FAK基因沉默促进舌癌细胞失巢凋亡及抑制转移的实验研究

目的:研究黏着斑激酶(FAK)基因沉默是否可促进舌癌细胞系Tca8113失巢凋亡,进而逆转其失巢凋亡抗性,抑制舌癌细胞侵袭转移。方法:以舌癌细胞株Tca8113为研究对象,首先利用RNA干扰方法抑制FAK基因表达。采用poly-HEMA诱导悬浮培养,进而采用流式细胞仪观察体外培养过程中,FAK基因沉默对舌癌细胞株Tca8113失巢凋亡抗性的影响。最后以划痕实验、Transwell小室侵袭模型研究舌癌细胞迁移及侵袭能力。结果 :在体外培养过程中,Tca8113细胞具有很强的失巢凋亡抗性。针对FAK的siRNA可显著下调FAK基因的表达。当FAK基因下调后,Tca8113细胞失巢凋亡抗性显著下降(P<0.01),并且细胞的侵袭及迁移能力明显下降(P<0.01)。结论:FAK基因沉默可促进失巢凋亡,逆转舌癌细胞失巢凋亡抗性,进而抑制其转移,是一个潜在的抗舌癌转移分子治疗的靶点。     

羟基喜树碱对人舌癌细胞的抑制作用及端粒酶活性的影响

目的研究化疗药物羟基喜树碱对人舌癌Tca8113细胞的抑制作用和对端粒酶活性的影响,初步探讨端粒酶作为化疗敏感性指标的可行性.方法应用MTT法、双层琼脂培养法、透射电镜观察、流式细胞术,TRAP-PCR-ELISA法研究.结果羟基喜树碱对人舌癌Tca8113细胞有明显的抑制作用且呈浓度依赖性,细胞超微结构有明显改变,细胞周期发生明显变化(S期细胞由23.9%变为39.5%,G0/G1期细胞由72.4%变为39.0%),抑制端粒酶活性且有一定的时间依赖性(用109ng/ml羟基喜树碱处理Tca8113舌癌细胞后24,48,72和96 h端粒酶活性分别为(0.57±0.07),(0.35±0.02),(0.18±0.04),(阴性).结论羟基喜树碱可以明显抑制Tca8113细胞的增值活性及其转移复发倾向,还可作用于线粒体,在细胞周期改变的同时抑制端粒酶活性.     

Iressa与顺铂联合抑制舌鳞癌细胞增殖的实验研究

 【目的】探讨EGFR靶向治疗药物Iressa与顺铂联用对舌鳞癌细胞增殖的抑制作用。【方法】采用MTT的方法检测Iressa与顺铂联用对舌鳞癌细胞系Tscca和Tca8113抑制作用的效率。【结果】Iressa抑制Tscca和Tca8113细胞增殖的IC50值分别为18.03 μmol/L和29.98 μmol/L(P=0.002);Iressa与顺铂联用加强了对舌鳞癌细胞系Tscca、Tca8113的增殖抑制,而且当Iressa提前24h或48h使用时,这种协同作用更加明显。【结论】Iressa可抑制舌鳞癌细胞系Tscca和Tca8113的增殖,与顺铂联用可协同抑制Tscca和Tca8113的增殖,这种抑制作用具有浓度和顺序依赖性。     

口腔癌相关成纤维细胞对舌癌细胞株增殖活性的影响

目的本研究拟通过体外实验观察口腔癌相关成纤维细胞（carcinoma-associated fibroblasts，CAFs）对舌癌细胞增殖能力的影响。方法建立口腔CAFs与舌癌细胞株Tca8113的交互作用模型，对Tca8113进行形态学观察，并通过MTT法及流式细胞术，观测口腔CAFs对Tca8113增殖活性及细胞周期的影响。结果CAFs和Tca8113直接混合培养组的Tca8113细胞形态及生长方式发生变化；与正常成纤维细胞（normal fibroblasts，NFs）相比，CAFs增强了Tca8113的增殖活性（P〈0．05），并提高了处于S期和G2期的癌细胞的比例（48．1％ vs 40．0％）。结论口腔CAFs可在体外促进舌癌细胞株Tca8113的增殖，提示其在口腔鳞癌发展中起重要作用。     

Iressa与顺铂联合抑制舌鳞癌细胞增殖的实验研究

【目的】探讨EGFR靶向治疗药物Iressa与顺铂联用对舌鳞癌细胞增殖的抑制作用。【方法】采用MTT的方法检测Iressa与顺铂联用对舌鳞癌细胞系Tscca和Tca8113抑制作用的效率。【结果】Iressa抑制Tscca和Tca8113细胞增殖的IC50值分别为18.03 μmol/L和29.98 μmol/L（P=0.002）;Iressa与顺铂联用加强了对舌鳞癌细胞系Tscca、Tca8113的增殖抑制,而且当Iressa提前24h或48h使用时,这种协同作用更加明显。【结论】Iressa可抑制舌鳞癌细胞系Tscca和Tca8113的增殖,与顺铂联用可协同抑制Tscca和Tca8113的增殖,这种抑制作用具有浓度和顺序依赖性。     

口腔癌相关成纤维细胞对舌癌细胞株增殖活性的影响

目的本研究拟通过体外实验观察口腔癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)对舌癌细胞增殖能力的影响。方法建立口腔CAFs与舌癌细胞株Tca8113的交互作用模型,对Tca8113进行形态学观察,并通过MTT法及流式细胞术,观测口腔CAFs对Tca8113增殖活性及细胞周期的影响。结果CAFs和Tca8113直接混合培养组的Tca8113细胞形态及生长方式发生变化;与正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)相比,CAFs增强了Tca8113的增殖活性(P<0.05),并提高了处于S期和G2期的癌细胞的比例(48.1%vs40.0%)。结论口腔CAFs可在体外促进舌癌细胞株Tca8113的增殖,提示其在口腔鳞癌发展中起重要作用。     

姜黄素对Tca8113细胞周期各时相的影响

目的:探讨姜黄素对Tca8113(人舌癌细胞株)细胞株的诱导分化作用及对细胞周期各时相的影响.方法:应用MTT比色法和流式细胞仪检测姜黄素对Tca8113细胞的增殖抑制率及细胞周期的改变,并通过电子显微镜观察其亚细胞结构的改变.结果:姜黄素对Tca8113细胞增殖有明显抑制作用,且呈剂量依赖性.流式细胞仪分析,G1期细胞增高,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多.亚细胞结构:细胞空化,核仁不规则.结论:姜黄素能够抑制Tca8113细胞增殖,阻止G1期细胞向S期的进程.S期细胞减少,G2/M期细胞增多,促进Tca8113细胞凋亡.     

异土木香内酯对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的 研究异土木香内酯对舌鳞癌细胞Tca8113的增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 用CCK-8法检测异土木香内酯作用于舌鳞癌Tca8113细胞的半数抑制浓度(IC50),EDU实验方法检测异土木香内酯抑制Tca8113细胞增值能力.检测土木香内酯对Tca8113细胞凋亡影响实验.Western Blot检测异土木香内...     

青蒿琥酯联合阿霉素对人舌鳞癌Tca8113细胞抑制作用的实验研究

目的研究青蒿琥酯(Art)与阿霉素(ADM)联合应用对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响。方法通过MTT法测定Art和ADM对Tca8113细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术分析细胞周期变化;利用吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色观察经Art作用前后Tca8113细胞形态的改变;应用透射电镜观察药物对细胞超微结构的影响。结果 Art和ADM对Tca8113有显著地抑制增殖和诱导凋亡作用,并呈明显的时间-剂量效应(P0.05);Art(25μg.mL-1)和ADM(0.39～1.56μg.mL-1)联合给药可对Tca8113产生增强的联合杀伤效果(P0.01);流式细胞术检测Art可使细胞周期阻滞于G2/M期和S期;透射电镜和荧光染色观察可见凋亡细胞染色质凝聚、边集呈新月形。结论 Art对Tca8113细胞有显著地抑制作用,其机制可能为阻滞细胞周期于G2/M期和S期以及诱导细胞凋亡。Art与ADM合用具有较好联合效应,可增强Tca8113对ADM的敏感性。     

Ebp1基因对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用

 目的 研究异位表达ebp1基因对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖能力的影响。方法 pcDNA3.1- ebp1真核表达载体稳定转染舌鳞状细胞癌细胞系（Tca8113）。Western blot和RT-PCR验证稳定转染细胞中ebp1的表达;观察细胞生长、增殖,细胞周期改变,通过软琼脂克隆形成,裸小鼠体内成瘤等方法来评价ebp1抑制肿瘤细胞生长的作用。结果 Ebp1转染细胞的细胞生长、增殖明显受抑制,细胞周期改变,G0/G1和G2/M细胞增多,而S期细胞减少,软琼脂克隆形成率明显下降;移植小鼠模型中肿瘤平均直径和重量Tca-0细胞明显大于Tca-1细胞和Tca-3细胞。结论 Ebp1异位表达对Tca8113有多种抗肿瘤特性,可进一步探讨将ebp1基因作为舌鳞状细胞癌的治疗措施的可能性。     

miR-200c对舌癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨 miR-200c 对人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法将 miR-200c 的模拟物通过脂质体转染到人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞内,通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率、Western blot 检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和 Bcl-2蛋白的表达。结果与对照组相比,miR-200c 模拟物20、40、80 nmol／L 组的 Tca8113细胞生长受到明显抑制,差异有统计学意义（P ＜0．05）,miR-200c 模拟物的浓度越大,作用时间越长,抑制效果越明显（P ＜0．05）;转染 miR-200c 模拟物48 h 后,Tca8113细胞停滞于 G0／G1期,细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（P ＜0．05）;Western blot 证明20、40、80 nmol／L 组 Bcl-2蛋白表达量明显低于对照组,而 Caspase-3蛋白表达量明显高于对照组（P ＜0．05）。结论miR-200c 过表达可抑制舌癌 Tca8113细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

一氧化氮诱导口腔鳞癌细胞凋亡和 P53蛋白表达的实验研究

目的：研究外源性一氧化氮（NO）对人舌鳞癌Tca8113细胞诱导凋亡的作用及可能机制。方法：硝普钠（SNP）作为NO的供体，用不同时间和不同浓度SNP处理细胞。采用MTT法检测N（）对细胞的生长抑制，丫啶橙染色、Wright—Giemsa染色、流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡作用，蛋白电泳法分析细胞凋亡机制。结果：NO对Tca8113细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖性。SNP处理细胞后，DNA、RNA合成减弱；细胞形态学出现凋亡的特征性改变；电泳可见典型的DNA Ladder形成；流式细胞仪上见随着SNP浓度增高，细胞凋亡随之增加，并出现G2／M期阻滞；Western blot显示随着SNP浓度增高，P53蛋白表达水平上调。结论：外源性NO对人舌鳞癌Tca8113细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用，P53蛋白介入了硝普钠引起的细胞凋亡调控作用。     

恒磁场诱导联合平阳霉素化疗对人舌癌细胞的作用

目的：观察恒磁场诱导下，人舌癌细胞增殖周期的变化，与平阳霉素联合，二者具有的协同抗癌作用。方法：利用体外培养的人舌癌Ｔｃａ８１１３系细胞分为四组：对照组、磁场组、平阳霉素组和磁场诱导联合平阳霉素组（简称联合组）。用倒置显微镜定时观察细胞的生长状态并照像。流式细胞仪分析结果。结果：均以对照组为参照，恒磁场诱导可使Ｇ０Ｇ１期的细胞比例上升，而Ｓ、Ｇ２Ｍ期的细胞比例下降。细胞增殖指数下降（Ｐ〈０．０５）     

顺铂对人舌癌细胞的抑制作用和对端粒酶活性的影响

目的 研究化疗药物顺铂对人舌癌Tca8113细胞的抑制作用和对端粒酶活性的影响及其抗癌机制、并初步探讨端粒酶作为化疗敏感性指标的可行性。方法 应用顺铂处理的人舌癌Tca8113细胞为用药组，相同条件培养但不用药的细胞为对照组。MTT法研究细胞的生长和增殖情况，双层琼脂培养法研究细胞的克隆形成率，透射电镜观察细胞的超微结构，应用流式细胞术检测细胞周期，TRAP-PCR—ELISA法检测人舌癌Tca8113细胞端粒酶活性。结果 顺铂对人舌癌Tca8113细胞有明显的抑制作用，且呈浓度依赖性；能明显改变细胞大体形态和超微结构；抑制端粒酶活性且有一定的时间依赖性；细胞周期改变不明显。结论 顺铂可以明显抑制Tca8113细胞的增殖活性及其转移复发倾向、还可作用于线粒体，抑制端粒酶活性，对细胞周期的改变不明显。     

非病毒载体介导的基因转染效率及其对人舌鳞癌细胞生长增殖的影响

[目的]观察多种非病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在舌鳞癌细胞内的表达情况,评价各载体的转染效率及其对细胞生长增殖的影响.[方法]采用pEGFP-N1评估阳离子脂质体、聚酰胺-胺型树枝状高聚物(PAMAM-D)以及SuperFect纳米微粒在舌鳞癌Tca8113细胞中的转染效率;绘制生长曲线,计算细胞的相对存活率,流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡.[结果]第5代(G5)PAMAM-D的转染效率明显高于第2代(G2)PAMAM-D(42.1%vs 19.4%,P=0.003),与SuperFect和脂质体转染组的结果无统计学差异(42.1%vs35.9%和42.1%vs47.7%,P＞0.05).G5 PAMAM-D对细胞的生长增殖无明显影响(P＞0.05),而脂质体转染组细胞的生长增殖受到明显的抑制(P=0.001),细胞凋亡水平升高(P=0.01).[结论]G5 PAMAM-D载体安全低毒,转染效率高,是一种有良好应用前景的新型纳米载体基因转移系统.     

靶向Cdc6 RNAi抑制舌癌CAL-27细胞的增殖

 【目的】 应用RNA干扰技术,靶向抑制舌癌细胞中Cdc6的表达,观察舌癌细胞增殖、凋亡等改变,初步探讨下调Cdc6表达抑制舌癌细胞增殖的分子机制。【方法】 实验分4组:空白对照组CON,阴性对照组NC,实验组KD1和KD2。应用前期构建的Cdc6的慢病毒载体,转染舌癌CAL-27细胞,通过Real time RT-PCR和Western blot法检测Cdc6 mRNA及蛋白的表达;以MTT法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线;利用流式细胞仪观察细胞凋亡。【结果】 慢病毒载体转染CAL-27细胞后,Real time RT-PCR和Western blot实验结果显示:舌癌CAL-27细胞中Cdc6的表达明显被抑制,相对NC组,KD1、KD2组对Cdc6基因敲减效率分别为55.60%和64.38%。蛋白表达分别降低44.44%和66.67%;细胞生长曲线表明,细胞生长明显减缓,KD1和KD2组细胞生长抑制率分别为33.68%和35.79%;流式细胞仪检测细胞周期显示:KD1组、KD2组两组细胞凋亡率较NC组均有显著上升,分别为57.55%和83.81%。【结论】 靶向Cdc6慢病毒载体RNA干扰能有效抑制舌癌CAL-27细胞的DNA复制,阻止舌癌细胞的增殖。     

Effects of ATRA, Acitretin and Tazarotene on Growth and Apoptosis of Tca8113 Cells

Summary：To investigate the effects of ATRA, acitretin and tazarotene on the growth and apoptosis of human tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113. The effect of retinoids on growth of Tca8113 cells in vitro was examined by MTT assay and Trypan blue exclusion assay. Cell cycle analysis, early apoptosis analysis with double staining with Annexin V-FITC and PI, and active caspase-3 analysis with the staining of FITC-conjugated monoclonal rabbit anli-active caspase-3 antibody were made by flow cytometer. Streptavidin-biotin complex （SABC） immunocytochemical assays were employed for the detections of Bax/Bcl-2 proteins expressions. Our results showed that the retinoids inhibited growth of Tca8113 cells in a dose-and time-dependent manner with maximal inhibition 24 h after treatment of 10 5 mol/L. 10^-5 mol/L retinoids altered cell cycle distribution of Tca8113 cells, revealing an increase in G0/G1-phase population, a decrease in S-phase population and the inhibition of G1/S switching. 10^-5 mol/L retinoids significantly induced apoptosis of Tca8113 cells （all P〈0.05）, elevated the cells population with detectable active caspase-3 （P〈 0.05 for all）, increased the number of cells forming Bax and decreased the number of cells forming Bcl-2 significantly （all P〈0.05）. Acitretin played a most prominent role among the retinoids. It is concluded that the inhibition of cell cycle progress of Tca8113 cells by ATRA, acitretin and tazarotene is one of the possible mechanisms for proliferation arrest of TcaS113 cells elicited by the retinoids. The retinoids mediate apoptosis in TcaS113 cells that may be caspase-dependent through mitochondria pathway. High concentration retinoids inhibit growth of Tca8113 cells in vitro by interfering with proliferation and inducing apoptosis of cells. Acitretin may be an alternative medicine for the prevention and treatment of tongue squamous cell carcinoma.     

蛇床子素对人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡和自噬的影响

目的 研究蛇床子素对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖、凋亡和自噬的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 体外培养Tca8113细胞,并将细胞分为不加药的对照组和分别加入40、80、120、160 μmol/L蛇床子素的实验组。用四甲基偶氮唑盐实验和集落形成实验检测蛇床子素对Tca8113细胞的增殖作用,通过Hoechst33342染色法和流式细胞仪检测蛇床子素对人舌鳞癌Tca8113细胞24 h凋亡情况,Western blot检测Bcl-2、Bax、活化的半胱氨酸蛋白酶3及LC3、P62的表达情况。结果 蛇床子素可以明显抑制Tca8113细胞增殖,且药物对细胞的抑制率呈浓度依赖性;细胞集落形成能力降低;Hoechst33342染色和流式细胞术结果显示,蛇床子素呈浓度依赖性诱导细胞死亡;Western blot结果显示,蛇床子素能上调Bax和活化的半胱氨酸蛋白酶-3蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达。同时增加LC3Ⅱ、P62的表达,降低LC3Ⅰ的表达。结论 蛇床子素能抑制人舌鳞癌Tca8113细胞增殖,其机制可能与促进细胞凋亡并抑制细胞自噬流、自噬途径损伤而抑制细胞自噬有关。     

甲基莲心碱对Tca8113/CBP卡铂耐药性的逆转作用

目的建立人舌鳞癌卡铂耐药细胞株Tca8113/CBP,探讨甲基莲心碱Nef对Tca8113/CBP卡铂耐药性的逆转作用及其机制。方法采用逐步递增卡铂浓度、体外间歇诱导法建立Tca8113/CBP耐卡铂细胞株;MTT法检测Nef对Tca8113/CBP卡铂耐药性的逆转作用;RT-PCR法检测Nef作用前后Tca8113/CBP内耐药相关基因肺耐药蛋白LRP与成纤维细胞肌型原肌球蛋白FMT的表达水平;免疫荧光观察Nef作用前后细胞形态结构变化。结果历时5个月建立的Tca8113/CBP细胞株对卡铂耐药性稳定,耐药指数为4.06。Nef对Tca8113/CBP的卡铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到2.12倍;与Tca8113/CBP细胞比较,经Nef干预后,Tca8113/CBP细胞内LRP与FMT mRNA表达水平明显降低(P<0.01),细胞内F-actin的含量也明显下降,排列整齐,分布趋于均匀,接近非耐药Tca8113细胞水平。结论 Nef对Tca8113/CBP的卡铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预Tca8113/CBP细胞内LRP和FMT表达,增加Tca8113/CBP细胞内卡铂的含量,改变微丝结构,降低细胞黏附能力,干扰细胞增殖周期有关。