模拟IMRT模式下相对剂量率变化对CNE-2细胞周期及Cyclin D1、Cyclin B1蛋白表达的影响

目的探讨模拟调强放射治疗（intensity-modulated radiation therapy IMRT）对人鼻咽低分化鳞癌细胞株（CNE-2）细胞周期及Cyclin D1、Cyclin B1蛋白水平的影响。方法选取CNE-2为实验对象,分为空白对照组、急速照射组（acute radiation AR）及模拟IMRT（simulational intensity-modulated radiation SIMR）组,后2组分别给予6MV-X线2、4、6、8 Gy 4个剂量点的照射。急速照射组完成时间1-3分钟;模拟IMRT组：各个剂量点分别等分分割5次,每次间隔8-8.5分钟,总时间35分钟照射完成。应用流式细胞术（FCM）分析细胞周期再分布的差异;应用Western blotting检测细胞周期相关因子Cyclin B1、Cyclin D1的蛋白水平。结果在相同剂量点,模拟IMRT组G2期细胞比例低于急速照射组,G2期细胞比例随照射剂量的增加而逐渐增加。急速照射与模拟IMRT组不同剂量点之间以及在相同剂量点比较,Cyclin D1的蛋白表达差异均无统计学意义（P值均〉0.05）;Cyclin B1的蛋白表达差异均有统计学意义（P值均〈0.05）,且随照射剂量的增加而下降,模拟IMRT组Cyclin B1的表达高于急速照射组。结论模拟IMRT照射时间延长,对G2期阻滞作用下降,细胞周期素Cyclin B1的表达相对升高。     

SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1在不同放射敏感度鼻咽癌细胞中的表达

目的 建立鼻咽癌放射抗拒亚系CNE-2S,研究SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1通路在鼻咽癌细胞系CNE-2和CNE-2S中表达的差异,探讨鼻咽癌放射敏感度变化的分子机制.方法 通过X线大剂量低分割照射技术建立鼻咽癌放射抗拒亚系(子代,CNE-2S1),观察亲代(CNE-2)和子代细胞的形态学和生长动力学差异,检测亲代及子代细胞系放射敏感度相关参数,分析亲代及子代细胞系各自细胞周期分布,同时检测亲代与子代细胞系SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1通路中各因子的蛋白质表达水平.结果 通过X线大剂量低分割照射技术成功建立鼻咽癌放射抗拒亚系CNE-2S1,且CNE 2及CNE-2S1放射敏感度相关参数具有延续性.同时CNE-2S1细胞S期比例较CNE-2细胞明显增高,G1期细胞明显减少,G2-M期细胞比例变化不明显.此外SHP-1、CDK6以及CylinD1在CNE-2S1细胞中的蛋白表达水平明显上调,p21表达水平则明显下调,其与CNE-2细胞之间的差异具有统计学意义.结论 SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1通路可能在调控鼻咽癌放射敏感度和细胞周期分布方面发挥一定作用.     

健择对人鼻咽癌细胞系放射增敏机制的实验研究

目的：观察单纯放射及放射联合健择（gemcitabine）对人鼻咽癌细胞系（CNE-2）细胞周期改变的影响，探讨健择对CNE-2细胞的放射增敏机制。方法：用流式细胞仪技术分析^60Coγ射线单纯照射和照射联合健择对CNE-2细胞周期的影响。结果：单纯照射导致CNE-2细胞G1期阻滞，照射剂量〈6Gy时与照射剂量呈正相关，〉6Gy时G1期阻滞基本稳定在一定水平。5mg／L、10mg／L、15mg／L健择与CNE-2细胞共育24h后照射2Gy，以S期阻滞为主；随着单次照射剂量的提高，以G1阻滞明显。CNE-2细胞与健择15mg／L共育12h后照射2Gy，开始时以G1阻滞为主，但24h后以S期阻滞明显。且至少维持36h以上。结论：健择对CNE-2细胞有中度放射增敏作用；其机制可能与健择引起S期或G1期阻滞有关。     

UCN-01增加鼻咽癌细胞株放射敏感性的研究

背景与目的：应用药物提高肿瘤组织的放射敏感性,是改善放疗疗效的主要研究方向之一。本研究通过观察已知p53基因突变的鼻咽癌CNE-1细胞照射后G2期阻滞的情况,以及药物7-hydroxystaurosporine(UCN-01)是否能够去除此G2期阻滞并增加放射敏感性,探讨UCN-01增加放射敏感性的机制。方法：用细胞培养和流式细胞仪（FCM）技术分析X线照射对CNE-1细胞周期（特别是G2期阻滞）的影响,观察UCN-01对放射引起的G2期阻滞的影响。应用细胞克隆形成实验观察UCN-01去除G2期阻滞对放射敏感性的影响。结果：照射明显导致CNE-1细胞G2期阻滞,未照射组（对照组）及照射2Gy、4Gy和6Gy组的细胞G2期比例分别为18.4％、43.6％、77.4％和86.4％,G2期阻滞的程度与照射剂量正相关。UCN-01能够去除放射引起的CNE-1细胞G2期阻滞,50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L和400nmol/L UCN-01组细胞的G2比例由对照组的63.5％分别降至28.5％、25.0％、16.1％和13.7％,UCN-01去除G2期阻滞的程度与药物浓度正相关。UCN-01能明显降低放射后CNE-1细胞的克隆形成率,100nmol/L和200nmol/LUCN-01组的放射增敏比分别为2.60和3.09。结论：UCN-01对CNE-1细胞有放射增敏作用,其机制可能与UCN-01去除放射引起的G2期阻滞有关。     

^60Co分割照射对鼻咽癌细胞生长增殖影响的观察

目的：观察不同剂量60Coγ射线分割照射对鼻咽癌细胞株CNE-2细胞生长和细胞周期素（Cyclin）D1及增殖细胞核抗原（PC-NA）的影响。方法：0、2.0、4.0、6.0Gy60Coγ射线分割照射CNE-2细胞1次/d,共5d。四唑盐（MTT）比色法测定细胞抑制率;流式细胞术检测细胞周期。PCR检测PCNA和Cyclin D1表达水平。结果：2.0、4.0、6.0Gy60Coγ射线分割照射5次/5d后各组细胞生长抑制率分别为-17.05%、4.01%和15.52%;各照射组G1期细胞数量减少,S＋G2/M期细胞数比例增多,χ2=16.53,P〈0.001。0、2.0、4.0、6.0Gy60Coγ射线分割照射CNE-2细胞5次/5d,CyclinD1表达水平随照射分割剂量增加而下降直至不表达,P值分别为0.035、0.022和0.000。2.0Gy照射CNE-2细胞5次/5d,细胞生长增殖未受到抑制,PCNA表达无下调,P=0.471;4.0和6.0Gy照射CNE-2细胞5次/5d,细胞生长增殖受到抑制,PCNA表达下调,P值分别为0.028和0.016。结论：4.0、6.0Gy60Coγ射线分割照射5次/5d,细胞生长增殖受到抑制;2.0Gy照射5次/5d细胞生长增殖未受抑制;2.0、4.0、6.0Gy60Coγ射线分割照射5次/5d后,CyclinD1和PCNA表达受抑制。     

60Co分割照射对鼻咽癌细胞生长增殖影响的观察

目的:观察不同剂量射线分割照射对鼻咽癌细胞株CNE-2细胞生长和细胞周期素(Cyclin)D1及增殖细胞核抗原(PC-NA)的影响.方法:0、2.0、4.0、6.0 Gy60Coγ射线分割照射CNE-2细胞1次/d,共5 d.四唑盐(MTT)比色法测定细胞抑制率;流式细胞术检测细胞周期.PCR检测PCNA和CyclinD1表达水平.结果:2.0、4.0、6.0 Gy60Coγ射线分割照射5次/5 d后各组细胞生长抑制率分别为-17.05%、4.01%和1 5.52%;各照射组G1期细胞数量减少,S+G2/M期细胞数比例增多,X2=16.53,P<0.001.0、2.0、4.0、6.0 Gy60Coγ射线分割照射CNE-2细胞5次/5 d,Cyclin D1表达水平随照射分割剂量增加而下降直至不表达,P值分别为0.035、0.022和0.000.2.0 Gy照射CNE-2细胞5次/5 d,细胞生长增殖未受到抑制,PCNA表达无下调,P=0.471;4.0和6.0 Gy照射CN E-2细胞5次/5 d,细胞生长增殖受到抑制,PCNA表达下调,P值分别为0.028和0.016.结论:4.0、6.0 Gy60Coγ射线分割照射5次/5 d,细胞生长增殖受到抑制;2.0 Gy照射5次/5 d细胞生长增殖未受抑制;2.0、4.0、6.0 Gy60Coγ射线分割照射5次/5 d后,Cyclin D1和PCNA表达受抑制.     

模拟调强模式下CNE-2细胞学中ATM和Ku80表达的研究

目的:研究延长时间的IMRT模式对鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)与DNA损伤修复相关的Ku80、ATM转录水平表达的影响及临床意义.方法:选取鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE-2为实验对象,分为常规照射、模拟IMRT两组,分别给予6MV-X线2、4、6、8Gy4个剂量点的照射;应用RT-PCR,检测CNE-2在不同照射模式下,与DNA损伤修复相关的Ku80、ATM转录水平表达.结果:常规照射与模拟IMRT组不同剂量点之间Ku80的转录水平表达差异有统计学意义(P均=0.000);在相同剂量点,常规照射组与模拟IMRT组LSD法两两比较,4个剂量点Ku80的转录水平表达差异均有统计学意义(P均<0.05);接受照射后CNE-2细胞中Ku80表达上调,模拟IMRT组Ku80的表达更高(P均=0.000),在4Gy剂量点时两组细胞Ku80的表达到达峰值,随后表达均下降.接受照射后,与空白对照比较,常规照射与模拟IMRT组CNE-2细胞中ATM转录水平表达均上调(P均<0.005);常规照射与模拟IMRT组不同剂量点之间,ATM的转录水平表达差异无统计学意义(P均>0.05);在相同剂量点,常规照射组与模拟IMRT组LSD法两两比较,ATM的转录水平表达差异均无统计学意义(P均>0.05).结论:由于亚致死性损伤修复增加,大幅延长照射时间的调强放疗的生物效应下降,Ku80的相对高表达可能是鼻咽低分化鳞癌细胞株模拟IMRT的放射生物学效应的下降的原因之一.     

DNA-PKcs 表达与鼻咽癌细胞株放射敏感性的关系

 目的 探讨不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1（鼻咽高分化鳞癌细胞株）和CNE-2（鼻咽低分化鳞癌细胞株）中DNA依赖蛋白激酶（DNA-PK）的催化亚基DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系。方法 通过克隆形成实验测定CNE-1、CNE-2不同剂量的存活分数，并用线性二次模型拟合剂量存活曲线求出放射生物学参数α、β,SF2、MID值，以及四氮唑蓝比色分析法（MTT法）检测60Co-γ线4Gy照射后12h细胞的存活率，以评价两株细胞的放射敏感性。逆转录实时荧光定量PCR技术（RTrFQPCR）检测照射前、后不同时间及不同剂量CNE-1、CNE-2细胞mRNA水平DNA-PKCS基因的定量表达。结果CNE-1在各个剂量点的存活分数均比CNE-2高，MID值分别为2．78、1．61，SF2值分别为0．627、0．341；4Gy照射后12h的存活率分别为88．2％、72．3％；RT-FQPCR显示两株细胞中均有DNA-PKCS基因的表达，其相对表达量之比为7．54±2．71（t=4．17，P=0．014），表达差异有统计学意义，DNA-PKCS基因在CNE-2细胞中存在时间、剂量依赖关系。结论实验验证了CNB2比CNE-1对射线更敏感，DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞的放射敏感性有关。     

反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞乏氧条件下放射敏感性的影响

目的:探讨乏氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在乏氧状态下对鼻咽癌CNE-1细胞放射敏感性的影响.方法:氯化钴处理CNE-1细胞模拟乏氧条件下的培养传代,通过脂质体将不同HIF-1α反义寡核苷酸酸导入CNE-1细胞中,根据转染复合物的不同将CNE-1细胞分为反义联合组、正义联合组、脂质体组和单纯放疗组(放疗对照组).X射线单次照射,照射条件为照射率4 Gy/min,共8Gy,细胞照射后继续乏氧条件下培养24 h.MTT法检测CNE-1细胞的存活率,Western blotting检测CNE-1细胞中HIF-1α和VEGF蛋白的表达.结果:在乏氧条件下,反义联合组的鼻咽癌CNE-1细胞存活率明显大于正义联合组和单纯放疗组.Western blotting结果显示,与正义联合组和单纯放疗组相比,反义联合组CNE-1细胞中HIF-1α蛋白表达显著下降(0.162 ±0.055vs 0.872 ±0.191,0.768±0.217,0.863±0.245,P＜0.05);同时反义联合组CNE-1细胞中VEGF蛋白的表达量较正义联合组和单纯放疗组明显减少(0.364±0.078 vs 1.165±0.346,1.068±0.379,1.087±0.266,P＜0.05).结论:HIF-1α反义寡核苷酸能有效抑制HIF-1α的表达,对乏氧状态下的鼻咽癌CNE-1细胞具有放射增敏作用.     

沉默CDKN1A基因对鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞放射敏感性的影响

目的：探讨CDKN1A基因的表达与鼻咽癌放射敏感性的关系。方法构建慢病毒表达载体LV-CDKN1A-RNAi并转染鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞,设转染LV-CDKN1A-RNAi慢病毒的CNE-2R细胞为实验组,转染阴性对照慢病毒的CNE-2R细胞为阴性对照组,未转染的CNE-2R细胞为空白对照组。用CCK-8法、细胞克隆形成实验及流式细胞术分别检测各组细胞增殖、放射敏感性及细胞周期的变化。结果成功构建了CDKN1A基因沉默的CNE-2R细胞,CCK-8法检测显示实验组CNE-2R细胞在照射6 Gy后生长受到抑制,且随时间延长其抑制作用更为明显。细胞克隆形成实验显示实验组CNE-2R细胞放射敏感性增强（放射增敏比为SER=1.24）。流式细胞术检测显示实验组与对照组细胞相比, G0/G1期和G2/M期细胞分布在X射线照射6 Gy前后明显改变（P约0.05）。结论 CDKN1A基因沉默能增强鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞的放射敏感性,CDKN1A基因的表达可能与鼻咽癌放射敏感性相关,有望成为鼻咽癌治疗的新靶点。     

Icotinib Enhanced Radiosensitization of Nasopharyngeal Carcinoma by Inhibiting the Expression of Epidermal Growth Factor Receptor

Epidermal growth factor receptor (EGFR) is frequently overexpressed in multiple malignancies. Icotinib (IH), a new EGFR tyrosine kinase inhibitor, enhances radiosensitivity in various types of cancer, but its effect on nasopharyngeal carcinoma (NPC) remains unclear. Total 115 NPC tissue sections and 30 nasopharyngitis tissue sections were enrolled. The correlation of EGFR expression and clinicopathologic features of NPC was analyzed. Survival analysis was calculated by using univariate and multivariate regression analysis. A radioresistant NPC cell line, CNE-2R, was established with a gradient irradiation schedule. Cell viability, colony formation and EGFR expression of CNE-2/2R cells were examined. Significant higher expression of EGFR was observed in NPC tissues than chronic nasopharyngitis lesions. EGFR expression was significantly correlated with both tumor stage (P < 0.001) and tumor-node-metastasis stage of NPC (P = 0.006). EGFR expression was an independent prognostic factor of disease-free survival (P = 0.047) and the overall survival of NPC (P = 0.016). Cell viability was higher in CNE-2R than CNE-2 on days 1, 2, 4, and 6 after radiation of 4 Gy. The colony number of CNE-2R was significantly higher than that of CNE-2 (P < 0.05), while IH enhanced the radiosensitizing effect of CNE-2R with lower survival fraction (P < 0.05). EGFR mRNA and protein expression levels were significantly higher in CNE-2R cells compared to CNE-2 cells, but significantly decreased after IH treatment (all P < 0.05). In conclusion, high EGFR expression is a poor prognostic factor for NPC patients. IH enhances the radiosensitivity of CNE-2R cells and reduce EGFR expression.     

DNA-PKcs反义寡核苷酸对不同p53功能状态的鼻咽癌细胞株辐射抗性的影响

背景与目的:DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)是一种双链断裂修复蛋白,可以修复细胞的DNA双链断裂损伤。本研究通过转染DNA-PKcs反义寡核苷酸入鼻咽癌细胞株,探讨DNA-PKcs反义寡核苷酸对不同p53功能状态的鼻咽癌细胞株的放射敏感性的影响。方法:利用LipofectamineTM2000转染DNA-PKcs反义寡核苷酸入鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-1-wtp53;设0、0.5、1、2、4、6、8Gy7个放射剂量点,用集落形成法分析转染反义寡核苷酸前后细胞的存活情况,并分别用线性二次模型和单击多靶模型拟合出细胞的剂量存活曲线,求出放射生物学参数α、β、α/β、SF2、D0、Dq和N值,评价细胞放射敏感性的变化。结果:转染DNA-PKcs反义寡核苷酸前,CNE-1和CNE-1-wtp53的α值分别为0.03、0.05,SF2值分别为0.73、0.50,D0值分别为2.08Gy、1.13Gy,Dq值分别为2.04Gy、1.36Gy。转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,CNE-1和CNE-1-wtp53的α值分别为0.04、0.26,SF2值分别为0.45、0.21,D0值分别为1.07Gy、0.83Gy,Dq值分别为1.24Gy、0.73Gy。转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,鼻咽癌细胞的α值增大,SF2、D0、Dq值均减小。结论:DNA-PKcs反义寡核苷酸可逆转CNE-1的辐射抗性,该逆转作用不依赖细胞的p53功能状态。     

E1A基因对鼻咽癌细胞放射敏感性影响的初步实验研究

目的 探讨E1A基因对鼻咽癌细胞放射增敏作用及相关机制.从而为提高鼻咽癌放射治疗疗效提供实验依据.方法 经腺病毒介导,将E1A基因导入人鼻咽癌细胞系CNE2细胞.经RT-PCR鉴定,获得含E1A的阳性克隆.将未转染的CNE2细胞、转染对照空载体Ad-B-gal的CNE2细胞和转染Ad-E1A的CNE2细胞用6 MV X线分别照射0、2、4、6、 8 Gy后进行成克隆分析并绘制细胞存活曲线,计算放射增敏比.流式细胞术和RT-PCR检测转染前后的细胞周期分布以及wtp53表达情况.结果 转染后阳性克隆细胞RT-PCR结果说明E1A已整合到细胞基因组中并且稳定表达.细胞存活曲线结果显示转染E1A的CNE2细胞放射增敏比分别为1.37(D_0值比)、1.95(D_q值比)、1.46(SF_2值比).未转染及空载体转染后的CNE2细胞照射后细胞存活曲线分析结果显示无差异,D0D_qSF2值分别为1.57 Gy及1.53 Gy、1.82 Gy及1.78 Gy、0.89及0.82.流式细胞术显示细胞周期出现G_2+M期阻滞,RT-PCR结果显示E1A基因能提高wtp53的表达.结论 E1A基因能显著提高人鼻咽癌细胞的放射敏感性,其作用机制可能与E1A基因提高叭p53基因的表达和引起G2+M期阻滞有关.     

E1A基因通过抑制NF-κB信号通路增加鼻咽癌细胞放射敏感性实验研究

目的 探讨E1A基因对人鼻咽癌细胞放射敏感性的影响及其可能机制。方法 通过腺病毒载体介导,将E1A基因转染至鼻咽癌CNE-2R细胞,采用RT-PCR鉴定E1A基因的表达;分别给予未转染组(PBS组)、转染空载体Ad-β-gal组(Ad-β-gal组)和转染E1A组(Ad-E1A组)的CNE-2R细胞0、2、4、6、8 Gy照射,应用克隆形成实验检测各组CNE-2R细胞放射敏感性的变化;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;蛋白印迹法检测各组细胞NF-κB、CK2α、Bcl-2及Cleaved caspase-3蛋白的表达。结果 RT-PCR确认E1A基因已整合到CNE-2R细胞中且稳定表达;Ad-E1A组CNE-2R细胞克隆形成率明显少于PBS和Ad-β-gal组的克隆形成率,Ad-E1A组CNE-2R细胞SF2为0.217小于 PBS组和Ad-β-gal组的0.602和0.585(P<0.05),Ad-E1A组α/β值为24.68大于PBS组和Ad-β-gal组的5.268和5.132(P<0.05);流式细胞术显示单独放射可促进CNE-2R细胞的凋亡,当与E1A基因联合使用时,细胞凋亡率明显增加(P<0.05);蛋白印迹法显示E1A基因可下调NF-κB/P65、CK2α、Bcl-2和上调Cleaved caspase-3的表达。结论 E1A基因可以通过抑制CK2的表达阻断NF-κB信号通路以及促进细胞凋亡,来提高鼻咽癌细胞对放射的敏感性。     

沉默LncRNA HOXD-AS1调控miR-454-3p表达增加H460细胞放射敏感性

目的 探究LncRNA HOXD-AS1靶向调控miR-454-3p表达对肺癌H460细胞放射敏感性影响。方法 qRT-PCR检测HOXD-AS1、miR-454-3p表达量,流式细胞术检测细胞凋亡率,克隆实验检测细胞放射敏感性。蛋白印迹法检测细胞中Caspase-3、Cyclin D1、γ-H2AX的蛋白表达量。结果 照后细胞中HOXD-AS1表达升高(P<0.05),miR-454-3p表达降低(P<0.05)。沉默HOXD-AS1促进细胞凋亡、增加放射敏感性,促进Caspase-3、γ-H2AX蛋白表达,抑制Cyclin D1表达;HOXD-AS1可靶向结合miR-454-3p并可负向调控其表达。结论 沉默HOXD-AS1可靶向调控miR-454-3p促进肺癌细胞凋亡及抑制细胞存活进而提高放射敏感性。     

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞生长抑制及放射增敏研究

目的 研究塞来昔布对人鼻咽癌细胞系CNE-2细胞生长影响及有无放射增敏作用.方法 (1)细胞生长抑制研究:用MTT法检测细胞生长抑制,流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡,透射电子显微镜观察细胞凋亡形态,SP法检测细胞COX-2表达.(2)放射增敏研究:随机设置照射对照、药物对照、单纯照射、药物+照射组,其中成克隆实验单次照射2、4、6、8、10 Gy,细胞周期分布和凋亡实验单次照射6 Gy.结果 塞来昔布显著抑制CNE-2细胞生长并呈浓度和时间依赖性,IC50为80 μmol/L.细胞周期分布显示G0+G1期细胞显著升高(47.03±2.76:56.17±1.95,t=4.68,P=0.010),而S、G2+M期细胞明显下降(33.07±1.86:24.87±1.76,t=5.54,P=0.010;19.30±0.53:17.73±0.83.t=2.75,P=0.050)并呈浓度依赖性.凋亡率显著增高(1.57±0.47:10.47±0.31,t=27.39,P=0.000)并呈浓度依赖性.电镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂等凋亡形态学改变.SP法检测塞来昔布显著下调CNE-2中COX-2表达[17.48±0.34、12.82±0.51(t=13.20,P=0.00)].塞来昔布的放射增敏比(D0值比为1.74:1.52)为1.15.4个组别细胞周期分布结果 显示单纯照射、药物+照射组的G2+M期细胞明显高于照射对照、药物对照组(68.00±1.65、54.27±5.74、17.60±0.80、14.86±1.23,t=47.70,P=0.000;t=11.63,P=0.000),且单纯照射与药物+照射组间也不同(t=3.99,P=0.020);单纯照射、药物+照射组的细胞凋亡率也明显高于照射对照、药物对照组(4.83±0.97、9.50±1.35、1.33±0.36、2.28±0.42,t=4.67,P=0.01;t=8.81,P=0.000),且单纯照射与药物+照射组也不同(t=4.85,P=0.010).结论 塞来昔布能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞生长和诱导凋亡,其机制可能涉及COX-2依赖途径.塞来昔布还能增强CNE-2细胞放射敏感性,可能机制与抑制放射后亚致死损伤修复、直接抑制细胞增殖和增强细胞对放射诱导凋亡率有关.     

Overproduction of Cyclin D1 is dependent on activated mTORC1 signal in nasopharyngeal carcinoma: Implication for therapy

Activated mTOR was implicated to play a role in the carcinogenesis of nasopharyngeal carcinoma (NPC). However, the mechanism of activated mTOR/Complex1(mTORC1) signaling pathway in NPC development has not been well established. In this study, we correlated the expression of mTORC1 signal molecules and Cyclin D1 in NPC. We also investigated the effect of blocking mTORC1 signal with rapamycin and mTOR siRNA on Cyclin D1 expression in CNE-2 cells, as well as cell apoptosis and viability. We found a positive association of mTORC1 signal molecules and Cyclin D1 in NPC. Also, we found blockage mTORC1 inhibited Cyclin D1 expression in CNE-2 cells and enhanced cell apoptosis. Our results suggested that mTORC1 signal pathway might be a potential target for NPC therapy.     

抑制Polo样激酶1对鼻咽癌细胞辐射敏感性的影响

目的:探索抑制Polo样激酶1(Polo-like kinase 1,PLK1)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞CNE-1和CNE-2辐射敏感性的影响.方法:分别运用siRNA和小分子抑制剂BI2536抑制CNE-1和CNE-2细胞内PLK1的表达或磷酸化,通过MTT法检测抑制PLK1对NPC细胞增殖能力的影响,流式细胞技术检测对细胞周期和凋亡的影响,细胞免疫荧光检测对辐射后DNA损伤位点的影响,克隆形成实验及曲线拟合计算对辐射后细胞放射生物参数和放射增敏比(sensitizationenhancement ratio,SER)的影响.结果:与对照组相比,抑制PLK1可以明显抑制NPC细胞增殖,并诱导细胞发生G2-M期阻滞和有丝分裂灾难.抑制NPC细胞PLK1联合射线辐射后,NPC细胞克隆形成能力下降(CNE-1:P ＜0.05;CNE-2:P ＜0.05),且随着BI2536浓度的增大克隆形成能力下降更加明显(CNE-1:P ＜0.05;CNE-2:P ＜0.05);细胞生存分数明显降低(均P＜0.05);核中γ-H2AX位点数目明显增加(P＜0.05);细胞凋亡率显著升高(均P＜0.05);siR-PLK1转染CNE-1和CNE-2后SER分别为1.1988和1.3198,BI2536处理CNE-1和CNE-2后SER分别为1.5508和1.2028.结论:抑制PLK1可以抑制NPC细胞增殖,诱导发生细胞周期阻滞和有丝分裂灾难,并能显著提高NPC细胞辐射敏感性.