原发性CD5+弥漫大B细胞淋巴瘤临床病理及预后的差异分析

目的 探讨CD5⁺的原发性弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL)的临床病理学特征及其分子突变特征谱。方法 采用免疫组化染色和二代测序技术(NGS)检测,比较原发性CD5⁺ DLBCL和CD5^- DLBCL的病理学特征、免疫表型和基因变异谱的差异,分析其与患者临床病理特征及预后的关系。结果 311例DLBCL样本中CD5⁺DLBCL患者46例(14.7%)。CD5⁺DLBCL与CD5^-DLBCL、CD5⁺DLBCL伴MYD88 L265P变异和不伴MYD88 L265P变异相比,患者性别、临床分期和国际预后指数等差异无统计学意义(P>0.05)。免疫表型：CD5⁺DLBCL组BCL2过表达率(69.5%vs 49.4%,P=0.003)、BCL2和C-MYC双表达率(26%vs 14%,P=0.04)均高于CD5^-DLBCL组;CD...     

伴有MYD88 L265P突变的弥漫性大B细胞淋巴瘤肿瘤细胞及肿瘤微环境PD-L1的表达特征

目的:探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中MYD88 L265P突变对肿瘤细胞及肿瘤微环境中PD-L1表达的影响,为患者进行免疫治疗提供理论依据。方法:采用多重连接探针扩增技术检测2008年8月至2010年5月间经中国医学科学院肿瘤医院病理诊断明确的72例初治性DLBCL石蜡包埋样本中MYD88 L265P突变的发...     

miRNA-145对结肠癌细胞体外增殖、侵袭、凋亡的影响

目的:探讨miRNA-145对结肠癌细胞体外增殖、侵袭、凋亡的影响。方法:采用脂质体转染法转染miRNA-145拟似物、阻遏物和阴性对照物至HCT116细胞,采用荧光实时定量PCR法检测细胞内miRNA-145表达,采用MTT法检测细胞增殖活性,采用Transwell小室法检测HCT116细胞侵袭,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测转染后HCT116细胞凋亡情况。结果:转染后24 h、48 h、72 h时拟似物转染组细胞增殖活性显著低于空白对照组、阴性对照组和阻遏物转染组(P0. 05),空白对照组和阴性对照组细胞增殖活性差异无统计学意义(P0. 05),阻遏物转染组细胞增殖活性显著高于空白对照组、阴性对照组和拟似物转染组(P0. 05)。转染24 h、48 h、72 h时拟似物转染组miRNA-145表达显著高于空白对照组、阴性对照组和阻遏物转染组,阻遏物转染组miRNA-145表达显著低于拟似物转染组、空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P0. 05);空白对照组和阴性对照组miRNA-145表达水平差异均无统计学意义(P0. 05)。Transwell小室法检测结果显示,拟似物转染组穿膜细胞数显著少于空白对照组、阴性对照组和阻遏物转染组,阻遏物转染组穿膜细胞数显著多于空白对照组、阴性对照组和拟似物转染组,差异均有统计学意义(P0. 05);空白对照组和阴性对照组穿膜细胞数相比较差异均无统计学意义(P0. 05)。Annexin V-FITC/PI双染法检查结果显示,拟似物转染组细胞凋亡率显著高于空白对照组、阴性对照组和阻遏物转染组,阻遏物转染组细胞凋亡率显著低于空白对照组、阴性对照组和拟似物转染组,差异均有统计学意义(P0. 05);空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率相比较差异无统计学意义(P0. 05)。结论:miRNA-145表达异常是影响HCT116细胞增殖、侵袭、凋亡重要因素,为新的基因靶点的药物开发提供了思路。     

乙肝病毒X蛋白抑制小鼠足细胞系MPC5增殖并促进其凋亡

目的探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)对条件永生型小鼠足细胞系(MPC5)增殖与凋亡的影响。方法用携带HBx基因的pEX质粒转染MPC5细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证转染效率。实验分空白对照组(MPC5 group)、阴性对照组(MPC5-pEX-neo group)、HBx转染组(MPC5-pEX-HBx group)。MTT法检测足细胞存活率;流式细胞计量术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中nephrin、STAT3、JAK2、p-STAT3和p-JAK2、caspase-3蛋白表达。结果 HBx转染MPC5细胞48 h后HBx表达最高。HBx转染组中nephrin蛋白表达水平显著低于空白对照及阴性对照(均P0.01)。转染HBx基因后足细胞增殖明显受抑,同时凋亡率显著增高(均P0.01)。此外,HBx转染组STAT3、p-STAT3、JAK2和p-JAK2蛋白表达较空白对照及阴性对照组均显著增高(均P0.01), caspase-3在HBx转染组中的表达也显著增高(均P0.01)。结论 HBx可下调足细胞中nephrin蛋白表达,抑制足细胞增殖,并促进其凋亡的发生。其作用机制可能与STAT3/JAK2信号通路活化有关。     

TNFAIP3 siRNA对弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY1细胞NF-κB活性及增殖的影响

目的探讨A20(TNFAIP3)基因对弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞生长的影响及其与细胞内核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活化的关系。方法采用RNA干扰技术沉默A20,设计3条针对人A20mRNA的siRNA序列,经过lipofectamine RNAiMAX转染至OCI-LY1细胞(DLBCL细胞),用RT-PCR技术检测转染后OCI-LY1细胞内A20 mRNA的表达,用Western blot法检测A20和NF-κB(p65)蛋白的表达。用MTT法检测A20基因沉默后OCI-LY1细胞体外生长活力变化。结果 (1)siRNA转染组A20 mRNA及编码蛋白表达较未转染组及阴性对照组明显降低(P0.05);(2)转染组p65蛋白的表达较未转染组和阴性对照组明显增高(P0.05);(3)转染组细胞较未转染组、阴性对照组的OCI-LY1细胞体外生长活力明显增强。三组siRNA序列中siRNA-2序列干扰效果最明显。结论 DLBCL细胞中A20基因沉默会导致NF-κB活性增强,从而增强淋巴瘤细胞的生长活力。     

Nup88-shRNA对人结肠癌细胞株HT-29生长及侵袭力影响的实验研究

目的构建重组慢病毒介导的Nup88-sh RNA载体,由RNA干扰(RNAi)技术沉默Nup88,研究其对结肠癌HT-29细胞的增殖、黏附、侵袭和转移的影响,为结肠癌的临床基因治疗寻找新的靶点。方法 Nup88重组慢病毒载体的构建后包装检验效价,以最佳感染复数转染结肠癌HT-29细胞,实验分为沉默组、阴性对照组和空白组3组,其中沉默组分为Nup88-sh RNA1、Nup88-sh RNA2、Nup88-sh RNA3、Nup88-sh RNA4 4个亚组。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot印迹检测各组表达效率,主要是HT-29细胞的m RNA和蛋白;四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术检测Nup88基因被干扰后对HT-29细胞增殖和凋亡的影响;细胞侵袭实验检测Nup88基因被干扰后对HT-29细胞侵袭力的影响。结果沉默4组病毒及1组阴性对照均构建成功,滴度均为4E+8 TU/m L。沉默组Nup88 m RNA与阴性对照组和空白组相比,蛋白表达差异均有显著统计学意义(P0.01)。Nup88-sh RNA1转染后,沉默率可达到86%。沉默组细胞增殖程度显著减少,与空白组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。沉默组细胞凋亡率(30.28%±0.19%)显著增加,与阴性对照组(4.15%±0.24%)和空白组(2.98%±0.27%)相比,差异有统计学意义(P0.05)。培养肿瘤细胞常规24 h后,沉默组穿膜细胞数(120.5±8.7)和抑制率(49.22%)与阴性对照组(232.2±13.4,-2.14%)和空白组(276.4±10.2,0)相比,穿膜细胞数明显减少,抑制率明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 Nup88重组慢病毒可以通过RNAi成功抑制HT-29细胞中Nup88基因的表达,并能显著抑制其增殖及远处的侵袭能力。     

内质网应激诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡

目的探讨内质网应激(ERS)致雌激素受体阴性(ER-)人乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡及钙激活中性蛋白酶2(calpain2)在凋亡效应中的作用。方法实验设空白对照组(DMEM)、对照组(DMEM+DMSO)和实验组,用不同浓度衣霉素(TM)诱导乳腺癌细胞不同时间,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖抑制率及凋亡率;Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达量,以GRP78表达最高点确定ERS模型建立,检测凋亡相关蛋白caspase4和CHOP表达以及calpain及其内源性抑制酶calpastatin的表达,用ERS抑制剂(4-PBA)和calpain抑制剂(calpeptin)分别预处理细胞2 h,观察对上述效应的影响。结果 9、12和18μmol/L TM诱导ERS对该细胞增殖有明显抑制效应,抑制率分别为33.88%±1.32%、51.51%±8.85%和55.77%±2.61%,细胞凋亡率分别为9μmol/L TM组16.70%±0.46%和12μmol/L TM组28.1%±1.09%,与对照组相比有明显差异(P0.05);9μmol/L TM诱导细胞24 h的GRP78表达上调最高(P0.01);ERS还可明显上调caspase4、CHOP和calpain表达,下调calpastatin表达(P0.01或P0.05),上述效应均能被4-PBA和calpeptin减弱或阻断(P0.05)。结论 ERS可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,calpain2参与调控凋亡发生。     

慢病毒介导的RNA干扰沉默Slug基因对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默Slug基因,观察对结肠癌HCT116细胞增殖和周期的影响。方法:构建Slug基因特异性siRNA慢病毒载体,感染结肠癌HCT116细胞,设立空白对照组、阴性对照组及SlugsiRNA三组,应用Real-time PCR和Western blot方法分别从基因和蛋白质水平检测各组干扰质粒对Slug基因的干扰效果,MTT法检测Slug基因在siRNA作用下的细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞凋亡周期变化情况。结果:转染Slug siRNA后,结肠癌HCT116细胞中Slug基因mRNA和蛋白表达明显受到抑制(P<0.05);MTT检测,干扰组细胞增殖水平明显低于阴性对照组;流式细胞仪检测细胞G1期细胞百分比(52.3±0.6)高于阴性对照组(45.1±0.3,P<0.05)。结论:Slug siRNA能明显下调靶基因Slug的表达,在体外可抑制结肠癌HCT116细胞的生长并促进其凋亡。     

上调miR-143表达对CasKi人宫颈鳞癌细胞系增殖与凋亡的影响

目的探讨miR-143对CasKi宫颈鳞癌细胞增殖与凋亡活性影响。方法应用荧光定量RT-PCR法检测miR-143在人宫颈鳞癌组织中表达水平,以及miR-143在CasKi细胞株中表达水平与变化;人工合成miR-143模拟体转染CasKi宫颈鳞癌细胞系,采用流式细胞技术、MTT等实验方法探讨上调miR-143表达对CasKi癌细胞增殖活性与凋亡影响。结果宫颈鳞癌组织与宫颈鳞癌细胞株CasKi中miR-143表达水平较正常宫颈组织明显下调,其中2例鳞癌组织未能检测出miR-143表达。miR-143 mimics转染组miR-143表达显著高于空白对照组;MTT检测结果表明miR-143 mimics转染组中细胞增殖抑制明显,且抑制效应自转染48 h开始显现。细胞周期检测结果显示miR-143 mimics转染组G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,组间差异有统计学意义(P0.05)。荧光TUNEL检测结果亦显示miR-143 mimics转染组细胞凋亡率增加(9.45±2.31)%,高于阴性对照组(4.03±1.35)%与空白对照组(3.85±1.61)%,组间差异具有统计学意义(P0.05)。结论上调miR-143表达可抑制宫颈鳞癌细胞增殖活性,影响宫颈鳞癌细胞周期和诱导宫颈鳞癌细胞凋亡。     

AP2M1抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖和侵袭

目的 探究接头相关蛋白质复合体2亚基μ1(AP2M1)对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖和侵袭的调控作用。方法 将人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系OCI-LY8分为对照组、NC-LV组、AP2M1-LV组。用Lipofectamine 2000进行细胞转染。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。Western blot检测AP2M1、表皮生长因子受体(EGFR)、p-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和p-蛋白质激酶B(AKT)蛋白表达。结果 与对照组相比,AP2M1-shRNA组细胞中AP2M1的mRNA和蛋白相对表达量均降低(P<0.05),相对细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),迁移和侵袭细胞数量均升高(P<0.05);EGFR的蛋白相对表达量及PI3K和AKT的磷酸化水平均升高(P<0.05)。与对照组相比,AP2M1-LV组细胞中AP2M1的mRNA和蛋白相对表达量均升高(P<0.05),相对细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P...     

ADAM33在IL-4刺激的人气道平滑肌细胞中对NF-κB和TGF-β1表达的影响

目的 探讨解整合素-基质金属蛋白酶33(ADAM33)在白介素-4(IL-4)刺激的人气道平滑肌细胞(HASMCs)中对NF-κB和TGF-β1表达的影响,为进一步完善哮喘的发病机制提供理论基础.方法 以50μg/L的IL-4刺激HASMCs,以未刺激细胞组为对照,24h后实时荧光定量PCR法和Western blot法检测ADAM33的表达;设计并合成ADAM33-siRNA,IL-4刺激24h后瞬时转染ADAM33-siRNA,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测抑制率;并且检测TGF-β1、NF-κB mRNA和蛋白的表达情况.结果 50 μg/L的IL-4较对照组明显促进了HASMCs中ADAM33的表达(P＜0.05),在mRNA水平表达量增加约4.36倍,蛋白水平增加约3.3倍;ADAM33-siRNA-575明显抑制了ADAM33在HASMCs中的表达;干扰组、阴性对照组和空白对照组TGF-β1 mRNA的相对表达量分别为0.602±0.024、1.01±0.176和1.239 ±0.171,NF-κB mRNA的表达量分别为0.54±0.08、1.014±0.21和1.049±0.378;TGF-β1蛋白的表达量分别为0.227±0.016、0.7 ±0.048和0.715±0.025,NF-κB蛋白的表达量分别为0.335±0.048、0.922±0.04和0.943±0.046.干扰组TGF-β1、NF-κB不论是在mRNA水平,还是在蛋白水平,均明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).结论 ADAM33可能是IL-4调节人气道平滑肌细胞NF-κB/TGF-β1信号通路中的一个关键信号分子,有望成为防治哮喘的重要靶点.     

TRAF6基因对宫颈癌细胞体外生物学行为的影响及其相关机制

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)基因对于宫颈癌细胞生长、增殖、凋亡及浸润转移等生物学行为的影响,为将来人宫颈癌的生物治疗提供实验依据.方法:采用Western印迹方法检测TRAF6在宫颈癌细胞系(Hela,SiHa,CaSki和C33A)中的表达,构建TRAF6-shRNA干扰表达载体并转染人宫颈癌Hela细胞,而后使用MTT法、流式细胞仪分析法、Transwell侵袭小室实验法等方法分析TRAF6对Hela细胞活力、周期、凋亡以及迁移等生物学行为的影响,同时检测TRAF6对其靶基因NF-κB表达的影响,以及Cyclin D1,easpase 3和MMP-9等蛋白影响.结果:TRAF6在宫颈癌细胞系(Hela,SiHa,CaSki及C33A)中高表达,TRAF6 shRNA转染组Hela细胞的活力、增殖能力以及迁移能力明显低于阴性对照组和空白对照组Hela细胞(P＜0.05),TRAF6 shRNA转染组发生凋亡的Hela细胞所占比例明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),阴性对照组和空白对照组Hela细胞的活力、增殖能力、凋亡情况以及迁移能力无明显差异;TRAF6 shRNA转染组Hela细胞中NF-κB,Cyclin D1和MMP-9蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),caspase 3蛋白表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),NF-κB,Cyclin D1,caspase 3和MMP-9在阴性对照组和空白对照组表达没有明显变化.结论:TRAF6基因可能具有促进Hela细胞生长增殖及其侵袭迁移能力,抑制Hela细胞凋亡的作用,TRAF6基因的表达下调可能与人宫颈癌Hela细胞迁移能力下降、凋亡能力增加有关.     

沉默婆罗双树样基因4对前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡生物学行为的影响

目的:使用小干扰RNA(siRNA)抑制人前列腺癌LNCa P细胞中婆罗双树样基因4(SALL4)的表达并对抑制效果进行测定,检测沉默(SALL4)后LNCa P细胞增殖、集落形成及凋亡等生物学行为的变化。方法:培养LNCa P细胞,分为si-SALL4组、阴性对照组与空白对照组。Real-time PCR与Western blotting技术检测SALL4 mRNA与蛋白水平。采用MTS比色法观察各组细胞增殖能力的变化,采用集落形成实验观察各组细胞集落形成能力的变化,流式细胞术研究SALL4对细胞凋亡的影响,利用Western blotting方法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况。结果:与阴性对照组相比,si-SALL4组SALL4 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖能力、细胞集落形成能力均明显降低(P0.05),而凋亡细胞明显增加(P0.05),Bcl-2的表达减弱,而Bax的表达增强。结论:通过siRNA技术沉默(SALL4)表达可抑制前列腺癌LNCa P细胞增殖和集落形成能力,促进细胞凋亡,其促进凋亡作用可能与Bcl-2及Bax表达有关。     

Survivin基因对大肠癌细胞HT29生物学行为的影响

目的探讨Survivin基因对人大肠癌细胞HT29增殖及凋亡的影响。方法以脂质体Lip-2000为载体,用针对Survivin特异靶点的siRNA转染人大肠癌细胞HT29后,应用免疫细胞化学SP法、Western blot技术检测Survivin蛋白表达变化;采用MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞技术检测细胞凋亡。结果免疫细胞化学结果:正常对照组、脂质体对照组及阴性错配对照组中Survivin均呈细胞质强阳性表达,Survivin-siRNA组细胞质呈弱阳性表达;Western blot检测结果:Survivin-siRNA组细胞的蛋白条带亮度明显低于正常对照组、脂质体对照组和阴性错配对照组;MTT检测结果:与阴性错配对照组相比,Survivin-siRNA组细胞生长出现明显的抑制(P<0.05)。不同时段(24、48、72 h)肿瘤细胞增殖抑制率之间差异有显著性(P<0.05);流式细胞术检测结果显示Survivin-siRNA组细胞凋亡比例显著高于空白对照组及阴性错配对照组(P<0.01)。结论 Sur-vivin基因参与调控大肠癌细胞的增殖和凋亡,Survivin有望成为大肠癌基因治疗的新靶点。     

LKB1基因对前列腺癌细胞增殖的影响

目的探讨LKB1/STK11(liver kinase B1/serine-threonine kinase 11)基因过表达对前列腺癌细胞增殖的影响及其可能机制。方法构建LKB1重组过表达稳转细胞株和阴性对照组稳转细胞株,同时加入空白对照组,通过q PCR法检测各组细胞中LKB1 mRNA的转录水平,Western blot法检测各组细胞中LKB1蛋白的表达水平,CCK-8法检测各组细胞系的增殖能力。结果 Western blot和q PCR法检测空白对照组、阴性对照组、LKB1组PC-3细胞中LKB1蛋白及mRNA的表达,结果显示LKB1组PC-3细胞中LKB1表达显著升高。CCK-8法检测空白对照组、阴性对照组、LKB1组PC-3细胞0、24、48、72 h各时间点的细胞活力,发现LKB1组PC-3细胞的生长活力于铺细胞24 h后开始,明显低于空白对照组及阴性对照组PC-3细胞,LKB1组PC-3细胞与空白对照组PC-3细胞相比,生长速度受到明显抑制。结论 LKB1基因过表达可以抑制前列腺癌细胞的增殖,LKB1是抑制前列腺癌细胞增殖分子机制的潜在靶点。     

β-catenin在食管癌侵袭转移过程中的作用

目的探讨β-catenin在食管癌侵袭转移过程中的作用。方法转染有效的β-catenin基因siRNA干扰片段于食管癌Eca-109细胞中,下调β-catenin表达:CCK-8增殖实验检测沉默该基因对食管癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室实验检测对其侵袭、迁移能力的影响;Western blot法检测β-catenin表达下调后WISP2、TCF4及E-cadherin蛋白表达。结果 CCK-8增殖实验结果显示,干扰组(siRNA干扰片段有效转染的下调β-catenin组)细胞增殖能力明显低于空白对照组(未处理组)及阴性对照组(转染无意义片段组)(P0.05),而空白对照组与阴性对照组之间差异无统计学意义(P0.05)。Transwell小室实验结果显示,干扰组迁移、侵袭能力均低于空白对照组及阴性对照组(P0.05)。Western blot结果显示,WISP2、E-cadherin蛋白在干扰组中的表达量高于空白对照组及阴性对照组(P0.05);TCF4蛋白在干扰组中的表达量低于空白对照组及阴性对照组(P0.05)。结论在食管癌细胞中,下调β-catenin后,Wnt信号通路的相关因子也出现明显改变,推测沉默食管癌中Wnt信号通路β-catenin因子,E-cadherin表达增加,抑制上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT),阻碍食管癌细胞增殖,通过减少TCF4表达,促进下游靶基因WISP2表达,从而抑制肿瘤细胞侵袭、转移;β-catenin基因有望成为靶向治疗食管癌的候选基因。     

睾丸弥漫大B细胞淋巴瘤中MyD88及CD79B基因突变及意义

目的探讨睾丸原发性弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中MyD88及CD79B基因突变及意义。方法回顾性分析15例睾丸原发性DLBCL的临床病理学特点,采用免疫组化及Sanger测序法检测原发性DLBCL中MyD88及CD79 B基因突变,分析MyD88及CD79B基因突变与肿瘤临床病理学特点、NF-κB蛋白在细胞核表达之间的关系。结果免疫组化显示15例DLBCL均为非生发中心B(non germinal center B,non-GCB)细胞型,4例存在CD79B基因Y196位点突变(26.7%),7例存在MyD88基因L265位点突变(46.7%),3例同时存在CD79B及MyD88基因突变(20%)。8例患者获得随访,未发现CD79B及MyD88基因突变与预后的相关性。结论中国人睾丸原发性DLBCL中存在较高的CD79B基因Y196位点和(或)MyD88基因L265位点突变,为针对这些突变基因的分子靶向治疗提供依据。     

MiR-139-5p通过靶向CXCR4/PI3K/Akt信号通路增强鼻咽癌顺铂耐药细胞对顺铂的敏感性

目的 探讨miR-139-5p对鼻咽癌顺铂(DDP)耐药细胞DDP敏感性的影响及其相关作用机制。方法 培养鼻咽癌DDP耐药细胞株HNE1/DDP,分为miR-139-5p组、阴性对照组、DDP组和空白对照组, miR-139-5p组转染miR-139-5p类似物,阴性对照组转染阴性对照序列,DDP组和空白对照组不做转染处理。转染后miR-139-5p组、阴性对照组和DDP组均加入20 μmol/L DDP,空白对照组加入培养基,溴化吡啶(PI)单染后流式细胞术检测各组HNE1/DDP细胞凋亡率。采用Western blot检测HNE1/DDP细胞miR-139-5p组、阴性对照组和空白对照组磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化(p)-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt及趋化因子受体4(CXCR4)蛋白的相对表达水平。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-139-5p组、阴性对照组和空白对照组CXCR4 mRNA的表达水平。结果 空白对照组、DDP组、阴性对照组和miR-139-5p组HNE1/DDP细胞凋亡率分别是6.26%±1.19%、22.43%±3.88%、23.87%±3.21%和40.87%±4.04%, DDP组、阴性对照组和miR-139-5p组细胞凋亡率均高于空白对照组,miR-139-5p组细胞凋亡率高于DDP组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。Western blot检测显示,miR-139-5p组p-Akt、p-PI3K、PI3K及 CXCR4蛋白的相对表达量均低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.01)。实时荧光定量PCR检测结果显示, miR-139-5p组中HNE1/DDP细胞CXCR4的mRNA相对表达水平低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.01)。结论 转染miR-139-5p可提高鼻咽癌耐药细胞株HNE1/DDP对DDP的敏感性,其作用机制可能与抑制CXCR4的表达进而调控其下游PI3K/Akt信号通路的活化有关。     

弥漫大B细胞淋巴瘤中CD27的表达及临床意义

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL)中CD27的表达及其临床意义。方法采用免疫组化EnVision法检测143例DLBCL组织中CD27蛋白的表达;应用FISH技术检测DLBCL组织中MYC、BCL-2、BCL-6基因重排情况。结果 143例DLBCL中,CD27蛋白阳性者46例,阳性率为32.2%。CD27阳性组中BCL-2重排阳性率(17.4%)明显高于CD27阴性组(4.1%),差异有统计学意义(P0.01)。CD27阳性组病死率(30.4%)明显高于CD27阴性组(15.5%),差异有统计学意义(χ~2=4.326,P=0.038)。CD27阳性者与阴性者的Kaplan-Meier生存曲线差异有显著性(χ~2=4.485,P=0.034),阳性组生存期较短。结论 CD27高表达与DLBCL预后密切相关,可作为临床预后评价的指标之一。