M2型巨噬细胞来源的外泌体对快速起搏HL-1细胞KCa3.1的作用及可能机制

目的 探究M2型巨噬细胞来源的外泌体对快速起搏小鼠心房肌细胞(HL-1)KCa3.1的作用及可能机制。方法 提取C57/6J小鼠骨髓巨噬细胞并分为未分化组(未加干预的骨髓巨噬细胞)和分化组(骨髓巨噬细胞经白细胞介素-4干预24 h分化为M2型巨噬细胞)。分别收集分化组和未分化组细胞培养液上清,采用超速离心法得到外泌体。实时荧光聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-146a-5p在分化组和未分化组外泌体中的表达情况。将HL-1细胞分为8组,分别为对照组(HL-1细胞未施加任何干预)、起搏组(HL-1细胞快速起搏)、共培养组(HL-1细胞快速起搏的同时与M2型巨噬细胞来源的外泌体共培养)、模拟物组(HL-1细胞快速起搏同时转染miR-146a-5p模拟物)、模拟物对照组(HL-1细胞快速起搏同时转染模拟物对照)、抑制物组(HL-1细胞快速起搏同时转染miR-146a-5p抑制物)、抑制剂物对照组(HL-1细胞快速起搏同时转染抑制剂物对照)、PDTC组[HL-1细胞起搏同时给予核因子-κBp65(NF-κB p65)特异性阻断剂PDTC]。采用qRT-PCR检测各组中miR-146a-...     

肝癌细胞来源外泌体对肿瘤相关M2型巨噬细胞极化的影响

目的 探讨来源于肝癌细胞的外泌体对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响,揭示肝癌形成新机制。方法 通过超速离心法分离肝癌细胞来源外泌体,透射电子显微镜、动态光散射粒度分析仪、蛋白免疫印迹法对外泌体表征进行鉴定;诱导巨噬细胞极化模型,实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法验证其极化状态。符合正态分布的计量资料两组间比较采用t检验;多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 透谢电子显微镜显示肝癌细胞来源外泌体为圆形或椭圆形囊泡结构,外泌体粒径大小为(172.65±2.34)nm,蛋白免疫印迹分析显示肝癌细胞来源的外泌体中标志蛋白TSG101和CD63呈高阳性表达。佛波酯15 ng诱导人源单核细胞巨噬细胞24 h贴壁后CD68表达显著增加(6.67±0.98 vs 1.00±0.25,t=11.20,P<0.001)。蛋白免疫印迹分析显示,相比对照组(L02来源外泌体组),HCC细胞来源外泌体(低、中、高3种剂量)诱导巨噬细胞表达M2型巨噬细胞标志物Arg-1、CD163均明显增加(P值均<0.05)。结论 肝癌细胞来源外泌体可促进巨噬细胞M2型极化。     

巨噬细胞相关的外泌体在心血管疾病中的作用研究进展

外泌体是细胞分泌的具有双层磷脂膜结构的囊泡样物质,内部包含蛋白质、核酸等多种物质,介导炎症反应、免疫应答、物质交换及清除等多种机体生理过程,是细胞间通讯的关键介质。近年的研究表明,外泌体参与不同功能表型的巨噬细胞上游或下游水平调控,在心血管疾病发生发展过程中发挥着重要作用。现对巨噬细胞相关的外泌体在心血管疾病发生和发展中的作用及机制进行综述,为心血管疾病的诊断及治疗提供新的靶点和思路。     

M2型巨噬细胞来源外泌体对食管癌细胞生长行为及人脐静脉血管内皮细胞血管生成的影响

目的 探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体(Exo)对食管癌细胞生长及人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管生成的影响。方法 采用佛波酯(PMA)和白细胞介素(IL)-4将人单核细胞系THP1细胞诱导为M2型巨噬细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测巨噬细胞相关基因肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、重组人精氨酸酶(Arg)1、转化生长因子(TGF)-β及CD206的表达变化;超速离心法分离M2型巨噬细胞来源的Exo,透射电镜观察形态,粒径分析仪检测粒径分布,Western印迹法检测Exo标志蛋白表达;利用PKH67标记Exo后再与食管癌细胞株EC9706共培养,细胞免疫荧光染色检测Exo被EC9706细胞摄取情况;将分离的Exo与EC9706细胞共培养,CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移与侵袭,细胞成管实验检测HUVEC血管生成情况。结果 经PMA和IL-4诱导后的细胞内M1型巨噬细胞相关基因TNF-α、IL-6和iNOS的mRNA表达水平显著下调(P<0.05),M2型巨噬细胞相关基因Arg1、T...     

外泌体在心房颤动中的作用研究进展

心房颤动是临床上最常见的快速性心律失常之一,常引起脑卒中、冠心病、心力衰竭、肢体动脉栓塞等严重并发症,是导致患者不良预后的重要因素.外泌体是细胞释放的30～150 nm大小的双层脂质囊泡,携带蛋白质、核酸和脂质等生物活性物质;其作为信息传递的媒介,在细胞间通讯中起着关键作用.近年研究发现外泌体广泛参与心血管疾病的病理生...     

至真方调控M2巨噬细胞来源外泌体逆转大肠癌细胞耐药的机制研究

目的:探讨至真方通过调控M2巨噬细胞来源的外泌体逆转大肠癌细胞耐药的机制.方法:采取差异超速离心法分别提取M2巨噬细胞来源的外泌体以及100 μg/mL至真方醇提物预处理的M2型巨噬细胞来源的外泌体;用透射电子显微镜观察外泌体的形态,Western blot鉴定外泌体的标志蛋白;通过共培养体系将HCT116细胞分为3组...     

外泌体来源微小RNA在心血管疾病中作用研究进展

在不同的病理生理状态下,细胞可分泌包含有特定内含物的外泌体至细胞外环境中。其中,来源于外泌体的微小RNA(miRNA)能够参与细胞间的物质传递和信号转导。近年来,人们逐渐认识到外泌体及其相关的miRNA在心血管疾病发病过程中的重要作用。本文介绍了外泌体的基本特征及外泌体来源的miRNA的生物学特性,讨论了外泌体来源的miRNA在不同心血管疾病中的表达情况。     

起搏成纤维细胞调控心房肌细胞电生理的机制研究

目的探究快速起搏状态下大鼠心房成纤维细胞对心房肌细胞动作电位的影响及其作用机制。方法本研究为前瞻性对照研究, 分离大鼠的乳鼠(雌雄不限, 体重8～10 g)心房成纤维细胞和心房肌细胞分别进行培养, 采用随机数字表法将心房成纤维细胞分为A组(不做任何处理)、B组(在1.0 V/cm的电压、10 Hz频率条件下起搏48 h)、C组[起搏+10 μmol/L中性鞘磷脂酶2抑制剂(GW4869)培养48 h], 48 h后收集成纤维细胞上清液, 超速离心提取外泌体以2×109颗粒/ml的量与心房肌细胞共培养。将心房肌细胞分为D组(心房肌细胞+A组外泌体共培养组)、E组(心房肌细胞+B组外泌体共培养组)、F组(心房肌细胞+C组外泌体共培养组)。比较不同状态成纤维细胞来源的外泌体对心房肌动作电位时限的影响。透视电镜分析外泌体形态, 纳米颗粒跟踪分析外泌体粒径分布、浓度等指标, 膜片钳检测不同组间心房肌细胞动作电位时限[复极达50%和90%时的动作电位时限(APD50和APD90)]。结果与A组相比, B组外泌体分泌量明显增加{[(1.193±0.090)×1012]颗粒/ml对[(1.613±0....     

迷走神经干预对犬心房电生理的影响

目的心房电重构可导致心房有效不应期缩短,通过测量心房有效不应期来研究迷走神经对心房电重构的影响。方法 10只成年犬给予酒石酸美托洛尔和阿托品阻断交感神经和迷走神经。分别测量心房电重构前后基础状态及迷走神经刺激下的心房有效不应期（ERP）和房颤易感窗口（VW）。结果①阿托品应用前后基础状态下的ERP无变化。阿托品应用前后迷走神经刺激下的ERP变化明显;②心房电重构后ERP：基础状态及迷走神经刺激下,无论右心房还是冠状静脉窦远端测得的ERP与重构前（阿托品应用后）ERP相比无明显差异（p值均〉0.05）;③VW的变化：阿托品应用前,迷走神经刺激下容易诱发房颤。阿托品应用后,心房电重构前后无论基础状态或迷走神经刺激均不能诱发房颤。结论迷走神经阻滞能减轻心房电重构所导致的心房不应期缩短,从而抑制迷走神经介导的房颤诱发。     

多房棘球蚴源性外泌体对巨噬细胞极化的影响

目的 探究不同时间及浓度多房棘球蚴源性外泌体对巨噬细胞极化的影响。方法 从60只造模BALB/c小鼠中随机选取4只,应用7.0T MRI观察腹腔病灶生长情况;解剖造模小鼠,通过腹腔病灶提取原头节进行体外培养,超速离心法从培养上清中提取外泌体,透射电镜及蛋白质免疫印迹法鉴定外泌体表征。将未加外泌体处理的巨噬细胞单独培养组设为对照组,不同浓度多房棘球蚴来源外泌体与巨噬细胞共培养组设为实验组(10μg/mL组、50μg/mL组),分别共培养48 h和72 h,显微镜下观察巨噬细胞形态变化。通过流式细胞术和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测极化状态。符合正态分布的计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 7.0T MRI显示小鼠腹腔内弥漫分布、大小不等的病灶形成;多房棘球蚴源性外泌体直径100 nm左右,呈杯型或茶托型,其表面标志物CD9、TSG101和CD63表达阳性。共培养后,实验组大部分细胞拉长,形态不规则,主要呈多角形;流式细胞术检测发现,共培养48 h,对照组CD16/32、CD206、CD369阳性率分别为(99.53±0.06)%、(90.27...     

外泌体介导心室重构的研究进展

外泌体是由多种细胞通过胞吐作用分泌的纳米级膜性囊泡小体,其携带的蛋白质、RNA等生物活性物质可以通过多种途径在细胞间进行输送,从而实现细胞间信息交流与传递。该文介绍外泌体介导的蛋白质、炎性因子和微小RNA(miRNA)等对不同病理状态下心室重构作用的研究进展。     

外泌体微小RNA与心血管疾病研究的进展

心血管疾病(CVD)是导致患者死亡的主要原因,早期诊断和治疗靶点的缺乏是CVD防治不佳的主要因素.大量研究证实,外泌体微小RNA(miRNA)与冠心病、心房颤动及心衰等多种CVD密切相关,在CVD的诊断和治疗方面具有巨大潜力.本文就外泌体miRNA与CVD的相关研究作一综述,旨在为外泌体miRNA在CVD早期诊断及防治...     

卡维地洛对心房肌细胞电生理的影响

心房颤动（房颤）是临床最常见的持续性心律失常，其发生率随年龄增加而升高。房颤不仅影响患者的生活质量，还增加患者的致残、致死率。最近研究表明卡维地洛可减少心胸外科手术后房颤的发生并可防止电复律后房颤的复发，但其机制尚不清楚。本研究的目的是观察长期应用卡维地洛对兔心房肌细胞电生理的影响，以阐明其抗心律失常效应的离子机制。[第一段]     

巨噬细胞外泌体抑制HBV DNA复制

目的探讨巨噬细胞(macrophage,M?)外泌体抑制HBV DNA复制的机制及与慢性乙型肝炎(chronic viral hepatitis B,CHB)肝损伤的相关性。方法体外分离鉴定M?外泌体,并将其与Hep G2.2.15细胞共培养,利用实时定量PCR检测共培养后HBV DNA复制的变化,分别分析M?及其上清外泌体中微小RNA(micro RNA,mi RNA)-638的表达;同时入组CHB免疫活化(immune activation,IA)期、低(非)复制(inactive carrier,IC)期患者,并以同期健康者作为对照组,通过实时定量PCR检测血清外泌体中mi RNA-638的表达,并与肝损伤、HBV DNA载量进行相关性分析。结果 M?外泌体可以抑制HBV DNA复制;M?及其上清外泌体中mi RNA-638高表达;CHB患者IA期mi RNA-638的表达水平低于IC期;CHB患者血清外泌体中mi RNA-638的表达水平与ALT、AST和HBV DNA水平呈负相关。结论 M?外泌体可以抑制HBV DNA复制,外泌体中mi RNA-638的表达水平与肝脏炎性损伤和病毒复制密切相关,M?外泌体相关mi RNA可能是潜在的抑制HBV复制、减轻肝脏炎症的靶点。     

冠心病患者血清外泌体微小核糖核酸-141-3p对内皮细胞损伤的影响研究

目的:检测冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清外泌体中微小核糖核酸-141-3p(miR-141-3p)的表达变化,并分析miR-141-3p对人血管内皮细胞损伤的影响.方法:收集冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清(n=8)和健康人对照(n=8),用外泌体提取试剂盒提取血清外泌体RNA,使用qRT-PCR的方法检测血清外泌体...     

肌成纤维细胞来源外泌体介导主动脉缩窄后心脏重构的作用

目的：观察肌成纤维细胞来源外泌体对主动脉缩窄后心脏重构的影响。方法：利用促纤维化因子转化生长因子-β(TGF-β)诱导心脏成纤维细胞活化,将原代心肌细胞分为正常组、PBS组、外泌体组,通过超高速离心分离提取成纤维细胞上清液中的外泌体,并将其与外泌体组心肌细胞共同孵育48 h。实时定量聚合酶链反应及免疫荧光染色法检测心肌细胞肥厚指标（心房利钠肽、脑钠肽和β肌球蛋白重链）以及心肌细胞表面积。选取C57雄性小鼠32只,随机分为对照组、假手术组、主动脉缩窄-对照组、主动脉缩窄-外泌体组,每组8只。主动脉缩窄组小鼠进行主动脉缩窄模型构建,外泌体组小鼠每日通过尾静脉注射20μg外泌体,连续注射4周。术后8周行心脏超声检测各组小鼠心功能状态,麦胚凝集素（WGA）染色检测小鼠左心室心肌肥厚程度。结果：电镜下提取物呈典型杯口状结构,Westrtn blot显示该物质含有外泌体特有标志物CD63、TSG101。相对于正常组及PBS组,外泌体组心肌细胞心房利钠肽、脑钠肽和β肌球蛋白重链的mRNA表达水平均显著升高,心肌细胞表面积显著增加（P均<0.05）。与对照组、假手术组、主动脉缩窄-对照组相比,主...     

外泌体在心房颤动发生中的作用及其应用

研究表明外泌体参与心房颤动(简称房颤)的发生、发展过程,不同来源的外泌体在房颤微环境下携带不同DNA、RNA,尤其是非编码RNA等,特异性作用于靶细胞,调节相应蛋白的表达水平,参与房颤结构重构和电重构的发生。此外,血浆中的外泌体可能成为房颤临床生物学标志物,将外泌体应用于房颤的临床治疗有可能成为新的研究方向。     

快速心房激动对心房肌电生理特性的影响

比较快速心房起搏与急性心房颤动 (简称房颤 )诱发心房电生理特性的变化。以 15 0～ 2 0 0ms起搏周长(PCL)对 4 5例成功射频消融后 (RFCA)病人右房进行S1S1刺激诱发急性房颤 ,据能否诱发急性房颤分为非房颤组和急性房颤组 ;再以 4 0 0msPCL对心房快速激动前后高位右房、低位右房、His束周围等多部位进行S1S2 扫描 ,测定心房有效不应期 (ERP)、ERP离散度 (ERPd)、右房内及房间的传导时间的变化 ;另以 35 0 ,4 0 0和 4 5 0ms三个PCL随机对RAA进行S1S2 扫描 ,观察ERP频率自适应性的变化。两组心房快速激动后 4 0 0msPCL下右房各刺激部位及三种不同PCL右心耳ERP均较心房快速激动前有明显的缩短 ,并且缩短的程度相同。两组病人心房快速激动前后房内和房间传导时间及ERPd没有明显改变。两组心房快速激动前后斜率均值均较激动后明显下降 ;心房快速激动前、后斜率均值两组间无显明差别 (P >0 .0 5 )。结论 :两种方式的心房快速激动可诱发相似的心房电重构现象。     

不同肺转移潜能的大鼠肝癌细胞外泌体对巨噬细胞转录组的影响

目的 比较不同肺转移潜能的大鼠肝癌细胞来源外泌体对巨噬细胞转录组的影响.方法 通过转录组测序技术,比较经两株不同肺转移潜能的大鼠肝癌细胞(WB1和WN1)来源外泌体处理的巨噬细胞的转录组差异,筛选差异基因并使用KEGG分析、GO分析和蛋白互作网络分析,探索癌细胞来源外泌体影响巨噬细胞功能促进肺转移的潜在机制.结果 对比...