人巨细胞病毒与妊娠期感染

孕妇感染人巨细胞病毒后，可导致宫内传播，引发早产、流产、胎儿畸形等不良妊娠结局，存活会留有听力缺陷，智力发育障碍等后遗症，严重影响人口出生质量。本对人巨细胞病毒妊娠期感染的发病情况、诊断及防治进行简要综述。     

四妙解毒汤体外抵制人巨细胞病毒作用研究

人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染播及广泛，它可引起肺炎、肝炎、胃肠炎、新生儿疾病等，近年来对ＨＣＭＶ在动脉硬化性疾病中的发病意义逐渐受到重视。Ｍｅｌｎｉｃｋ等以电镜和免疫荧光技术在冠心病患者动脉粥样硬化斑块中检出了 ＨＣＭＶ ＤＮＡ，阳性率高达９０％以上，另外器官移植患者感染ＨＣＭＶ后可在短期内发生动脉粥样硬化，从而提出动脉粥样硬化的病毒感染学说［１］。目前尚无特效药物能够预防和控制其感染［２］。笔者在临床经验基础上，应用四妙解毒汤治疗动脉硬化性闭塞症取得满意效果，并通过体外实验证实其确有明显抑制ＨＣ…     

人巨细胞病毒活动性感染的分析

目的：调查人类巨细胞病毒（HCMV）活动性感染人群的分布及流行病学特征，为预防和诊治HCMV活动性感染提供证据。方法：用ELISA法测定血清中HCMV活动性感染的特异性抗体HCMV-IgM，并对HCMV-IgM检测人群进行分析。结果：90例健康人群血清HCMV活动性感染率为0，5315例孕妇血清HCMV-IgM检测中有303例为阳性，HCMV活动性感染率平均为5.70%,但孕妇HCMV活动性感染率有逐年下降趋势；51例不明原因的黄疸患者，16例器官移植患者、3例发热待查患者，HCMV活动性感染率分别为3.92%，12.5%。结论：移植患者、孕妇、不明原因的黄疸患者易受HCMV活动性感染，临床上应将其作为高危人群常规筛查HCMV-IgM。     

黄芩素抗人巨细胞病毒的体外实验研究

目的体外研究黄芩素抗人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）的效果和安全性。方法细胞病变法和噻唑蓝（MTT）法检测各浓度黄芩素对人胚肺成纤维细胞（HEL）存活率及HCMV抑制率的影响,并与更昔洛韦进行比较。数据输入SigmaPlot软件,经Hill方程曲线拟合计算药物的半数毒性浓度（TC50）和半数有效浓度（EC50）。结果更昔洛韦和黄芩素的TC50分别为353.1＂g/ml和151.4＂g/ml,EC50分别为62.98＂g/ml和14.47＂g/ml,治疗指数分别为6和10。结论黄芩素具有体外抗HCMV作用,值得进一步研究。     

人巨细胞病毒负荷量对细胞病变的影响

目的探讨感染后人巨细胞病毒负荷量与细胞病变的关系。方法采用不同滴定度的人巨细胞病毒感染传代培养的人胚肺成纤维细胞,建立人巨细胞病毒梯度感染细胞模型,荧光定量PCR法测定感染细胞内及其维持液病毒DNA量,光镜观察致细胞病变作用,电镜检查其超微结构的改变。结果人巨细胞病毒感染后,细胞内与其维持液病毒DNA量成正相关(r=0.83,P<0.01)。当细胞内病毒DNA量>105GE/106HEL时,病毒开始自细胞内释放;当维持液病毒DNA量>103GE/ml时,细胞出现病变。结论人巨细胞病毒感染后,受染细胞排放病毒致细胞外,且细胞内外病毒负荷量成正相关。细胞病变的发生情况与细胞内及其周围环境的病毒负荷量均密切相关。     

孕早期绒毛细胞原位杂交监测人巨细胞病毒宫内感染的价值

用地高辛标记人巨细胞病毒 (HCMV) DNA探针 ,对 10 5例孕早期妇女 (其中有异常妊娠史者 4 5例 )绒毛细胞进行原位杂交 (ISH)。结果发现 :正常组与异常妊娠史组 ISH阳性率分别为 2 5 .0 0 %及 4 8.89% ,P<0 .0 5。与 PCR法相比 ,该方法敏感度 5 5 .0 0 % ,特异度 76 .92 % ,符合率 6 8.5 7% ,且可进行病毒核酸定位及半定量。提示 :用地高辛标记探针进行绒毛细胞原位杂交 ,监测 HCMV宫内感染是可行的 ,为进一步探讨 HCMV感染引起不良妊娠的机理提供了一条新途径 ,并为胎儿取舍提供更确切的科学依据 ,减少低质儿的出生     

人巨细胞病毒感染对单核细胞和内皮细胞株ECV-304间趋化和黏附的增强作用

目的 研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对单核细胞及内皮细胞株表达趋化因子的影响,以及对两者之间趋化和黏附的影响。方法 通过ELISA法和半定量RT-PCR的方法,检测CMV感染对单核细胞株(THP-1)及内皮细胞株(ECV-304)几种趋化因子及其受体表达的改变,同时通过趋化实验和黏附实验研究内皮细胞对单核细胞的趋化和黏附的改变。结果 HCMV感染可刺激ECV-304分泌MCP-1、GROα,在mRNA水平可改变内皮细胞MCP-1、CRO-α和IL-8表达,先下调后上调(IL-8除外);而对单核细胞趋化因子受体CCR2、CXCR2的表达在mRNA水平却有明显的下调作用(P<0.05)。HCMV感染可显著增强内皮细胞对单核细胞的趋化和黏附。结论 HCMV感染可增强内皮细胞对单核细胞的趋化和黏附,参与炎症反应,这可能与CMV上调内皮细胞趋化因子表达有关。     

人巨细胞病毒pp65抗原检测在肾移植后HCMV感染状况的研究

目的人巨细胞病毒pp65蛋白（HCMVpp65）抗原血症检测已被认为是预测活动性感染非常好的指标。但临床医生对移植患者此项检查的最佳时机掌握并不十分准确。本文拟探讨HCMVpp65抗原移植患者阳性率、移植术后HCMVpp65抗原检测的最佳时期。方法①回顾性分析100例次HCMVpp65抗原检测，计算阳性率。②对10例HCMVpp65阳性患者，计算初次阳性出现时期例数分布情况。结果①移植患者术后HCMVpp65抗原阳性率为10．0％；②HCMVpp65抗原术后检测出现阳性时期集中在术后第一至三个月，此后极少。结论①肾移植患者术后HCMVpp65抗原阳性率为10．0％。②术后第一至三个月患者易感HCMV，为HCMVpp65抗原高密度检测最佳时期，第四个月至1年可低密度监测。     

CpG-ODN活化的外周血单个核细胞体外对肿瘤细胞杀伤效应的研究

目的探讨CpGODN体外活化的外周血单个核细胞（PBMC）后对肿瘤细胞的杀伤效应。方法CpG—ODN体外刺激人外周血单个核细胞（PBMC），将活化的PBMC与肿瘤细胞按50：1的比例共孵育72h后，以MTT和酶学检测活化的PBMC对肿瘤细胞的杀伤作用。结果CpC—ODN诱导活化的PBMC对肿瘤细胞的杀伤作用增强，而对正常肝细胞则无明显的杀伤作用。结论CpG—ODN可诱发机体免疫效应，提高对肿瘤细胞的杀伤作用。     

聚酯型儿茶素对人外周血单核细胞免疫反应的影响

目的 研究聚酯型儿茶素对人外周血单核细胞免疫反应的影响。方法 采用MTT法测定淋巴细胞增殖反应和IL－2活性,采用免疫细胞化学和间接免疫荧光测定IL－2R的水平,采用和放射免疫法细胞内cAMP浓度。结果 50,150,500μg/mL聚酯型儿茶素对人外周血单核细胞增殖有明显的促进作用,亦可促进经植物血凝素（PHA)在化的人外周血单核细胞产生IL－1及表达IL－2R。此外,聚酯型儿茶素可明显降低人外周血单核细胞内cAMP浓度,也可对抗前列腺素E1（PGE1）升高cAMP的作用。结论 聚酯型儿茶素对人具有明显的免疫增强作用,其机制与促进IL－2的诱发及其受体的表达,降低细胞内cAMP水平有关。     

内毒素诱导外周血单核细胞释放β-葡萄糖苷酸酶的体外研究

目的研究内毒素(LPS)对正常人外周血单核细胞(PBMC)产生β-葡萄糖苷酸酶(β-GD)的影响,探讨胆石症的又一个发病机制。方法以生理盐水(对照组)和0.01、0.10、1.00、10.00和100.00μg/mL内毒素(LPS组)刺激体外培养的外周血单核细胞,并分别于培养的2、4、8、12和24h取上清液,采用酶促动力学方法于pH值4.5条件下检测β-GD活性。结果正常人PBMC在无LPS条件下可以产生具有一定活性的β-GD;在培养的4、8、12和24h,各LPS组β-GD活性显著高于对照组(以1.00μg/mLLPS组为例,与对照组β-GD活性分别为(1633.3±65.0)vs(1106.7±48.6),(1926.0±147.1)vs(1067.7±133.1),(1743.3±66.8)vs(1016.7±147.7),(1553.7±79.6)vs(1193.3±90.2)Fishman单位/106PBMC,t值分别为14.5、9.6、10.0和6.7,P<0.05)。结论LPS可以增加正常人PBMC释放β-GD,此途径可能是LPS参与胆石症发病的又一个机制。     

RANKL联合M-CSF体外诱导人外周血单个核细胞成为破骨样细胞的研究

目的 体外诱导人外周血单个核细胞成为破骨样细胞.方法 从人外周血以密度梯度离心法分离出单个核细胞贴壁培养后分为3组.A组:使用核因子NF-κB受体激活剂配体(RANKL)联合巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)进行诱导;B组:仅使用M-CSF进行诱导;C组:仅使用RANKL进行诱导.14 d后使用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法以及扫描电镜观察骨片以鉴定细胞是否具有破骨细胞的特征.结果 A组14 d时出现较多的多核TRAP染色阳性的细胞,数量为(476±47)个,较B组(54±18)个明显增加(P<0.05),C组不能诱导出TRAP染色阳性细胞.A组诱导生成的细胞具有在骨片上形成骨吸收陷窝的能力,B组骨片上均没有发现明显的骨吸收陷窝.结论 从人外周血单个核细胞中可以诱导出破骨样细胞,RANKL和M-CSF是诱导过程中所需要的两个重要因子.     

人外周血CD68+单核细胞体外的分选及诱导分化为破骨细胞

目的 建立高纯度人活性破骨细胞方法,用于对破骨细胞生物化学和分子生物学的研究。方法 用免疫磁珠法在人类外周血单核细胞中分选出CD68⁺细胞,用流式细胞仪分析分选效能,体外在10^-8 mol/L地塞米松及25 μg/L巨噬细胞集落刺激因子的培养条件下用16 μg/L可溶性核因子κB受体活化子配体诱导(s-RANKL)分化,用降钙素受体抗体免疫组化染色及抗酒石酸磷酸酶染色鉴定,扫描电镜观察骨片贴壁细胞及骨吸收陷窝。结果 分选获得CD68⁺单核细胞纯度为(93.06±0.61)%(n=4),经核因子κB受体活化子配体诱导后降钙素受体抗体免疫组化染色阳性,抗酒石酸磷酸酶染色,扫描电镜观察有骨吸收陷窝形成。结论 人外周血单核细胞中CD68⁺细胞是破骨前体细胞,在RANKL在诱导下分化为成熟破骨细胞。     

产妇血浆和新生儿尿液HCMV-DNA检测分析

目的了解产妇血浆、外周血单个核细胞(PBMC)和新生儿尿液中人巨细胞病毒核酸(HCMV-DNA)含量,并探讨其相关性。方法应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测42例分娩了新生儿黄疸、早产儿和低出生体重儿的产妇血浆、PBMC及其新生儿尿液中HCMV-DNA的含量(观察组),同时检测36例正常新生儿尿液及其产妇血浆和PBMC中HCMV-DNA的含量(对照组)。结果观察组产妇血浆、PBMC和新生儿尿液中HCMV-DNA的阳性率分别为45.2%(19/42)、64.3(27/42)和61.9%(26/42),与对照组的阳性率5.6%(2/36)、11.1%(4/36)和8.3%(3/36)相比有统计学意义(χ2=15.5,P<0.01、χ2=22.9,P<0.01和χ2=25.2,P<0.01);观察组HCMV-DNA的平均含量(105.1±2.1)copies/ml(不含阴性)与对照组(104.4±1.4)copies/ml(不含阴性)相比(取10的对数)有统计学意义(t=1.70,P<0.05)。观察组26例产妇的PBMC与新生儿尿液中HCMV-DNA同时阳性时,两者HCMV-DNA含量呈正相关(r=0.758,P<0.01)。结论HCMV的感染与新生儿黄疸、早产和低体重患儿密切相关;新生儿尿液作为HCMV感染的检测标本,具有无创伤、易留取和真实反映体内感染情况的优点。     

人外周血单个核细胞体外重编程为少突胶质前体细胞研究

目的利用非整合质粒载体在体外将成人外周血中单个核细胞重编程为少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)。方法经外周静脉采集志愿者血液5 m L,利用Ficoll-Paquem密度梯度离心法获得单个核细胞,体外扩增培养后,电转染携带外源基因(OCT4,SOX2,KLF4,C-myc,LIN28,Nanog)的质粒,然后在加有化学小分子的特定培养基中分三步培养。结果转染后30 d左右,可以获得血小板衍生生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor-α,PDGFR-α)阳性的早期少突胶质前体细胞(Pre-OPC),该细胞能传20代以上,继续分化30 d左右可以获得表达O4的少突胶质前体细胞。结论利用非整合质粒载体携带外源基因可以将成人外周血单个核细胞在较短期时间内重编程为具有增生能力的早期少突胶质前体细胞,且能继续分化为少突胶质前体细胞。     

人外周血CD68^＋单核细胞体外的分选及诱导分化为破骨细胞

OBJECTIVE: To establish a method for obtaining highly purified primary human osteoclast precursors for the biochemical and molecular biological research. METHODS: CD68(+) mono/macrophages were separated from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of healthy donors by means of immunomagnetic cell sorting for subsequent analysis with flow cytometry. The isolated cells were incubated on coverslips or bone slices in the presence of dexamethasone(10(-8) mol/L), macrophage colony-stimulating factor (25 microg/L ) and soluble receptor activator of nuclear factor (NF)-kappaB ligand (s-RANKL, 16 microg/L). Calcitonin receptor (CR) immunocytochemistry and tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) histochemistry were employed. The bone slices were also studied by scanning electron microscopy (SEM). RESULTS: Fluorescence-activated cytometric analysis showed that 93.06%+/-0.61% n=4 of the selected cells were CD68(+) cells. After 7 days of culture of the CD68(+) cells, VR+, TRAP+ multinucleated giant cells appeared, and resorption lacunae could be observed by SEM. CONCLUSION: Highly purified CD68(+) cells can be obtained from human PBMCs as the osteoclast precursors, and mature osteoclasts can be induced from CD68(+) mono/macrophages by RANKL.     

尼古丁对体外培养人外周血单个核细胞分泌TNF的影响

目的 :观察尼古丁对体外培养人外周血单个核细胞分泌肿瘤坏死因子 (TNF)的影响 ,探讨吸烟使血浆TNF水平升高的可能机制。方法 :分离 2 1名不吸烟与 19名吸烟健康志愿者的外周血单个核细胞 (PBMC)。每名志愿者的PBMC分成A ,B ,C三组 ,A组培养基中不加尼古丁 ,B和C组培养基中分别加入 5 0ng·ml- 1 和 5 0 0ng·ml- 1 浓度的尼古丁 ,体外培养 72h后检测上清液TNF水平 ,观察细胞增殖情况。结果 :吸烟A组TNF水平显著高于不吸烟A组 (P <0 .0 5 ) ,吸烟B组TNF水平显著高于不吸烟B组 (P <0 .0 5 ) ;不吸烟C组TNF水平显著高于不吸烟B组 (P <0 .0 5 ) ,且两组均显著高于不吸烟A组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ;吸烟B组TNF水平显著高于吸烟A组 (P <0 .0 5 ) ;而吸烟C组TNF水平则显著低于吸烟A组和不吸烟C组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 ) ,且PBMC增殖也受到抑制 ,其增殖倍数显著低于吸烟A组和不吸烟C组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 ) ,TNF水平与细胞增殖倍数呈正相关 (r =0 .93,P <0 .0 5 ) ,直线回归方程式为 ^Y =2 .913X - 2 .95 5。结论 :尼古丁可以促进体外培养的人外周血单个核细胞分泌TNF ,且作用大小随剂量增大而增大 ,但高浓度尼古丁反而抑制TNF分泌 ,这可能是吸烟升高血浆TNF水平的机制之一。     

外周血单个核细胞向平滑肌祖细胞分化的体外培养

目的 探讨外周血单个核细胞向平滑肌祖细胞分化的培养方法. 方法 分离人外周血单个核细胞,接种于加有牛垂体提取物的M-199培养基中,第8 天予以血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)刺激促进细胞分化,刺激15 d后运用RT-PCR、免疫荧光法和Western blot检测平滑肌细胞特异性α-辅肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SM MHC)、调宁蛋白(Calponin)、CD34、Tie-2 和Flk-1的表达, 并以流式细胞技术检测培养细胞α-SMA阳性表达率,对培养细胞进行鉴定. 结果 在PDGF-BB刺激培养15 d后细胞表达平滑肌细胞的标记α-SMA、SM MHC和Calponin,同时表达干细胞的标记CD34,并发现其Flk-1阳性表达,Tie-2阴性表达.PDGF-BB刺激后细胞α-SMA阳性表达率为 (90.57±5.63)%,与阴性对照细胞之间有统计学差异(P＜0.05). 结论 外周血单个核细胞分离后第8天,使用PDGF-BB刺激可使其向平滑肌前体细胞分化,提出了一种新的外周血单个核细胞向平滑肌细胞分化的培养方法.