顺铂诱导肺腺癌H1650细胞线粒体氧化应激损伤的实验研究

目的:研究顺铂诱导肺腺癌H1650细胞氧化应激致线粒体功能损伤。方法:用不同剂量的顺铂(0、0.5、1.0、2.0μg/mL)处理肺腺癌H1650细胞后,分别采用荧光探针DCFH-DA和JC-1检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平,荧光素酶测定细胞内三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)浓度。结果:顺铂处理后,H1650细胞内的ROS含量在5 min时达到最高水平,之后逐渐下降,对照组(培养液不加顺铂)内的ROS含量没有变化。不同浓度顺铂处理细胞24 h后,随着顺铂浓度的增加,细胞的绿色荧光强度逐步增加,红色荧光强度逐步减弱,表明细胞内MMP水平随顺铂浓度的增加而降低。ATP含量测定显示,随着顺铂浓度增加,ATP含量逐步减少。结论:顺铂通过诱导肺腺癌H1650细胞产生ROS导致氧化应激,使MMP降低,ATP含量减少,线粒体功能受损,细胞能量供应受限而发挥抗肿瘤作用。     

虾青素对ECV-304细胞的抗氧化作用及其作用机制

目的 研究虾青素的抗氧化作用并探讨其作用机制.方法 MTT、LDH释放实验检测了虾青素对ECV-304细胞活力的影响,超氧化物歧化酶(SOD)、二氨基二苯甲烷(MDA)、细胞内氧化应激活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)的测量实验检测了虾青素对ECV-304细胞的抗氧化作用,ATP、细胞色素C氧化酶(COX)、线粒体跨膜电位的测量实验检测了虾青素对ECV-304细胞线粒体的保护作用.结果 虾青素能保护细胞膜不受损伤,提高细胞活力,降低ROS、MDA的含量,升高SOD活性和NO含量.同时,虾青素还能显著升高ATP水平和COX活性,线粒体跨膜电位有所升高.结论 虾青素的抗氧化作用可能是通过保护线粒体功能实现的.     

膜电位及MAPK磷酸化在飞燕草素抑制Ox-LDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤中的作用

目的 观察飞燕草素(Delphinidin-3-glucoside,Dp-3-dc)对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的血管内皮细胞株EA.hy926的氧化应激损伤、细胞膜电位和线粒体膜电位改变及p38MAPK磷酸化的影响,探讨其抑制内皮细胞氧化应激的分子机制.方法 不同浓度(25、50、100、200 μmol/L)的Dp-3-glc预处理内皮细胞2 h后,Ox-LDL(100μg/ml)继续处理24 h,MTT法检测细胞活力;细胞培养上清液LDH、NO、MDA水平及细胞匀浆SOD酶活件采用试剂盒分别检测;荧光探针DCFH-DA标记细胞内活性氧(ROS)、膜电位敏感的阳离子荧光探针DISC3(5)和阴离子荧光探针DiBACA(3)分别标记细胞膜电位,罗丹明-123标记线粒体膜电位,激光共聚焦显微镜分别检测荧光强度;Western blot法检测细胞内p38MAPK的磷酸化水平.结果 Dp-3-ste能明显抑制Ox-LDL诱导的内皮细胞MDA和LDH生成增加、NO分泌减少及细胞内SOD酶活力降低,并显著减少细胞内活性氧(ROS)生成.实验发现Ox-LDL能明显诱导细胞膜电位升高和线粒体膜电位下降,及增强膜电位相关的p38MAPK的磷酸化水平,而Dp-3-dc预处理能明显减弱Ox-LDL诱导的膜电位改变,并抑制038MAPK的磷酸化.结论 Dp-3-c可能通过影响细胞膜电位、线粒体膜电位及膜电位相关的p38MAPK的磷酸化水平,削弱Ox-LDL诱导的内皮细胞氧化应激损伤.     

间断高浓度葡萄糖对胰岛β细胞的损伤机制研究

目的探讨间断高浓度葡萄糖对培养的胰岛β细胞(HIT-T15细胞)的损伤机制。方法实验分为对照组(葡萄糖5.5mmol/L)、持续高浓度葡萄糖组(葡萄糖16.7mmol/L)、间断高浓度葡萄糖组(葡萄糖16.7mmol/L培养2h后更换为5.5mmol/L的葡萄糖3h,每天重复共3次,夜间9h维持在5.5mmol/L的培养基中)、抗氧化剂(NAC1.0mmol/L) 持续高糖组和NAC 间断高糖组。放免法测定胰岛素分泌水平;罗丹明123染色线粒体,激光共聚焦显微镜测量线粒体膜电位(MMP);荧光素酶方法检测细胞内ATP含量;硫代巴比妥酸法测量脂质过氧化物丙二醛(MDA)水平;流式细胞仪测定活性氧簇(ROS)的水平。结果高糖刺激后胰岛素分泌量在间断高糖组〔(3.13±1.11)μIU/mL〕和持续高糖组〔(5.18±0.95)μIU/mL〕分别较对照组〔(9.33±0.62)μIU/mL〕均明显减少(P<0.05);MDA水平、ROS水平明显升高(P均<0.05),并且间断高糖组较持续高糖组产生更多的ROS(P<0.05);间断高糖组和持续高糖组细胞内ATP含量、MMP水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论间断高浓度葡萄糖与持续高糖均使培养的β细胞线粒体氧化应激水平增高,且间断高糖组较持续高糖组产生更严重的氧化应激,从而使β细胞分泌胰岛素功能受损,其机制可能是由于氧化应激使线粒体的膜电位下降,细胞ATP含量减少所致。     

雌激素对血管内皮细胞线粒体的保护作用

目的 探讨雌激素对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)线粒体的保护作用.方法 采用过氧化氢(H2O2)作用于HUVEC制备氧化应激细胞模型,观察17β-雌二醇(E2)对氧化应激内皮细胞线粒体的保护作用.实验分A组(空白组)、B组(250 μmol/L H2O2刺激组)、C组(250 μmol/L H2O2 0.1 μmol/L E2组)及D组(250 μmol/L H2O2 0.1 μmol/L E2 10μmol/L ICI182780组).刺激4 h后,检测细胞线粒体细胞色素C氧化酶活性、细胞内ATP水平、细胞内活性氧(ROS)水平及细胞活力.结果 与A组比较,B组细胞中线粒体细胞色素C氧化酶活性下降,ATP水平下降,细胞内活性氧增加,细胞活力下降;C组细胞上述指标与B组细胞相比程度减轻;D组细胞上述指标与B组细胞变化相似.结论 E2可通过受体机制对氧化应激HUVEC的线粒体产生保护作用.     

脂氧素通过Nrf2信号通路对LPS诱导脐静脉内皮细胞氧化应激的抑制作用

目的研究脂氧素对脂多糖(LPS)刺激的脐静脉内皮细胞引起的氧化应激的抑制作用及其机制。方法以LPS10μg/ml诱导脐静脉内皮细胞氧化应激,以不同浓度脂氧素(lipoxin A4,LXA4)进行干预,以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;细胞免疫荧光检测转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)转位变化;RT-PCR检测Nrf2及其下游抗氧化酶mRNA的表达;化学显色法测定脐静脉内皮细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX,GPX)活性。结果细胞内ROS测定显示,脂氧素能够有效地降低脐静脉内皮细胞内由LPS刺激引起的ROS升高;细胞免疫荧光结果显示,LPS组Nrf2主要在胞质中表达。而加入脂氧素干预后胞核可见较强的Nrf2的表达;其中加入200nmol/L脂氧素作用后胞核中的Nrf2的表达明显增强。RT-PCR结果显示,LPS组Nrf2、血红素氧合酶-1(HO-1)、SOD、GPX mRNA表达水平明显降低,加入脂氧素干预后Nrf2、HO-1、SOD、GPX mRNA表达水平均增加。化学显示法结果显示,LPS组脐静脉内皮细胞的SOD、GSH-PX的活性明显降低,使用100nmol/L和200nmol/L脂氧素干预后均能明显减少细胞的氧化损伤。结论脂氧素通过活化转录因子Nrf2来促进多种抗氧化酶的表达,进而减轻细胞内的氧化应激损伤。     

糖化终末产物对内皮细胞氧化应激的影响

目的研究糖化终末产物(AGEs)对猪髂动脉内皮细胞(PIEC)氧化应激的影响。方法不同浓度AGEs干预PIEC一定时间后,MTT比色法检测细胞活力变化。运用活性氧(ROS)捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞,通过流式细胞仪检测细胞内二氯荧光黄(DCF)的荧光强度而测得细胞内ROS水平。结果随着AGEs浓度的增加和作用时间的延长,PIEC活力明显下降(P<0.05);细胞活力下降与作用浓度及时间呈显著正相关(r=0.927,P<0.01)。经DCFH-DA孵育后流式细胞仪检测显示,AGEs处理组细胞内DCF平均荧光强度较空白对照组明显升高。结论AGEs抑制内皮细胞活力,使细胞内ROS生成明显增加,直接诱导内皮细胞的氧化应激。     

α-硫辛酸对大鼠皮肤成纤维细胞高糖损伤的保护机制

目的:探讨α-硫辛酸(ALA)抑制高糖刺激大鼠皮肤成纤维细胞损伤的作用机制。方法:以不同浓度ALA干预高糖作用下的大鼠皮肤成纤维细胞,分别采用MTT比色法观察细胞活力,硫代巴比妥酸法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)含量,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,Caspase-3活性检测以及Western blotting法检测细胞磷酸化JNK(p-JNK),磷酸化p38(p-p38)蛋白量的表达。结果:ALA能够显著改善高糖刺激对大鼠成纤维细胞细胞活力的影响(P<0.05),降低细胞内MDA含量及ROS水平并提高SOD活力,且能明显降低Caspase-3的活性以及p-JNK、p-p38蛋白量的表达(P<0.05)。结论:在体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞模型中,ALA能够通过降低氧化应激水平,抑制JNK,p38通路的激活并降低Caspase-3活性来改善高糖诱导的氧化应激损伤。     

糖化终末产物对内皮细胞氧化应激的影响

目的 研究糖化终末产物(AGEs)对猪髂动脉内皮细胞(PIEC)氧化应激的影响.方法 不同浓度AGEs干预PIEC一定时间后,MTT比色法检测细胞活力变化.运用活性氧(ROS)捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞,通过流式细胞仪检测细胞内二氯荧光黄(DCF)的荧光强度而测得细胞内ROS水平.结果 随着AGEs浓度的增加和作用时间的延长,PIEC活力明显下降(P＜0.05);细胞活力下降与作用浓度及时间呈显著正相关(r=0.927,P＜0.01).经DCFH-DA孵育后流式细胞仪检测显示,AGEs处理组细胞内DCF平均荧光强度较空白对照组明显升高.结论 AGEs抑制内皮细胞活力,使细胞内ROS生成明显增加,直接诱导内皮细胞的氧化应激.     

黄芪甲苷改善过氧化氢诱导的人主动脉内皮细胞氧化应激损伤的研究

目的：研究黄芪甲苷（astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ）对过氧化氢（H2O2）诱导的人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAECs）氧化应激损伤的改善作用。方法：体外培养的HAECs经饥饿处理后分为对照组、H2O2损伤组及AS-Ⅳ治疗组。H2O2损伤组细胞经H2O2（400 μmol/L)持续损伤36 h,AS-Ⅳ治疗组细胞经H2O2损伤12 h后加入含50 μg/mL AS-Ⅳ的培养基继续干预处理24 h。观察AS-Ⅳ对H2O2诱导的HAECs氧化应激损伤及线粒体功能损伤的修复作用。结果：H2O2损伤后HAECs 丙二醛（MDA）含量、NADPH氧化酶活性及线粒体活性氧（ROS）水平显著增加,超氧化物歧化酶（SOD）和锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）活性及线粒体膜电位显著降低;H2O2损伤的HAECs 经AS-IV治疗后,HAECs的MDA含量、NADPH氧化酶活性及线粒体ROS含量明显降低,SOD和Mn-SOD活性及线粒体膜电位显著增高。结论：AS-Ⅳ对H2O2诱导的HAECs氧化应激损伤具有保护作用,提高线粒体的抗氧化功能是其可能的机制之一     

右美托咪定对大鼠离体肺缺血再灌注所致线粒体损伤的影响

目的：探究右美托咪定（dexmedetomidine,Dex）对大鼠离体肺缺血再灌注所致线粒体损伤的影响。方法：将SD大鼠随机分成4组（n=6）：对照组（C组）、缺血再灌注组（IR组）、1 nmol/L Dex组（D1组）、10 nmol/L Dex组（D10组）,制备大鼠离体肺缺血再灌注模型。记录平衡末（T0）、再灌注即刻（T1）、再灌注30 min（T2）和再灌注60 min（T3）时的潮气量（tidal volume,VT）、肺顺应性（compliance,Cdyn）、气道阻力（airway resistance,Raw）和肺静脉氧分压（oxygen partial,PaO2）;测定肺湿/干重比;HE染色观察组织病理学改变;测定灌流末流出液乳酸脱氢酶（LDH）活性和肺组织中活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、三磷酸腺苷（ATP）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）活性。分离肺组织线粒体,检测线粒体肿胀程度和线粒体膜电位（MMP）。结果：与C组相比,IR组、D1组、D10组肺功能不同程度降低,LDH活性升高,ROS、MDA增加,SOD活性下降,ATP生成减少,线粒体肿胀程度升高,MMP下降（P < 0.05）;与IR组相比,D1组、D10组肺功能改善,病理显示肺损伤明显减轻,LDH释放减少,ROS、MDA含量减少,SOD活性升高,ATP生成增加,线粒体肿胀程度减轻,MMP上升（P < 0.05）;与D1组相比,D10组改善肺功能作用更明显,Raw下降,LDH活性降低,SOD活性升高,线粒体肿胀程度减轻（P < 0.05）。结论：右美托咪定减轻了离体肺缺血再灌注损伤,其机制可能与减轻线粒体损伤,减少氧化应激反应有关。     

用荧光探针JC-1检测氧化应激对精子线粒体膜电位的影响

目的：利用荧光探针JC-1观察氧化应激对精子线粒体膜电位的变化。方法：用FeSO4/H2O2体系诱导精子氧化损伤模型，利用新型荧光探针JC 1标记精子线粒体,在FACS Calibur流式细胞仪上检测JC 1荧光强度的变化。结果：正常精子线粒体维持较高的膜电位,JC 1在线粒体内形成聚合物, 红色荧光占主导地位。FeSO4/H2O2体系导致线粒体膜电位下降, JC 1聚合物分解成单体,红色荧光强度减弱。结论：氧化应激导致精子线粒体膜电位下降; JC 1结合流式细胞仪是一种理想的检测线粒体膜电位的手段。     

黄芪和三七主要有效成分配伍对氧化损伤所致的PC12细胞凋亡及其活性氧、线粒体膜电位的影响

目的：探讨黄芪主要有效成分黄芪甲苷和三七主要有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1配伍抗氯化钴（cobalt chloride,CoCl2）诱导的PC12细胞氧化损伤的作用及其机制。方法：应用CoCl2诱导经神经生长因子转分化的PC12细胞氧化损伤模型,经不同药物处理后,采用Hocchst33258荧光染色检测细胞凋亡,罗丹明123荧光染色检测细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）,2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐荧光染色检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平。结果：CoCl2能引起转分化后的PC12细胞凋亡,同时PC12细胞MMP水平显著降低,ROS生成显著增加。黄芪甲苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1均能不同程度地抑制CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,减少损伤后ROS的生成和MMP的下降,4个有效成分配伍的效应强于各有效成分单用。结论：黄芪和三七的主要有效成分能抑制氧化损伤后的PC12细胞凋亡,有效成分配伍后作用加强,其机制可能与抑制细胞活性氧的生成,提高线粒体膜电位有关。     

番茄红素对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：探讨番茄红素（Lycopene）对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法体外培养 H9c2心肌细胞,分为正常对照组（对照组）、番茄红素预处理组（Lycopene组）、模型组（H2 O2组）和番茄红素预处理后建立模型组（Lycopene加H2 O2组）。除对照组及Lycopene组外,其余各组用过氧化氢（H2 O2）200μmol／L处理6 h ,建立心肌细胞氧化应激损伤模型。Lycopene组建模前30 min加入5μmol／L的番茄红素。6 h后M T T观察H9c2心肌细胞存活率;分光光度计检测细胞培养液上清中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）活性和细胞中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活性;激光共聚焦联合流式细胞仪观察细胞内活性氧（ROS）的产生和线粒体膜电位;流式细胞仪检测细胞凋亡;酶标仪检测细胞内ATP水平。结果与对照组比较,H2O2组LDH、CK-BM、ROS、MDA及细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（P＜0．05）;H9c2心肌细胞存活率、SOD、ATP及线粒体膜电位显著降低,差异有统计学意义（P＜0．05）。与 H2O2组比较,Lycopene加 H2O2组LDH、CK-BM、ROS、MDA及细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义（P＜0．05）;H9c2心肌细胞存活率、SOD、ATP及线粒体膜电位显著增加,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论番茄红素可以减轻氧化应激条件下H9c2心肌细胞的损伤,其机制可能与清除细胞内氧化应激产物,增强细胞内抗氧化酶活性及改善线粒体功能有关。     

Damage mechanism of intermittent exposure to high concentrations of glucose to beta cell lines (HIT-T15 cell)]

OBJECTIVE: To test the effect of intermittent exposure to high concentrations of glucose on HIT-T15 cells. METHODS: The HIT-T15 cells (pancreatic betacell lines) were exposed to 16.7 mmol/L of glucose for two hours, at an interval of three hours. Such intermittent exposure was repeated three times a day. Otherwise, the cells were exposed to 5.5 mmol/L of glucose. The control groups included continuing exposure to 5.5 mmol/L of glucose (normal control group) and continuing exposure to 16.7 mmol/L of glucose. The impact of N-acetyl-L-cysteine (NAC) was also tested in the groups with intermittent and continuing exposure to 16. 7 mmol/L of glucose. The insulin was detected by radioimmunoassay (RIA). The mitochondrial membrane potential (MMP) was measured by laser scanning confocal microscope. The ATP levels of beta cells were examined by the luciferin-luciferase kit. The Malonaldehyde (MDA) was measured through thiobarbituric acid reaction (TBA). The intracellular reactive oxygen species (ROS) was observed by flow cytometry. RESULTS: The HIT-T15 cells exposed to intermittent and continuing high glucose secreted [(3.13 +/- 1.11) microIU/mLD and [(5.18 +/- 0. 95) microIU/mL] of insulin, significantly less than the control [(9.33 +/- 0.62) microIU/mL, P < 0.05]. The MDA and ROS levels increased while the ATP and MMP levels decreased significantly in the cells exposed to intermittent and continuing high glucose (P < 0.05). The cells exposed to intermittent high glucose produced more ROS than the cells exposed to continuing high glucose (P < 0.05). CONCLUSION: Exposure of HIT-T15 to high glucose leads to oxidative stress of mitochondrial. Intermittent exposure causes more serious stress than continuing exposure. Such response might be a result of decreased MMP level and ATP contents.     

解偶联蛋白2过表达对脓毒症大鼠心肌细胞线粒体的保护作用

目的：探讨解偶联蛋白2（UCP2）过表达对脓毒症大鼠心肌细胞线粒体的保护作用,阐明其作用机制。方法：构建UCP2过表达的H9C2心肌细胞。H9C2心肌细胞随机分为正常对照组、脂多糖/聚糖肽（LPS/PepG）刺激组、空病毒组和过表达组,除正常对照组外其余各组予LPS/PepG刺激。采用RT-PCR和Western blotting法检测各组心肌细胞中UCP2 mRNA和蛋白表达水平,采用分光光度计法和ELISA法检测脓毒症心肌细胞模型建立指标肌酸激酶（CK）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,采用电镜观察各组心肌细胞线粒体形态表现,采用流式细胞术检测各组心肌细胞线粒体膜电位（MMP）水平,采用多功能酶标仪检测各组心肌细胞线粒体活性氧（ROS）和三磷酸腺苷（ATP）水平。结果：与正常对照组比较,LPS/PepG刺激组心肌细胞中CK和TNF-α水平明显升高（P<0.05）,且线粒体形态明显损害,MMP水平明显降低（P<0.05）,线粒体ROS水平明显升高（P<0.05）,ATP水平明显降低（P<0.05）;与LPS/PepG刺激组比较,过表达组心肌细胞中CK和TNF-α水平明显降低（P<0.05）,且线粒体形态结构明显好转,MMP水平明显升高（P<0.05）,线粒体ROS水平明显降低（P<0.05）,ATP水平明显升高（P<0.05）;与LPS/PepG刺激组比较,空病毒组心肌细胞中CK、TNF-α、MMP、ROS和ATP水平差异均无统计学意义（P>0.05）,线粒体肿胀度无明显改变。结论：UCP2过表达对脓毒症大鼠心肌细胞线粒体有保护作用,其机制可能与UCP2通过解偶联作用调控膜电位,进而影响ROS和ATP的合成有关。     

Oxidative Stress and Apoptotic Changes of Rat Cerebral Cortical NeuronsExposed to Cadmium in Vitro

Objective To investigate the cytotoxic mechanism of cadmium (Cd) on cerebral cortical neurons.Methods The primary cultures of rat cerebral cortical neurons were treated with different concentrations of cadmium acetate (0,5,10,and 20 μmol/L),and then the cell viability,apoptosis,ultrastructure,intracellular [Ca2+],and reactive oxygen species (ROS) levels,mitochondrial membrane potential (Δψ),activities of catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) were measured.Results A progressive loss in cell viability and an increased number of apoptotic cells were observed.In addition,Cd-induced apoptotic morphological changes in cerebral cortical neurons were also demonstrated by Hoechst 33258 staining.Meanwhile,ultrastructural changes were distortion of mitochondrial cristae and an unusual arrangement.Simultaneously,elevation of intracellular [Ca2+] and ROS levels,depletion of △ψ were revealed in a dose-dependent manner during the exposure.Moreover,CAT and SOD activities in the living cells increased significantly.Conclusion Exposure of cortical neurons to different doses of Cd led to cellular death,mediated by an apoptotic mechanism,and the apoptotic death induced by oxidative stress may be a potential reason.And the disorder of intracellular homeostasis caused by oxidative stress and mitochondrial dysfunction may be a trigger for apoptosis in cortical neurons.     

黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的腹膜间皮细胞线粒体损伤的干预机制研究

目的?研究黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的人腹膜间皮细胞（HPMCs）线粒体损伤的影响,并探讨其干预机制。方法?①人腹膜间皮细胞株（HMrSV5）在RPMI 1640（含1%FCS）培养液中培养24?h后分为6组:空白组:正常培养液2?mL;高糖腹透液组:含4.25% PDS 1?mL+正常培养液1?mL;低剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度10?μmol/mL;中剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度20?μmol/mL;高剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度40?μmol/mL;阳性药对照组:吡菲尼酮50?μmol/mL。②分别采用CCK-8法测定HMrSV5的增殖活性;流式细胞仪检测细胞活性氧族（ROS）水平变化;罗丹明123荧光染色检测HMrSV5膜电位水平变化;JC-1法测定HMrSV5线粒体膜电位的去极化;Western blot检测HPMCs线粒体形态和功能相关蛋白的表达情况。结果?①CCK-8检测结果显示,与模型组相比,黄芪甲苷处理组OD值明显升高,细胞存活率也相应增加,呈浓度依赖性,黄芪甲苷对HPMCs有保护作用;②流式检测提示高糖腹透液刺激后线粒体ROS产生增加,而黄芪甲苷可有效降低ROS水平;③JC-1和罗丹明123染色后流式检测发现随着黄芪甲苷浓度的增加,线粒体膜电位的去极化程度随之减少,同时有效增加线粒体膜电位,线粒体膜通透性降低,黄芪甲苷能部分修复高糖腹透液对线粒体的损伤;④Western blot检测结果显示,黄芪甲苷处理的细胞线粒体分裂蛋白DRP1、FIS1的表达水平明显降低,线粒体外膜结合蛋白OPA1、TOM70的表达水平明显升高。结论?①高糖腹透液能诱导HPMCs线粒体损伤模型;②黄芪甲苷能够通过促进HPMCs线粒体外膜OPA1、TOM70蛋白的表达,降低DRP1、FIS1蛋白表达水平,减少线粒体膜电位去极化,同时有效增加膜电位及降低线粒体膜通透性,进而改善高糖腹透液诱导的HPMCs线粒体氧化应激损伤,保护其结构功能的稳定。      

血管紧张素-(1-7)通过抑制ClC-3通道减轻高糖引起的心肌细胞损伤

目的 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]能否通过调控ClC-3通道保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤.方法 应用35 mmol/L葡萄糖处理H9c2心肌细胞24 h建立损伤模型.Ang-(1-7)或氯通道抑制剂与心肌细胞共处理24 h观察对高糖诱发的心肌细胞损伤的影响.应用细胞计数试剂盒8检测细胞存活率;Hoechst33258染色荧光显微镜照相术检测凋亡细胞的形态学改变;双氯荧光素染色荧光显微镜照相术测定细胞内活性氧水平;超氧化物歧化酶试剂盒测定活性;罗丹明123染色荧光显微镜照相术检测线粒体膜电位;Western blot法测定心肌细胞ClC-3通道蛋白的表达水平.结果 35 mmol/L葡萄糖处理H9c2心肌细胞24 h明显地增加ClC-3通道蛋白的表达水平(P<0.01);1μmol/LAng-(1-7)与葡萄糖共处理心肌细胞24 h显著地抑制葡萄糖对ClC-3通道蛋白表达的上调作用(P<0.01);1μmol/LAng-(1-7)或100μmol/L氯通道抑制剂氯通道抑制剂与葡萄糖共处理心肌细胞24 h减轻葡萄糖引起的损伤作用,表现为增加细胞存活率和超氧化物歧化酶活性,减小细胞凋亡数量,胞内活性氧水平及线粒体膜电位丢失(P<0.01).结论 ClC-3通道参与葡萄糖引起的心肌细胞损伤;Ang-(1-7)通过抑制ClC-3通道保护心肌细胞对抗葡萄糖引起的损伤.     

Emerging roles of cardiolipin remodeling in mitochondrial dysfunction associated with diabetes, obesity, and cardiovascular diseases

Cardiolipin (CL) is a phospholipid exclusively localized in inner mitochondrial membrane where it is required for oxidative phosphorylation, ATP synthesis, and mitochondrial bioenergetics. The biological functions of CL are thought to depend on its acyl chain composition which is dominated by linoleic acids in metabolically active tissues. This unique feature is not derived from the de novo biosynthesis of CL, rather from a remodeling process that involves in phospholipases and transacylase/acyltransferase. The remodeling process is also believed to be responsible for generation of CL species that causes oxidative stress and mitochondrial dysfunction. CL is highly sensitive to oxidative damages by reactive oxygen species (ROS) due to its high content in polyunsaturated fatty acids and location near the site of ROS production. Consequently, pathological remodeling of CL has been implicated in the etiology of mitochondrial dysfunction commonly associated with diabetes, obesity, heart failure, neurodegeneration, and aging that are characterized by oxidative stress, CL deficiency, and abnormal CL species. This review summarizes recent progresses in molecular, enzymatic, lipidomic, and metabolic studies that support a critical regulatory role of pathological CL remodeling as a missing link between oxidative stress and mitochondrial dysfunction in metabolic diseases and aging.