RNA干扰HOXA9基因对人类急性单核细胞白血病U937细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA（siRNA）沉默HOXA9基因对人类急性单核细胞白血病U937细胞株增殖、凋亡的影响。方法设计合成针对HOXA9的特异性siRNA寡核苷酸链,应用阳离子脂质体介导瞬时转染U937细胞。实验分为3组：实验组（脂质体转染靶向HOXA9的siRNA）、阴性对照组（脂质体转染阴性对照siRNA）和细胞对照组（仅加等量细胞及培养液）。利用反转录．聚合酶链反应法、Western blot法分别检测各组细胞HOXA9 mRNA、蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果转染靶向HOXA9的siRNA后,实验组、阴性对照组、细胞对照组mRNA相对表达水平分别为、（22.980±0．548）％、（82．371±1．517）％、（8d．637±2．252）％（P〈0．05）,蛋白相对表达水平分别为（50．377±2．773）％、（102．275±3．898）％、（107．510±3．905）％（P〈0．05）;siRNA转染后实验组U937细胞增殖明显受抑制且细胞凋亡率显著增高,24、48、72h增殖抑制率分别为（41．909±4．333）％、（54．470±3．756）％、（65．835±1．024）％,凋亡率为（26．800±2．081）％,与细胞对照组、阴性对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论靶向HOXA9的siRNA可有效沉默U937细胞HOXA9基因表达,明显抑制细胞的增殖并促进细胞凋亡,为临床白血病HOXA9基因靶向治疗提供了实验依据。     

RNA干扰联合长春新碱对U937细胞体内外生长的影响

目的 从体外和体内两个方面探讨慢病毒载体介导小发卡shRNA(short harpin RNA,shRNA)靶向沉默同源盒A10(homeoboxA10,HOXA10)基因联合长春新碱（Vincristine,VCR）对U937细胞增殖和凋亡的影响。方法 将U937细胞分为干扰（KD）组、阴性对照（NC）组、空白对照（BC）组,经Western blot方法测定对HOXA10基因的沉默作用;MTT法检测各组细胞的IC50;流式细胞术（Flow cytometry,FCM）检测各组细胞的凋亡率;通过流式细胞仪分选出干扰组和阴性对照组绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein,GFP）阳性的细胞,建立裸鼠AML皮下移植瘤模型（细胞活力>90%）,计算干扰组的抑瘤率。结果 流式细胞仪测得慢病毒对U937细胞的感染率>90%,干扰组HOXA10的蛋白水平为较BC组下降89.78%。下调HOXA10的表达水平可降低VCR对U937细胞的半数抑制浓度（half-inhibitory concentration,IC₅₀）,提高VCR诱导的U937细胞凋亡率,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。体内实验：干扰组肿瘤组织增长受到抑制。结论 慢病毒载体介导的RNA干扰下调HOXA10的表达水平可在体外和体内增强U937细胞对VCR的敏感度。     

和厚朴酚对人急性白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响

 目的 探讨和厚朴酚在体外对人急性白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测和厚朴酚对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染检测细胞凋亡,RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase 3、Caspase 8 和 Caspase 9基因的表达。结果 5 μg/ml的和厚朴酚作用48 h对U937细胞增殖即可表现抑制作用,10 μg/ml的和厚朴酚作用48 h对细胞的增殖抑制率高达50%以上,作用120 h可完全抑制细胞增殖。经10 μg/ml和厚朴酚处理的U937细胞凋亡率达到26.8% (P＜0.01)。10 μg/ml的和厚朴酚处理U937细胞后48 h,Bcl-2基因表达降低（对照组：0.33±0.02,实验组：0.14±0.01,P＜0.01）,Bax基因表达升高（对照组：0.1±0.01,实验组：0.87±0.08,P＜0.01）。Caspase 3（对照组：0.48±0.01,实验组：0.87±0.06,P＜0.01）、Caspase 8（对照组：0.23±0.02,实验组：0.41±0.07,P＜0.01）和Caspase 9（对照组：0.44±0.05,实验组：0.76±0.06,P＜0.01）基因表达均升高。Caspase 3活性为0.325±0.089,较对照组有显著地升高(P＜0.01.结论 和厚朴酚能明显抑制人急性白血病细胞株U937细胞增殖并引起细胞凋亡。其机制在于上调凋亡促进基因Bax的表达,下调凋亡抑制基因Bcl 2的表达,并且内源性和外源性途径均参与了凋亡过程。     

靶向hoxa9 siRNA联合小剂量阿糖胞苷对U937细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨利用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默hoxa9基因联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对U937细胞增殖、凋亡的影响.方法 设计合成针对hoxa9的特异性siRNA,应用脂质体介导转染U937细胞.利用RT-PCR法、Western blot法分别检测各组细胞hoxa9 mRNA、蛋白的表达;siRNA和(或)小剂量Ara-C分别作用U937细胞后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 靶向hoxa9的siRNA可有效沉默hoxa9的表达,hoxa9 mRNA及蛋白相对水平明显下降.RNAi联合小剂量Ara C作用于U937细胞后对细胞增殖抑制作用最强,48 h细胞凋亡率显著升高,与其余组比较均有统计学差异(P＜0.05).结论 靶向hoxa9的siRNA联合小剂量Ara-C能显著抑制U937细胞增殖并促进其凋亡,为研究hoxa9联合化疗治疗白血病的作用机制及应用于临床提供实验依据.     

靶向HOXA9基因RNAi慢病毒载体增加人急性单核细胞白血病U937细胞的药物敏感性

目的:探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默同源盒A9(homeobox A9,HOXA9)基因对人急性单核细胞白血病U937细胞药物敏感性的影响。方法:应用蛋白质印迹法从4条针对HOXA9基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体中筛选出1条敲减效率最高的包装成慢病毒HOXA9/GV118RNAi-LV#2。实验分成未感染对照组(control,CON)、阴性对照组(negative control,NC)及敲减组(knock down,KD)。HOXA9/GV118RNAi-LV#2感染U937细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测HOXA9 mRNA的沉默效率,蛋白质印迹法检测HOXA9蛋白的表达,MTT法和FCM检测病毒感染前后U937细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(daunorubicin,DNR)的敏感性及细胞凋亡率变化,RT-PCR法检测DNR作用后各组细胞中MDR-1mRNA的表达。结果:KD组细胞中HOXA9mRNA的沉默效率在55%以上,HOXA9蛋白的表达量明显减少。VCR及DNR作用KD组细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值明显降低(P<0.01),药物敏感性明显增强;VCR和DNR作用后,KD组细胞的凋亡率明显增加(P<0.01);DNR作用后,KD组U937细胞中MDR-1mRNA的表达水平明显下调(P<0.01)。结论:靶向HOXA9基因的RNAi慢病毒可稳定沉默HOXA9基因的表达,在一定程度上提高U937细胞对化疗药物的敏感性。     

EZH2基因沉默对人脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:研究RNA干扰技术抑制zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)的表达对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响.方法:构建靶向EZH2基因的shRNA质粒并转染至U251细胞中,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测EZH2 mRNA和蛋白的表达情况,利用四甲基偶氮哇盐(MTT)实验和Annexin V-FITC/PI流式细胞术实验观察转染后U251细胞增殖和凋亡情况.结果:靶向EZH2基因的shRNA质粒成功抑制了U251细胞EZH2基因的表达,mRNA和蛋白表达抑制率分别为56.00％和88.73％;转染shRNA EZH2后,U251细胞的生长受到明显抑制(P＜0.01),在转染96 h后,生长抑制率达35.79％;转染48 h后,U251细胞早、晚期凋亡率分别为(26.59±0.83)％和(38.63±0.80)％,较阴性质粒组和空白对照组均增加,以晚期明显,差异有统计学意义,P＜0.01.结论:EZH2基因的沉默能有效抑制胶质瘤U251细胞的增殖、促进其凋亡,提示EZH2可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点.     

靶向survivin的siRNA抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡

目的 观察靶向survivin的siRNA对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建靶向survivin的siRNA真核表达载体,采用Lipofectamine^TM2000转染乳腺癌细胞MCF-7,采用半定量RTPCR、免疫组化技术检测转染前后MCF-7细胞survivin基因表达的变化;采用MTT法检测对MCF-7细胞增殖的抑制作用;采用TUNEL法检测诱导MCF-7细胞凋亡的作用。结果靶向survivin的序列特异性siRNA可以高效抑制MCF-7细胞survivin基因的表达,在mRNA水平其表达抑制率为64．9％;在蛋白质水平其表达抑制率为79．7％;转染靶向survivin的siRNA真核表达载体可以显著抑制MCF-7细胞的增殖,细胞重新接种24、48h后,其增殖抑制率分别为31．6％和33．0％;转染后24h可以诱导12．9％的细胞凋亡。结论利用RNA干扰技术阻断survivin基因的表达可以显著抑制MCF-7细胞的增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有一定的价值。     

下调PRPS2基因表达对HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨下调磷酸核糖焦磷酸合成酶亚基II(PRPS2)基因表达对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建PRPS2基因干扰载体sh-PRPS2,正常对照组不转染载体,阴性对照组转染阴性对照载体sh-PRPS2-0,3个实验组分别转染干扰载体sh-PRPS2-1、sh-PRPS2-2和sh-PRPS2-3,经DNA测序鉴定后转染人结肠癌HCT116细胞,分别采用RT-PCR和Western blot法检测各载体转染后细胞PRPS2 mRNA和蛋白水平的表达变化,CCK8试剂盒检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化。结果:经DNA测序证实成功构建sh-PRPS2干扰载体3个,分别为sh-PRPS2-1、sh-PRPS2-2和sh-PRPS2-3。将上述3个干扰载体分别转染HCT116细胞72 h后,RT-PCR结果显示,PRPS2 mRNA相对表达量依次为0.61±0.03、0.89±0.02、0.27±0.05,与对照组比较,均显著下降(P<0.05)。Western blot结果显示,PRPS2蛋白相对表达量依次为0.37±0.06、0.84±0.05、0.30±0.04,与对照组比较均显著下降(P<0.05)。转染sh-PRPS2-3载体72 h后细胞增殖抑制率达19.8%±2.4%,凋亡率上升至68.4%±4.6%,G0/G1期细胞比例上升为12.9%±3.8%。结论:PRPS2的低表达可以有效抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,细胞阻滞于G0/G1期,本研究为肿瘤的靶向治疗提供了研究基础。     

靶向沉默同源盒A10基因对白血病NB4细胞的影响

目的 探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(shRNA)靶向沉默同源盒A10(HOXA10)基因对白血病NB4细胞增殖、凋亡和耐药的影响.方法 将NB4细胞分为干扰(lenti-shHOXA10)组、阴性对照组和未处理组,用慢病毒感染NB4细胞5d后进行相关实验.运用流式细胞仪测定慢病毒对NB4细胞的感染效率.实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)测定慢病毒干扰载体对HOXA 10基因的沉默作用;MTF法检测细胞的增殖抑制情况.流式细胞术检测3组细胞凋亡率的变化,Western blot方法测定干扰HOXA10基因对多药耐药1(MDR-1)蛋白的影响.结果 慢病毒对NB4细胞的感染率达90％左右.干扰组HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平均较对照组下降,干扰组细胞抑制率和凋亡率分别为(52.12±4.02)％、(30.0±2.7)％,与阴性对照组和未处理组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示干扰HOXA 10基因的表达能降低MDR-1基因的表达水平,逆转白血病细胞耐药.结论 慢病毒载体靶向干扰HOXA10基因的表达,能有效抑制NB4细胞增殖和促进其凋亡,逆转白血病细胞耐药.HOXA10基因有望成为逆转白血病耐药的新靶点.     

白血病K562细胞XIAP表达RNAi下调对凋亡及化疗敏感性影响的研究

目的:通过RNAi下调K562细胞X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达,观察XIAP下调后细胞凋亡及对化疗药物敏感性的变化情况。方法:K562细胞分为3组,实验组和阴性对照组分别用XIAP siRNA及阴性对照siR-NA转染,空白对照组不做任何转染处理。用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测转染后各组细胞XIAP mRNA及蛋白的表达,CCK-8法检测各组细胞对阿糖胞苷和依托泊苷敏感性的变化,流式细胞仪和Hochest染色法检测各组细胞加入不同化疗药物后细胞的凋亡情况。结果:转染后48h,实验组XIAP mRNA及蛋白表达量较阴性对照组分别下降约70.0%和60.0%,P<0.05;实验组细胞对依托泊苷和阿糖胞苷的敏感性分别提高2.77和2.28倍,P<0.05;转染siR-NA 48h后,实验组与阴性对照组、空白对照组间凋亡率差异无统计学意义,P>0.05;转染siRNA 6h后加入依托泊苷孵育48h,实验组凋亡率(41.3±1.6)%较阴性对照组(34.3±1.9)%和空白对照组(30.6±1.7)%明显增加;加入阿糖胞苷孵育48h,实验组凋亡率(47.4±1.1)%较阴性对照组(37.0±1.8)%和空白对照组(35.5±1.7)%明显增加,P<0.05。结论:XIAP siRNA能特异性下调K562细胞的XIAP mRNA和蛋白质水平的表达,提高K562细胞对依托泊苷和阿糖胞苷的敏感性,同时伴化疗药物诱导的细胞凋亡增强。     

靶向HOXA9基因shRNA慢病毒载体对U937细胞增殖与凋亡影响观察

目的：观察慢病毒介导的短发夹RNA（shorthairpinRNA,shRNA）沉默同源盒A9（homeoboxA9,HOXA9）基因对U937细胞增殖和凋亡的影响。方法：前期从4条针对HOXA9基因的RNA干扰（RNAinterference,RNAi）慢病毒载体中筛选出了l条敲减效率最高的包装成慢病毒H0xA9／GVll8RNAi—LV#2。实验分为对照组（control,CON）、阴性对照组（negativecontrol,NC）及敲减组（knockdown,KD）。HOXA9／GVll8RNAi-LV#2感染U937细胞5d后,FCM检测U937细胞感染效率,应用实时荧光定量PCR法检测HOXA9mRNA的沉默效率,蛋白质印迹法检测HOXA9蛋白的表达;MTT法和绘制细胞生长曲线检测细胞增殖抑制情况;FCM检测细胞凋亡及细胞周期;RT-PCR法检测细胞c-mycmRNA及p27mRNA表达情况。结果：慢病毒感染效率〉90％,KD组细胞中HOXA9mRNA的沉默效率〉55％,HOXA9蛋白的表达量明显减少,其中KD组相对表达水平达（0．223±0．024）,显著低于NC组（0．884±0．009）及CON组（0．891±0．013）,差异有统计学意义,F=1566．202,P〈0．001。MTT结果显示,KD组细胞的IR值为（40．469±1．756）％,明显高于NC组及CON组（F=1311．928,P〈0．001）,细胞生长曲线表明该组细胞生长速度减慢;FCM结果显示,KD组、NC组及CON组凋亡率分别为（26．762±2．245）％、（6．819±0．547）％和（6．113±0．349）％,KD组与NC组（q=25．501,P〈0．001）及CON组（q=26．418,P〈0．001）比较差异均有统计学意义,提示该载体显著增加细胞凋亡率;其细胞周期G0／G1期细胞比例较CON组及NC组明显增加,提示该载体使细胞周期阻滞于G0／G1期,F=27．769,P=0．001;RT-PCR结果表明,U937细胞KD组较CON组及NC组c-mycmRNA表达水平下降,p27mR—NA表达水平上升。结论：靶向HOXA9基因shRNA慢病毒载体能稳定沉默HOXA9表达,可显著抑制U937细胞增殖并促进其凋亡,同时可下调c-myc表达,上调p27表达,使细胞周期阻滞于G0／G1期。     

JQ1对急性髓系白血病细胞株U937增殖抑制作用及其对STAT-5信号转导途径的影响

目的 探讨布罗莫结构域抑制剂JQ1抑制急性髓系白血病细胞株U937的作用机制及对STAT-5信号转导途径的影响.方法 各实验组取对数生长期U937细胞,分别加入0.2、1.0、4.0μmol/L JQ1,同时设置不加JQ1的空白对照组,培养48 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测黏着斑激酶(FAK)、P21活化激酶(PAK1)mRNA的表达水平,蛋白质印迹法分析细胞STAT-5蛋白的表达.结果 不同浓度JQ1对U937细胞的增殖均有抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;不同浓度JQ1可诱导U937细胞凋亡,且呈剂量依赖性.不同浓度(0.2、1.0、4.0μmol/L)JQ1处理U937细胞48 h后均能降低FAK mRNA和PAK1 mRNA表达,FAK mRNA的表达量分别为0.417±0.066、0.140±0.026、0.027±0.006(F=454.651,P=0.000),PAK1 mRNA的表达分别为0.533±0.045、0.080±0.010、0.010±0.001(F=2434.610,P=0.000);STAT-5蛋白表达也被明显地抑制,在48 h后对照组STAT-5蛋白相对含量为1.00±0.21,不同浓度(0.2、1.0、4.0μmol/L)JQ1组中STAT-5蛋白相对含量分别为0.71±0.19、0.62±0.16、0.53±0.14(F=263.135,P=0.000).结论 JQ1能有效地抑制急性髓系白血病细胞株U937增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过STAT-5信号转导途径来实现的.     

靶向miRNA-214反义核酸对白血病U937细胞的生长抑制作用

 【摘要】　目的　探讨以miRNA-214为靶点的反义核酸对白血病U937细胞的生长抑制作用及可能的作用机制。方法　人工合成miRNA-214的反义核酸序列,硫代修饰,以Lipofectamine 2000为介导转入U937细胞。MTT细胞毒性检测U937细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞的凋亡水平,荧光定量PCR检测miRNA-214的表达水平。结果　MTT检测结果显示,转染反义核酸后24 、48、72 h,U937细胞的增殖活性显著下降（0.812 ±0.001、0.770±0.002、0.541±0.001）,与随机对照组（1.011±0.002、1.112±0.003、1.111±0.003）、空白对照组（1.112±0.001、1.023±0.001、1.101±0.001）相比较差异均有统计学意义（F＝2.782、3.659、2.735,P＝0.021、0.018、0.036）。流式细胞术检测结果表明,在转染反义核酸48 h后细胞的凋亡水平随时间延长而提高（48、72 h分别为15.12±0.02、19.14±0.01）,与随机对照组（2.04±0.02、2.45±0.03）、空白对照组（1.19±0.02、2.02±0.01）相比较差异均有统计学意义（F＝3.683、3.762,P＝0.013、0.015）。荧光定量PCR结果证实,在反义核酸作用后,U937细胞内miRNA-214的相对表达水平明显下降（31.1±0.2）,与随机对照组、空白对照组的25.8±0.1、25.6±0.2相比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论　以miRNA-214为靶点的反义核酸可抑制U937细胞的增殖活性,并明显促进细胞的凋亡。     

人类DOT1L基因在地西他滨抑制人单核细胞白血病细胞株THP-1增殖中的作用 及机制研究

目的 分析人类DOT1L(hDOT1L)信号途径在地西他滨抑制人单核细胞白血病细胞株THP-1细胞增殖中的作用,探讨其DNA去甲基化以外的可能作用及hDOT1L信号途径参与白血病发生的机制.方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度地西他滨对THP-1细胞增殖的影响,锥虫蓝拒染法检测地西他滨对THP-1细胞存活率的影响,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hDOT1L、HOXA9、HOXA10、MLL-AF10(MLLT10)mRNA表达水平,蛋白印迹法检测甲基化H3K79蛋白水平.结果 与阴性对照组相比,各浓度地西他滨明显抑制THP-1细胞增殖,72 h抑制作用最明显,最高抑制率达56.18%,呈时间和浓度依赖性.与阴性对照组相比,除0.5μmol/L地西他滨处理组外,其余各浓度地西他滨对THP-1细胞抑制率差异均有统计学意义(均P<0.05).THP-1细胞内hDOT1L及HOXA9、HOXA10、MLLT10 mRNA水平高H3K79过甲基化,各浓度地西他滨处理48 h后均可降低细胞内hDOT1L mRNA水平,并下调细胞内HOXA9、HOXA10、MLLT10 mRNA水平,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01).各浓度地西他滨处理48 h后细胞内H3K79甲基化水平明显降低,以双甲基化和三甲基化H3K79蛋白表达水平下降最明显,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 地西他滨可能通过某种机制减少hDOT1L表达水平,降低H3K79甲基化水平,并可能抑制其信号途径中的关键分子HOXA9、HOXA10、MLLT10的表达,发挥其抑制THP-1细胞增殖的作用.     

Toll样受体4在淋巴瘤细胞株中的表达及其对细胞增殖和耐药的影响

目的 探讨Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）在人淋巴瘤细胞株中的表达及其对细胞增殖和耐药的影响。方法 采用RT-PCR、qPCR和Western blot检测8株淋巴瘤细胞株中TLR4 mRNA及蛋白的表达情况并筛选出TLR4高表达株,对高表达株进行基因测序以排除MyD88 L265P基因突变。将TLR4高标达细胞株分为空白对照组、TAK-242组、细菌脂多糖（lipopolysaccharides, LPS）组和LPS+TAK-242组,分别进行细胞增殖和阿霉素耐药实验。采用CCK-8试剂盒检测其增殖活性和细胞杀伤率,用Western blot法检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）和P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）的变化。结果 8株淋巴瘤细胞株中TLR4 mRNA和蛋白广泛表达,其中Burkitt淋巴瘤细胞株Raji的表达水平最高。Raji细胞MyD88基因为野生型。与空白对照组相比,TAK-242和LPS+TAK-242组Raji细胞的增殖活性无明显改变（P=2.19, P=1.85）,LPS组Raji细胞的增殖活性明显升高（P=0.016）, LPS组PCNA蛋白表达明显升高（P=0.009）。阿霉素在半数抑制浓度下各组杀伤率分别为：空白对照组（49.23±2.03）%、TAK-242组（51.41±1.12）%、LPS组（24.65±3.17）%、LPS+TAK-242组（41.17±2.69）%,可见LPS组细胞杀伤率明显降低（P=0.002）。P-gp蛋白表达明显升高（P=0.001）。结论 TLR4分子在淋巴瘤细胞株中广泛表达,尤以Burkitt淋巴瘤细胞株Raji最高,激活TLR4可以促使肿瘤细胞增殖和耐药,其机制可能与PCNA和P-gp的表达上调有关。     

Pyk2基因对肝癌He p3 B细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的：探讨沉默富含脯氨酸的酪氨酸激酶2（Pyk2）基因对人肝癌Hep3 B细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法构建Pyk2基因RNA干扰（RNAi）载体,脂质体转染至肝癌Hep3B细胞,实验分3组,Pyk2 RNA干扰组（siRNA组）：转染携带Pyk2基因RNAi的质粒;阴性对照组：转染不携带Pyk2基因RNAi的空载质粒;空白对照组：未转染任何质粒。应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blotting鉴定Pyk2基因和蛋白表达;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）、Transwell侵袭和划痕实验分别检测细胞增殖、侵袭及迁移等生物学特性。结果 Pyk2基因干扰后肝癌 Hep3B 细胞 Pyk2 mRNA 的表达（0．16±0．03）较阴性对照组（0．74±0．13）和空白对照组（0．77±0．16）均明显下降,差异均有统计学意义（t＝51．46,P＝0．000;t＝53．21,P＝0．000）。Pyk2基因干扰后肝癌 Hep3B 细胞 Pyk2蛋白的表达（0．24±0．06）较阴性对照组（0．83±0．05）和空白对照组（0．91±0．06）均明显下降,差异均有统计学意义（t＝57．29,P＝0．000;t＝68．53,P＝0．000）。siRNA组48 h细胞增殖抑制率（26．17％±0．28％）较阴性对照组（9．28％±0．22％）和空白对照组（6．47％±0．31％）明显提高,差异均有统计学意义（t ＝31．45,P＝0．004;t＝34．64,P＝0．002）。siRNA组细胞的穿膜细胞数（32．5±8．5）／10 HP明显低于阴性对照组（98．4±12．3）／10 HP和空白对照组（112．6±11．3）／10 HP,差异有统计学意义（t＝95．64,P＝0．000;t＝105．17,P ＝0．000）。siRNA 组的划痕愈合率（28．17％±1．46％）显著低于阴性对照组（77．38％±2．24％）和空白对照组（79．41％±3．17％）,差异有统计学意义（t ＝85．86,P＝0．000;t ＝89．37,P＝0．000）。结论 Pyk2基因参与肝癌Hep3B细胞的增殖、侵袭及迁移,与肿瘤发展、侵袭、转移等密切相关,Pyk2有望成为肝癌诊断和治疗的分子靶标。     

miRNA-519d对卵巢癌的生长抑制作用及其对XIAP表达的影响

目的 探讨MicroRNA-519d(miRNA-519d)对卵巢癌细胞生长抑制的作用及其对XIAP表达的影响.方法对人卵巢癌细胞系OVCAR3瞬时转染miR-519d mimic(实验组)和NC(阴性对照组),不进行任何转染为空白对照组,转染48 h后进行MTT实验、流式细胞实验、Transwell侵袭实验,观察卵巢癌细胞生长抑制状况,WB实验测定XIAP的表达变化.结果定量Real-time PCR检测显示:miR-519d的表达水平均较对阴性对照组与空白对照组有明显的增高(P<0.05).MTT检测显示:上调OVCAR3细胞内miR-519d水平后,细胞增殖抑制率为(29.81±8.24)%,而阴性照组与空白对照组分别为(2.49±0.28)%和(1.98±0.34)%,对比差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞术检测显示实验组OVCAR3细胞凋亡率为(8.33±1.39)%,而阴性对照组与空白对照组分别为(2.13±2.11)%和(1.89±1.08)%,对比差异有统计学意义(P<0.05).Transwell侵袭实验显示:转染miR-519dmimics后实验组、阴性对照组、空白对照组的三组的细胞转移能力对比无明显差异(P>0.05).Western实验结果显示:处理后实验组的XIAP蛋白相对表达量为(0.98±0.34),阴性对照组为(7.54±1.22),空白对照组为(7.67±1.32),对比差异有统计学意义(P<0.05).结论增强miR-519d的表达能对卵巢癌细胞的增殖起抑制作用,并促进其凋亡,而对卵巢癌细胞的转移没有影响,能抑制XIAP的表达,表明miR-519d在卵巢癌的生长中起到一定的抑制作用.