利用废弃胚胎行人原核移植方法的初步建立

 【目的】 探索利用废弃胚胎进行人原核移植的方案?【方法】 收集废弃多原核受精卵117个?用显微操作-电融合的方法构建原核移植重构胚胎?分别比较钙离子浓度0.05 mmol/L(n=39)和0.1 mmol/L(n=58)的两种电融合液以及电压分别为1 800 V/cm(n=58)和2 000 V/cm(n=20)的两种电场条件对重构合子融合率和发育的影响?【结果】 操作成功率70.1%,融合成功率59.8%,得到43个卵裂胚胎,其中23个(53.5%)6细胞以上胚胎?共14个重构胚发育至8细胞或以上,得到3个囊胚?将电压由2 000 V/cm下降到1 800 V/cm,重构胚胎融合率?卵裂率和囊胚率的差异没有统计学意义(P > 0.05),但6-细胞率明显上升(22.2% vs. 60.9%, P < 0.05)?和钙离子浓度为0.05 mmol/L的融合液比较,0.1 mmol/L的融合液融合率明显上升(39.3% vs. 69.0%,P < 0.05),卵裂率?6-细胞率和囊胚率皆无统计学差异(P > 0.05)?【结论】 通过显微操作-电融合的方法,用废弃胚胎重构人核-质异质的胚胎模型,是可行的?经济的?     

辅助生殖技术中废弃胚胎继续培养的影响因素分析

目的 探讨辅助生殖技术中废弃胚胎继续培养的潜能,为今后利用废弃胚胎建立胚胎干细胞系提供参考.方法 将D1观察为无原核(0PN)、单原核(1PN)、多原核(≥3PN)和受精正常(2PN),D3评分为Ⅳ级的胚胎继续培养至囊胚期,观察囊胚形成率.比较年龄、受精方式、不同来源、D3卵裂球细胞数、D3胚胎碎片与囊胚形成率的关系.结果 共收集143个取卵周期499个废弃胚胎进行继续培养,形成囊胚105个(21.04％),优质囊胚为24个(22.86％).年龄、不同来源、D3卵裂球的奇偶性、D2卵裂球的数目各组之间差异不显著(P＞0.05);受精方式、D3卵裂球数目、胚胎碎片各组之间差异显著(P＜0.05).结论 部分废弃胚胎有继续发育成囊胚的潜能,受精方式、D3卵裂球的数目和胚胎碎片情况可能为囊胚形成的主要影响因素.     

操作台温度对小鼠卵母细胞受精及胚胎发育的影响

目的:探讨操作台温度对小鼠卵母细胞受精及胚胎发育的影响。方法:应用超促排卵技术获得小鼠卵母细胞,体外培养后受精,继续培养胚胎至囊胚期。观察在不同的操作台温度下小鼠卵母细胞的受精及胚胎的发育情况。结果:卵母细胞收集期操作台温度升高至38.0±0.2°C,两原核形成率(2PN率)和囊胚形成率分别为89.82%和41.66%,显著低于操作台温度为37.0±0.2°C的2PN率96.25%(P<0.05)和囊胚形成率57.50%(P<0.05)。胚胎培养期操作台温度升高至38.0±0.2°C,受精率、卵裂率和囊胚形成率与操作台温度为37.0±0.2°C时期的受精率、卵裂率和囊胚形成率无显著差异。结论:卵母细胞收集期操作台温度升高至38.0±0.2°C会降低小鼠卵母细胞2PN受精率、胚胎卵裂率和囊胚形成率,提高异常受精率。胚胎培养期操作台温度升高对小鼠卵母细胞受精率、胚胎卵裂率和囊胚形成率无影响。     

囊胚解冻过夜培养后移植对妊娠结局的影响

【目的】 比较行囊胚移植的复苏周期中,解冻后经2 ~ 3 h培养或过夜培养后移植对妊娠结局的影响?【方法】 回顾性分析本中心2010年9月至2012年10月进行复苏周期囊胚移植的523个周期资料,按照解冻后至移植前时间不同分为2组:解冻2 ~ 3 h后当天移植(0TET,n = 247)?提前1 d解冻过夜培养后移植(1TET,n = 276),对其妊娠结局进行比较?【结果】1TET组与0TET组相比移植了较少的胚胎个数(1.6 vs. 1.8,P < 0.001),获得较高的妊娠率(57.6% vs. 56.3%)?种植率(46.3% vs. 44.1%)和较低的流产率(9.4% vs. 12.2%)?多胎率(28.3%vs. 36.7%)?但除移植胚胎个数外,其他各妊娠结局指标的差异无统计学意义?人工周期(HRT)作内膜准备获得较高的妊娠率(62.8% vs. 53.0%,P = 0.027)?单囊胚移植周期分析发现,第5天发育为囊胚的胚胎比第6天的囊胚具有较高的种植率 (57.6% vs. 36.1%, P = 0.004)【结论】 提前1 d解冻囊胚过夜培养后再移植不会影响主要妊娠结局?影响妊娠率的因素有内膜准备方法和发育为囊胚的天数?降低多胎率可考虑D5单囊胚移植?     

时差成像系统对复苏周期单囊胚移植妊娠结局的影响

目的 探讨时差成像系统对复苏周期单囊胚移植妊娠结局的影响。方法 选取在本中心接受体外受精(IVF)或卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗的113个周期，将每周期获得的受精卵随机分配到时差成像系统(实验A组)和桌面培养箱(对照B组)进行卵裂期胚胎培养，囊胚培养全部转入桌面培养箱进行，同一培养系统胚胎同一液滴集合培养，按照受精方式和年龄进行分层，比较两组2PN卵裂率、D3优质胚胎率、囊胚形成率、可利用囊胚形成率、优质囊胚形成率。将集合培养形成的可用囊胚进行冻存，并对第一次复苏周期囊胚移植的妊娠结局进行分析。复苏囊胚来源于时差成像系统的为实验C组(42周期),来源于桌面培养箱的为对照D组(33周期)。结果 实验A组和对照B组患者的2PN卵裂率、D3优质胚胎率、囊胚形成率、可利用囊胚形成率、优质囊胚形成率比较，差异无统计学意义。实验C组和对照D组患者的年龄、转化日内膜厚度、流产率比较，差异无统计学意义；但实验C组的临床妊娠率(83.33%vs 60.61%)和着床率(83.33%vs 60.61%)显著高于对照D组(P<0.05)。结论 时差成像系统对胚胎发育没有明显不利影响，可能改善复苏...     

IVF中未见原核卵裂胚胎囊胚滋养层细胞的CNV检测价值研究

 摘要：目的  对常规体外受精（IVF）中未见原核卵裂胚胎囊胚滋养层细胞>10 MB拷贝数变异进行分析。方法  对IVF受精的未见原核卵裂胚胎囊胚培养，利用全基因组测序的方法对D5评级>3BC囊胚的滋养层细胞进行>10MB的拷贝数变异检测，判断未见原核卵裂胚胎囊胚非整倍体变异程度。结果  共选择未见原核卵裂胚胎69例，形成囊胚51例（73.91%）；囊胚评级>3BC者共33例，对其进行滋养层细胞活检并进行拷贝数变异检测，检测成功23例（70%），其中正常核型（46，XN）17例（73.9%），异常6例（26.1%）。结论  未见原核卵裂胚胎经囊胚培养可以获得较高比例染色体正常胚胎，结合胚胎植入前遗传学诊断及产前诊断技术，未见原核卵裂囊胚具有利用价值。

     

新建体外受精实验室的鼠胚实验质控和氧气浓度对胚胎体外发育的影响

目的采用鼠胚实验（MEA）检测新建体外受精（IVF）实验室的培养环境和培养体系是否符合辅助生殖技术人类胚胎体外培养的要求,并探讨不同培养环境（O2浓度）对小鼠早期胚胎体外发育的影响。方法利用ICR小鼠进行体内受精和IVF实验,观察不同受精方式来源的早期胚胎的受精及发育情况,并比较不同O2浓度下体内受精/IVF早期胚胎的受精率、卵裂率和囊胚形成率。结果体内受精组共获卵1387个,受精率、卵裂率和囊胚形成率分别为86.37%、94.74%和91.72%;IVF组共获卵1345个,受精率、卵裂率和囊胚形成率分别为80.67%、94.75%和91.05%。体内受精组的受精率明显高于IVF组（P＜0.05）,但两组卵裂率和囊胚形成率比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。体内受精组中,二气培养（三气培养）的受精率、卵裂率和囊胚形成率分别为87.04%、93.09%和88.19%（85.79%、96.21%和94.75%）,二气培养与三气培养受精率比较差异无统计学意义（P＞0.05）,但二气培养卵裂率和囊胚形成率均低于三气培养（均P＜0.05）。IVF组的二气和三气培养环境下的鼠胚发育情况与体内受精组一致。结论MEAIVF和体内受精的囊胚形成率均达到了IVF实验室的质控标准。建议IVF实验室进行早期胚胎体外培养时选用三气培养,其可有效减少活性氧对早期胚胎的氧化应激作用,并可提高其发育潜能。     

短时受精对体外受精结果的影响

目的观察短时受精在IVF中的临床作用。方法35例IVF-ET患者经促排卵治疗后获得的卵子,孵育4~6h,先与精子共培养3h后,一半的卵子经洗涤后去除外周的精子,在新鲜培养液滴中培养,作为实验组,剩余的一半卵子在精子液滴中过夜培养至16~18h,作为对照组。比较两组的受精率(2PN、1PN、≥3PN)、卵裂率、优质胚胎率,进行统计学分析。结果实验组卵子数为219个,受精率、2PN率、1PN率、≥3PN率、卵裂率、优质胚胎率分别为73.6%、59.7%、6.1%、3.6%9、5.7%、43.4%,而对照组卵子数为228个,受精率、2PN率、1PN率、多PN率、卵裂率、优质胚胎率分别为75.9%、58.9%5、.4%、9.8%、96.1%、45.8%。两组的受精率、卵裂率、优质胚胎率及正常受精2PN率差异无显著性(P>0.05),多精受精率差异有显著性(P<0.05)。结论短时受精可作为降低多精受精的一种补充办法。     

原核期形态特征与胚胎体外发育能力和体内着床潜能的关系

目的探讨原核期评分系统与受精后第3天胚胎形态、受精后第6天囊胚形成和着床率之间的关系,以评估其在体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)中的应用价值。方法于常规IVF或卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)受精后16～20 h观察受精情况,将正常受精卵母细胞参照Scott提出的Z评分系统分为Z1～Z4四种类型,比较不同原核类型之间的卵裂率,胚胎第3天(D3)优质胚胎率和第6天(D6)囊胚形成率。并通过分析着床结局明确的移植胚胎,比较各种类型受精卵之间的着床率。结果 Z4组受精卵的卵裂率(92.9%)、D3优质胚胎率(14.25%)、D6囊胚形成率(10.48%)均明显低于其他各组(P<0.01)。Z4组的着床率(5.88%)很低,但各组的着床率之间差异无显著性(P>0.05)。Z1、Z2、Z3三组间的卵裂率、D3优质胚胎率、D6囊胚形成率和着床率之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论异常的原核形态(Z4型)可预测胚胎的体内外发育潜能,但核仁的形态特征并不一定能预测胚胎的活力,Z1、Z2和Z3胚胎可能具有相同的发育潜能。     

短时受精对体外受精结果的影响

目的 了解短时受精对体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)结局的影响.方法 选择在本生殖医学中心接受常规IVF治疗的248个周期,通过一定条件限制将其分为短时受精组和过夜受精组,将248个常规IVF周期中的卵子进行配对资料(同一IVF周期同时进行短时受精和过夜受精者,共20个周期)和非配对资料(1个IVF周期只采用1种方式受精者,过夜受精组177个周期,短时受精组51个周期)研究,比较短时受精组和过夜受精组的正常受精(2PN)率、多精受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率.结果 无论配对还是非配对资料,短时受精组的正常受精(2PN)率、多精受精率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率等与过夜受精组比较均无统计学差异(P>0.05);在非配对资料中,短时受精组的移植优胚率(77.33±36.69)%明显高于过夜受精组(64.04±41.85)%(P<0.05),而在配对资料中,用于移植的优质胚胎率短时受精组和过夜受精组无统计学差异(P>0.05).结论 短时受精是一种安全、有效的受精方式,但不能改善胚胎质量和妊娠结局.     

未见原核来源囊胚复苏移植的临床价值

目的 分析未见原核(0PN)来源囊胚在复苏周期中的临床应用价值.方法 回顾分析接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕治疗后,进行囊胚复苏移植的345例患者,48例解冻移植0PN来源囊胚患者为0PN组,297例解冻移植2PN来源囊胚患者为2PN组.移植后对患者临床妊娠进行随访分析.结果 435枚0PN卵裂胚与2891...     

Relevance of Hepatocyte Growth Factor and Fibroblast Growth Factor on Mouse Preimplantation Embryo Development

Objective To explore the effect of hepatocyte growth factor （HGF） and fibroblast growth factor （FGF） on preimplantation embryo development of mouse.
Methods Mated mice were killed by cervical dislocation to collect two pronucleous （2 PN） zygotes from oviduct of pregnant 1 d NMRI mice and were cultured to the hatching blastocyst stage and the number of embryo in different stages was recorded under an invert microscope. The cleavage rates of formed 2 PN zygotes were compared with blastocyst and hatching blastocyst stage in drops of T6 medium with or without HGF or FGF （0 ng/ml, 10 ng/ml, 20 ng/ml, 50 ng/ml, 1 000 ng/ml）.
Results HGF and FGF enriched embryo culture media promotea the aevetopment from 2 PN stage embryos to blastocyst. Adding 20 ng/ml of FGF or HGF to the culture medium significantly increased the percentage of 2PN embryos that developed into blastocysts （P〈0.05）, but culture of embryos in drops of T6 medium with HGF （20 ng/ml） had no improvement in in-vitro hatching.
Conclusion Exogenous HGF and FGF at low concentrations promote in-vitro mouse blastocyst formation.     

超排卵对体外培养胚胎IL-6分泌的影响

【目的】探讨超排卵对小鼠体外培养胚胎发育及其分泌IL-6的影响。【方法】采用超排后自然受孕和正常自然受孕ICR小鼠各50只,收集受精卵体外培养3 d,观察胚胎发育状态。应用酶联免疫吸附法检测各胚胎培养液滴IL-6蛋白的浓度。【结果】超排组囊胚形成率明显低于正常组(P<0.05),但碎片和阻滞胚胎率高于对照组(P<0.05)。ELISA结果显示超排组IL-6分泌显著低于正常组(P<0.01)。【结论】控制性超排卵能够降低IL-6分泌,可能与其影响胚胎发育有关。     

体外受精周期中来源于单原核受精卵胚胎性染色体分析

目的：分析常规体外受精和单精子显微注射周期中来源于单原核受精卵胚胎性染色体的异常率。方法：应用FITC、Texas red标记的X/Y染色体着丝粒部位α卫星重复序列探针，对常规体外受精和单精子显微注射周期中来源于单原核受精卵的胚胎进行荧光原位杂交（fluorescent in situ hybridization,FISH）, 分析其性染色体的异常率和性染色体类型。结果：共分析来自常规体外受精和单精子显微注射周期中来源于单原核受精卵的胚胎111个。总胚胎固定率为92.80%，胚胎杂交率为95.15%。有杂交信号的常规体外受精后单原核受精卵发育来的胚胎中，胚胎性染色体二体率为54.35％，单体率为23.91％，嵌合体率为21.74％。有杂交信号的单精子显微注射后单原核受精卵发育来的胚胎中，胚胎性染色体二体率为34.62％，单体率为34.62％，嵌合体率为30.77％。结论：常规体外受精和单精子显微注射周期中来源于单原核受精卵的胚胎有高于正常的性染色体异常率，不利于进行胚胎移植；前者性染色体二体率显著高于后者。     

抗骨桥蛋白(OPN)和整合素β3抗体中和OPN、整合素β3对小鼠胚泡种植的影响

目的研究骨桥蛋白抗体和整合素β3抗体对小鼠胚泡着床的影响。方法取20只孕4d小鼠,分别在两侧子宫角内注射骨桥蛋白抗体、整合素β3抗体,对照组注射生理盐水,正常妊娠空白对照组未行任何处理,于孕8d处死小鼠,统计胚泡着床数及妊娠率,取子宫观察内膜的组织学变化。结果结果显示骨桥蛋白抗体组小鼠妊娠率为60%,平均胚胎着床数为1.6±1.19,整合素β3抗体组妊娠率为70%,平均胚胎着床数为1.7±1.28,明显低于生理盐水组及空白对照组(90%,10.0±1.63及100%,10.5±1.58),提示骨桥蛋白抗体和整合素β3抗体明显抑制小鼠胚泡着床。结论骨桥蛋白和整合素β3抗体明显抑制小鼠胚泡的着床并导致子宫内膜的形态学变化,这提示骨桥蛋白和整合素β3与子宫内膜容受性获得有关。骨桥蛋白和整合素β3参与了小鼠胚泡的着床。     

不同发育阶段、不同质量囊胚冷冻复苏移植周期妊娠结局分析

目的 分析囊胚的发育阶段及其内细胞团、滋养层质量对妊娠结局的影响,从而为囊胚冷冻时机的把握及冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)周期解冻胚胎选择提供帮助.方法 本研究回顾分析了在保定市妇幼保健院生殖医学科接受单囊胚FET周期的患者资料,依据囊胚扩张/孵出状态及囊胚质量将囊胚...     

胃癌患者术后早期肠内营养与肠外营养疗效比较

【目的】研究肠内营养对胃癌患者术后胃肠功能恢复的影响。【方法】胃癌患者76例,随机分为肠内营养组(EN)和肠外营养组(PN),每组38例。术后均给予营养支持7 d。观察两组腹胀、腹泻、恶心、呕吐、排便等情况,以及血清的白蛋白、血红蛋白、前白蛋白、AST、ALT、肌酐水平变化。【结果】PN组的平均肛门排气时间为5.8 d,EN组的平均肛门排气时间为4.1 d,两组差异有统计学意义(P<0.05)。PN组平均排便时间为4.6 d,EN组平均排便时间为3.2 d,两组差异有统计学意义(P<0.05)。术后第4天时,两组的白蛋白、血红蛋白、前白蛋白较术前1 d明显下降,PN组和EZ组之间差异无统计学意义(P>0.05)。EN组术后第4~8天白蛋白、血红蛋白、前白蛋白上升幅度明显高于PN组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。术后第8天,两组ALT和肌酐差异无统计学意义(P>0.05),AST差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】胃癌患者术后早期肠内营养安全可行,能够早期恢复肠道功能,优于肠外营养。     

Effect of the P1 Medium and the ECM Medium on Embryo Quality in IVF

Objective To investigate the effect of the glucose-free preimplantation stage one （P1） medium and the ECM medium on embryo development quality in IVF. Methods The patients with ≥4 zygotes of 2PN were studied. A total of 201 retrieval cycles were included in a prospective randomized study. Each patient was herself control. Half of zygotes of 2PN were transferred into ECM medium （group A） and half into P1 medium （group B）for further culture. Embryo development was evaluated on the day of embryo transfer. The efficacy of ECM was compared with P1 as culture medium for the development of preimplantation embryos. Results No statistically significant differences were noted between the two groups regarding embryo-cleavage rate （97.13% vs 97.55%） and rate of normal-cleaving embryos （58.29% and 58.37%）. The rate of top-quality embryos was statistically higher in group A than in group B （27.59% vs 19.75%, P〈O.05）. Embryo quality, as assessed by morphological parameters （the amount of detached anuclear fragments 〉30%）, was better in group A than in group B （19.86% vs 21.75%）, however, there was no statistically significance. Both the rate of good-quality embryos （47.95% vs 46.17%） and available embryos （63.22% vs 61.19%） were higher in group A than in group B, but there was also no statistically significance. Conclusion The ECM medium may be associated with a better embryo quality compared with the P1 medium.