类风湿关节炎患者滑液NK-22细胞对成纤维样滑膜细胞增殖的影响及其机制研究

目的探讨类风湿关节炎患者滑液NK-22细胞对成纤维样滑膜细胞增殖的影响及其可能机制。方法采用流式细胞术检测20例RA患者及20例健康对照外周血(peripheral blood,PB)、10例RA患者滑液(synovial fluid,SF)中NK-22细胞(NKp44+CCR6+NK细胞)比例。流式细胞术分选滑液NK-22细胞,鉴定细胞纯度;体外悬浮培养2周,佛波酯(PMA()20ng/ml)和ionomycin(0.5μmol/L)刺激后NK-22细胞培养上清液分别作用于成纤维样滑膜细胞(fibroblastlike synoviocytes,FLS)24 h、48 h、72 h、96 h,MTT法检测成纤维样滑膜细胞增殖情况。ELISA检测NK-22细胞培养上清中IL-22、T0.N05F)-;αR浓A度患。者结滑果液①NKR-A22患细者胞外比周例血为N4K.5-62%2细,明胞显比高例于为自0身.9外56周%,血明比显例高1于.31健5%康(对P<照0.外05)周。血②N流K式-22分细选胞2比×1例04个0.0N0K3%-2(2P细<胞,细胞纯度>90%。③PMA和ionomycin刺激后NK-22细胞培养上清作用于成纤维样滑膜细胞24 h、48 h、72 h、96 h可明显刺激成纤维样滑膜细胞增殖(P<0.05)。④PMA和ionomycin刺激后NK-22细胞培养上清中IL-22、TNF-α浓度分别为941.82 pg/ml和368.10 pg/ml。结论类风湿关节炎患者关节液NK-22细胞可明显刺激成纤维样滑膜细胞增殖,其可能机制与NK-22细胞能分泌白介素-22(IL-22)、肿瘤坏死因子(TNF-α)有关。     

uPAR在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的功能及机制

【目的】 采用RNA干扰(RNAi)技术阻断类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)基因的表达,探讨uPAR基因沉默后对RA-FLS功能产生的影响及有关机制?【方法】 收集行关节置换术或滑膜清理术的RA患者的滑膜组织,组织块法培养RA-FLS?通过阳离子脂质体转染的方法,转染体外合成的特异性uPAR-siRNA;利用荧光定量PCR法和Western blotting法检测uPAR沉默效果;CCK8法检测细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测细胞周期改变;Transwell趋化小室测定细胞的迁移能力;Western blotting技术分析沉默uPAR基因对RA-FLS中PI3K/AKT通路的影响?【结果】 uPAR-siRNA能有效阻断RA-FLS中uPAR基因在mRNA和蛋白水平上的表达?沉默uPAR基因后,细胞48?72?96 h增殖抑制率分别为(17.51 ± 2.27)%?(28.62 ± 4.82)%?(22.91 ± 5.78)%,显著高于对照组(P < 0.05);uPAR-siRNA干扰后,被阻滞于G0/G1期的细胞增加,而S和G2/M期的细胞减少;Transwell趋化小室结果显示:与对照组相比,特异性干扰组的RA-FLS迁移细胞数(35 ± 11)相比空白对照组(138 ± 21)和NC-siRNA组(136 ± 19)明显减少(P < 0.05);转染后的RA-FLS相对于对照组,PI3K?AKT?GSK3β的磷酸化水平显著降低(P < 0.05)?【结论】 uPAR在RA-FLS的增殖?周期及迁移中起重要作用,这可能与其对PI3KAKT通路的激活有关?     

CXCL16/CXCR6在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及其在滑膜细胞增殖中的作用

目的：探讨趋化因子CXCL16及其受体CXCR6在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）中的表达及其对FLS增殖的作用。方法:纳入RA 8例、骨关节炎（osteoarthritis,OA）7例、健康对照3例,采用组织块贴壁方法体外分离培养人膝关节FLS,第3~5代细胞用于后续研究。Western blot方法检测CXCL16及其受体CXCR6在3组FLS的表达水平;不同浓度的重组人CXCL16(0、10、50、100、200 μg/L)刺激3组FLS后,细胞活性检测试剂盒-8（cell counting kit,CCK-8）检测FLS增殖水平;Western blot方法检测重组人CXCL16刺激后RA-FLS中pAKT/AKT水平;ELISA法检测重组人CXCL16刺激后RA-FLS培养上清中TNF-ɑ、IL-6、MMP-3、RANKL水平。结果: RA-FLS中CXCL16、CXCR6蛋白表达水平均明显高于OA组和对照组（P<0.05）,OA组和对照组间差异无统计学意义;重组人CXCL16（50、100、200 μg/L）刺激后RA-FLS增殖能力明显高于非刺激组（P均<0.05）,OA组和对照组FLS经CXCL16刺激后细胞增殖水平无明显变化（P>0.05）;200 μg/L CXCL16刺激后,RA-FLS表达pAKT/AKT明显增高;CXCL16（50、100、200 μg/L）刺激后,RA-FLS培养上清中IL-6和RANKL表达明显增加（P < 0.05）,而MMP-3、TNF-ɑ水平无明显变化。结论:CXCL16及其受体在RA-FLS中表达增高,重组人CXCL16可促进RA-FLS增殖活化、分泌炎性因子增加,提示CXCL16参与了RA的滑膜炎症。     

长春新碱对类风湿关节炎滑膜细胞作用的研究

目的 :评价长春新碱 (VCR)诱导滑膜细胞凋亡作用在治疗类风湿关节炎 (RA)中的意义。方法 :采用光镜、电镜、流式细胞仪及 DNA凝胶电泳等方法对不同浓度的 VCR诱导 9例体外培养的 RA病人及对照组 5例骨关节炎 (OA)与 4例正常人(NC)关节滑膜细胞凋亡情况进行了研究。结果 :加药前 RA、OA及 NC组凋亡细胞百分率分别为 3.8%± 0 .6 %、0 .8%± 0 .3%及0。加药后均显著升高 ,RA组可高达 6 7.5 %± 15 .1% (P<0 .0 1) ,OA组为 38.4%± 6 .8% (P<0 .0 1) ,NC组为 15 .7%± 1.5 % (P<0 .0 1)。 RA组凋亡细胞百分率显著高于 OA组 (P<0 .0 1)和 NC组 (P<0 .0 1)。结论 :诱导滑膜细胞凋亡可能是 VCR治疗 RA的机制之一 ,同时可为临床选择合理药物及药量提供依据     

甲氨蝶呤对类风湿关节炎滑膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的　研究甲氨蝶呤 (MTX)对类风湿关节炎 (RA)滑膜细胞增殖及细胞周期的影响 ,揭示MTX治疗RA的机制。方法　应用克隆形成实验和流式细胞术分别测定RA患者滑膜细胞的增殖水平和细胞周期。结果　加入不同浓度MTX (0 2～ 2 μmol/L)的实验组 ,RA患者滑膜细胞克隆形成率均显著低于未加MTX的空白对照组 (P<0 0 5 ) ;细胞周期分析显示加入不同浓度MTX后第 5、 8天 ,细胞停留在G1期的比例比空白对照组明显增加 (P <0 0 5 ) ,而S、G2 期的细胞比例则明显减少 (P <0 0 5 ) ;MTX能明显抑制滑膜细胞的增殖水平 ,并呈剂量依赖性。结论　MTX治疗RA ,主要作用于RA患者滑膜细胞的增殖及增殖相关的病理过程。     

类风湿关节炎滑膜细胞凋亡及相关基因Fas表达的研究

目的:研究类风湿关节炎(RheumatoidArthritis,RA)患者滑膜组织中细胞凋亡及相关基因蛋白Fas的表达和意义。方法:采用免疫组织化学方法,对9例患者及8例正常对照滑膜组织中凋亡细胞及Fas的表达进行检测。结果:RA患者滑膜组织中细胞凋亡率明显低于对照组,而Fas阳性的细胞百分比却明显高于对照组。结论:RA患者滑膜组织中细胞凋亡的减少可能是导致滑膜过度增生进而关节功能丧失的原因之一,Fas表达虽增多但不能直接诱导细胞凋亡。     

类风湿关节炎与滑膜细胞凋亡研究进展

类风湿关节炎(RA)是一种慢性自身免疫性的炎症性关节病,表现为对称性多关节炎,可侵犯多个大小关节,并伴有晨僵、乏力、体重减轻及全身多系统受累.     

中医药对类风湿关节炎滑膜细胞作用机制研究概况

类风湿关节炎(RA)是一种慢性自身免疫性疾病,滑膜炎是其特征性病理改变,大量新生血管生成进而形成血管翳,逐渐侵袭关节软骨,最终导致关节破坏、功能丧失。因此抑制滑膜细胞增殖、促进滑膜细胞凋亡是治疗RA的关键。本文对近年来中医药诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡、抑制其增殖的相关文献作出综述,为临床研究提供参考。     

白细胞介素-22促进类风湿关节炎成纤维化膜细胞的增殖

目的 通过白细胞介素-22(IL-22)干预类风湿关节炎(RA)成纤维滑膜细胞(FLS)以期明确IL-22促进其增殖的机制.方法 无菌条件下获取的RA滑膜组织,应用组织块分离法培养RA-FLS,含10% FBS的DMEM培养基进行细胞传代培养,并对第4~5代FLS应用vimentin/CD68进行免疫组化法鉴定;不同浓度的IL-22干预FLS培养24、48、72 h后,MTT法检测细胞增殖程度;联合IL-22和/或AG490干预FLS,于冰面上用含蛋白酶抑制剂的细胞裂解液获取细胞总蛋白,再经超声、离心提取、蛋白定量后,Western blot法检测STAT3、ERK1/2、P38蛋白及其磷酸化蛋白的表达,统计分析采用SPSS20.0软件进行,P<0.05为差异有统计学意义.结果 不同浓度IL-22干预FLS的增殖均较对照组呈梯度增高变化,差异具有统计学意义(P<0.05).随着IL-22干预时间的延长,STAT3总蛋白表达相对灰度值的整体水平差异无统计学意义(P=0.68),但是其磷酸化蛋白表达相对灰度值整体水平差异具有统计学意义(P<0.001),且在干预的不同时间点STAT3磷酸化蛋白相对表达量较基线0 h时均显著升高,且差异具有统计学意义(P<0.001).IL-22干预后的ERK1/2和P38总蛋白及其磷酸化蛋白表达相对灰度值差异均无统计学意义(P>0.05).联合50 ng/mL IL-22和100 μmol/L AG490干预FLS不同时间后,细胞的增殖程度较单用IL-22干预均显著降低(P<0.01).结论 IL-22以浓度依赖方式促进RA成纤维化膜细胞STAT3蛋白磷酸化所介导的细胞增殖,而非ERK1/2和P38蛋白所介导的信号通路.     

类风湿关节炎患者白介素18水平的变化及其意义

白介素18(IL-18),又称IFNγ诱导因子,可诱导IFNγ的产生,选择性刺激Th1细胞分化,在各种过敏性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病及感染性疾病的免疫调节中起重要作用[1].近年研究表明类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种与Th1相关的自身免疫性疾病[2].本研究采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测RA患者体内IL-18的水平变化,以期发现其在RA发病机制中的作用.     

类风湿关节炎患者外周血白细胞介素-23和类风湿因子的表达研究

目的：检测类风湿关节炎（RA）患者体内白细胞介素（IL）-23和类风湿因子（RF）的表达,探讨IL-23在RA发病中的作用及其与RF的关系,为RA的早期诊断和进一步阐明RA的发病机制提供理论依据。方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测66例RA患者和44例健康对照者外周血单个核细胞（PBMC）中IL-23p19 mRNA的表达水平,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清IL-23浓度,采用免疫比浊法检测血清RF的浓度。结果：RT-PCR显示RA患者PBMC中IL-23p19 mRNA的表达[（45.2±11.7）%]显著高于健康对照组[（23.8±9.5）%],ELISA检测结果显示RA患者血清IL-23水平[（114.47±42.70）ng/L]显著高于健康对照组[（70.81±28.85）ng/L],差异均有统计学意义（均P〈0.05）。RA患者血清IL-23水平与RF含量无明显相关性（r=0.389,P〉0.05）。结论：RA患者体内IL-23在基因和蛋白水平均过表达,提示IL-23可能参与了RA的免疫病理过程,在RA的发病中发挥作用。     

类风湿关节炎患者血清白介素-33、白介素-35表达及其临床意义

目的:初步探讨白介素-33(IL-33)、白介素-35(IL-35)在类风湿关节炎(RA)发病中的意义。方法:酶联免疫吸附法(ELISA)检测50例RA患者(其中RA活动组25例,RA缓解组25例)、25名健康对照组血清IL-33、IL-35水平,并与临床资料进行相关性分析。结果:RA活动组患者血清IL-33水平(332.02±31.43)pg/ml显著高于RA缓解组(227.56±48.02)pg/ml及健康对照组(77.03±20.68)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05),RA缓解组与健康对照组差异有统计学意义(P<0.05);RA活动组血清IL-35水平(236.14±32.20)ng/L显著低于RA缓解组(353.21±24.61)ng/L及健康对照组(349.60±28.45)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05),RA缓解组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)。RA患者血清IL-33与IL-35水平之间呈显著负相关(r=-0.473,P<0.05);血清IL-33水平与关节肿胀数、关节压痛数、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、DAS28评分、抗CCP抗体呈正相关(P<0.05);血清IL-35水平与关节肿胀数、关节压痛数、ESR、CRP、DAS28评分、类风湿因子(RF)、抗CCP抗体呈负相关(P<0.05)。结论:RA活动组患者血清IL-33水平升高、IL-35水平减低,二者可能参与了RA发生发展,并可作为RA病情活动的预测指标。     

Increased interleukin-23 is associated with increased disease activity in patients with rheumatoid arthritis

Background Interleukin-23 (IL-23) is a pro-inflammatory cytokine that is thought to be central to the development of autoimmune diseases.This study was conducted to determine whether or not the serum c...     

雷公藤单体T4对IL—1刺激引起的类风湿患者关节滑膜成纤 …

目的 探讨雷公藤单体Ｔ４对经ＩＬ－１刺激的体外培养的类风湿关节炎（ＲＡ）患者的关节滑膜成纤维细胞增殖和产生ＩＬ－６的影响。方法 关节滑膜组织来自行关节置换术或滑膜切除术的类风湿患者。滑膜组织经体外消化使细胞分散后,传代培养,以培养３代后的滑膜成纤维细胞为对象,先给予ＩＬ－１刺激,再加入雷公藤Ｔ４单体。结果 Ｔ４可抑制由Ｉ－１刺激的滑膜成纤维增殖,但不影响ＩＬ－６的产生。结论 Ｔ４的上述作用可能是其     

类风湿性关节炎患者关节炎支原体的感染状况

目的：了解类风湿性关节炎(RA)患者关节炎支原体(Mar)的感染状况。方法：用套式聚合酶链反应(nPCR)法对本院2001年1月—2002年9月72例RA患者的咽拭子、睑结膜拭子、尿道拭子以及血液和关节液标本中的Mar核酸进行检测，并测定阳性株的DNA序列。结果：在48例咽拭子、37例睑结膜拭子、19例尿道拭子以及48例血液标本和26例关节液标本中，各检出1例阳性株，阳性率分别为2．1％、2．7％、5．3％、2．1％和3．8％。上述5例Mar nPCR阳性株的DNA序列与国际典型株完全一致。结论：RA患者体内存在Mar感染。     

肥大细胞和类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞共培养对白细胞介素-6分泌的影响

目的 观察肥大细胞和关节成纤维样滑膜细胞(FLS)共培养对FLS分泌白细胞介素(IL)-6的影响及其作用机制.方法 应用免疫组化染色法观察肥大细胞在关节滑膜中的分布.分离培养RA患者的FLS,加入肥大细胞系LAD-2共培养或用Transwell小室隔离共培养,观察上清中FLS分泌的细胞因子IL-6的变化.结果 LAD-2几乎不产生IL-6,FIS组IL-6的浓度为(3019±57)μg/L,而FLS与等量LAD-2细胞共培养的IL-6浓度为(7150±114) μg/LL(P<0.01).且其增加程度与LAD-2细胞数量呈正相关.以4%甲醛固定和Transwell小室隔离两种方法分别阻断可溶性介质分泌和细胞间相互黏附,前一组中IL-6增加可被阻断,但在后一组中不受影响.结论 肥大细胞与FLS通过可溶性介质相互作用可增加FLS的IL-6分泌,在RA发病中可能有重要意义.     

类风湿关节炎患者髓系来源的抑制细胞促进自身B细胞增殖

目的:探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者髓系来源的抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)对自身B细胞增殖的影响,揭示MDSC在RA发病中的作用.方法:健康对照15例,RA患者38例,按28-关节疾病活动度分值(28-joint disease activity score,DAS28)分为高疾病活动度组(DAS28 ＞5.1)、中疾病活动度组(3.2＜ DAS28≤5.1)和低疾病活动度组(2.6＜ DAS28≤3.2),流式细胞术检测其外周血MDSC细胞的比例;同时分选10例高疾病活动度RA患者外周血B细胞和MDSC细胞体外共培养,羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)法检测B细胞的增殖.结果:高疾病活动度RA外周血MDSC比例(7.13％±2.17％)相对于健康成年人(4.79％±1.02％)、中活动度患者(5.35％±1.36％)和低活动度患者(4.72％±1.08％)明显增加(P＜0.05),而中、低疾病活动度RA之间及其二者与健康成年人之间差异皆无统计学意义(P＞0.05);MDSC比例与患者DAS28分值成正相关(P＜0.05),与年龄、病程、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、抗环瓜氨酸多肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)抗体等无相关性;MDSC共培养不抑制反而促进B细胞的增殖(P＜0.01).结论:MDSC在高疾病活动度RA患者外周血中明显增加,与疾病活动度呈正相关,并可在体外促进自身B细胞的增殖,提示MDSC可能通过调节B细胞的功能参与RA的疾病进程.