EB病毒潜伏感染的套细胞淋巴瘤模型研究

  目的   建立EBV潜伏感染的套细胞淋巴瘤模型,为淋巴瘤预防与治疗的研究奠定基础。   方法   利用新霉素耐性的重组遗传基因EBV（NeoR EBV）和B95-8 EBV对套细胞淋巴瘤细胞株SP49、SP53和Jeko-1进行感染,选出EBV阳性的MCL细胞株,采用免疫荧光法和Southern blot进行鉴定,采用Western blot和流式细胞仪检测EBV阳性的MCL细胞株的免疫表型及生物学活性。   结果   成功获得SP49/EBV、SP53/EBV细胞株,均表达EBER1、EBNA2和LMP1,其免疫表型只有CD38表达增强,两细胞株均具有低增殖功能,凋亡抵抗性,成瘤能力下降等特点。   结论  本研究建立的SP49/EBV和SP53/EBV细胞株,具有体内EBV潜伏感染的静息B细胞低增殖活性的特征,可成为研究体内EBV潜伏感染的良好模型。      

EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌形成中的作用

EB病毒潜伏感染在鼻咽癌的形成中起着重要的作用。现综述近年来研究EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌形成作用中的进展情况，并着重介绍其对细胞信号传导通路、血管生成及转移等的影响。     

鼻咽癌组织中bcl—2及EB病毒潜伏膜蛋白表达与放射诱发细胞？…

目的：探讨鼻咽癌（ＮＰＣ）组织ｂｃｌ－２及ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）表达与放射诱发细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化Ｓ－Ｐ法及ＴｄＴ酶介导的生物素化ｄＵＴＰ缺口要端标记技术（ＴＵＮＥＬ法）,分别检测３５例ＮＰＣ组中ｂｃｌ－２及ＥＢ病毒ＬＭＰ的表达,以及放疗总量为１０Ｇｙ时ＮＰＣ组织的细胞凋亡率（ＡＲ）。结果ＮＰＣ组织ｂｃｌ－２及ＬＭＰ的表达率分别为７１．４％（２５／３５）、４５．７％（１６／３５）     

宿主细胞microRNAs对潜伏于静息初始CD4+T细胞中HIV-1病毒的作用

microRNAs是参与靶基因转录后调控的一类非编码小RNA，它们可分别来源于宿主细胞RNA或病毒RNA。研究证实，病毒编码的microRNAs可靶向宿主细胞或病毒自身基因，调控其表达而实现免疫逃逸和相关致病作用；而宿主细胞编码的microRNAs在抗病毒感染过程存在防御作用，但亦有研究发现宿主细胞microRNAs在病毒感染复制中起促进作用，如miR-122和HCV感染。艾滋病患者的临床治疗是个世界难题。HIV-1病毒潜伏于静息性初始CD4＋T淋巴细胞是艾滋病患者接受临床治疗方案HAART最终失败的主要原因。其中，HIV-1的潜伏存在作用于病毒生命周期多个环节的多种因素的影响。本论文作者向我们展示了在基因转录后水平宿主细胞microRNAs在其中发挥的作用。     

EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌形成中的作用

EB病毒潜伏感染在鼻咽癌的形成中起着重要的作用.现综述近年来研究EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌形成作用中的进展情况,并着重介绍其对细胞信号传导通路、血管生成及转移等的影响.     

EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌细胞中调节表皮生长因子受体磷酸化的研究

目的 阐明EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）在鼻咽癌(NPC）中调节表皮生长因子受体9EGFR）磷酸化水平。方法 采用已建立的、受四环素调控的、LMP1表达的NPC细胞系（pTet-on-LMP1 HNE2),定量诱导pTet-on-LMP1 HNE2细胞LMP1动态表达水平,并观察EGFR表达和磷酸化水平,采用瞬间转染方法,将EGFR显性负性突变体和LMP1antisense表达质粒分别导入pTet-on-LMP1 HNE2细胞中,采用免疫共沉淀和Western blot检测EGFR磷酸化;同时观察EGF刺激后对EGFR磷酸化前后的影响。结果 在pTet-on-LMP1 HNE2细胞中,LMP1能诱导EGFR的表达和磷酸化,并随LMP1表达增加而增加。pTet-on-LMP1 HNE2细胞在导入EGFR显性负性突变体后,不但完全阻断EGFR磷酸化,而且完全抑制EGF所引起的EGFR磷酸化;而导入LMP1 antisense后,可显著地抑制GFR磷酸化水平。结论 LMP1能同时诱导EGFR表达和上调EGFR磷酸化,并呈剂量相关效应,提示EGFR磷酸化可能在NPC发生发展过程中起着重要作用。     

EB病毒潜伏膜蛋白对鼻咽癌细胞体内外增殖力的影响

 目的:研究EBVLMP对人高分化鼻咽癌细胞株CNE1体内外增殖能力的影响。方法:以人高分化鼻咽癌细胞株(CNE1)为对象,采用电穿孔基因转染技术,将重组EBVLMP表达质粒转染CNE1细胞。以载体质粒转染及CNE1细胞为对照,用细胞体外增殖实验、细胞软琼脂克隆形成率测定、流式细胞术、PCNA检测和裸鼠成瘤实验,观察细胞增殖能力的变化。结果:结晶紫染色法检测体外细胞增殖,结果表明,A比值实验组高于空白组及阴性对照组(P<0.01);实验组细胞软琼脂克隆形成率显著高于空白组及阴性对照组(P<0.01);FCM法测定细胞周期,实验组S期细胞比空白组及阴性对照组显著增高,S期细胞达349%;PCNA免疫组化染色,实验组细胞PCNA阳性率明显高于空白组及阴性对照组(P<0.01)。CNE1及转染细胞系裸小鼠移植结果表明,LMP表达细胞系移植瘤潜伏期、体内倍增时间明显缩短(P<0.01),成瘤率、瘤重显著增高(P<0.01/0.05)。结论:EBVLMP对CNE1细胞体内外增殖能力有明显的促进作用,提示LMP在NPC细胞演进过程中可能起重要作用,为进一步深入研究提供了依据。     

鼻咽癌组织中bcl-2及EB病毒潜伏膜蛋白表达与放射诱发细胞凋亡的关系

目的　探讨鼻咽癌 (NPC)组织bcl 2及EB病毒潜伏膜蛋白 (LMP)表达与放射诱发细胞凋亡的关系。方法　采用免疫组化S P法及TdT酶介导的生物素化dUTP缺口末端标记技术 (TUNEL法 ) ,分别检测 35例NPC组织中bcl 2及EB病毒LMP的表达 ,以及放疗总量为 10Gy时NPC组织的细胞凋亡率 (AR )。结果　NPC组织bcl 2及LMP的表达率分别为 71.4%(2 5 /35 )、45 .7% (16 /35 ) ,AR为 (6 1.3± 11.8) %。放疗后的AR与LMP表达呈正相关 ,与bcl 2的表达呈负相关。结论　LMP有促进NPC放疗后细胞凋亡的生物学作用 ,其作用与bcl 2的表达无关 ;而bcl 2表达阴性者对放射线的敏感较阳性者强。     

EB病毒潜伏膜蛋白1与肿瘤转移研究的进展

引言 EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）与Burkitt＇s淋巴瘤、鼻咽癌、霍奇金病等密切相关。EB病毒编码多种蛋白,其中EB病毒潜伏膜蛋白1（Latent membrane protein-1,LMP1）唯一被确认具有癌基因功能而倍受学者关注。转移是恶性肿瘤最基本的生物学特征,也是影响患者预后的关键因素。同一种肿瘤,LMP1阳性表达的比阴性表达的更容易侵袭肿瘤旁正常组织和转移到淋巴结,LMP1与肿瘤转移过程中各阶段的众多影响因素有关,通过一系列复杂的调节促进肿瘤转移。     

老年人EB病毒阳性弥漫大B细胞淋巴瘤的研究进展

Epstein-Barr病毒(EBV)是与多种人类肿瘤的发生密切相关的DNA病毒.在2008版WHO关于淋巴造血组织肿瘤分类中,老年人EBV阳性弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)被作为非特指DLBCL的一个新的变异型,该变异型具有与其他DLBCL亚型不同的形态学和生物学特征.现对老年人EBV阳性DLBCL的病因及发病机制、临床病理特点、免疫表型、遗传学改变、诊断和鉴别诊断以及预后进行综述.     

Clonal T-cell Lymphoproliferation Containing Epstein-Barr (EB) Virus DNA in a Patient with Chronic Active EB Virus Infection

A 10-year-old boy with chronic active Epstein-Barr virus (EBV) infection developed T-cell lymphoproliferation in the terminal stage of hepatic failure. The phenotypes of the proliferating lymphocytes were CD3^±, CD4^± and HLA-DR^±. The genomic DNAs from these cells demonstrated two rearranged T-cell receptor μ-chain genes and contained the EBV genome. These findings indicate that EBV can infect T lymphocytes and might cause clonal T-cell lymphoproliferation.     

中国南方鼻咽鳞状细胞癌与EB病毒感染的关系

目的：探讨中国南方鼻咽癌高发区鼻咽鳞状细胞癌或称角化性鳞状细胞癌（Ｋｅｒａｔｉｎｉｚｉｎｇ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＫＳＣＣ）是否也如非角化性癌那样与ＥＢ病毒感染有密切的关系。方法：应用ＰＣＲ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ、原 位分子杂交和免疫组化法检测３８例鼻咽鳞状细胞癌细胞中有ＥＢ病毒ＤＮＡ及其产物ＥＢＮＡ－１,ＥＢＮＡ－２,ＥＢＥＲＳ,ＬＭＰ－１,ＺＥＢＲＡ,Ｅ     

EB病毒微小RNA在鼻咽癌患者中表达的意义

目的研究探讨EB病毒微小RNA在鼻咽癌中的表达情况,以便于找到诊断和防治鼻咽癌的生物标志物。方法选取45例鼻咽癌患者和37例鼻咽炎患者为研究对象,借助实时荧光定量PCR技术并以miR-U6作为内参物,对上述疾病病灶中的EB病毒miRNAs(包括EBV-miR-BART4*和EBV-miR-BART18-3P)的表达情况进行研究分析。结果经统计分析可知,EB病毒的两种miRNAs在鼻咽炎组织中的表达数值分别是(28.43±3.16)和(26.73±3.08),而在鼻咽癌组织中的表达数值分别是(40.51±4.82)和(41.66±3.46),可见其在鼻咽癌组织中的表达水平明显高于鼻咽炎组织,两者具有显著的差异性(P<0.01)。结论 EB病毒微小RNAs可通过较显著的表达水平导致鼻咽癌的发病和病灶转移,因此可将其作为鼻咽癌诊断防治中潜在的生物分子标志物。     

化疗对乳腺癌患者外周血中Treg细胞数目的影响及意义

目的: 研究化疗药物对乳腺癌患者根治术后外周血中Treg(CD₄⁺CD₂₅⁺调节性T细胞)的影响及意义。 方法: 采集52例乳腺癌术后患者化疗前1天及化疗后第10天外周静脉血,应用流式细胞技术检测外周血中Treg细胞以及CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺T细胞占T淋巴细胞百分比,采用ELLSA法检测外周血中IL-4、IL-10、TGF-β1和IFN-γ的表达水平。 结果: 化疗后乳腺癌患者外周血中Treg细胞占T淋巴细胞百分比(4.75±1.60)%较化疗前(5.59±1.81)%减少(Plt;0.05),且与淋巴结有无转移、转移数量以及绝经状态无关(P>0.05)。化疗前后CD3⁺细胞占T淋巴细胞比例分别为(64.690±7.469)%,(64.357±9.356)%(<0.05)。化疗前后CD4+T细胞占T淋巴细胞比例分别为(38.048±10.671)%,(36.536±9.664)%(Pgt;0.05)。化疗后CD8⁺T细胞占T淋巴细胞比例(28.129±10.900)%较化疗前(24.876±6.631)%升高(Plt;0.05)。化疗后CD₄⁺/CD₈⁺(1.506±0.691)较化疗前(1.680±0.704)降低(Plt;0.05)。化疗后乳腺癌患者外周血中IL-4、IL-10、TGF-β1浓度较化疗前降低,而IFN-γ浓度增高(P<0.05)。化疗前后Treg细胞比例变化与细胞因子IL-4、IL-10、TGF-β1和IFN-γ浓度变化无关(P>0.05)。 结论: 化疗可使乳腺癌患者外周血中Treg细胞占T淋巴细胞比例降低,从而达到治疗肿瘤的效果。     

食管癌患者外周血调节性T细胞亚群格局变化及其临床意义

[目的]分析食管癌患者外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞(Treg)占CD4+T细胞的比例变化.[方法]采用流式细胞仪检测104例食管癌患者和68例健康及良性疾病对照者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的比例,分析其与临床分期、淋巴结转移及外膜受侵的关系.[结果]食管癌患者与对照组的外周血CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞比例分别为(5.19％±1.82％)和(4.56％±1.16％),两组比较差异有统计学意义(t=2.544,P=0.012).Ⅱa期CD4+CD25+CD 127-Treg细胞比例分别与Ⅱb期和Ⅲa期比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);不同年龄、淋巴结及外膜受侵状况患者的外周血CD4+CD25+CD127-Treg细胞比例变化比较无统计学差异(P＞0.05).[结论]食管癌患者外周血CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的比例明显升高,且分期高患者升高更为明显,提示可能与食管癌免疫逃逸和免疫耐受有关.     

结直肠癌患者外周血CD4+ CD25high调节性T细胞的作用

目的探讨结直肠癌患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)的作用。方法采用流式细胞仪测定36例结直肠癌患者及30例健康对照者外周血中CD4+CD25highFoxP3 Treg、CD4+CD25highTreg、CD4+CTLA-4 Treg及CD4+T细胞水平。结果与健康对照组比较,结直肠癌组患者外周血CD4+CD25highFoxP3 Treg显著增多(P<0.01),CD4+CD25high Treg和CD4+CTLA-4 T细胞也增多(P<0.05)。结论CD4+CD25highFoxP3 Treg可能在结直肠癌发展过程中起着重要作用。     

Enzyme-altered Liver Cell Foci in Woodchucks Infected with Woodchuck Hepatitis Virus

The histochemical characteristics of liver cell foci in woodchucks were investigated. The foci appeared to be distributed throughout the liver and were observed only in the woodchuck hepatitis virus (WHV)-positive animals, including all 19 woodchucks with hepatocellular carcinoma(HCC), and 7 without HCC. No foci appeared in 11 WHV-negative animals. Histochemical studies revealed that liver cell foci and carcinoma cells were characterized by positive gamma-glutamyl transpeptidase (GGT) enzymatic reactions and decreased glucose-6-phosphatase enzyme activity compared to non-neoplastic liver. Furthermore, serum GGT was significantly elevated in almost all of the animals which had larger carcinomas. Ultrastructural findings of foci showed some resemblance to carcinoma cells, being characterized by abundant free ribosomes within the cytoplasm and undeveloped endoplasmic reticulum. These results suggest that the liver cell foci are potential precursors of HCC in WHV-infected animals, and that serum GGT may be a useful marker for indicating the development of carcinoma.     

EB病毒潜伏膜蛋白1介导鼻咽癌细胞中转录因子Ets-1表达的实验研究

目的 探讨鼻咽癌(NPC)细胞中EB病毒潜伏膜蛋白1(EMP1)是否可介导转录因子Ets-1的表达。方法 采用受四环素(Dox)调控的、LMP1表达的NPC细胞系(pTet-on-LMP1 HNE2),用Dox诱导LMP1表达,并检测Ets-1的表达。采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测Ets-1 RNA水平的变化;应用Western blot方法检测Ets-1蛋白质表达情况;应用免疫共沉淀和Western blot方法检测Ets-1磷酸化水平;应用EMSA方法检测Ets-1的DNA结合活性。结果 在不同诱导时间、不同浓度Dox诱导的pTet-on-LMP1 HNE2细胞中,LMPl表达与Ets-1 RNA表达、蛋白质表达、苏氨酸磷酸化水平及DNA结合活性在一定范围内呈正相关。结论 IMP1可介导NPC细胞中Ets-1的转录活化和表达,可能是LMP1致瘤的新机制。     

乙肝病毒感染状态及表面抗原/抗体水平与结肠癌分期和预后的关联

 目的 观察结肠癌患者乙肝病毒感染状态及表面抗原/抗体水平,分析其与结肠癌分期的关联,从而间接评估结肠癌患者合并乙型肝炎对其预后的影响。方法 收集福建省立医院收治的85例结肠癌患者,采用SPSS16.0统计软件回顾性分析乙肝病毒感染状态对结肠癌浸润深度、区域淋巴结转移和远处转移的影响。结果 乙肝病毒感染状态对结肠癌原发灶浸润深度（T）（P=0.331）和结肠癌区域淋巴结转移（N）的影响差异无统计学意义（P=0.098）。合并乙肝病毒阳性的结肠癌患者其区域淋巴结转移度明显低于乙肝病毒阴性的亚组（8.1% vs. 17.8%）,且无区域淋巴结转移的结肠癌患者血清中HbsAb水平较发生淋巴结转移的亚组患者明显升高（240.111 mIU/ml vs. 178.161 mIU/ml）。乙肝病毒感染状态对结肠癌患者发生远处转移（M）以及肝转移的影响差异均具有统计学意义（均P<0.001）。不论是乙肝病毒感染还是乙肝疫苗相关的乙肝病毒阳性患者,肝转移发生率均显著低于乙肝病毒阴性的患者（P=0.039, P<0.001）。 结论 结肠癌合并乙肝病毒表面抗体水平高表达对区域淋巴结转移可能具有潜在的抑制作用。乙肝病毒阳性对结肠癌发生远处转移（尤其对肝转移）呈显著性负相关。乙肝病毒感染状态以及表面抗原/抗体水平显著性影响结肠癌患者的分期及预后。     

健择联合顺铂化疗对非小细胞肺癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节T细胞的影响

目的探讨健择联合顺铂对非小细胞肺癌患者免疫耐受的调控作用。方法38例经病理学或细胞学确诊的NSCLC患者,采用健择、顺铂联合化疗方案,应用流式细胞仪检测化疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞(Treg)占CD4+T细胞的百分率。结果化疗前NSCLC患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞(Treg)占CD4+T细胞的比率明显高于健康对照组(P<0.05);化疗后NSCLC患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞(Treg)占CD4+T细胞的百分率较化疗前显著降低(P<0.05);但鳞癌、腺癌及腺鳞癌3组间化疗前、化疗后各项指标之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论健择联合顺铂化疗可调控晚期非小细胞肺癌机体的肿瘤免疫耐受,改善患者的免疫功能。