去甲斑蝥素抑制蛋白激酶C影响乳腺癌细胞侵袭转移的研究

目的探讨去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)抑制乳腺癌细胞侵袭与转移的机制。方法应用迁移实验、趋化实验、transwell转移模型分别检测NCTD对不同侵袭力乳腺癌细胞株MCF-7、SKBR3和MDA-MB231的粘附、迁移和侵袭的影响;用Western blot检测NCTD作用前后乳腺癌细胞PKCζ表达的变化。结果 SKBR3和MDA-MB231的趋化、侵袭能力明显高于MCF-7;用NCTD处理后,三种乳腺癌细胞体外迁移、粘附和侵袭均受到不同程度抑制(P0.05);NCTD对SKBR3和MDA-MB 231细胞迁移、侵袭抑制作用明显高于MCF-7细胞株(P0.05),SKBR3和MDA-MB231细胞之间差异则无统计学意义(P0.05)。使用PKCζ抑制剂myristolated pseudosubstrate(PSζ)可促进NCTD抑制SKBR3和MDA-MB231的侵袭和迁移能力;经NCTD处理后,三种乳腺癌细胞PKCζ表达均降低。结论去甲斑蝥素可明显抑制人乳腺癌细胞株的细胞侵袭和迁移能力,其机制可能通过抑制PKCζ信号传导途径实现,与PKC抑制剂联用,可以增强治疗肿瘤的疗效。     

沉默整合素连接激酶基因抑制TCA8113舌癌细胞生长和侵袭

目的 研究沉默整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因表达,对人舌鳞癌细胞生长、侵袭和转移能力的影响.方法 通过用ILK mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染人舌鳞癌TCA8113细胞,分为TCA8113组、TCA8113 vector组和TCA8113 siILK组,通过筛选鉴定后,用MTT法、划痕试验和Transwell法分别检测细胞生长、迁移和侵袭能力,用Western blot分析细胞中ILK、p-Akt、p-GSK3β及Snail等的表达.结果 沉默ILK基因表达显著抑制了细胞的生长、迁移和侵袭能力,接种的第48、72、96、120小时,TCA8113 siILK组的抑制率分别为17％、29％、25％、42％,迁移能力较TCA8113组和TCA8113 vector组分别下降67％和66％,侵袭能力则较两个对照组下降了67％和68％,p-Akt、p-GSK3β及Snail的表达较TCA8113组和TCA8113 vector组分别降低了45％和53％,57％和61％,74％和73％.结论 抑制ILK基因的表达可通过Akt/GSK3β/Snail途径,显著抑制人舌鳞癌TCA8113细胞的生长、迁移和侵袭潜能,可作为治疗人舌鳞癌的靶蛋白.     

雷帕霉素抑制肝癌细胞生长及转移的实验研究

目的探讨具有抗肿瘤特性的新型免疫抑制剂雷帕霉素(RPM)对肝癌细胞生长及转移的作用。方法应用流式细胞仪检测RPM(10 ng/m l)、环孢素(CsA)(100 ng/m l)、以及两者合用对人肝癌高转移细胞株MHCC97H细胞凋亡及细胞周期的影响;应用MTT法检测上述药物对细胞增殖的影响。用实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测RPM处理后血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA、缺氧诱导因子-1α(H IF-1α)mRNA、转化生长因子b(TGFb)的表达。ELISA法检测MHCC97H培养液上清VEGF蛋白水平的变化。28只原位种植高转移性人肝癌模型LC I-D20裸鼠,随机分为CsA(25 mg/kg)组、RPM(2 mg/kg)组、CsA+RPM组及对照组(生理盐水),每组7只;探讨免疫抑制剂对肿瘤生长及自发肺转移的影响。结果体外实验中,RPM抑制了MHCC97H细胞的增殖,并使细胞停滞于G0/G1期,但未促进细胞凋亡。RPM下调了H IF-1α和VEGF的基因表达及MHCC97H培养液上清VEGF蛋白的表达(890.3 pg/m l±25.1 pg/m lvs 1583.7 pg/m l±17.3 pg/m l,P=0.000)。CsA对细胞周期及增殖无影响。体内实验中,RPM及CsA+RPM抑制了LC I-D20模型移植瘤的生长(0.76 g±0.38 g vs 2.09 g±0.75 g,P=0.001;0.40 g±0.22 g vs 2.09 g±0.75 g,P=0.000)及肺部转移的发生(均为2/7 vs 7/7,P=0.021)。CsA组肺部自发转移灶的数目多于对照组(6±2 vs 4±1,P=0.046)。结论RPM能明显抑制肝癌细胞的生长及转移,以RPM为基础的免疫抑制方案在肝癌肝移植中可能有临床应用前景。     

斑蝥素抑制人宫颈癌Hela细胞增殖的研究

目的:研究斑蝥素(CTD)对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用和机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CTD对Hela细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析Hela细胞周期及CTD对细胞周期的影响。结果:CTD对Hela细胞24、48和72h的IC50值分别为3.2、2.5和1.4μg/ml。CTD浓度为3.2μg/ml时,细胞周期滞留在G2期。结论:CTD对Hela细胞的增殖有抑制作用;流式细胞仪显示细胞周期出现明显的G2/M期阻滞。     

PRN4C裸基因抑制人肝癌细胞生长及转移的体内实验研究

目的 :研究RTN4C裸基因直接注射抗肝癌生长及转移复发作用。方法 :将RTN4C装入逆转录病毒载体 ,扩增提取RTN4C裸基因 ,以LacZ为对照组。将不同裸基因和生理盐水与LCI D2 0裸鼠人肝癌同时皮下接种或待LCI D2 0肝癌成瘤后注射 ,观察对肿瘤成瘤和生长影响。LCI D2 0肿瘤裸鼠皮下接种后 10天 ,分别瘤内注射不同裸基因 ,观察其对肿瘤生长转移影响。LCI D2 0肿瘤肝内接种 ,接种后 2 2天行肝癌切除术 ,术中经切缘或脾内注射不同裸基因 ,观察其对术后转移复发的影响。结果 :不同裸基因与LCI D2 0肝癌同时皮下接种对照组、LacZ组、RTN 4C组 ,肿瘤直径分别为 (1 81± 0 12 )cm ,(1 6 1± 0 2 7)cm、 (0 4 3± 0 0 4 )cm。裸基因肿瘤内注射对照组、LacZ组、RTN4C组 ,瘤径 (cm)分别为 0 91± 0 0 9,0 90± 0 0 6 ,0 2 5± 0 0 4 ;肝癌切除术应用裸基因转移灶累及部位数、切缘复发瘤直径、肝内转移灶数目 ,转移灶累及肝叶数在对照组、LacZ组与RTN4C组间存在显著差异。脾内注射效果优于肝切缘组注射。结论 :RTN4C裸基因注射具有抑制LCI D2 0肝癌生长及防治肝癌切除术后转移复发作用     

野生型p53基因抑制舌鳞癌细胞株Tca8113在裸鼠体内生长及增殖研究

为考察野生型ｐ５３基因转移入舌鳞癌细胞株Ｔｃａ８１１３后，癌株在裸鼠体内的生长及增殖状态，作者采用电穿孔方法分４组进行了如下基因转移：野生型ｐ５３基因，空白对照质粒，突变型ｐ５３基因和未转移任何基因的空白对照。在基因转移进入舌鳞癌细胞株Ｔｃａ８１１３后，分别接种于１６只裸鼠体内。成瘤后分别进行常规病理学、定量病理学和免疫组织化学研究。结果：转染野生型ｐ５３基因组与其余３组比较，其形成的肿瘤重量明显为轻；肿瘤异常核分裂相减少；定量病理学显示肿瘤坏死区面积所占瘤体总面积的百分比明显降低；免疫组织化学显示非坏死区增殖细胞核抗原明显更低。上述结果提示肿瘤细胞获取了功能完好的外源性野生型ｐ５３基因后，其基因表达并产生了新的负性调节因子，抑制了肿瘤的生长和增殖。并从理论上证明了利用野生型ｐ５３基因口腔粘膜鳞癌进行基因治疗是可能的。     

舌颌颈联合根治术加胸大肌肌皮瓣转移舌再造术

1　病例介绍例 1,男 ,38岁 ,汉族 ,已婚。因舌左侧溃烂 3个月 ,入院。查体 :舌尖背部左侧可见一 (2 .8× 2 .8)cm2 大小溃疡面 ,边缘不规则 ,呈菜花样隆起 ,中央部凹陷 ,表面有乳白色伪膜 ,触之易出血溃疡基底部质地较硬 ,边界清楚 ,有触痛 ,边缘过舌中线。左颌下、颏下各可扪及一 (0 .6× 0 .6 )cm2 大小淋巴结 ,质地中等 ,可活动 ,有触压痛。左颈部胸锁乳突肌中上份前缘可扪及一 (2 .0× 3.0 )cm2 大小肿大的淋巴结 ,质地偏硬 ,周界清 ,活动度小 ,有触压痛。活检报告 :鳞状细胞癌 ,中度分化。给予平阳霉素行术前化疗 ,总量达 2 12mg。舌体…     

去甲斑蝥素和去甲斑蝥酸钠释放及影响

目的:以去甲斑蝥素和去甲斑蝥酸钠为模型药物,比较其从聚合物基质中的释放行为。方法:采用混合和压膜方法制备载药的聚己内酯片,然后剪切成小片后考察其在不同浓度的磷酸缓冲盐和含有不同浓度氯化钠的磷酸缓冲盐中的释药行为,并探讨其释药机制。结果:去甲斑蝥酸钠的释药行为受磷酸缓冲盐浓度以及磷酸缓冲盐中氯化纳浓度的影响,而去甲斑蝥素的释药行为则基本不受其影响。结论:去甲斑蝥素和去甲斑蝥酸钠从聚合物中释药行为差异主要由药物渗透压引起,渗透压是影响药物释放的重要因素。     

舌癌颈淋巴结转移的临床分析

目的：探讨舌癌颈淋巴结转移的规律。方法：回顾性分析1992年7月-2004年12月间收治的54例舌癌临床资料。结果：本组患者舌癌的转移率是42．59％(23／54)；50岁以上患者占75．93％(41／54)，其中发生颈淋巴结转移的占51．22％(21／41)；受累淋巴结位于颌下区和颈深上区达72．34％(34／47)；临床颈淋巴结阴性(cNo)的患者颈淋巴转移率是30．43％(7．／23)。结论：舌癌颈淋巴结转移与年龄、肿瘤发生部位密切相关，部分患者可发生早期的隐匿性转移，颌下和颈深上区是舌癌转移的集中部位。     

血根碱对人类宫颈癌细胞生长和转移的抑制作用

目的利用宫颈癌细胞株探讨血根碱（SAN）的抗肿瘤作用。方法采用MTT、克隆形成及细胞划痕试验研究不同浓度SAN对体外培养的人类宫颈癌HeLa和Siha细胞的影响。结果经1.0μmol/L和5.0μmol/LSAN处理后,Siha细胞的存活率分别为对照组的72%和10%（P〈0.01）,HeLa细胞比Siha细胞更敏感。用1.0μmol/LSAN处理后,HeLa和Siha细胞的克隆形成数从33个降低到14个和16个（P〈0.05）。划痕试验显示培养48h后,HeLa细胞和Siha细胞的“细胞伤口”宽度对照组分别为（0.51±0.04）mm和（0.64±0.02）mm,而0.5μmol/LSAN处理组为（1.22±0.02）mm和（1.63±0.01）mm（分别P〈0.01和P〈0.05）。MTT、克隆形成及细胞划痕试验均呈剂量和时间依赖性。结论SAN可抑制宫颈癌细胞的生长和转移。该研究为SAN作为一种新药应用于宫颈癌的治疗提供了初步的实验依据和理论基础。     

表皮生长因子受体在舌癌患者常见舌苔中的表达

目的：检测表皮生长因子受体（EGF—R）在舌癌患者常见舌苔中的表达水平,探讨EGF—R与舌苔形成的关系。方法：选择口腔舌鳞癌切除术患者,根据不同舌苔分为白薄苔组、白厚苔组、黄薄苔组、黄厚苔组及无苔组;并将胎儿正常白薄苔设为对照组。应用基因芯片初筛、荧光定量PCR技术定量检测舌癌患者舌黏膜EGF—RmRNA的表达水平。结幂：不同舌苔EGF—R mRNA表达水平差异明显,从高到低依次为：黄厚苔〉白薄苔〉黄薄苔〉无苔〉白厚苔,且均高于对照组。结论：不同舌苔舌上皮细胞EGF—R基因表达水平存在明显差异,EGF—R可能是影响舌苔形成的重要因素之一。     

Repair and Reconstruction of Large or Whole Tongue Defects following Surgical Treatment of Tongue Cancer

Since1978,we have repaired and reconstructed 17 patients of largeor whole tongue defects following surgical treatment of tonguecancer successively using four sorts of flaps,deltopectonal,forehead,free forearm and pectoralis major myocutaneous,so as to restorethe shape and functions of the tongue.The results are satisfactory.Methods of using the four different flaps are discribed and theiradvantages and disadvantages are discussed in this article.     

中频交变磁场抑制人舌鳞癌细胞的增生

目的 探讨不同强度的交变磁场辐照对人舌鳞癌细胞(TCa8113)增生的影响.方法 不同强度的交变磁场(5mT、8mT、11mT)对人舌鳞癌细胞进行连续3天的辐照刺激,每天1h,通过MTT法和流式细胞术检测细胞的增生、凋亡和细胞周期的变化.对照组(假实验组)采用相同的实验条件和作用时间但不加磁场辐照.结果 MTT法检测实验组与对照组辐照后24h、48h、72h的OD值,通过SPSS软件分析显示实验组比对照组的OD值显著降低(P<0.01).流式细胞术检测电磁场组与对照组细胞凋亡率无差异.但细胞周期有显著改变(0.5mT).结论 不同强度的交变磁场辐照对人舌鳞癌细胞增生有明显抑制作用,并可阻滞细胞周期,但对舌鳞癌细胞的凋亡未发现明显影响.     

miR-26a通过调节MTDH基因表达抑制CAOV3细胞系生长

目的 检测miR-26a在卵巢癌组织的表达改变,明确miR-26a调控卵巢癌细胞生长的分子机制.方法 运用qRT-PCR检测52例卵巢癌及相应癌旁组织中miR-26a的表达改变;将miR-26a mimics转染卵巢癌细胞CAOV3,以MTDHsiRNA为阳性对照,采用Western blot检测其对MTDH蛋白表达水平的影响;然后采用MTT法检测高表达miR-26a对CAOV3细胞生长增殖的影响. 结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-26a在52例卵巢癌组织中表达下调;Western blot结果显示,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制MTDH蛋白的表达.MTT检测发现,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制人CAOV3细胞的生长（P＜0.05）. 结论 miR-26a通过调节MTDH基因的表达而抑制卵巢癌细胞的生长.     

靶向Cdc6 RNAi抑制舌癌CAL-27细胞的增殖

 【目的】 应用RNA干扰技术,靶向抑制舌癌细胞中Cdc6的表达,观察舌癌细胞增殖、凋亡等改变,初步探讨下调Cdc6表达抑制舌癌细胞增殖的分子机制。【方法】 实验分4组:空白对照组CON,阴性对照组NC,实验组KD1和KD2。应用前期构建的Cdc6的慢病毒载体,转染舌癌CAL-27细胞,通过Real time RT-PCR和Western blot法检测Cdc6 mRNA及蛋白的表达;以MTT法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线;利用流式细胞仪观察细胞凋亡。【结果】 慢病毒载体转染CAL-27细胞后,Real time RT-PCR和Western blot实验结果显示:舌癌CAL-27细胞中Cdc6的表达明显被抑制,相对NC组,KD1、KD2组对Cdc6基因敲减效率分别为55.60%和64.38%。蛋白表达分别降低44.44%和66.67%;细胞生长曲线表明,细胞生长明显减缓,KD1和KD2组细胞生长抑制率分别为33.68%和35.79%;流式细胞仪检测细胞周期显示:KD1组、KD2组两组细胞凋亡率较NC组均有显著上升,分别为57.55%和83.81%。【结论】 靶向Cdc6慢病毒载体RNA干扰能有效抑制舌癌CAL-27细胞的DNA复制,阻止舌癌细胞的增殖。     

量子点为载体转染survivin siRNA至人舌鳞癌Tca8113细胞的研究

目的靶向survivin基因的siRNA通过量子点为载体转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,研究其对survivin基因表达的影响,为量子点在肿瘤的基因治疗方面提供实验依据。方法 Survivin siRNA通过量子点转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,同时设立LIPOFECTTAMINE2000脂质体为转染载体的对照组以及未转染的空白组,采用实时定量RT-PCR检测各组Tca8113细胞中survivin mRNA表达的改变情况。结果实验组用50pmolQD转染100pmol survivin siRNA入Tca8113细胞48h后,检测到survivin siRNA mRNA表达量相对于空白组下降64%,QD与siRNA的使用比例为1∶2;对照组中用100pmol lipofectamine2000脂质体转染100pmol survivin siRNA入Tca8113细胞48h后,检测到survivin siRNA mRNA表达量相对于空白组下降90%,QD与siRNA的使用比例为1∶1。结论量子点为载体转染survivin siRNA能够有效的抑制Tca8113细胞survivin mRNA的表达,量子点有望作为RNA干扰技术的新型载体。     

舌癌广泛切除后即刻舌再造

33例舌癌半舌以上切除后行即刻舌再造,成功30例(90.90%)。舌体缺损或伴有口底、下颌骨方块缺损的,以前臂游离皮瓣再造为好,尤其前臂尺侧皮瓣,部位更为隐蔽;舌体缺损伴口底或下颌骨较大缺损和舌根缺损伴下颌升支甚至咽侧缺损的,以胸大肌肌皮瓣再造为好。     

舌苔与表皮生长因子(EGF)关系的临床研究

目的　分析不同舌苔和肿瘤病人舌苔变化与唾液中人表皮生长因子 (h -EGF)含量的关系。方法　采用放射免疫分析法 (RIA)。结果　 4 2 5例住院病人中 ,h-EGF含量依次分别为 :1 98例薄苔为 (3 .0 84± 1 .6) μg/L ,2 0 3例厚苔为 (3 .671±1 .2 ) μg/L ,2 1例花剥、镜面苔为 (1 .65 3± 1 .9) μg/L,3例灰苔为 (2 .0± 0 .7) μg/L ,相互之间有高度显著性差异 (P <0 .0 1 ,两两比较 )。 1 5 2例肿瘤病人与 2 4 9例非肿瘤病人唾液中h-EGF分别为 (4.0 70± 1 .0 ) μg/L和 (3 .0 60± 1 .6) μg/L ,两者有高度显著性差异 (P <0 .0 1 )。进一步分析表明 ,无论是肿瘤病人还是非肿瘤病人 ,呈厚苔者其唾液中h -EGF的含量均高于呈薄苔者及正常人。结论　唾液中h-EGF含量的高低与肿瘤病人和非肿瘤病人舌苔苔质的厚薄、剥脱之间有密切的关系 ;肿瘤病人唾液中h -EGF含量明显高于正常人和非肿瘤病人 ;h -EGF与人类舌苔的形成、舌苔的增厚有密切的关系     

血管内皮生长因子m-RNA表达与大肠癌生长转移的关系

目的 :探讨血管内皮生长因子表达与大肠癌组织的生长、侵袭和转移关系。方法 :应用逆转录聚合酶链(RT- PCR)法 ,对 2 3例大肠癌组织、远癌组织及 16例结肠息肉的血管内皮生长因子基因进行扩增。结果 :2 3例大肠癌组血管内皮生长因子 m RNA阳性率 6 5 .2 2 % ,明显高于远癌组 (2 1.74 % )及结肠息肉组 (18.75 % )。差异有显著性 (P<0 .0 1)。且与大肠癌临床病理分期有关。结论 :血管内皮生长因子 m RNA可作为大肠癌生长、侵袭和转移的临床预后判断指标