siRNA抑制VEGF基因表达对鼻咽癌细胞生物学行为的影响

目的:应用RNA干扰(RNAi)技术抑制人鼻咽低分化鳞状上皮细胞癌细胞株CNE-2中血管内皮生长因子(VEGF)的表达,研究VEGF对鼻咽癌细胞生物学行为的影响.方法:构建针对VEGF的siRNA真核表达载体pU-VEGF-siRNA,将其表达载体经脂质体LipofectamineTM2000转染至CNE-2细胞,荧光显微镜下观察转染效率,采用RT-PCR、Western blot方法检测转染后CNE-2细胞中VEGF mRNA和蛋白的表达.通过流式细胞仪分析细胞周期的分布,并应用平板克隆形成实验、Transwell侵袭小室模型观察转染后CNE-2细胞恶性生物学行为的变化.结果:pU-VEGF-siRNA转染后CNE-2细胞株中VEGF mRNA和蛋白表达较pU-siCONT组、空白对照组显著下降(P＜0.05),细胞周期被阻滞在G1期,细胞生长缓慢,体外侵袭能力下降.结论:通过RNAi技术阻断VEGF的表达,可抑制CNE-2细胞的生长、增殖、迁徙,提示VEGF在鼻咽癌的发生、发展过程中起重要作用.     

VEGF表达预测鼻咽癌放疗效应的价值

[目的]探讨血管内皮生长因子（VEGF）预测鼻咽癌（NPC）放疗效应的价值。[方法]应用免疫组化法检测50例放射敏感和30例放射抵抗的鼻咽部低分化鳞状细胞癌在接受放疗前的肿瘤组织中VEGF的表达情况,分析VEGF的表达与放疗效应的关系。[结果]VEGF在NPC中总的阳性表达率为58．75％（47／80）。在50例放射敏感的NPC组织中,33例f66．00％1VEGF阳性表达,在30例放射抵抗的NPC组织中,14例（46．67％）VEGF阳性表达;两组比较,差异无统计学意义（χ2=2．892,P=0．105）。根据VEGF阳性表达预测NPC放疗抵抗,其预测鼻咽癌放疗效应的敏感性46．67％,特异度34．00％,准确率38．75％。ROC曲线下面积为0．625（95％CI：0．491～0．760;P=0．062）。[结论]放疗前鼻咽部低分化鳞状细胞癌肿瘤组织中VEGF表达对预测放疗效应的价值有限。     

下调WT1基因对K562细胞血管内皮生长因子表达的影响

 目的　探讨WT1基因沉默对人类白血病细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法　将已构建的WT1小发夹RNA（shRNA）质粒载体转染入K562细胞，流式细胞术检测转染效率并对转染细胞进行分选，实时荧光定量PCR检测细胞转染前后WT1及VEGF基因mRNA的表达变化，用ELISA检测转染前后细胞培养液中VEGF浓度的变化。结果　转染48 h，WT1shRNA质粒转入K562细胞，转染效率为（65±4.5）%，通过流式细胞术分选，可以得到纯度达98 %以上的WT1shRNA阳性细胞，转染后的K562细胞WT1及VEGF基因mRNA表达较转染前及对照组均明显降低（P＜0.05），转染后48、72 h细胞培养液中VEGF的含量较对照组明显降低（P＜0.05）。结论　WT1干扰质粒在体外可以抑制白血病细胞株VEGF的表达，提示WT1基因可能通过上调VEGF基因的表达而参与白血病的血管新生。     

鼻咽癌组织VEGF表达及淋巴细胞浸润对患者预后的影响

目的：研究鼻咽癌活检组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达及瘤巢中淋巴细胞的浸润程度对鼻咽癌患者远期预后的影响。方法：以免疫组化S-P法检测42例初诊无远处转移鼻咽癌患者活检组织中VEGF的表达情况,在HE切片上观察瘤巢中淋巴细胞的浸润程度,对其与患者临床病理特征及远期生存的关系进行分析。结果：VEGF低表达组与高表达组5年生存率分别为86．67％和37．04％（P=0．002）,瘤巢低淋巴细胞浸润组与中、高组5年生存率分别为23．5％和76．0％（P=0．0014）;VEGF低表达组与高表达组、瘤巢低淋巴细胞浸润组与中、高组的生存曲线分布差异有统计学意义。VEGF表达水平与N分期正相关,瘤巢淋巴细胞浸润程度与患者年龄呈负相关。结论：VEGF高表达、瘤巢低淋巴细胞浸润的鼻咽癌患者5年生存率降低,VEGF表达水平、瘤巢淋巴细胞浸润情况可以作为评价鼻咽癌患者预后的参考指标。     

靶向沉默RNF2基因对食管癌细胞放射敏感度的影响

目的 探讨RNF2基因表达对X射线照射后食管癌细胞放射敏感度的影响。方法 针对RNF2mRNA序列,设计合成3对有效的干扰序列（siRNA1、siRNA2和siRNA3）和阴性对照序列。瞬时转染细胞,分别命名为RNF2 siRNA1组、RNF2 siRNA2组、RNF2 siRNA3组,转染空载体组和未转染组分别命名为NC组和control组。RT-PCR和Western blot法观察食管癌ECA109细胞各组中RNF2表达变化。MTT法检测RNF2基因对ECA109增殖能力的影响。克隆形成实验检测RNF2对ECA109放射敏感度的影响。流式细胞术测定RNF2基因干扰后对细胞周期和凋亡分布的影响。结果 3对干扰序列组的RNF2基因在mRNA和蛋白表达水平低于control组和NC组,尤以siRNA1组效果最明显。选择siRNA1作为干扰组进行MTT和流式细胞术检测。MTT结果表明照射后干扰组细胞增殖明显受抑;克隆形成实验的结果显示干扰组的的D0、Dq、SF2显著低于control组和NC组,而干扰组的外推数N（extrapolation number N）值明显高于后者,可见干扰组细胞的放射敏感度高于control组和NC组;流式细胞术显示照射后RNF2 siRNA组G0/G1期明显高于control组和NC组,S期显著低于control组和NC组。结论 siRNA干扰技术有效地抑制了食管癌ECA109细胞中RNF2基因的表达,联合X线照射后显著抑制了细胞增殖,消除了细胞周期阻滞在S期,增加了食管癌的放射敏感度。     

鼻咽癌患者血清VEGF水平及临床意义

目的 探讨鼻咽癌患者血管内皮生长因子(VEGF)水平变化的临床意义。方法 采用双抗夹心ELISA法检测55例鼻咽癌患者血清VEGF水平，并与40例健康体检者的血清VEGF水平作对比分析。结果 鼻咽癌患者血清VEGF水平显著高于健康体检者(P=0．000)；晚期(Ⅲ期、Ⅳ期)鼻咽癌患者血清VEGF水平显著高于早期(Ⅰ期、Ⅱ期)鼻咽癌患者(P=0．003)；有淋巴结转移和远处转移的鼻咽癌患者血清VEGF水平明显高于无淋巴结转移和无远处转移的患者(P=0．015及0．003)；血清VEGF水平与鼻咽癌患者性别、年龄和组织病理学类型无明显相关。结论 血清VEGF可作为鼻咽癌早期诊断、病情进展的动态监测及预后判断的简便可靠的指标。     

下调VEGF表达对人乳腺癌细胞凋亡相关基因影响的研究

目的:研究下调VEGF基因的表达对人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡及相关基因表达的影响,探讨敲减VEGF后乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制.方法:体外化学合成针对VEGF基因的siRNA序列,在脂质体Li-pofectamine2000TM 介导下转染MCF-7细胞,RT-PCR检测VEGF、Survivin及wtP53表达水平,比色法检测Caspase-3的活性,免疫组织化学法检测Survivin蛋白的表达,并用图像分析软件分析蛋白表达强度.结果:靶向VEGF的siRNA转染MCF-7后,明显促进了细胞凋亡,VEGF mRNA表达明显减少;Survivin基因mRNA及蛋白水平表达下调(P<0.01);p53的mRNA表达上调,Caspase-3活性增高.结论:敲减VEGF基因可促进MCF-7细胞的凋亡,其主要途径可能是下调Survivin的表达,活化Caspase-3来实现.     

外周血淋巴细胞微核变化值与鼻咽癌颈淋巴结转移灶放射敏感度的关系

外周血淋巴细胞微核变化值与鼻咽癌颈淋巴结转移灶放射敏感度的关系王捷１何玲２郎锦义１卢铀１王冀川１王琼２王静波关键词鼻咽肿瘤淋巴细胞微核放射敏感度中图号Ｒ７３９．６３外周血淋巴细胞微核（ＭｉｃｒｏｎｕｃｌｅｉｏｆｐｅｒｉｐｈｅｒａｌＢｌｏｏｄＬｙｍｐ...     

siRNA靶向沉默COX-2对宫颈癌细胞VEGF、EGFR表达的影响

目的 探讨siRNA靶向沉默环氧合酶-2(COX-2)基因对宫颈癌HeLa细胞血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响.方法 以人宫颈癌HeLa细胞为研究对象,采用COX-2 siRNA转染HeLa细胞作为转染组,以未转染的HeLa细胞作为空白对照组,以阴性对照siRNA转染HeLa细胞作为阴性对照组.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2、VEGF、EGFR基因的表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测COX-2、VEGF、EGFR蛋白的表达水平,MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Tran-swell小室检测细胞的迁移和侵袭能力.结果 RT-PCR结果显示,转染组的COX-2、VEGF、EGFR基因表达水平均低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).Western blot结果显示,转染组的COX-2、VEGF、EGFR蛋白表达水平均低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).MTT检测结果显示,转染组的细胞增殖抑制率高于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).流式细胞仪检测结果显示,转染组的细胞凋亡率高于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).Transwell小室检测结果显示,转染组的细胞穿透率低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论siRNA靶向沉默COX-2基因能够抑制HeLa细胞中VEGF和EGFR的基因及蛋白表达水平,促进HeLa细胞凋亡,抑制HeLa细胞增殖,降低HeLa细胞的迁移及侵袭能力.     

内皮抑素对NSCLC细胞系中VEGF受体2表达的影响及其放射增敏效应机制研究

目的 研究内皮抑素对NSCLC细胞(人肺腺癌A549细胞、人肺鳞癌Calu-1细胞)中VEGF受体2(VEGFR₂)表达影响,并探索其放射增敏效应的可能机制。方法 CCK8法检测内皮抑素对细胞增殖抑制作用,计算24 h的20%药物抑制浓度(IC₂₀);采用RT-PCR及蛋白印迹法检测各组VEGFR₂、相关信号通路及HIF-1α mRNA与蛋白表达变化;克隆形成实验检测各组细胞放射敏感性,流式细胞术检测凋亡及周期分布。多样本均数比较采用单因素方差分析,组间比较采用两样本均数t检验。结果 经内皮抑素处理后,Calu-1细胞增殖活力明显下降(F=50.36,P<0.01),IC₂₀=296.5 μg/ml;VEGFR₂和HIF-1αmRNA与蛋白表达水平均受抑制(F=25.43、10.44,P值均<0.05);同时Akt、ERK1/2和p38的蛋白磷酸化水平均减低(F=2.89、0.24、1.09,P值均<0.05);其放射增敏比为1.38;凋亡率、G₂+M期阻滞增加(F=44.15、104.24,P值均<0.01)。此外,与Calu-1细胞相比,内皮抑素对A549细胞放射增敏比为1.09。结论 内皮抑素能促进VEGFR₂高表达Calu-1细胞凋亡并能增强放射敏感性,对低表达的A549细胞效果有限。     

鼻咽癌患者血清血管内皮生长因子水平的临床意义

目的　分析血管内皮生长因子 (VEGF)在鼻咽癌 (NPC )患者血循环的含量及其临床意义。方法　采用酶联免疫吸附试验 (ELISA )测定 14 0例NPC患者 (治疗前组 63例 ,完全缓解组 41例 ,复发组 3 6例 )和 40例健康人血清VEGF水平。结果　NPC患者治疗前、完全缓解和复发组血清VEGF水平分别为 ( 2 96.5± 183 .6)ng/L、( 2 78.7± 169.6)ng/L和 ( 3 69.3± 3 15 .6)ng/L ,均显著高于健康对照组的 ( 180 .9± 14 7.7)ng/L(分别为P <0 .0 1、P <0 .0 5、P <0 .0 1) ;血清VEGF水平随着NPC进展有上升趋势 ,尤其是发生远处转移者 ;高水平VEGF的患者更易发生肿瘤复发转移。结论　NPC患者血清VEGF水平上升 ,与肿瘤的侵袭有密切关系     

Ki-67表达与鼻咽癌放射敏感性的关系

目的探讨Ki-67表达与鼻咽癌放射敏感性的关系。方法应用免疫组织化学法检测159例鼻咽癌组织中Ki-67蛋白表达的情况。结果159例鼻咽癌组织中Ki-67阳性表达率为98.7%。Ki-67表达强度与鼻咽癌的临床分期、根治放疗70Gy后鼻咽部肿瘤大小和颈部淋巴结的消退情况无关(P>0.05)。结论Ki-67与鼻咽癌的放射敏感性无关。     

VEGF-C和VEGFR-3在鼻咽癌组织中的表达及其意义

目的探讨血管内皮生长因子C（VEGF-C）及其受体3（VEGFR-3）在鼻咽癌淋巴管生成及淋巴道转移中的作用。方法取61例鼻咽癌组织样本,应用免疫组织化学法观察VEGF-C和VEGFR-3在鼻咽癌组织中的表达,应用D2-40标记淋巴管,检测鼻咽癌组织中的微淋巴管密度。结果 61例鼻咽癌组织中,VEGF-C阳性表达率为61.8%,VEGFR-3表达的阳性率为69.1%。经计数淋巴管数量,癌组织中的微淋巴管密度（LVD）与VEGF-C、VEGFR-3的表达显著相关（P〈0.01）。结论 VEGF-C通过与VEGFR-3的结合促进癌组织中淋巴管生成,使癌组织中LVD增高,从而对肿瘤细胞发生淋巴道转移起促进作用。     

鼻咽癌survivin基因和血管内皮生长因子表达的临床意义

目的研究鼻咽癌survivin基因表达和血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其临床意义。方法运用逆转录聚合酶链反应技术（RT—PCR）检测鼻咽癌组织中survivin、VEGF mRNA的表达情况。结果35例鼻咽癌组织中23例survivin表达阳性（65．7％），22例VEGF表达阳性（62．9％）；14例鼻咽黏膜慢性炎症组织中2例survivin表达阳性（14．3％），3例VEGF表达阳性（21．4％）。癌组织与炎症组织相比，survivin、VEGF两者均有表达，但具有显著性差别（P〈0．05）。鼻咽癌组织中survivin的表达与肿瘤的细胞分化及TNM分期有关，高分化者的表达率明显低于中低分化者（P〈0．05），Ⅰ～Ⅱ期的阳性表达率（47．4％）较Ⅲ～Ⅳ期（87．5％）低（P〈0．05）。鼻咽癌组织中VEGF的表达与颈淋巴结转移及TNM分期有关，有颈淋巴结转移者其阳性表达率较高，Ⅰ～Ⅱ期的阳性表达率（42．1％）较Ⅲ～Ⅳ期（87．5％）低（P〈0．01）。鼻咽癌组织中survivin、VEGF的表达呈正相关性。结论鼻咽癌组织中存在survivin、VEGF的过表达现象。survivin、VEGF基因的异常表达与鼻咽癌的发生发展存在一定的关系。survivin的异常表达可能在鼻咽癌的血管生成中发挥一定的作用。     

RNA干扰沉默VEGF及其受体抗大肠癌血管生成研究进展

研究表明血管内皮生长因子(VEGF)及其受体在大肠癌血管生成中扮演重要角色.因此通过RNA干扰技术阻断大肠癌VEGF及其受体在大肠癌抗血管生成治疗中显示出良好的应用前景.     

鼻咽癌尿激酶型纤溶酶原激活物及VEGF 表达与侵袭转移关系

 目的　探讨鼻咽癌 ( NPC)组织尿激酶型纤溶酶原激活物 ( u PA)及血管内皮细胞生长因子 ( VEGF)表达与癌生物学行为的关系。方法　采用免疫组织化学方法检测了 45例 NPC组织中的 u PA及 VEGF表达。结果　NPC有淋巴结转移组 u PA及 VEGF的阳性率较无淋巴结转移组高 ,复发或远处转移组与无复发组之间有显著性差异 ;u PA与 VEGF表达有相关性 ( P<0 .0 5 )。结论　u PA与 VEGF与鼻咽癌的浸润及转移密切相关 ,在鼻咽癌的发生、发展和转移过程中可能起促进作用.     

RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子表达

目的：应用RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子（VEGF）表达。方法：将VEGF基因作为RNA干扰的靶区，通过E—RNAi网上提供的服务，设计两个特异的RNA干扰序列，将其装入含U6启动子的载体上，构建成抗VEGF基因的小发夹样RNA（shRNA）表达载体，再转染人胚肾细胞HEK293、结肠癌细胞HT29、宫颈癌细胞Hela和肝癌细胞HepG2，通过RT—PCR、Northern杂交和免疫荧光观察VEGF表达受抑的程度。结果：成功构建了两种抗VEGF基因的shRNA表达载体，RT—PCR发现其在HEK293和HT29细胞系中，能明显抑制VEGF基因的表达，抑制率分别为72％和42％。但在Hela和HepG2细胞中的抑制率仅为28％和13％；Northern杂交显示，在HEK293细胞和HT29细胞中，VEGF mRNA明显受抑，抑制率达88％和89％；免疫荧光显示，在HT29细胞中，VEGF蛋白表达的受抑制率为73％。结论：针对VEGF基因的shRNA表达载体能够明显抑制VEGF基因的表达，但在不同细胞系中的作用强度存在差别。     

EGFR的多态性与鼻咽癌放射敏感性的初步研究

目的：探讨表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因外显子13R497K和内含子1CA双核苷酸简单重复序列（CA）n的多态性与鼻咽癌放射敏感性的相关性。方法：对53例经病理确诊为鼻咽癌患者治疗前的外周血用PCR和PCR-RFLP方法进行EGFR多态性的分析；所有病例采用调强适行放射治疗方式行根治性放疗；临床放射敏感性评价应用肿瘤体积消退率Rv表示。统计分析采用SPSS13．0软件包，用KruskalWallis Test和X2检验分别分析基因型与肿瘤消退率和临床病理特征的关系。结果：R497KGTV-T型比Lyx／Arg和Arg／Arg型的GTV-T、GTV-N以及GTV-T＋GTV-N体积消退率大，放射敏感性高（PGTV-T=0．000；PGTV-N=0．000；PGTV-T＋GTV．N=0．001）；Lys／Arg与Arg／Arg型GTV-T、GTV-N以及GTV-T＋GTV—N体积消退率无统计学差异（PGTV-T=0．209；PGTV-N=0．143；PGTV-T＋GTV-N=0．459）。CA总数≥38时GTV-T、GTV-N、GTV—T＋GTV—N体积消退率比CA〈38时大，敏感性高（PGTV-T=0．001；PGTV，N=0．001和PGTV-T＋GTV-N=0．000）。结论：11497K Lys／Lys型比Lys／Arg和Arg／Arg型病人对放射治疗更敏感；（CA）n重复序列总数≥38的比CA〈38的病人对放射治疗更敏感。因此，测定EGFR的多态性将有利于预测鼻咽癌病人放疗前的临床放射敏感性，对选择合适的病人进行分类治疗优化个体治疗方案，具有较强的临床应用潜力。     

大肠癌组织中血管内皮生长因子的表达及其临床意义

目的探讨大肠癌患者血管内皮生长因子(VEGF)与组织学分级和Dukes分期的关系.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测了68例大肠癌患者肿瘤组织中VEGF表达水平.结果肿瘤组织中VEGF表达水平在不同组织学分级之间比较,无显著性差异;Dukes C、D期组显著高于Dukes A、B期.结论检测大肠癌患者VEGF的表达,可作为判断大肠癌分期、预测淋巴结转移和远处转移的1个指标.     

DNA 倍体类型与鼻咽癌放射敏感性及预后关系的研究

 目的 探讨DNA倍体类型与鼻咽癌放射敏感性及预后的关系。方法 应用流式细胞术(FCM)分析45例放疗前鼻咽癌细胞的DNA倍体，放疗结束六个月评定疗效。对患者进行定期随访，分析DNA倍体性与鼻咽癌放射敏感性及预后有无相关性。结果 DNA倍体性与鼻咽癌临床分期、近期疗效、放射敏感性及预后均有明显的相关性，但与性别、病理类型无关。早期肿瘤(Ⅰ+Ⅱ期)的DNA异倍体率为11．11％(2／18)远低于晚期(Ⅲ+Ⅳ期)者的40．74％(11／27)(P<0．05)，异倍体肿瘤较二倍体肿瘤对放疗更敏感(P<0．01)，且异倍体肿瘤的近期疗效明显好于二倍体肿瘤(P<0．05)，但异倍体肿瘤的预后较二倍体肿瘤差(P<0．01)。结论 DNA倍体类型可作为评估鼻咽癌放射敏感性和预后的一个独立指标。FCM的肿瘤细胞DNA倍体分析可能成为鼻咽癌选择放疗分割方案的客观指标。