健脾化瘀解毒方调控PI3K/Akt/HIF-1α 通路干预胃癌前病变大鼠胃黏膜上皮细胞自噬及凋亡

目的探讨健脾化瘀解毒方（JPHY）调控PI3K/Akt/HIF-1α 通路干预胃癌前病变（GPL）大鼠胃黏膜上皮细 胞自噬及凋亡的机制。方法采用200 μg·mL-1 N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）自由饮用+隔日禁食法 造模28 周复制GPL 模型。将SD 大鼠随机均分为空白组、模型组、维酶素组（270 mg·kg-1）、JPHY 高剂量 组（9 g·kg-1）和JPHY 低剂量组（4.5 g·kg-1）,每组18 只。第15 周起,各给药组大鼠每天灌胃给药（10 mL·kg-1） 1 次,连续25 周。分别于第18、28 和39 周,每组随机取6 只大鼠,采用HE 染色法观察大鼠胃黏膜组织病 理学形态变化;Western Blot 法测定胃黏膜组织PI3K、Akt、HIF-1α、Beclin1、Bcl-2、BAX 蛋白的表达。 结果与空白组比较,模型组大鼠胃黏膜组织固有腺变薄,非固有腺锯齿样变,弥漫性细胞空泡样变,固有 腺细胞变为体积小、胞质少、核质比例大、深染的异型增生细胞,呈假复层、跨腺腔灶状分布,有炎性细胞浸 润,表现为以肠上皮化生为主;第18 周,大鼠胃黏膜组织的PI3K、Akt 蛋白表达明显下调（P < 0.05,P < 0.01）,HIF-1α、Beclin1、Bcl-2 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值明显上调（P < 0.05,P < 0.01）;第28 周,PI3K、 Akt、BAX 蛋白表达明显下调（P < 0.05,P < 0.01）,HIF-1α、Beclin1 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值明显上 调（P < 0.01）;第39 周,Akt 蛋白表达明显下调（P < 0.05）,HIF-1α、Beclin1、Bcl-2 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值明显上调（P < 0.05,P < 0.01）,PI3K、BAX 蛋白表达差异无统计学意义（P > 0.05）。与模型组比较, JPHY 高剂量组的胃黏膜改善作用最明显,异型增生细胞数量、分布范围和分布密度有明显减少,固有层厚度 明显增加,腺腔结构趋于正常;第18 周的PI3K、Akt 蛋白表达明显上调（P < 0.01）,HIF-1α、Bcl-2 蛋白表达 及Bcl-2/BAX 比值明显下调（P < 0.05）;第28 周的PI3K、Akt、BAX 蛋白表达明显上调（P < 0.05,P < 0.01）,HIF-1α、Beclin1 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值表达明显下调（P < 0.01）;第39 周Akt 蛋白表达明显上 调（P < 0.01）,HIF-1α、Beclin1 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值明显下调（P < 0.05,P < 0.01）。结论JPHY 对 GPL 不同阶段的黏膜损伤均有明显保护作用,可能与其通过PI3K/Akt/HIF-1α 通路调节肿瘤缺氧微环境以及调 控细胞自噬、凋亡作用有关。     

安胃汤含药血清通过调节PI3K/Akt信号通路促进MC细胞凋亡的研究

目的:探讨安胃汤含药血清对MC细胞(MNNG诱导人胃黏膜上皮细胞系(GES-1)恶性转化)PI3K/Akt信号通路相关因子及细胞凋亡影响。方法:根据中药复方血清药理学实验方法,以MC细胞为研究对象,设立空白组(A组)、安胃汤组(B组)、安胃汤+阻断剂组(C组)、阻断剂组(D组)。含药血清处理12、24、48 h后的各组细胞采用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot和Real-time PCR检测PI3Kα、AKT、XIAP蛋白及mRNA的表达。结果:A组细胞凋亡率比较低,B、C、D组细胞凋亡率有所增加,C组细胞凋亡率增加最为明显;与A组相比,B、C、D 3组细胞内PI3Kα、AKT、XIAP基因及蛋白表达有所降低(P0.01或P0.05)。结论:安胃汤能促进MC细胞细胞凋亡,可能与其通过调控PI3K/Akt通路,下调XIAP基因及蛋白有关。     

电针对神经根型颈椎病大鼠PI3K/AKT信号通路的影响

目的:观察探讨电针对神经根颈椎病(CSR)大鼠PI3K/AKT信号转导通路及细胞凋亡的变化。方法:SD大鼠60只,按照随机数字表法分为空白组、模型组和电针组3组,每组20只。造模后第3天开始电针,取双侧颈夹脊穴,以一侧穴位为一组,两侧均通过针柄接电针治疗仪,疏密波,频率,强度以大鼠四肢轻度抖动为度。1次/d,30 min/次,连续治疗14 d后处死。采用YLS-3E型痛分析仪检测大鼠外周神经模型感觉功能,采用蛋白免疫印迹法检测PI3K/AKT通路表达情况,采用免疫组化法检测BAX和BCL-2,同时以DNA断裂的原位末端标记法(Tunel法)检测细胞凋亡情况。结果:1)与空白组比较,模型组和电针组大鼠外周神经疼痛感觉功能机械痛阈值均下降(P 0. 05),其中电针组的机械痛阈值较模型组高(P 0. 05)。2)与空白组比较,模型组和电针组大鼠PI3K、p-AKT的蛋白表达均下调(P 0. 05),电针组PI3K、p-AKT较模型组明显上调(P 0. 05),而3组的AKT和GAPDH蛋白表达差异均无统计学意义(P 0. 05)。3)与空白组比较,电针组和模型组BAX明显上调(P 0. 05),BCL-2则明显下调(P 0. 05);而电针组BAX表达程度低于模型组(P 0. 05),电针组BCL-2的表达程度高于模型组(P 0. 05)。4)与空白组比较,模型组和电针组细胞调亡比例均增高,差异有统计学意义(P 0. 05);电针组细胞调亡比例低于模型组,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论:电针双侧颈夹脊穴对CSR大鼠具有明显的镇痛作用,其机制可能与激活PI3K/AKT通路,激活下游BAX、BCL-2等生物因子抗细胞凋亡有关。     

消肿止痛合剂对大鼠膝骨性关节炎软骨中PI3K/Akt信号通路影响的实验研究

目的观察消肿止痛合剂对大鼠膝骨性关节炎软骨中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)蛋白和丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)蛋白、天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)表达的影响及其作用机制。方法将80只SD大鼠随机分为4组:观察组(消肿止痛合剂组)、对照组(硫酸氨基葡萄糖片组)、模型组、假手术组,每组20只。除假手术外,其余三组通过改良Hulth法行膝骨关节炎造模。药物连续干预8周后,取各组大鼠膝关节软骨,采用ELISA方法检测血清中TNF-α、IL-1β、iNOS水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组软骨中PI3K、AKT、Caspase-3mRNA的表达情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测各组软骨细胞中PI3K、AKT、Caspase-3蛋白的表达。结果消肿止痛合剂可显著减低KOA大鼠血清TNF-α、IL-1β、iNOS水平,显著下调PI3K、AKT、Caspase-3基因及蛋白表达。结论消肿止痛合剂对KOA关节软骨损伤的保护可能与PI3K/AKT信号通路相关。     

消痞颗粒对胃癌前病变模型大鼠胃黏膜组织miR-21-PTEN-PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨消痞颗粒治疗胃癌前病变的可能作用机制。方法 70只Wistar大鼠随机分为空白组10只,造模组60只。造模组采用以200μg/ml的N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍溶液每只5ml/(kg·d)灌胃,配合自由饮用0.05%氨水溶液及食含0.03%雷尼替丁的颗粒状饲料,三种因素联合建立胃癌前病变大鼠模型。44周末将造模成功的41只大鼠随机分为模型组14只、维酶素组14只、消痞颗粒组13只。模型组大鼠予生理盐水3ml/(kg·d)灌胃,维酶素组予维酶素片0.3g/(kg·d)灌胃,消痞颗粒组予消痞颗粒9g/(kg·d)灌胃,共给药12周。采用RT-PCR法检测大鼠胃黏膜组织miR-21、张力蛋白同源基因(PTEN)基因表达,采用ELISA法检测大鼠胃黏膜组织磷酸肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)蛋白表达。结果各组大鼠胃黏膜组织miR-21、PTEN基因表达及AKT、PI3K蛋白表达差异均有统计学意义(P0.01)。与空白组比较,模型组和维酶素组miR-21基因表达升高,PTEN基因表达降低(P0.01);模型组、维酶素组、消痞颗粒组AKT、PI3K蛋白表达均升高(P0.01)。与模型组比较,消痞颗粒组miR-21基因表达降低,PTEN基因表达升高,AKT、PI3K蛋白表达均降低(P0.01),而维酶素组各指标与模型组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论消痞颗粒可能通过抑制胃黏膜组织miR-21异常表达来调控PTEN基因,从而对PI3K/AKT信号通路进行干预来逆转胃癌前病变的发生。     

基于PI3K/Akt/mTOR通路探讨半夏泻心汤对PLGC大鼠黏膜微环境的影响

目的:对胃癌前病变(Precancerous Lesion of Gastric Cancer,PLGC)模型大鼠从整体、细胞及分子水平的指标进行观察,分析其胃黏膜微环境的特点,并初步探讨半夏泻心汤对其胃黏膜的作用机制。方法:清洁级雄性SD大鼠70只,随机分成3组:模型组50只,造模加中药干预组10只,空白组10只。采用改良MNNG+复合法制备PLGC大鼠模型,于造模中期第10周、造模结束期第20周,各组随机抽取5只大鼠,分别从整体水平、细胞水平及分子水平检测半夏泻心汤对其胃黏膜微环境的影响。结果:1)启动子PTEN,造模加中药干预组较模型组表达高,但仍低于空白组; 2)调控器PI3K/Akt/mTOR信号通路,PI3K、Akt、mTOR的表达造模加中药干预组较模型组低,但仍高于空白组; 3)效应子HIF-1α及其下游基因,造模加中药干预组较模型组表达低,但仍高于空白组;上述结果差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论:中药半夏泻心汤通过影响PLGC大鼠胃黏膜组织微环境变化的3个关键环节,即PI3K/Akt/mTOR信号通路中的启动子、调控器及效应子,从而影响并阻断PLGC的发生发展。     

嗅三针对蛛网膜下腔出血并发认知障碍大鼠海马神经元及Caspase-3表达的影响

目的:研究嗅三针对蛛网膜下腔出血并发认知障碍模型大鼠的干预作用及对海马神经元Caspase-3、PI3K、AKT mRNA和蛋白表达的影响。方法:取清洁级雄性SD大鼠60只,随机分为空白组、模型组、嗅三针组、尼莫地平组以及假针刺组,每组12只。各组大鼠干预后,采用荧光定量PCR检测大鼠海马区Caspase-3、PI3K、AKT mRNA表达,Western blot技术检测Caspase-3、PI3K、AKT蛋白表达量。结果:与模型组比较,嗅三针组和尼莫地平组海马中PI3K、AKT mRNA表达量均有不同程度升高,且嗅三针组高于尼莫地平组,差异有统计学意义(均P<0.05),嗅三针组和尼莫地平组Caspase-3 mRNA表达均低,差异有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,尼莫地平组及嗅三针组PI3K、AKT蛋白的表达均升高,Caspase-3蛋白表达降低,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:嗅三针对蛛网膜下腔出血并发认知障碍大鼠的神经保护作用机制可能是通过激活大鼠脑组织的PI3K/AKT信号通路,抑制Caspase-3蛋白表达及细胞凋亡,减轻神经组织炎性损伤。     

基于蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白通路观察化浊解毒方对胃癌前病变大鼠肿瘤血管新生机制的影响

目的基于胃黏膜组织蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)通路观察化浊解毒方对胃癌前病变(PLGC)大鼠肿瘤血管新生机制的影响。方法将48只雄性SD大鼠按随机分组法分为正常组、模型组、维甲酸组、化浊解毒组,每组12只。采用胃癌前病变模型的建立法复制PLGC模型成功后,模型组、正常组给予0.9%氯化钠注射液10 mL/kg,维甲酸组予维甲酸药液40 mg/kg、化浊解毒组予化浊解毒方水煎液10 g/kg,均每日1次灌服,连续16周。采用免疫组织化学法,检测化浊解毒方对PLGC大鼠胃黏膜组织AKT、mTOR的影响。结果给药16周后,模型组AKT、mTOR表达高于正常组,比较差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,化浊解毒组、维甲酸组AKT、mTOR的表达均有不同程度下降,比较差异有统计学意义(P0.05);化浊解毒组与维甲酸组比较,AKT、mTOR表达明显降低,比较差异有统计学意义(P0.05)。结论化浊解毒方可能是通过降低AKT、mTOR的表达,从而调控AKT/mTOR通路,达到抗肿瘤血管新生以逆转PLGC的治疗效果。     

姜黄素对脑缺血大鼠脑组织PI3K/AKT信号通路、Bcl-2、BAX的影响

目的:探究姜黄素对脑缺血大鼠脑组织PI3K/Akt信号转导通路的影响及作用机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、姜黄素A组和姜黄素B组,每组18只。其中模型组、姜黄素A、B组慢性脑缺血大鼠模型制备采用将大鼠两侧颈动脉结扎的方法,假手术组和模型组大鼠分别给予等剂量生理盐水。采用免疫组化法检测大鼠PI3K、AKT、Bcl-2、BAX蛋白表达情况,采用干湿重法检测脑组织水含量,采用甲酰胺法检测血脑屏障通透性。结果:与模型组比较,姜黄素组大鼠PI3K、AKT、Bcl-2蛋白含量均明显增高(P0.05,P0.01,P0.05),脑组织含水量、BAX表达及伊文思蓝含量显著降低(P0.05,P0.01,P0.01),差异均具有统计学意义。结论:姜黄素对缺血性脑损伤的保护机制可能是其穿透血脑屏障后激活了PI3K/AKT信号通路,介导Bcl-2蛋白表达增加以及BAX蛋白表达降低,进而调节二者平衡。     

化痰消瘀方治疗胃癌前病变的分子机制研究

目的:基于网络药理学预测和胃癌前病变(PLGC)大鼠模型验证的方法,探讨化痰消瘀方治疗胃癌前病变的分子机制。方法:利用网络药理学技术筛选化痰消瘀方治疗胃癌前病变的关键活性成分及其作用靶点,并进行蛋白质间相互作用分析,GO功能富集和KEGG通路富集。建立PLGC大鼠模型,给予化痰消瘀方干预治疗12 w,苏木精-伊红染色法观察大鼠胃黏膜组织的病理学改变,AB-PAS染色法观察大鼠胃黏膜组织的肠上皮化生病理改变,免疫组化法对预测结果中PI3K/Akt信号通路的相关蛋白表达进行分析。结果:网络药理学结果显示:化痰消瘀方含有98个活性成分,作用于129个靶点,主要涉及酶结合、药物反应、细胞凋亡调控等生物学途径以及PI3K/Akt、TNF等信号通路。动物实验验证结果显示:与模型对照组比较,化痰消瘀方干预治疗后可改善PLGC大鼠胃黏膜组织病理学改变,并减轻肠上皮化生等病理改变,PI3K/Akt信号通路中相关蛋白p-Akt、p-PI3K、mTOR表达下调,PTEN表达上调。结论:化痰消瘀方通过多成分、多靶点、多通路共同作用治疗PLGC,其中PI3K/Akt信号通路是其作用的主要通路之一。     

基于VEGF相关信号通路研究益气除痰方对缺氧血管新生的影响

目的:研究益气除痰方(YQCTF)对缺氧人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管新生的影响及机制探讨。方法:设立HUVEC常氧(Norm)组、缺氧造模(Hyp)组、缺氧+YQCTF低浓度(L)组、缺氧+YQCTF中浓度(M)组、缺氧+YQCTF高浓度(H)组,采用CCK8法和流式细胞术(Annexin V/PI染色)检测细胞增殖和凋亡;管腔形成实验和transwell小室测定细胞血管生成和细胞迁移能力;Western blot检测HIF-1α、VEGFA、VEGFR2、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结果:与常氧组比较,缺氧造模组HUVEC无明显增殖抑制和凋亡,但迁移和管腔形成能力增强,且HIF-1α、VEGFA、VEGFR2、PI3K、AKT、P-AKT蛋白表达上调;与缺氧造模组比较,YQCTF可明显抑制缺氧下HUVEC增殖,促进凋亡,降低迁移及管腔形成能力,呈现剂量依赖性,并可下调HIF-1α、VEGFA、VEGFR2、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结论:益气除痰方可抑制缺氧诱导的血管新生,可能与其调控VEGF相关信号通路有关。     

香砂六君子汤对慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织PI3K信号通路相关因子表达的影响

目的观察香砂六君子汤对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃组织血管内皮生长因子(VEGF)、磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的影响,探讨该复方防治CAG的作用机制。方法将120只Wistar大鼠分为空白组和模型组,采用综合法制作CAG动物模型,将成模大鼠分为模型组、维酶素组和香砂六君子汤高、中、低剂量组,空白组和模型组大鼠给予10 mL/(kg·d)蒸馏水灌胃,香砂六君子汤高、中、低剂量组分别给予24、12、6 g/(kg·d)香砂六君子汤灌胃,维酶素组给予0.30 g/(kg·d)维酶素灌胃,连续120 d。ELISA检测大鼠胃组织VEGF含量,RT-PCR和Western blot分别检测大鼠胃组织PTEN、PI3K、AKT基因和蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组大鼠一般状况较差,胃黏膜变薄,上皮细胞及腺体排列紊乱、稀疏,腺体数目明显减少,黏膜肌层增厚向固有层延伸,可见大量炎性细胞浸润,胃组织PTEN基因及蛋白表达显著降低(P0.01),VEGF含量和AKT、PI3K基因及蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,香砂六君子汤高剂量组大鼠胃组织PTEN基因表达显著升高(P0.01),VEGF含量和AKT、PI3K基因及蛋白表达显著降低(P0.01)。结论香砂六君子汤通过改善模型大鼠生存状况及胃黏膜病理状态,上调胃组织PTEN表达,下调VEGF、AKT、PI3K表达,发挥治疗CAG的作用。     

基于PI3K/AKT/mTOR通路研究杜仲总黄酮对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响

目的:探讨杜仲总黄酮基于磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响。方法:55只SD大鼠随机取10只作为正常对照组,其余建立PCOS大鼠模型,40只大鼠建模成功,随机分为模型对照组、PI3K抑制剂BKM120 40 mg/kg组、BKM120 40 mg/kg+杜仲总黄酮200 mg/kg组、杜仲总黄酮200 mg/kg组,各组灌胃生理盐水或相应药物,连续干预3 w。Elisa法检测血清促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒氏管激素(AMH)水平;HE染色观察卵巢病理学变化;流式细胞术检测卵巢组织颗粒细胞自噬率;Western blot检测卵巢组织中PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白及微管相关蛋白1轻链3 II(LC3 II)表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠AMH、LH、T含量显著升高,FSH含量显著降低P<0.01);大鼠卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低,LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,抑制剂组大鼠AMH、LH、T含量显著升高,FSH含量显著降低(P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低,LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组大鼠AMH、LH、T含量明显降低,FSH含量明显升高(P<0.05或P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著降低(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著升高,LC3 II/LC3 I比值显著降低(P<0.01)。模型对照组卵巢表面苍白,黄体减少,出现多个囊状扩张卵泡;杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组卵巢体积减小,表面色泽较红,黄体有所增加,囊状扩张卵泡减少;抑制剂组卵巢体积更大、黄体更少,囊状扩张卵泡更多。结论:杜仲总黄酮可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路降低PCOS大鼠卵巢组织自噬水平,改善其性激素水平。     

胃炎1号方对胃癌前病变大鼠胃黏膜上皮细胞缺氧及缺氧耐受的影响

目的研究胃炎1号方(党参、白芍、蒲公英等)对胃癌前病变的大鼠胃黏膜上皮细胞缺氧及缺氧耐受的影响。方法 40只大鼠随机分为空白组、模型组、维酶素组和胃炎1号方组。除空白组外,其他组大鼠采用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)和小承气汤建立癌前病变大鼠模型。给药10周后,观察胃黏膜上皮微血管超微结构,测定胃黏膜上皮缺氧诱导因子-1α(Hif1a)mRNA、HIF-1α、血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白的表达。结果与空白组相比,模型组胃黏膜上皮微血管数量减少,管腔严重狭窄或扩张,内壁不光滑,有粘附,血管内皮细胞肿胀;Hif1a mRNA表达有升高趋势,HIF-1α、VEGF蛋白呈异常表达;与模型组相比,胃炎1号方组改善了胃癌前病变大鼠胃黏膜血管病变,显著降低Hif1a mRNA、HIF-1α、VEGF蛋白的表达。结论胃炎1号方可改善胃癌前病变大鼠胃黏膜上皮缺氧及缺氧耐受,并促进血管新生。     

参七虫草方通过抑制促血管生成因子表达改善大鼠肺组织纤维化实验研究

目的:观察参七虫草方对特发性肺纤维化(IPF)大鼠肺组织缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、促进磷酸肌3激酶(PI3K)、AKT mRNA的影响。方法:SPF级SD大鼠128只随机分为四组,空白组、模型组、氯沙坦组、参七虫草组,各32只。采用一次性气管滴注博来霉素的方法建立IPF大鼠模型,常规法检测四组大鼠的第7、14、21、28天体重; HE、Masson染色观察四组大鼠的第7、14、21、28天肺组织病理变化; RT-PCR检测各组大鼠肺组织第7、14、21、28天HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT mRNA的表达水平。结果:模型组、氯沙坦组及参七虫草组大鼠在镜下均有不同程度的炎性浸润、胶原纤维沉积; 模型组、氯沙坦组及参七虫草组第7、14、21、28天肺组织VEGF、HIF-1α高表达,PI3K、AKT mRNA、 HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT mRNA表达水平均显著高于空白组(P<0.05),且随时间推进,差异越显著; 在相同时间点,氯沙坦组及参七虫草组HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT mRNA表达水平显著低于模型组(P<0.05),氯沙坦组与参七虫草组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:参七虫草方可通过抑制大鼠HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT mRNA等促血管生成因子的生成而发挥抗纤维化作用。     

艾灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路的影响

目的:观察艾灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞焦亡NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路的影响。方法:将30只健康SPF级SD大鼠雌雄各半,分为正常组、模型组和艾灸预处理组。选取足三里(双侧)和中脘穴进行艾灸预处理7 d,再用无水乙醇灌胃法进行造模,观察胃黏膜组织形态,评估UI指数,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和白介素18(IL-18)3种细胞因子的表达量; Western blot检测大鼠胃组织炎性小体核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)及胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、消皮素(GSDMD)的表达水平。结果:艾灸预处理后,机体在应对致病因素刺激时可抑制IL-1β、IL-18及TNF-α的分泌,对比正常组和模型组均有明显下降(P<0.01),NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白的表达量均低于正常组和模型组(P<0.01)。结论:艾灸预处理通过NLRP3/Caspase-1/GSDMD经典通路途径抑制细胞焦亡,降低炎症发生的程度,达到保护胃黏膜的作用。     

康心饮对缺血性心肌病大鼠心肌凋亡及PI3K/Akt/FoxO1信号通路的影响

目的观察康心饮对缺血性心肌病(ICM)大鼠心肌凋亡及PI3K/Akt/FoxO1信号通路的影响,探讨其对ICM的作用及可能机制。方法 66只大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、卡托普利组及康心饮低、中、高剂量组,每组11只。采用左前降支结扎法制备缺血性心肌病模型。模型组予生理盐水10 m L/(kg·d)早晚灌胃,卡托普利组予卡托普利2.86 mg/(kg·d)早晚灌胃,康心饮低、中、高组分别予康心饮9.2、18.4、36.8 g/(kg·d)早晚灌胃,给药2周。TUNEL法检测心肌凋亡情况,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、PI3K、Akt、FoxO1蛋白表达,RT-PCR检测PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组心肌凋亡增多(P0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达量升高(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达量下降(P0.01),PI3K、p-Akt、p-FoxO1蛋白和PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达均下降(P0.05);与模型组比较,康心饮组低、中、高剂量和卡托普利组心肌凋亡均明显减少(P0.01),Bax和Caspase-3蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达增加(均P0.05),PI3K、p-Akt、p-FoxO1蛋白及PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达均升高(P0.01),且康心饮高剂量组和卡托普利组优于康心饮低、中剂量组(P0.05)。结论康心饮可能通过激活PI3K/Akt/FoxO1信号通路,抑制ICM心肌细胞凋亡。     

加味沙参麦冬汤调控PTEN/PI3K/AKT通路对CAG大鼠的治疗作用

目的 观察加味沙参麦冬汤对慢性萎缩性胃炎（CAG）大鼠胃黏膜细胞凋亡及对PTEN/PI3K/AKT通路的作用。方法 将60只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组、加味沙参麦冬汤低剂量、中剂量、高剂量组共6组,每组各10只。除空白组外,其余大鼠饮用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）溶液以复制CAG模型。阳性对照组以维酶素作为阳性对照,于造模完成后给予0.3 g/kg维酶素混悬液灌胃,加味沙参麦冬汤低剂量、中剂量、高剂量组分别给予加味沙参麦冬汤不同剂量灌胃,每日给药1次,持续12周。采用中性红清除法观察胃黏膜血流量,ELISA实验检测血清中Fas、Fas L的含量,TUNEL染色检测胃黏膜细胞凋亡情况,免疫组织化学法及Western-blot法检测胃黏膜组织中PTEN/PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果 加味沙参麦冬汤不同剂量灌胃治疗后,胃黏膜血流量明显升高,血清中Fas、Fas L的水平显著降低,胃黏膜TUNEL凋亡阳性细胞明显减少,胃黏膜组织中AKT的阳性细胞数和蛋白表达显著减少（P <0.05）,胃黏膜组织中PTEN的阳性细胞数和蛋白表达显著...     

“调神畅志”法针刺对帕金森伴便秘模型大鼠结肠组织PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响

目的：探讨“调神畅志”针法对帕金森(PD)伴便秘大鼠结肠组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/AKT/eNOS)信号通路关键标志物(PI3K、AKT、p-Akt及eNOS)的影响,并探究此针法治疗的机制。方法：采用颈背部皮下注射鱼藤酮的方法制造PD伴便秘大鼠模型,并用APO诱导检测。40只造模成功大鼠随机分为模型组、西药组、常规针刺组与调神畅志组,每组10只,另空白组、假手术组各10只,共计60只,予相应干预4周。采用Western blot法检测各组大鼠远端结肠组织中PI3K、AKT、p-Akt蛋白表达和eNOS含量。结果：与空白组相比,模型组大鼠远端结肠组织中PI3K、AKT及p-Akt蛋白表达显著降低,eNOS含量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,西药组、常规针刺组和调神畅志组远端结肠组织PI3K、AKT及p-Akt蛋白表达均明显升高,eNOS含量均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与常规针刺组比较,调神畅志组PI3K、AKT及p-Akt蛋白表达明显较高,eNOS含量显著较低,差异具...     

黄地安消胶囊调控PI3K/Akt通路改善自发性2型糖尿病大鼠血管病变损伤

目的:探讨黄地安消胶囊调控PI3K/Akt通路改善自发性2型糖尿病大鼠血管病变损伤的作用机制。方法:选取符合2型糖尿病大鼠模型的GK大鼠随机分为模型组、参芪降糖1. 08g/kg组、二甲双胍0. 72g/kg组、黄地安消胶囊12. 0、6. 0、3. 0g/kg组,另设Wistar大鼠为正常组,每组10只。通过在GK大鼠的饮用水中加入0. 1mg/ml Nω-精氨酸甲酯(L-NAME)联合高脂饲料喂养的方法复制2型糖尿病大血管病变的模型。造模同时开始给药,每日1次,连续6周。实验结束后,HE、Masson、Verhoeff染色法观察腹主动脉组织病理学损伤程度;免疫吸附法测定大鼠腹主动脉ET-1、HIF-1α和VEGF含量;免疫组织化学染色法观察腹主动脉I型胶原(Collagen I)、III型胶原(Collagen III)分布情况; Western blot技术检测大鼠腹主动脉内的TRIB3、PTEN、PI3K、Akt、p-PI3K、pAkt、HIF-1α、VEGF的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠腹主动脉中膜的厚度、胶原含量增加,弹力纤维减少,病理损伤程度明显增加,ET-1、HIF-1α、VEGF、Collagen I和Collagen III水平以及PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、HIF-1α、VEGF蛋白表达显著增加,PTEN、TRIB3蛋白表达明显降低;与模型组比较,黄地安消胶囊不仅可改善GK大鼠腹主动脉组织病理学损伤程度,明显降低ET-1、HIF-1α、VEGF、Collagen I和Collagen III水平以及PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、HIF-1α、VEGF蛋白表达水平,还可显著升高PTEN、TRIB3蛋白表达水平。结论:黄地安消胶囊能够改善自发性2型糖尿病大鼠血管病变损伤,其机制可能与调控PI3K/Akt信号通路、抑制腹主动脉胶原蛋白的沉积有关。