miR-153干预对骨肉瘤细胞MG-63侵袭能力的影响

目的:探讨不同miR-153干预对骨肉瘤细胞系MG-63侵袭能力的影响。方法:培养骨肉瘤细胞MG-63并随机分为miR-153过表达组、miR-153沉默表达组及阴性对照组,依次分别转染miR-153 mimic、miR-153 inhibitor及空白对照质粒;Real-time PCR检测转染后细胞中miR-153表达以确定细胞模型构建成功;Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中侵袭相关蛋白ROCK1和ROCK2的表达;Transwell侵袭实验检测转染后细胞侵袭能力的变化;理论预测miR-153与ROCK1/ROCK2的靶向结合作用。结果:相比于阴性对照组,miR-153过表达组、miR-153沉默表达组MG-63细胞内miR-153表达水平分别上调和下调,细胞模型构建成功;Real-time PCR和Western blot结果显示,相比于阴性对照组,miR-153过表达组、miR-153沉默表达组MG-63细胞内侵袭相关蛋白ROCK1和ROCK2的mRNA表达变化不明显而蛋白表达水平分别降低和增高;Transwell侵袭实验结果显示上调及沉默miR-153后,MG-63细胞侵袭能力分别下降和增强;Targetscan生物学软件理论预测miR-153与ROCK1/ROCK2同时存在结合位点。结论:不同miR-153干预可明显影响骨肉瘤细胞MG-63的侵袭能力,而这种影响可能通过miR-153-ROCK1/ROCK2途径实现。     

miR-581调控FOXO1对卵巢癌SKOV3细胞自噬的影响

目的 探讨miR-581对卵巢癌SKOV3细胞自噬的影响及作用机制。方法 将miR-581 mimics和miR-581 NC转染到卵巢癌SKOV3细胞中,实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测转染效率;转染成功后,Western blot检测转染后卵巢癌SKOV3细胞中自噬相关蛋白的表达水平;TargetScanHuman数据库预测miR-581靶基因,Western blot验证miR-581与靶基因的作用。结果 过表达miR-581后可显著抑制自噬相关蛋白LC3Ⅱ和Beclin1的表达（P<0.01）;miR-581可负向调控FOXO1的表达（P<0.01）;FOXO1促进卵巢癌SKOV3细胞自噬（P<0.05）。结论 miR-581通过调控FOXO1的表达影响卵巢癌SKOV3细胞自噬。     

miR-494下调Sox9的表达对骨肉瘤细胞MG-63增殖和侵袭的影响

 目的 探讨miR-494对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与侵袭的影响,并验证Sox9是否为miR-494的靶基因。方法 过表达miR-494后,利用CCK-8、克隆形成实验检测MG-63细胞的增殖,利用Transwell实验检测细胞的侵袭能力。Western blot与荧光定量PCR检测Sox9蛋白与mRNA水平的表达。结果 MG-63细胞转染腺病毒miR-494后,miR-494表达明显升高（t=36.78, P=0.000）,Ad-miR-494转染组MG-63细胞增殖（F=1.711, P=0.012）、克隆形成（F=2.742, P=0.019）和侵袭能力（F=1.653, P=0.006）较Ad-GFP组下降。过表达miR-494后,Sox9蛋白（F=5.827, P=0.021）和mRNA表达水平（F=5.827, P=0.021）下降。而Sox9的下调使MG-63细胞增殖（t=27.54, P=0.042）、克隆形成（t=29.64, P=0.026）和侵袭能力（t=32.48, P=0.016）下降。结论 miR-494通过Sox9抑制骨肉瘤细胞MG-63的增殖与侵袭。     

miR-1271-5p在胃癌组织的表达及对胃癌AGS细胞生物学行为的影响

目的 探讨miR-1271-5p在胃癌组织和细胞中的表达及其对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 收集2011年6月至2014年6月广西医科大学附属肿瘤医院90例手术切除胃癌组织及相应癌旁组织。采用qRT-PCR法检测胃癌组织及相应癌旁组织,人胃癌细胞系（SGC-7901、MGC-803、AGS）和人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miR-1271-5p的表达情况。利用瞬时转染法将miR-1271-5p mimics（过表达miR-1271-5p组）和miR-NC（阴性对照组）分别转染胃癌AGS细胞,建立过表达miR-1271-5p的胃癌AGS细胞系,然后采用CCK-8法检测转染后的胃癌AGS细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果 miR-1271-5p在胃癌组织和胃癌细胞（SGC-7901、MGC-803、AGS）中的表达均低于相应癌旁组织及人正常胃黏膜上皮GES1细胞（均P<0.01）。与阴性对照组相比,过表达miR-1271-5p组胃癌AGS细胞增殖活力降低（P<0.01）,细胞集落形成数减少（P<0.01）,迁移和侵袭细胞数量亦减少（P<0.01）。结论 miR-1271-5p在胃癌组织和细胞中低表达,上调miR-1271-5p可抑制胃癌AGS细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-18a对胶质瘤细胞增殖和自噬的影响

目的:探讨miR-18a在神经胶质瘤细胞增殖和自噬中的作用。方法:采用瞬时转染的方法将miR-18a inhibitor及其阴性对照(negative control inhibitor,NC inhibitor)分别转染大鼠C6胶质瘤细胞;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测miR-18a在C6胶质瘤细胞中的表达;CCK-8法检测转染miR-18a inhibitor后C6细胞的增殖活性;mCherry-EGFP-LC3B质粒瞬时转染各组细胞,以动态监测自噬通量;Western blot检测敲低miR-18a后C6细胞中自噬相关蛋白LC3、p62、Beclin1的表达情况;RT-qPCR检测转染miR-18a抑制剂后C6细胞中自噬相关基因Beclin1和LC3B的相对表达水平。结果:RT-qPCR结果显示,与NC inhibitor组相比,miR-18a inhibitor组的miR-18a表达量显著降低（P＜0.05）。敲低miR-18a后显著抑制C6胶质瘤细胞的增殖（P＜0.05）。倒置荧光显微镜下观察到抑制miR-18a后可阻断自噬流,抑制自噬小体和溶酶体融合。抑制miR-18a可使胶质瘤细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1蛋白的相对表达量显著降低（P＜0.05）,p62蛋白的相对表达量明显升高（P＜0.05）。敲低miR-18a后能抑制胶质瘤细胞中的Beclin1和LC3B mRNA表达（P＜0.05）。结论:miR-18a下调可抑制胶质瘤细胞的增殖和自噬。     

miR-139-5p靶向GPR56抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:研究miR-139-5p对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测软骨肉瘤细胞中miR-139-5p、GPR56的mRNA表达;Western blot检测细胞中GPR56的蛋白表达;将miR-139-5p组（转染miR-139-5p mimics）、miR-NC组（转染miR-NC）、si-NC组（转染si-NC）、si-GPR56组（转染si-GPR56）、miR-139-5p+pcDNA3.1组（miR-139-5p mimics和pcDNA3.1共转染）、miR-139-5p+pcDNA3.1-GPR56组（miR-139-5p mimics和pcDNA3.1-GPR56共转染）,均以脂质体法转染至U-2OS细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;Transwell检测各组细胞的迁移、侵袭。结果:与人正常成骨细胞hFOB1.19相比,人骨肉瘤细胞U-2OS中miR-139-5p表达显著降低,GPR56表达显著升高（P＜0.05）。过表达miR-139-5p、敲减GPR56均可明显抑制U-2OS细胞增殖、迁移、侵袭;GPR56是miR-139-5p的靶点。过表达GPR56可逆转miR-139-5p对U-2OS细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:miR-139-5p可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向GPR56有关,将可为骨肉瘤的治疗提供新靶点。     

miRNA-95在骨肉瘤组织中的表达及其对MG-63细胞增殖和侵袭的影响

目的：研究miRNA-95在骨肉瘤组织和细胞株中的表达情况及其对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡、细胞周期和侵袭 能力的影响。方法：以实时荧光定量PCR检测15例骨肉瘤组织及其癌旁组织（标本收集自2015年1月至2018年1月青岛市海 慈医疗集团外科手术的病例）和骨肉瘤细胞株（MG-63、 U2OS、143B和HOS）与正常人成骨细胞株hFOB1.19中的miRNA-95表 达。利用Lipofectamine 2000将miRNA-95 mimics和miRNA-95 inhibitors分别转染至人骨肉瘤MG-63细胞株中,并设置miRNANC对照组,CCK-8法检测各组细胞增殖活力变化,流式细胞术检测各组细胞周期和凋亡变化,Transwell方法检测各组细胞侵袭 能力变化,双荧光素酶活性实验检测并验证miRNA-95在MG-63细胞中的靶向基因。结果：miRNA-95在人骨肉瘤组织中的表 达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）, 在MG-63、 U2OS、143B和HOS细胞中的表达水平显著高于hFOB1.19,且在MG-63细胞中表 达水平最高（P<0.01）。与miRNA-NC对照组相比,miRNA-95 mimics组中MG-63细胞的增殖活力显著上升、细胞凋亡率显著下 降而侵袭率显著上升（均P<0.01）、 而miRNA-95 inhibitors组中MG-63细胞增殖活力显著下降、细胞周期被阻滞、细胞凋亡率显著 上升而侵袭率显著下降（均P<0.01）;miRNA-95在骨肉瘤MG-63细胞中靶向上皮膜蛋白-1（epithelial membrane protein-1,EMP-1） 基因发挥作用。结论：miRNA-95在人骨肉瘤组织和细胞中均呈高表达,抑制骨肉瘤MG-63细胞中miRNA-95表达能够促进细 胞凋亡进而抑制细胞增殖、细胞周期及侵袭能力,该作用可能通过靶向EMP-1基因而发挥。     

miR-124 通过靶向BECN1 基因调控细胞自噬抑制食管癌KYSE170 细胞的侵袭和迁移

目的：探讨miR-124 通过调控细胞自噬对食管癌KYSE170 细胞侵袭和迁移能力的影响。方法：食管癌KYSE170 细胞转染miR-124 mimic,Transwell 实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化,双荧光素酶报告基因验证miR-124 对BECN1(Beclin1)基因的靶向调控作用,Western blotting 分析对BECN1、P62 及LC3 蛋白表达水平的影响。向KYSE170 细胞中转染BECN1 siRNA沉默BECN1 的表达,Transwell 法检测细胞侵袭及迁移能力的变化,Western blotting 检测BECN1、P62 及LC3 蛋白的表达。将miR-124 mimic 与BECN1 过表达质粒共转染至KYSE170 细胞,Transwell 实验检测细胞侵袭及迁移能力的变化,Western blotting 检测自噬相关基因表达的变化。结果：转染miR-124 mimic 后,KYSE170 细胞的侵袭和迁移能力下降(P<0.05),BECN1 蛋白及荧光素酶报告基因活性均明显下调(均P<0.01),自噬相关蛋白P62 表达增高,LC3 表达水平明显降低(均P<0.01)。沉默BECN1 表达抑制食管癌细胞侵袭及迁移(P<0.01),而过表达BECN1 使miR-124 mimic 对KYSE170 细胞自噬、侵袭和迁移能力的抑制作用明显减弱(P<0.01),自噬相关蛋白P62 表达降低、LC3 蛋白表达水平明显升高(均P<0.01)。结论：miR-124 能够抑制食管癌细胞侵袭及迁移能力,其机制可能与靶向调控自噬相关基因BECN1 的表达影响细胞自噬有关。     

miR-106a负调控PTEN促进骨肉瘤细胞增殖并抑制凋亡

目的:研究miR-106a在骨肉瘤组织和MG-63细胞中的表达水平及其对MG-63细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:用荧光实时定量PCR法检测20对骨肉瘤和相邻正常组织及MG-63和成骨细胞hFOB 1.19中miR-106a的表达。用miR-106a mimics、miR-106a antagomir 及两者相应的对照物转染MG-63细胞,然后分别用CCK-8法检测四组细胞增殖活性和FCM法检测细胞凋亡率。miR-106a mimics和mimics control与野生型或突变型PTEN 3'-UTR 重组载体共转染后,应用荧光素酶基因报告系统检测miR-106a是否与PTEN基因3'-UTR 结合。利用Western blot技术检测PTEN蛋白在上述四组转染MG-63细胞和骨肉瘤标本中的表达水平。结果:与相邻正常组织（1.19±0.15）相比,肿瘤组织miR-106a的表达水平（2.60±0.86）显著升高;同时,miR-106a在MG-63中的表达水平（2.60±0.92）明显高于hFOB 1.19（1.19±0.39）,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。CCK-8和FCM检测结果显示,与mimics control组相比,miR-106a mimics组的增殖率明显增加,而细胞凋亡率下降;反之,miR-106a antagomir组与antagomir control组相比,增殖率前者低于后者,而凋亡率前者高于后者,上述差异均有统计学意义（P＜0.05）。荧光素酶报告实验显示,miR-106a mimics和wt PTEN 3'-UTR共转染组的荧光强度值明显低于mimics control和wt PTEN 3'-UTR组（P＜0.05）。Western blot发现,与对照组相比,miR-106a mimics组PTEN表达下调,而miR-106a antagomir表达上调;临床标本,肿瘤组织PTEN表达明显低于正常组织,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:miR-106a在骨肉瘤组织及细胞中过表达,并靶向负调控PTEN表达,促进骨肉瘤细胞增殖并抑制其凋亡,从而发挥促癌作用。因此,miR-106a可为骨肉瘤的诊治提供新的潜在分子靶点。     

miR-101靶向甲基化转移酶3A抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭

背景与目的：miR-101在胃癌、结肠癌、乳腺癌以及前列腺癌中表达下调,有类似抑癌基因样作用,然而,其在卵巢癌中的作用尚未明确。该研究旨在探讨miR-101是否通过靶向调控甲基化转移酶3A(DNMT3A)抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭,从而进一步揭示miR-101的抑瘤机制。方法：采用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测22例卵巢癌组织及癌旁正常卵巢组织中miR-101的表达改变;将miR-101 mimics转染于卵巢癌SKOV3细胞,以DNMT3A siRNA为阳性对照,采用蛋白［质］印迹法(Western blot)检测外源过表达miR-101对DNMT3A蛋白表达水平的影响;采用噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)和Transwell侵袭实验检测外源高表达miR-101对人卵巢癌细胞生长与侵袭能力的影响。结果：qRT-PCR检测结果显示,miR-101在22例卵巢癌组织中的表达水平较癌旁正常组织明显下调;Western blot检测结果显示,外源过表达miR-101或沉默DNMT3A能下调SKOV3细胞DNMT3A蛋白的表达水平;MTT检测结果显示,转染miR-101 mimics或沉默DNMT3A 48、72和96 h后D值与对照组比较明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);Transwell侵袭实验显示,转染miR-101 mimics或沉默DNMT3A 36 h后穿过基底膜的细胞数分别为(105±7)个和(107±13)个,与对照组(213±11)个比较能明显减缓SKOV3细胞的穿膜能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：miR-101通过靶向调控DNMT3A抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭。     

MiR-184在人胃癌组织中的表达及对胃癌细胞凋亡的影响

[目的]探讨miR-184在人胃癌组织中的表达及对胃癌细胞凋亡的影响。[方法]使用Real-time PCR检测miR-184表达,SGC-7901细胞转染,MTT法检测细胞增殖情况,Hoechst33342染色观察细胞自噬、凋亡情况,Transwell法检测细胞侵袭能力应用,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞NF-κB、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达。[结果](1)胃癌组织的miR-184表达水平显著低于正常胃组织(1.74±0.12 vs 2.51±0.41,t=12.745,P<0.001)。(2)转染1d后,miR-184 mimics组的miR-184表达水平(6.02±1.15)显著高于NC组(2.15±0.37)(t=22.652,P<0.001),miR-184 inhibitors组表达水平(0.52±0.09)显著低于NC组(t=30.268,P<0.001)。(3)24~72h内,miR-184 inhibitors组和NC组的细胞增殖能力显著性高于miR-184 mimics组(P<0.05)。(4)Mi R-184 mimics组(45.39%±1.74%)侵袭率显著低于NC组(52.05%±2.03%)(t=17.614,P<0.001),而miR-184 inhibitors组(94.51%±3.08%)侵袭率显著高于NC组(t=22.652,P<0.001)。(5)MiR-184 mimics组(72.32%±22.82%)细胞凋亡率显著高于NC组(44.07%±16.23%)(t=7.133,P<0.001),而miR-184 inhibitors组(35.31%±11.29%)凋亡率显著低于NC组细胞(t=3.133,P=0.001)。(6)MiR-184 mimics组可见大量自噬泡,NC组自噬泡可见部分,miR-184 inhibitors组仅可见极少量自噬泡。(7)MiR-184 mimics组NF-κB、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达水平显著高于NC组(t=14.055、14.486、28.450,P均<0.001),miR-184inhibitors组NF-κB、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达水平显著低于NC组(t=15.423、10.354、39.836,P均<0.001)。[结论]MiR-184可在一定程度上抑制胃癌细胞的侵袭和增殖能力,其主要作用机制是诱导胃癌细胞的自噬与凋亡。     

MiR-29c模拟物对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:观察miR-29c在具有不同转移能力的F4和F5M2细胞系中的表达差异;研究miR-29c模拟物对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:利用qRT-PCR技术检测F4与F5M2间miR-29c的表达差异;将骨肉瘤细胞F5M2分为3组,运用细胞转染技术分别对两组转染miR-29c模拟物、模拟物阴性对照,第3组不作处理,随后用qRT-PCR技术检测3组间miR-29c的表达差异。Transwell法检测3组不同处理的F5M2细胞的侵袭和迁移能力是否存在差异。结果:MiR-29c在F4和F5M2细胞系中表达差异显著,miR-29c在高转移性的F5M2细胞中表达水平显著下降。与阴性对照组和空白组相比,转染miR-29c模拟物的F5M2细胞侵袭和迁移能力均明显减弱,且差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:MiR-29c在高转移性骨肉瘤细胞中低表达,且miR-29c模拟物具有抑制骨肉瘤细胞侵袭和转移的作用。MiR-29c有可能作为骨肉瘤转移基因治疗的一个新靶点。     

miR-203a-3p靶向AKT2增强骨肉瘤细胞的放射敏感性

目的:研究miR-203a-3p对骨肉瘤MG-63细胞凋亡和放射敏感性的影响及潜在作用机制.方法:qRT-PCR检测AKT2 mRNA的表达水平及不同放射剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射后MG-63细胞中miR-203a-3p的表达水平,克隆形成实验检测不同放射剂量处理后细胞存活分数,流式细胞术测定MG-63细胞凋...     

miR-106a下调MAP3K2抑制骨肉瘤细胞增殖的实验研究

目的:探讨miR-106a对骨肉瘤细胞增殖的影响及机制。方法:利用Real-time PCR比较了正常成骨细胞（hFOB11.9）及三种骨肉瘤细胞（MG-63、U-2OS和HOS）中miR-106a的表达情况;将NC（negative control)、miR-106a mimics及miR-106a inhibitor分别转染MG-63细胞;转染后通过CCK-8实验、平板克隆形成实验检测miR-106a对细胞增殖的影响;通过生物信息学软件预测miR-106a的靶基因-蛋白激酶2（MAP3K2）;分别构建MAP3K2 3'-UTR结合区野生型和突变型载体,通过荧光素酶报告基因实验检测miR-106a对MAP3K2的调控;在转染了NC以及miR-106a mimics的MG-63细胞中,利用Western blot检测MAP3K2的蛋白水平。结果:与正常成骨细胞相比,骨肉瘤细胞MG-63、U-2OS和HOS中miR-106a的表达明显降低（P＜0.05）;CCK-8生长曲线表明,转染48、72和96小时后,与NC相比,miR-106a mimics能够显著抑制MG-63细胞的生长（P＜0.05）,而miR-106a inhibitor则能促进肿瘤细胞的生长（P＜0.05）;平板克隆形成实验也表明miR-106a mimics能够抑制MG-63的生长,miR-106a inhibitor发挥相反作用;荧光素酶报告基因实验表明转染了克隆MAP3K2 3'-UTR的荧光素酶质粒组中,荧光素酶活性受到miR-106a mimics的明显抑制（P＜0.05）,而在MAP3K2 3'-UTR突变组中,荧光素酶活性与对照相比无显著差异（P=0.877）;与NC组相比,转染miR-106a mimics后,MAP3K2的表达明显降低（P＜0.05）。结论:miR-106a可能通过下调MAP3K2的表达抑制骨肉瘤细胞的生长。     

miR-185通过靶向调控CDC42基因表达抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖和迁移

目的：分析miR-185以及细胞分裂周期蛋白42(CDC42)在骨肉瘤组织和细胞中的表达情况,初步探究miR-185是否通过调控CDC42影响骨肉瘤MG63细胞的增殖与迁移。方法：选取2020年1月至2021年1月于衡水市第四人民医院经病理确诊为骨肉瘤的的28例患者的癌组织及癌旁组织,采用免疫组化法检测骨肉瘤组织中CDC42的表达,采用qPCR法检测骨肉瘤组织中miR-185的表达。双荧光素酶报告基因实验验证CDC42基因与miR-185间的靶向关系。根据转染物不同,将MG63细胞分为miR-185 mimic组、miR-NC组、miR-185 inhibitor组、NC-inhibitor组、CDC42组（转染CDC42过表达载体）及阴性对照（NC）组,采用划痕愈合实验、CCK-8法和流式细胞术分别检测miR-185和CDC42表达对MG63细胞迁移、增殖和周期的影响。构建骨肉瘤MG63细胞裸鼠移植瘤模型,采用免疫组化法、qPCR法和WB法检测过表达或敲降miR-185对移植瘤组织中Ki67与CDC42表达的影响。结果：与癌旁组织相比,骨肉瘤组织中miR-185表达明显降低,而CDC...