞内细胞因子的影响,与NZBWF1/J MSCs共培养后,TH2型细胞因子IL-4,IL-6较共培养前增加(P＜0．05),TH1型细胞因子IFN-γ,IL-12无明显变化,而与BALB/c MSCs共培养后,IL-4降低,IFN-γ,IL-12增加(P＜0．05)；与正常及狼疮鼠MSCs共孵育后T细胞凋亡数目均降低(P＜0．05)。结论MSCs可能通过诱导T细胞亚群的改变来影响狼疮病情进展,正常鼠MSCs对SLE病情可能有改善作用,狼疮鼠MSCs与正常鼠相比,免疫调节功能存在缺陷。     

来氟米特对狼疮患者树突状细胞作用机制的初探

目的　探讨来氟米特(LEF)处理前后系统性红斑狼疮(SLE)患者树突状细胞(DC)表面标志及功能的改变,揭示LEF治疗SLE的作用机制,为开展“抑制性DCs”治疗SLE奠定实验基础。方法　(1)分离SLE患者外周血单核细胞,用细胞因子诱导DC成熟, LEF组再加入A7717262(来氟米特的活性代谢产物)培养。第9天收集DC细胞,流式细胞仪检测CD80、CD83、CD86和HLA DR的表达。(2)分别将A771726处理或不处理的第9天DC和T细胞进行培养, 72h后用MTT法检测DC刺激淋巴细胞增殖的能力,FACS检测T细胞亚群和ELISA检测培养上清中IL 10和IFNγ水平。结果A771726处理后虽DC形态无改变,但DC表达CD83、CD86和HLA DR百分数较对照组均明显降低(72 70±1 77vs 79 36±4 80, 63 50±14 06vs. 83 91±9 81, 80 44±12 56vs. 90 51±8 63,P值均<0 01)。A771726处理后的DC,其刺激T细胞增殖相应的吸光度值明显降低,混合培养的上清液中IL 10水平较无A771726处理的DC与T细胞的混合培养上清液明显降低,而IFNγ两者间无显著差异;但见CD 4 CD 25CTLA 4 T细胞百分比增高。结论　LEF在体外可抑制SLE患者外周血DC的成熟;未成熟DC能抑制T细胞增殖及T细胞向Th2 细胞转化,诱导CD 4 CD 25CTLA 4 T细胞产生,从而纠正SLE患者的部分免疫紊乱。     

骨髓间充质干细胞免疫调节作用的研究进展

骨髓间充质干细胞（MSC）是骨髓中除造血干细胞以外的一种成体干细胞，具有自我更新、横向分化和免疫调节作用。MSC是一种能分泌多种细胞因子的较原始的骨髓基质细胞，具有基质细胞的特性，能支持造血，在适宜的条件下能增殖并被诱导分化成骨、软骨、脂肪、神经、心肌、肝脏等组织细胞。目前关于MSC对免疫系统作用的机制尚不十分清楚，本文对其免疫调节作用作一综述。     

骨髓间质干细胞对系统性红斑狼疮患者调节性T细胞的免疫调节作用

目的探讨自体与异体骨髓间质干细胞（MSCs）对系统性红斑狼疮（SLE）患者调节性T细胞的免疫调节作用。方法用Percoll密度梯度离心法从14例SLE患者和15例健康人骨髓中分离MSCs,同时用免疫磁珠（MACS）分离SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞。将SLE患者外周血分离的淋巴细胞或CD4^＋CD25^＋T细胞与自体、异体MSCs共培养,观察MSCs对淋巴细胞及CD4^＋CD未T细胞增殖的影响,同时测CD4^＋CD25^＋T细胞分泌IL-10、转化生长因子（TGFβ）水平及细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）表达。结果自体与异体MSCs均抑制淋巴细胞增殖,其抑制率分别为56．32％、65．46％。MSCs以数量依赖性方式促进纯化CD4^＋CD25^＋T细胞增殖,分泌IL-10、TGFβ水平升高。结论MSCs可纠正SLE活动时CD4＋CD25^＋T细胞免疫缺陷,并抑制淋巴细胞过度活化,可能在自身免疫病的外周血造血干细胞和间质干细胞共移植或MSCs单独移植中发挥重要的免疫调节作用。     

来氟米特对狼疮肾炎患者T细胞表面共刺激分子谱影响的体外研究

目的 了解来氟米特(LEF)对狼疮肾炎(LN)患者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子谱的表达模式有无作用.方法 密度梯度离心法提取LN患者及健康对照外周血单个核细胞(PBMCs),设立4个培养组:空白组,植物血凝素(PHA)组,LEF组,PHA+LEF组.双色标记流式细胞术检测PBMCs中T细胞表面分子CD28,CD40L,淋巴细胞功能相关抗原(LFA)-1a和细胞毒T淋巴细胞相关抗原(CTLA)-4的表达水平.多组间比较采用单因素方差分析.结果 活动性LN组外周血T细胞表面CD28、CD40L、L FA-1a和CTLA-4表达水平较健康对照组明显上调CD28:33.4±6.5和14.4±3.2;CD40L:13.2±3.2和5.4±2.3;LFA-1a:8.5±2.3和2.2±1.1;CTLA-4:4.6±1.5(P均＜0.01);PHA可诱导健康对照T细胞表面CD28和CD40L表达明显上调CD28:26.8±6.7和14.4±3.2;CD40L:13.9±4.9和5.4±2.3(P均＜0.01),但对其CTLA-4和LFA-1α的表达无明显影响(P均＞0.05);而PHA对活动性LN组外周血T细胞表面上述指标表达均有明显上调作用CD28:54.8±9.5和33.4±6.5;CD40L;49.9±9.1和13.3±3.2;LFA-1a:25.5±7.5和8.5±2.3;CTLA-4:10.5±2.8和7.7±1.4(P均＜0.05);LEF活性代谢产物A771726对健康人外周血T细胞表面上述指标的表达无明显影响,但可逆转活动性LN患者外周血T细胞表面的CD40L、LFA-1α过度表达(P均＜0.05),对其CD28和CTLA-4过度表达无明显影响(P均＞0.05);且A771726对PHA所诱导的活动性LN患者外周血T细胞表面CD28、CD40L和LFA-1a表达增加亦有明显抑制(P均＜0.05).结论 LEF可下调活动性LN患者外周血T细胞CD40L和LFA-1a表达,而对其CD28和CTLA-4表达无明显抑制作用,可能是其有效治疗LN的重要机制之一.     

骨髓间充质干细胞的免疫学特性

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSC)的免疫学特性,为临床应用提供实验依据.方法 培养鉴定MSC,检测其生长动力学、细胞周期.检测单纯和200 U/ml干扰素(IFN)γ干预后MSC的程序性死亡配体(PDL)-1、CD54、CD40、CD80、CD86、主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达情况,并以此为调节细胞进行混合淋巴细胞反应.封闭PDL-1、CD54,观察它们在MSC免疫调节中的作用.检测培养上清液中IFN γ、白细胞介素(IL)-2,IL-4、IL-10的水平.将MSC移植于体内观察肝脏归巢和诱导微嵌合体情况.结果 分离、培养的MSC纯度较高;生长曲线显示第1、2天为潜伏期,第3、4、5天为对数生长期,第6、7天为平台期.细胞周期显示G0/G1期为76.0%±2.0%,S期为13.0%±2.0%,(G2+M)期为10.0%±1.7%.IFN γ上调CD54、PDL-1、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达,CD40、CD80、CD86为阴性表达.MSC呈剂量依赖性地抑制T淋巴细胞增殖,IFN γ增强其抑制作用.封闭PDL-1、CD54后能减弱MSC对T淋巴细胞增殖的抑制作用.培养上清液中IFN γ、IL-10水平较高,IL-4较低,IL-2未检测到.MSC在肝实质内有多处定居,并能诱导肝移植术后微嵌合体形成.结论 IFN γ能增强MSC对淋巴细胞增殖的抑制作用,PDL-1和CD54可能发挥关键作用;MSC移植后能在体内存活并诱导微嵌合体形成.     

间充质干细胞对系统性红斑狼疮CD4+Foxp3+T淋巴细胞的调节

目的 探讨同种异体骨髓间充质干细胞(MSC)体内外对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4+Foxp3+T淋巴细胞及人脐带MSC移植对MRL/lpr鼠脾脏和淋巴结CD4+Foxp3+T淋巴细胞水平的影响.方法 血缘相关供者骨髓中分离培养MSC移植治疗5例SLE患者,采用流式细胞术检测移植前后外周血CD4+Foxp3+T淋巴细胞百分率.7例SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)分别与SLE患者和正常人骨髓MSC按不同比例体外共培养72 h,检测共培养后PBMC中CD4+Foxp3+T淋巴细胞百分率.MRL/Ipr鼠输注脐带MSC后检测脾脏和淋巴结CD4+Foxp3+T淋巴细胞百分率.结果 SLE患者异基因骨髓MSC移植后1周外周血CD4+Foxp3+T淋巴细胞百分率(4.8±1.6)%和移植后3个月(6.0±2.6)%均较移植前(2.1±1.2)%明显升高(5例,P<0.05).正常骨髓MSC与SLE患者PBMC共培养后CD4+Foxp3+T淋巴细胞百分率明显升高(P<0.05).且存在剂量依赖性,狼疮MSC也可上调SLE患者CD4+Foxp3+T淋巴细胞水平,但作用较正常MSC弱(P<0.05);正常MSC培养上清也可上调SLE患者PBMC中CD4+Foxp3+T淋巴细胞水平,但作用弱于MSC:PBMC=1:1组(P<0.05).MRL/Ipr鼠经1次或3次脐带MSC移植后脾脏CD4+Foxp3+T淋巴细胞百分率均较对照组高(P<0.05),但淋巴结CD+Foxp3+T淋巴细胞百分率均较对照组低(p<0.01),1次和3次移植组间差异无统计学意义.结论 异基因甚至异种MSC移植可上调SLE患者或MRL/Ipr鼠CD4+Foxp3+T淋巴细胞水平,同时体外试验也得出相同结论,且体外上调作用呈一定剂量依赖性,CD4+Foxp3+T淋巴细胞水平上调可能是MSC移植治疗SLE有效的机制之一.     

异基因骨髓间充质干细胞对类风湿关节炎患者淋巴细胞的影响

目的 探讨在体外环境中,异基因骨髓间充质干细胞(BMSCs)对类风湿关节炎(RA)患者T、B淋巴细胞的增殖和功能成熟的影响.方法 采集健康供者的骨髓标本,经密度梯度离心分离、纯化获得其BMSCs,进行体外培养扩增.同时采集RA患者的外周血,分离单个核细胞.将来源于健康供者的BMSCs与来源于RA患者的单个核细胞在体外进行共培养,同时分别加入T淋巴细胞和B淋巴细胞刺激物.分别检测异基因BMSCs对RA患者T、B淋巴细胞增殖的影响;正常BMSCs对RA患者T淋巴细胞增殖周期和凋亡的影响;BMSCs对RA患者外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8、CD25表达的影响;以及BMSCs对B细胞分泌IgG的影响.结果 正常骨髓来源的BMSCs对RA患者T、B淋巴细胞增殖均有抑制作用,并且这种抑制作用与BMSCs的剂量呈依赖性;与BMSCs共培养组的T细胞主要处于G0/G1期,而进入细胞增殖周期的细胞比例减少,同叶与BMSCs共培养组的凋亡比例(15.2±0.6)%明显低于单纯T细胞活化组(28.2±1.8)%;与BMSCs共培养后CD3+CD4+T细胞表达阳性率(34±6)较对照组(44±7)降低(P<0.05),CD25+的表达下降,但CD4+CD25+调节性T细胞数(4.9±2.3)增加(P<0.05).在SAC刺激下,健康人BMSCs与RA患者外周血淋巴细胞共培养后IgG分泌升高.结论 异基因BMSCs对RA患者T、B淋巴细胞的增殖和功能成熟均有影响,BMSCs可能在RA发病和病情进展中起一定的作用,同时证明利用MSCs来调节RA的免疫功能紊乱进行生物治疗是可行的.     

自体骨髓间充质干细胞联合造血干细胞共移植治疗恶性血液病五例疗效观察

目的 研究自体骨髓间充质干细胞(MSCs)与造血干细胞共移植治疗恶性血液病的安全性和可行性,及其对移植后造血重建的影响.方法 从无骨髓浸润的恶性血液病患者本人骨髓中分离、培养间充质干细胞,经放化疗等预处理后,与造血干细胞共移植治疗恶性血液病患者5例,其中恶性淋巴瘤4例,粒细胞肉瘤1例,并观察其对移植后造血重建的影响.结果 MSCs联合造血干细胞共移植治疗恶性血液病患者5例,MSCs输注过程顺利,未见明显不良反应.移植后造血恢复过程中,中性粒细胞≥0.5×109/L的中位时间为9.4(8～11)d、血小板≥20×109/L的中位时间为12.2(10～14)d.结论 MSCs联合造血干细胞共移植治疗恶性血液病安全性好,未见明显副作用.结果 提示输注MSCs可促进造血恢复,但其远期疗效仍有待于进一步观察.     

骨髓间充质干细胞移植治疗胶原诱导性关节炎的疗效和机制

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)治疗胶原诱导型关节炎(CIA)疗效及可能治疗机制.方法 分离培养C57BL/6小鼠MSCs.健康对照组DBA-1小鼠3只(第0天和第21天尾静脉输注生理盐水0.2 m1)15只牛Ⅱ型胶原诱导的CIA小鼠随机分为CIA对照组(第0大和第21天尾静脉输注生理盐水0.2 ml)、预防组(第0天输注MSCs1×106细胞数/200 μl)和治疗组(第21天输注MSCsl×106细胞数/200 μl).另设健康对照组(不诱导CIA,第0天和第21天尾静脉输注生理盐水0.2 ml).疗效观察包括关节炎指数(AI)评分,关节病理分析,酶联免疫吸附试验(ELISA)测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-1β水平,流式细胞术检测脾脏和淋巴结CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞百分率等.结果 ①预防组和治疗组AI、关节病理评分明显下降(P<0.05);②健康对照组、预防组和治疗组血清TNF-α和IL-1β水平降低(P<0.05),与AI呈显著正相关(P<0.05),TNF-α与关节病理评分呈显著正相关(r=0.61,P<0.01);③治疗组小鼠脾脏和淋巴结中调节性T细胞明显升高(P<0.05).结论 MSCs治疗CIA有效,抑制TNF-α和IL-1β和上调调节性T细胞可能是MSCs治疗CIA有效的机制.     

系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞凋亡相关研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)的凋亡变化及凋亡相关因子的表达.方法 密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养SLE患者及健康人骨髓MSCs,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞表面Fas、Bcl-2表达水平及Caspase 8活性;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术榆测Fas、Bcl-2、Bax、Bcl-w、Caspase 8及凋亡细胞蛋白酶激活因子(Apaf)-1 mRNA表达水平;免疫组织化学染色检测胞质细胞色素C表达水平;统计学采用Mann-Whitnev秩和检验.结果 SLE患者BMSCs凋亡明显高于健康对照组[(64±10)%和(14±9)%,U=0,P<0.05];SLE患者BMSCs抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达显著低于健康对照组[(11±9)%和(56±18)%,U=0,P<0.05],其mRNA表达水平同样显著低于健康对照(0.2±0.2和2.4±0.7,U=24.P<0.05);SLE患者BMSCs胞质中细胞色素C表达显著增多[(56±21)%和(16±16)%,U=1,P<0.05].SLE患者BMSCs细胞内Caspase 8活性增强[(49±14)%和(16±12)%,U=0,P<0.05],但基因表达水平与健康对照组比较差异无统计学意义(U=28,P>0.05);SLE患者与健康对照组BMSCs均高表达Fas,差异无统计学意义(U=19,P>0.05).结论 SLE患者BMSCs凋亡增多,可能与Bcl-2表达减少、胞质中细胞色素C表达增多和Caspase 8活性增强,从而激活内源性及外源性凋亡途径相关.

Abstract：

Objective To investigate the apoptosis of bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs)from systemic lupus erythematosus(SLE)patients and the expression of apoptotic molecules.Methods BMSCs were isolated from bone marrow of SLE patients and normal controls by density eentrifugation and adhesive culture in vitro.The apoptosis of BMSCs were evaluated by TUNEL assay.The expressions of Fas.Bcl-2 and the activity of Caspase 8 were detected by flow cytometry.Real-time PCR technique was used to determine the gene expressions of Fas,Bcl-2,Bax,Bcl-w,Caspase 8 and Apaf-1.Meanwhile,cytochrome C was detected by immunocytochemistry.Statistical analysis was conducted with t-test and Mann-Whitney rank test.Results The percentage of apoptotic BMSCs increased in SLE patients compared with healthy donors[(64±10)%vs [14±9)%,U=0,P<0.05 ].The expression of Bcl-2 in BMSCs of SLE patients was lower than the normal controls at protein leve[(11±9)%vs(56±18)%,U=0,P<0.05 ],and mRNA level(0.2±0.2vs 2.4±0.7,U=24,P<0.05).More cytochrome C positive pellets in the cytosolic fraction could be detected in BMSCs from SLE patients compared with healthy controls [(56±21)%vs (16±16)%,U=1,P<0.05].The activity of Caspase 8 was enhanced[(49±14)%vs(16±12)%,U=0.P<0.05 ],although with no significant difierence at mRNA Ievel.Both groups expressed Fas but with no significant difference (U=19,P>0.05).Conclusion BMSCs from SLE patients undergo more apoptosis,the mechanisms may be associated with the down regulation of Bcl-2,up-regulation of Cytoehrome C in cytoplasm and the activation of Caspase 8,which directs the intrinsic and extrinsic apoptosis pathways.     

Biologic characteristics of bone marrow-derived mesenchymal stem cells from a patient with thalassemia syndrome

Introduction: Mesenchymal stem cells (MSCs) are capable of self‐renewal and differentiating morphologically and functionally into several mesenchymal tissues. There have been contrasting data on whether MSCs are altered in various hematologic disorders. Methods: We isolated bone marrow (BM)–derived MSCs from a patient with thalassemia syndrome to compare phenotypic and functional characteristics to those from normal healthy donor. Results: No differences were observed between MSCs from thalassemia syndrome (T‐MSCs) and those from normal healthy donor in terms of morphology, phenotype, karyotype, multidifferentiation capacity. In mixed lymphocyte reaction, T‐MSCs strongly inhibited the proliferation of allogeneic T cells in association with reduced proportion of CD3⁺, CD4⁺, and CD8⁺ cells. Furthermore, the fraction of Treg cells was increased under the culture with T‐MSCs, suggesting that T‐MSCs exert normal immunomodulatory function. In addition, T‐MSCs expressed hematopoietic cytokines and supported hematopoiesis, which was comparable to those from normal BM‐derived MSCs. Conclusion: T‐MSCs exhibited normal phenotype, karyotype as well as normal immunomodulatory function, and autologous MSCs from patients with thalassemia syndrome may be an attractive source of stem cell in terms of hematopoietic support as well as immunomodulatory activity.     

骨髓间充质干细胞治疗急性胰腺炎的潜能

急性胰腺炎是多种病因导致的胰腺水肿、出血,甚至坏死的炎症性疾病,有较高的发病率及死亡率,目前仍缺乏特异性的治疗方法.而骨髓来源的间充质干细胞(marrow-derived mesenchymal stemc ells,BMSCs)作为一种具有多向分化潜能的细胞,可跨越中胚层向内、外胚层的其他组织细胞转化,并具有再生、修复及抗炎的作用.目前的研究已证明,BMSCs有治疗急性胰腺炎的潜能.主要通过向损伤部位迁移并增殖,转化为胰腺干细胞,参与组织再生;修复血管内皮,改善血流;调控炎症相关的细胞因子,减轻炎症反应以及免疫调节功能来发挥其治疗作用,为临床上急性胰腺炎的治疗提供了新的思路.     

系统性红斑狼疮患者骨髓间质干细胞对B淋巴细胞免疫抑制作用的初步研究

目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者骨髓间质干细胞（MSCs）体外对B淋巴细胞的免疫调节作用是否存在异常。方法：采用直接贴壁法分离培养正常人及SLE患者MSCs。免疫磁珠法分选正常人外周血B淋巴细胞,与MSCs共培养,流式细胞术检测B细胞凋亡及表面标志表达,3H掺入法检测B细胞增殖,酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清中免疫球蛋白IgG、IgM和IgA水平。结果：①B细胞＋正常MSCs共培养组B细胞增殖（4307±308）cpm较单纯B细胞培养组（7059±346）cpm降低（P〈0.05）;②B细胞＋正常MSCs共培养组B细胞凋亡率（14±7）%低于单纯B细胞培养组（25±8）%（P〈0.05）;③B细胞＋正常MSCs共培养组B细胞表面CD86表达率（53±5）%较单纯B细胞培养组（66±10）%低（P〈0.05）;④与MSCs共培养后,B细胞分泌免疫球蛋白IgG、IgM和IgA较单纯B细胞培养显著减少（P〈0.05）;⑤B细胞＋狼疮MSCs共培养组与B细胞＋正常MSCs共培养组比较,B细胞增殖、凋亡、CD86表达和Ig分泌两组间差异无统计学意义。结论：MSCs在体外对B细胞有抑制作用,SLE患者骨髓MSCs与正常MSCs相比,对B细胞的表面刺激分子表达、增殖、Ig分泌有相似的抑制作用。     

系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞多向分化能力异常

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓间充质干细胞(MSCs)多向分化能力是否存在异常. 方法 密度梯度离心法和贴壁筛选法分离培养MSCs,定向诱导骨髓MSCs向脂肪和成骨细胞分化,脂肪细胞经油红O染色鉴定并定量,成骨细胞经茜素红S染色鉴定.将骨髓MSCs与羟基磷灰石共孵育,将共孵育物植于裸鼠皮下,8周后常规苏木素-伊红(HE)染色.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ-2(PPARγ-2)、脂蛋白酶(LPL)、Runx2/CBFA1、降钙素(osteocalcin) mRNA的表达水平.结果 SLE骨髓MSCs分化成脂肪细胞比例低于健康埘照组,油红O染色定量低于健康对照组[(35±7)%与(80±5)%],(0.14±0.04与0.27±0.04),LPL mRNA表达低于健康对照组(0.369±0.020与0.481±0.038),两组PPARγ-2 mRNA表达差异无统计学意义(0.421±0.052与0.441±0.012).SLE骨髓MSCs分化成骨细胞后形成钙结节低于健康对照组[(35±4)%与(45±4)%],Runx2/CBFA1、osteocalcin mRNA表达低于健康对照组(0.371±0.000与0.563±0.069),(0.819±0.023与0.962±0.049);羟基磷灰石与SLE患者骨髓MSCs共孵育后移植裸鼠皮下8周后,成骨细胞形成明显少于健康埘照组. 结论 SLE骨髓MSCs成脂和成骨分化能力存在异常,提示SLE患者骨髓MSCs存在缺陷.