5 - 氮杂 - 2’ - 脱氧胞苷对食管鳞癌 ECa109 细胞增殖及 TIG1 基因表达与甲基化状态的影响

目的：探讨5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-aza-2＇-deoxy-cytidine,5-aza-CdR）对食管鳞癌细胞株ECa109增殖抑制作用,以及对ECa109中TIG1基因甲基化状态及其mRNA表达的影响.方法：实验组分别使用10、20、50、100μmol/L的5-aza-CdR处理ECa109细胞,对照组用不添加5-aza-CdR培养基培养;采用MTT法检测两组细胞生存率的变化;MSP检测TIG1基因的甲基化状态;RT-PCR法检测TIG1基因mRNA表达水平.结果：5-aza-CdR可以显著抑制ECa109的生长,实验组细胞生存率显著低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）.实验组同种药物浓度,作用时间延长,生存率显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01）;同一作用时间,随着药物浓度增加,细胞生存率降低,差异有统计学意义（P＜0.01）.对照组ECa109细胞TIG1基因处于高甲基化状态,经过10μmol/L及20μmol/L的5-aza-CdR处理细胞株120h后,TIG1基因的甲基化部分解除.对照组ECa109细胞中无TIG1 mRNA表达,采用10μmol/L及20μmol/L浓度药物处理72、120、168h后细胞株中TIG1 mRNA恢复表达,且20μmol/L处理组细胞较10μmol/L组TIG1 mRNA表达增强.结论：5-aza-CdR可以抑制ECa109细胞生长,且具有剂量及时间依赖性;ECa109中TIG1基因甲基化阳性,其mRNA的表达缺失;经5-aza-CdR干预后可使TIG1基因发生去甲基化修饰,恢复表达,去甲基化修饰具有时间及剂量依赖效应.     

三氧化二砷对淋巴瘤T2细胞株SHP-1基因的去甲基化作用

背景与目的:去甲基化作用可能是三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对抗造血系统恶性肿瘤的另一种机制.本研究探讨As2O3对淋巴瘤细胞系T2细胞中抑癌基因酪氨酸磷酸酶(SH2-containinphosphatase-1,SHP-1)的去甲基化作用及对T2细胞生长增殖的生物学影响.方法:T2细胞以As2O3或5-氮杂胞苷(5-aza-2'-deoxyoytidine,5-AC)单独处理,或两药联合处理.采用甲基化特异性PCR、荧光定量PCR和Western检测As2O3处理前后SHP-1基因启动子过甲基化及其mRNA和蛋白表达状况、c-kit蛋白表达变化.MTT法检测细胞存活率.流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:As2O3能逆转SHP-1基因启动子甲基化,使T2细胞SHP-1 mRNA和蛋白重新表达,同时c-kit蛋白表达呈下降趋势;As2O3明显抑制T2细胞的增殖,随浓度增加及作用时间延长,其增殖抑制效应增加(P<0.05);2.5μmol/L浓度的As2O3作用T2细胞t,2,3d细胞增殖抑制率(9.8%,20.3%,47.5%)明显低于联合作用组(11.0%,36.7%.61.0%).As2O3可使T2细胞凋亡率增加,且随作用时间延长和浓度增加,凋亡细胞逐渐增多(P<0.05),联合作用组细胞凋亡率(1 d:17.3%;2 d:37.9%;3 d:67.9%)明显高于2.5 μmol/L As2O3单独作用组(6.1%,26.5%,50.9%).结论:As2O3能去除T2细胞中SHP-1基因甲基化,使其重新表达,并可能通过抑制c-kit受体及其信号转导路径的活化而抑制肿瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡.     

5-氮杂-2＇-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞株RASSF1A基因表达的影响

目的 观察5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对体外培养的人卵巢癌细胞株（SKOV3、3AO） RASSF1A mRNA及蛋白表达的影响.方法 卵巢癌细胞株（SKOV3、3AO）经不同浓度（0.5、5、50 μmol/L）的5-Aza-CdR处理,未经处理的作为对照组,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫印记（Western Blot）检测RASSF1A在mRNA和蛋白质水平表达的变化.结果 对照组细胞株SKOV3、3AO均可见RASSF1A mRNA及蛋白的表达,但表达较弱,经药物处理后的细胞RASSF1A mRNA及蛋白的表达较前明显增强.经不同浓度5-Aza-cdR处理的SKOV3细胞株中,随浓度增加,RASSF1A mRNA及蛋白的表达依次递增.经不同浓度5-Aza-cdR处理的3AO细胞株中,经0.5μmol/L 5-Aza-cdR处理后,RASSF1A mRNA的表达明显低于经5和50 μmol/L 5-Aza-cdR处理后的表达（t=-8.866,P=0.01;t=-12.256,P=0.000）;但经5、50 μmol/L 5-Aza-cdR分别处理的3AO细胞株RASSF1A mRNA的表达差异无统计学意义（t=0.431,P=0.689）.在3AO细胞株中,0.5 μmol/L组与5μmol/L组RASSF1A蛋白表达差异无统计学意义（t=-1.586,P=0.188）.结论 经过5-Aza-CdR处理后,卵巢癌细胞株（SKOV3、3AO） RASSF1A mRNA及蛋白的表达均明显增强,细胞增殖能力受到明显抑制,从而起到抑制肿瘤细胞生长,甚至促进肿瘤细胞凋亡的作用.     

5-氮-2''-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞凋亡及DNA错配修复基因表达的影响

目的:观察5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine ,又称5-aza-CdR)对卵巢癌细胞SKOV3和3AO增殖凋亡及DNA错配基因hMLH1 和hMLH2 表达的影响.方法: 以特异性甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR 0.5、5、50μmol/L处理人卵巢癌细胞SKOV3和3AO 3d,继续常规培养7 d后,采用MTT比色法观察细胞经药物处理前后的增殖活性,用流式细胞术分析5-aza-CdR对细胞凋亡影响,以半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞经5-aza-CdR处理前后DNA错配修复基因hMLH1和hMSH2 mRNA表达水平的改变.结果: 人卵巢癌细胞SKOV3和3AO经5-aza-CdR处理后,与对照组比较,0.5、5、50 μmol/L均能明显抑制肿瘤细胞生长,随着5-aza-CdR浓度增加,细胞增殖速度下降.SKOV3经5-aza-CdR 0.5、5、50μmol/L处理后细胞的凋亡率分别为(10.59±1.57)%、(17.52±1.72)%、(34.10±1.45)%,3A0经0.5、5、50μmol/L 5-aza-CdR处理后细胞的凋亡率分别为(11.11±2.21)%、(17.24±1.11)%、(26.53±2.00)%,与对照组相比均有统计学意义(P＜0.01);且凋亡率与剂量成正相关(FSKOV3=227.6,P SKOV3＜0.01;F3AO=108.4,P 3AO＜0.01).经5-aza-CdR处理后的两株卵巢癌细胞中hMLH1 和hMLH2 的mRNA表达量有不同程度的增加(P＜0.01),且与药物存在剂量依赖性.结论: 在人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中,5-aza-CdR可部分逆转hMLH1 和hMLH2 的失活,恢复其生长调控功能,抑制肿瘤细胞生长,并诱导细胞凋亡.     

5-氮-2′-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞凋亡及DNA错配修复基因表达的影响

目的:观察5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,又称5-aza-CdR)对卵巢癌细胞SKOV3和3AO增殖凋亡及DNA错配基因hMLH1和hMLH2表达的影响。方法:以特异性甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR0.5、5、50μmol/L处理人卵巢癌细胞SKOV3和3AO3d,继续常规培养7d后,采用MTT比色法观察细胞经药物处理前后的增殖活性,用流式细胞术分析5-aza-CdR对细胞凋亡影响,以半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞经5-aza-CdR处理前后DNA错配修复基因hMLH1和hMSH2mRNA表达水平的改变。结果:人卵巢癌细胞SKOV3和3AO经5-aza-CdR处理后,与对照组比较,0.5、5、50μmol/L均能明显抑制肿瘤细胞生长,随着5-aza-CdR浓度增加,细胞增殖速度下降。SKOV3经5-aza-CdR0.5、5、50μmol/L处理后细胞的凋亡率分别为(10.59±1.57)%、(17.52±1.72)%、(34.10±1.45)%,3A0经0.5、5、50μmol/L5-aza-CdR处理后细胞的凋亡率分别为(11.11±2.21)%、(17.24±1.11)%、(26.53±2.00)%,与对照组相比均有统计学意义(P<0.01);且凋亡率与剂量成正相关(FSKOV3=227.6,PSKOV3<0.01;F3AO=108.4,P3AO<0.01)。经5-aza-CdR处理后的两株卵巢癌细胞中hMLH1和hMLH2的mRNA表达量有不同程度的增加(P<0.01),且与药物存在剂量依赖性。结论:在人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中,5-aza-CdR可部分逆转hMLH1和hMLH2的失活,恢复其生长调控功能,抑制肿瘤细胞生长,并诱导细胞凋亡。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肝癌细胞HepG2凋亡及其PEG10基因表达的影响

目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人肝癌细胞系HepG2凋亡及其PEG10基因表达调控的影响,进一步探讨肝癌的发病机制及5-Aza-CdR治疗肝癌的可行性。方法用浓度为50 μmol/L的5-Aza-CdR分别处理HepG2细胞24、48、72 h,hoechst 33342/PI 双染荧光显微镜检测HepG2细胞凋亡情况。RT-PCR、Western blot法分别检测PEG10 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,5-Aza-CdR作用24、48、72 h后,HepG2细胞的凋亡率明显升高,PEG10 mRNA 和蛋白表达水平显著下降,并呈现时间依赖性（P＜0.05）。结论5-Aza-CdR 可促进HepG2细胞凋亡并抑制PEG10基因的表达。     

记忆CD8+T细胞与造血干细胞移植免疫

目的：观察5-氮-2＇-脱氧胞苷（5-aza-2＇-deoxycytidine，又称5-aza-CdR）对卵巢癌细胞SKOV3和3AO增殖凋亡及DNA错配基因hMLH1和hMLH2表达的影响。方法：以特异性甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR0．5、5、50μmol／L处理人卵巢癌细胞SKOV3和3AO3d，继续常规培养7d后，采用MTT比色法观察细胞经药物处理前后的增殖活性，用流式细胞术分析5-aza-CdR对细胞凋亡影响，以半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞经5-aza-CdR处理前后DNA错配修复基因hMLH1和hMSH2 mRNA表达水平的改变。结果：人卵巢癌细胞SKOV3和3AO经5-aza-CdR处理后，与对照组比较，0．5、5、50μmol／L均能明显抑制肿瘤细胞生长，随着5-aza-CdR浓度增加，细胞增殖速度下降。SKOV3经5-aza-CdR0．5、5、50μmol／L处理后细胞的凋亡率分别为（10．59±1．57）％、（17．52±1．72）％、（34．10±1．45）％，3AO经0．5、5、50μmol/L5-aza-CdR处理后细胞的凋亡率分别为（11．11±2．21）％、（17．24±1．11）％、（26．53±2．00）％，与对照组相比均有统计学意义（P〈0．01）；且凋亡率与剂量成正相关（FSKOV3=227．6，PSKOV3〈0．01；F3AO=108．4，P3AO〈0．01）。经5-aza-CdR处理后的两株卵巢癌细胞中hMLH1和hMLH2的mRNA表达量有不同程度的增加（P〈0．01），且与药物存在剂量依赖性。结论：在人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中，5-aza-CdR可部分逆转hMLH1和hMLH2的失活，恢复其生长调控功能，抑制肿瘤细胞生长，并诱导细胞凋亡。     

SHP-1和JAKs基因在成人急性髓系白血病患者中的异常表达及其相关性

 目的 研究SHP-1基因和JAK家族基因在成人急性髓系白血病（AML）患者中的表达及相关性,以探讨两者在AML发病机制中的作用。 方法 急性髓系白血病患者63例及健康志愿者19名（健康对照）为研究对象,分别应用FQ-PCR和RT PCR方法检测骨髓单个核细胞中SHP-1、 JAKs mRNA表达情况;并分析两者的相关性及其与预后的关系。 结果 SHP-1在AML患者表达水平明显低于缓解组和健康对照组(P＜0.01),JAK2、JAK3和TYK2表达水平明显高于缓解组和健康对照组 (P＜0.05),JAK1在初治AML中表达也增高但与CR和NC组相比差异无统计学意义（P＞0.05）;SHP 1和JAK1、JAK3在mRNA水 平负相关（P＜0.05）。 结论 SHP-1可能是白血病潜在的抑癌基因,AML细胞中SHP-1与JAKs mRNA表达呈负相关;SHP-1对JAKs基因的负调控作用并非只是通过去除JAKs磷酸化而阻断JAK/STAT路径,还可能在转录水平进行调节。     

三氧化二砷联合抗坏血酸抑制人肾癌 786 -0 细胞增殖及相关蛋白表达的研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3）联合抗坏血酸（AA）对786-0人肾透明细胞癌细胞增殖的影响,并通过其对bcl-2和bax蛋白表达的影响探讨相关机制.方法：将体外培养的786-0人肾透明细胞癌细胞分为对照组（N）和实验组,实验组分为AA组、As2O3组、As2O3与AA联合组.用CCK-8细胞增殖-毒性检测试剂盒检测药物对细胞增殖的影响,TUNEL试剂盒检测细胞凋亡,Western blot方法测定bcl-2基因和bax基因的蛋白表达.结果：以0μmol/L或50μmol/L AA分别联合0、1、2、4、8、16μmol/L As2O3作用786-0细胞24h,与As2O3单独应用相比,AA与不同浓度As2O3联合应用都可显著提高As2O3对786-0细胞的抑制率,其作用具有剂量依赖性（P＜0.05）.0μmol/L或8μmol/L As2O3分别联合0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L AA作用786-0细胞24h,与As2O3单独应用相比,AA与As2O3联合应用能够显著下调bcl-2表达,上调bax表达,联合组与其他组比较有明显差异,并具有剂量依赖性.结论：抗坏血酸（AA）联合三氧化二砷（As2O3）可以明显协同抑制786-0人肾透明细胞癌细胞的增殖,且具有剂量依赖性,其机制可能与下调bcl-2基因表达,上调bax蛋白表达从而诱导肾癌细胞的凋亡有关.     

三氧化二砷对淋巴瘤细胞酪氨酸磷酸酶1基因的去甲基化作用

目的 探讨淋巴瘤细胞系T2和非霍奇金淋巴瘤(NHL)组织中酪氨酸磷酸酶1基因启动子区甲基化状态,三氧化二砷(As2O3)对T2细胞中SHP-1的去甲基化作用及对T2细胞生长增殖的生物学影响.方法 以不同浓度As2O3处理淋巴瘤细胞株T2,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测T2细胞的生长变化,采用流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,采用实时定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot方法检测T2细胞SHP-1基因mRNA和蛋白表达及c-kit蛋白表达变化.采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测T2细胞和32例NHL组织SHP-1基因启动子甲基化状态.结果 As2O3使T2细胞增殖受抑,凋亡增加,效应均具有时间和剂量依赖性.As2O3能逆转T2细胞SHP-1基因启动子甲基化,SHP-1基因恢复表达,同时c-kit蛋白磷酸化水平降低.SHP-1基因在对照组淋巴组织中呈完全性非甲基化状态,而在NHL组织中启动子甲基化出现率为87.5%(28/32).结论 在淋巴瘤细胞和NHL组织中,SHP-1基因启动子区域存在高度甲基化.As2O3能逆转T2细胞DNA异常甲基化,诱导SHP-1基因表达,并可能通过抑制c-kit受体及其信号传导路径的活化,抑制肿瘤细胞增殖.     

三氧化二砷逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药的机制研究

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人乳腺癌MCF 7/ADM细胞耐药性的逆转作用及其相关机制。方法　采用MTT法检测As2 O3 的细胞毒性及非细胞毒性剂量 ,对MCF 7/ADM细胞药敏性的影响。以荧光分光光度计测定细胞内药物浓度的改变 ,明确As2 O3 对MCF 7/ADM的逆转作用。同时 ,于逆转前后分别采用生化方法测定谷胱甘肽S 转移酶 (GSTs)酶活性 ,RT PCR方法检测GST πmRNA表达水平的改变。结果　As2 O3 的非细胞毒性剂量为 0 .2 μmol/L ,低毒剂量为 0 .8μmol/L。0 .2 μmol/LAs2 O3 可增加MCF 7/ADM细胞内阿霉素 (ADM)浓度 ,使细胞MCF 7/ADM的IC50 由原来的5 3.74 μmol/L降低至 2 5 .0 μmol/L ,其逆转倍数为 2 .1倍。在 0 .2 μmol/L、0 .8μmol/LAs2 O3 作用前后 ,GSTs酶活性有显著性改变 ,由 2 9.6 8± 0 .2 9(U/ml)分别降低为 19.2 9± 2 .10 (U/ml)、12 .6 6± 2 .78(U/ml) ,P <0 .0 5 ,而GST πmRNA的表达水平也呈不同程度的下调。结论　As2 O3 可部分逆转人乳腺癌MCF 7/ADM细胞对ADM的耐药性 ,其逆转机制可能与细胞内GST π的改变有关。     

谷胱甘肽含量对肿瘤多药耐药相关蛋白1的影响

目的 研究应用丁硫氨酸亚砜胺（BSO）降低谷胱甘肽（GSH）含量后,三氧化二砷（As2O3）对K562/ADM细胞的诱导凋亡效应,及其对多药耐药相关蛋白1（MRP1）的抑制作用.方法 As2O3组（0.5、2.0、5.0 μmol/L）单独及联合100 μmol/L BSO作用于K562/ADM细胞,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测K562/ADM细胞的增殖活性;Annexin V/PI标记法观察K562/ADM细胞的凋亡效应;分光光度法检测K562/ADM细胞内GSH含量变化;流式细胞术（FCM）检测的MRP1蛋白水平表达变化;反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测MRP1的编码基因mRNA的表达变化.结果 降低GSH含量后,临床剂量As2O3（0.5、2.0 μmol/L）联合BSO 24 h内即可抑制K562/ADM细胞的增殖活性,诱导K562/ADM细胞发生凋亡,72 h单用As2O3（0.5、2.0 μmol/L）凋亡率为（8.32±2.11）％、（16.75±3.56）％,GSH含量降低后,两剂量组细胞的凋亡率分别为（82.15±9.28）％和（92.72±9.41）％.72 h后,临床剂量As2O3联合BSO抑制MRP1的荧光强度分别为8.20±0.92和10.40±2.33,明显低于单用高剂量As2O3组的荧光强度（21.30±3.09）;两药联合对于MRP1 mRNA的作用效果也明显强于单用高剂量As2O3组.结论 GSH的含量变化与As2O3的作用效果密切相关,As2O3联合BSO可有效诱导K562/ADM细胞发生凋亡,可有效抑制MRP1及其编码基因mRNA的表达.     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对肝癌细胞HepG2凋亡及其PEG10基因表达的影响

目的 探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞系HepG2凋亡及其PEG10基因表达调控的影响,进一步探讨肝癌的发病机制及5-Aza-CdR治疗肝癌的可行性.方法 用浓度为50 μmol/L的5-Aza-CdR分别处理HepG2细胞24、48、72 h,hoechst 33342/PI双染荧光显微镜检测HepG2细胞凋亡情况.RT-PCR、Western blot法分别检测PEG10 mRNA和蛋白表达水平的变化.结果 与对照组相比,5-Aza-CdR作用24、48、72 h后,HepG2细胞的凋亡率明显升高,PEG10 mRNA和蛋白表达水平显著下降,并呈现时间依赖性(P＜0.05).结论 5-Aza-CdR可促进HepG2细胞凋亡并抑制PEG10基因的表达.     

和厚朴酚对组织因子途径抑制物 2诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究#br#

目的探讨和厚朴酚对组织因子途径抑制物 2（TFPI 2）表达的影响,以及和厚朴酚和TFPI 2过表达对人胶质瘤U251细胞凋亡的影响。 方法体外培养胶质瘤U87、U251、LN18、LN229、A172细胞系,荧光定量PCR（QPCR）检测不同细胞系中TFPI 2的表达。不同浓度（0、10、20、30、40和50 μmol／L）和厚朴酚干预U251细胞,QPCR和Western blotting检测TFPI 2 mRNA和蛋白的表达。采用腺病毒载体pGSadeno TFPI 2过表达U251细胞内TFPI 2的表达,流式细胞术及caspase 3试剂盒检测细胞凋亡率和caspase 3活性。 结果在选取的5种不同胶质瘤细胞株中,U251和A172细胞内TFPI 2 mRNA明显下降（P＜005）。和厚朴酚呈浓度依赖性增加U251细胞内TFPI 2 mRNA水平;其中50 μmol／L和厚朴酚干预24 h后, TFPI 2 mRNA表达水平升高最明显（P＜005）。腺病毒感染U251细胞后TFPI 2表达水平明显增加（P＜005）。过表达TFPI 2和50 μmol／L和厚朴酚干预均可增加U251细胞凋亡水平和caspase 3的活性（P＜005）。 结论和厚朴酚处理可增加U251细胞内TFPI 2的表达;和厚朴酚联合TFPI 2过表达显著诱导胶质瘤细胞凋亡。     

三氧化二砷对人卵巢癌SKOV3细胞VEGF表达的影响

目的：从转录及翻译两个水平观察As2O3对卵巢癌SKOV3细胞VEGF表达的影响,从而明确As2O3是否可以通过抑制卵巢癌细胞表达VEGF而达到抗卵巢癌血管生成的目的。方法：RT-PCR半定量法测定不同浓度As2O3作用于SKOV3细胞24h后VEGF mRNA含量的变化。用ELISA法测定不同浓度和作用时间下As2O3对SKOV3细胞培养上清液中VEGF蛋白表达的影响。结果：1μmol/L-4μmol/L As2O3能显著抑制VEGF mRNA的表达,且具有浓度依赖性。1μmol/L-4μmol/L As2O3能明显降低培养上清中VEGF蛋白表达,具有浓度依赖性,但随时间延长抑制作用减弱。结论：As2O3能通过降低卵巢癌SKOV3细胞VEGF mRNA表达及VEGF蛋白分泌抑制肿瘤血管生成。     

JAK2/STAT3信号通路对A549细胞株中HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达的影响

目的：研究人肺腺癌细胞A549细胞中JAK2/STAT3信号通路对HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达的影响。方法：AG490处理在氧含量正常及缺氧条件下（CoCl2200μmol/L）48h后Westernblot法测定A549细胞中HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达变化（分组为对照组、AG49050μmol/L、AG490100μmol/L、CoCl2、CoCl2＋AG49050μmol/L和CoCl2＋AG490100μmol/L组）。IL-6（3.85nmol/L）处理A549细胞24h后,检测细胞中STAT3、p-STAT3、HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达变化（分组为对照组,IL-6组）。结果：JAK2特异性抑制剂AG490作用48h后,相对于对照组AG490能够下调HIF-1ɑ、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性;随浓度的升高,抑制作用更明显。缺氧条件下（CoCl2200μmol/L）能够上调HIF-1ɑ、VEGF的蛋白表达。AG490也能够下调CoCl2诱导的HIF-1ɑ、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性,随浓度的升高,抑制作用更显著。IL-6能够上调HIF-1ɑ、VEGF的蛋白表达。结论：在人肺腺癌细胞A549细胞中,缺氧可上调HIF-1α和VEGF蛋白表达。JAK2/STAT3信号通路对HIF-1α和VEGF蛋白的表达具有调节作用。     

地西他滨联合三氧化二砷对NB4细胞凋亡作用的研究

 目的　研究去甲基化制剂地西他滨（DAC）单用或联合三氧化二砷（As2O3）对NB4细胞凋亡的作用机制。方法　将不同浓度的DAC、As2O3以及两药联合作用于NB4细胞,不加药为对照组,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果　DAC与As2O3单药对NB4细胞的抑制作用呈浓度时间依赖性（DAC 1 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别为12.18 %、22.72 %、35.54 %;DAC 2 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为22.14 %、31.18 %、45.21 %;As2O3 0.5 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别21.09 %、32.43 %、44.93 %;As2O3 1.0 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为31.69 %、41.12 %及54.27 %）,两药联合抑制作用较单药明显（DAC 1 μmol／L+As2O3 0.5 μmol／L作目的　研究去甲基化制剂地西他滨（DAC）单用或联合三氧化二砷（As2O3）对NB4细胞凋亡的作用机制。方法　将不同浓度的DAC、As2O3以及两药联合作用于NB4细胞,不加药为对照组,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果　DAC与As2O3单药对NB4细胞的抑制作用呈浓度时间依赖性（DAC 1 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别为12.18 %、22.72 %、35.54 %;DAC 2 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为22.14 %、31.18 %、45.21 %;As2O3 0.5 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别21.09 %、32.43 %、44.93 %;As2O3 1.0 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为31.69 %、41.12 %及54.27 %）,两药联合抑制作用较单药明显（DAC 1 μmol／L+As2O3 0.5 μmol／L作用24、48、72 h抑制率分别为42.10 %、48.75 %、60.78 %）（P＜0.05）,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;As2O3 1 μmol／L作用于NB4细胞株48 h可见5.8 %的细胞凋亡,联合组增高为17.3 %。结论　DAC能显著抑制NB4细胞的增殖并诱导其凋亡,DAC联合As2O3对NB4细胞增殖抑制及诱导凋亡有协同作用。用24、48、72 h抑制率分别为42.10 %、48.75 %、60.78 %）（P＜0.05）,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;As2O3 1 μmol／L作用于NB4细胞株48 h可见5.8 %的细胞凋亡,联合组增高为17.3 %。结论　DAC能显著抑制NB4细胞的增殖并诱导其凋亡,DAC联合As2O3对NB4细胞增殖抑制及诱导凋亡有协同作用。     

三氧化二砷体外诱导雌激素受体α表达的初步研究

目的本文拟探讨三氧化二砷（arsenic trioxide，As2O3）诱导因高甲基化失活的雌激素受体重新表达的可能性。方法以雌激素受体高甲基化失活的人乳腺细胞系MDA-MB-231细胞系为研究对象，经不同浓度As203处理后，采用RT-PCR技术检测ER-α基因mRNA表达。结果经1．0μmol／L、2．0μmol／L和4．0μmol／L．As2O3处理的MDA-MB-231细胞均能扩增出ER-α基因。结论一定浓度的As2O3可通过去甲基化作用诱导MDA—MB-231细胞系重新表达ER-α。     

丙泊酚抑制IL-6诱导的A549肺癌细胞上皮间质转化及其机制探讨

目的:探究丙泊酚对白细胞介素-6（IL-6）诱导的A549肺癌细胞上皮间质转化（EMT）的作用及机制。方法:将A549细胞随机分成四组:对照组、IL-6组（50 ng/ml重组IL-6蛋白）、IL-6+丙泊酚低剂量组（50 ng/ml重组IL-6蛋白和5 μmol/L丙泊酚）、IL-6+丙泊酚高剂量组（50 ng/ml重组IL-6蛋白和10 μmol/L丙泊酚）。MTT法检测细胞活力，Transwell检测细胞迁移情况，Real-time PCR方法检测EMT相关基因（E-cadherin、Vimentin和Snail1）mRNA的表达水平，Western blot检测EMT相关蛋白及JAK2和STAT3的磷酸化表达水平。使用0.5 μmol/L STAT3激活剂colivelin处理细胞，检测其对丙泊酚调节的IL-6诱导的A549细胞活力、迁移和EMT的影响。结果:与对照组相比，IL-6组中细胞的活力、迁移、EMT和JAK2/STAT3的活化均增加（P均<0.05）；与IL-6组相比，IL-6+丙泊酚组中细胞活力、迁移、EMT和JAK2/STAT3的活化均降低（P均<0.05），这些变化均具有剂量依赖性。STAT3激活剂能够减弱丙泊酚对IL-6诱导的A549细胞活力、迁移和EMT的影响（P均<0.05）。结论:丙泊酚能够抑制IL-6诱导的A549肺癌细胞EMT进程，这种作用是通过抑制JAK2/STAT3的活化发挥作用的。     

As2O3和全反式维甲酸对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的 探讨As2O3和全反式维甲酸(ATRA)对人宫颈癌HeLa细胞体外生长的影响及其机制.方法 采用不同浓度As2O3和ATRA分别作用于人官颈癌HeLa细胞,观察细胞形态;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot法检测细胞中N-myc下游调节基因1(NDRG1)mRNA和蛋白的表达.结果 As2O3和ATRA能够抑制宫颈癌HeLa细胞生长,12.5 μmol/L As2O3处理HeLa细胞48 h的抑制率为(36.5±1.2)%,明显高于同时间低浓度组;1 × 10-5mol/LATRA处理HeLa细胞48 h的抑制率为(23.5±3.1)%,明显高于同时间低浓度组,并且同浓度的药物处理72 h的抑制率高于处理48 h的抑制率,呈浓度和时间依赖性(P<0.05).As2O3和ATRA能够从分子水平和蛋白水平上调宫颈癌HeLa细胞中NDRG1基因的表达,12.5 μmol/L As2O3和5×10-6mol/L ATRA处理HeLa细胞后,NDRG1 mRNA表达量分别为0.942±0.169和0.894±0.138,明显高于低浓度组的表达量;12.5 μmol/LAs2O3和5×10-6 mol/LATRA处理HeLa细胞后,NDRG1蛋白表达量分别为1.220±0.202和1.233±0.103,明显高于低浓度组的蛋白表达量.结论 As2O3能够抑制宫颈癌HeLa细胞生长,其抑制作用与NDRG1基因的表达上调相关.

Abstract：

Objective To study the effect of arsenic trioxide (As2O3 ) and all-trans retinoic acid ( ATRA ) on human cervical carcinoma HeLa cell line.Methods HeLa cells were treated with As2O3 and ATRA.The cell proliferation was evaluated by MTT assay.The expressions of NDRG-1 protein and mRNA were determined by Western blot and RT-PCR analysis.Results MTT assay showed that As2O3 and ATRA inhibited the growth of human cervical carcinoma HeLa cells in vitro in a dose- and time-dependent manner.Western blot and RT-PCR techniques showed that As2O3 and ATRA down-regulated the expressions of NDRG-1 protein and mRNA (P < 0.05 ) .Conclusion As2O3 and ATRA can significantly inhibit the growth and proliferation of HeLa cells.The reason of these changes may be related with the down-regulation of expression of NDRG-1.