miR-205对肾上腺皮质癌SW-13细胞转移潜能影响的研究

目的:通过调控miR-205在肾上腺皮质癌(ACC)细胞株SW-13中的表达,探讨miR-205对SW-13细胞生物学行为的影响。方法:通过基因重组技术构建pcDNA3.1(+)-miR-205重组质粒并合成miR-205的反义寡核苷酸作为反向对照,调控miR-205在肾上腺皮质癌SW-13细胞中表达,实时荧光定量PCR法验证miR-205表达情况;分别采用MTS、EdU、TUNNEL及Transwell小室法,检测过表达及抑制miR-205对增殖、凋亡及侵袭的影响。结果:在转染pcDNA3.1(+)-miR-205及miR-205反义寡核苷酸后,SW-13细胞中miR-205分别上调了63.2倍(P=0.001)及下调了86.3%(P=0.002)。MTS结果显示,在24、48、72和96h时,miR-205上调后SW-13细胞增殖率下降了(10.50±1.80)%、(23.67±4.80)%、(30.9±5.40)%和(38.34±6.20)%,P值分别为0.041、0.014、0.016和0.032;miR-205下调后增殖率提高了(25.31±3.20)%、(32.51±4.60)%、(40.15±4.10)%和(38.34±6.20)%,P值分别为0.032、0.026、0.022和0.013。TUNNEL结果显示,pcDNA3.1(+)-miR-205组SW-13细胞凋亡数为(46±4)个,pcDNA3.1(+)组为(25±3)个,P=0.001 9;anti-miR-205转染组为(11±2)个,空白组为(25±3)个,P=0.002 5。Transwell侵袭实验显示,pcDNA3.1(+)-miR-205组穿过小室膜细胞数为(43±8)个,pcDNA3.1(+)组为(120±15)个,P=0.001 4;anti-miR-205转染组为(118±14)个,空白组为(220±20)个,P=0.001 9。结论:miR-205通过抑制细胞增殖、侵袭并促进凋亡在ACC SW-13细胞中起抑癌作用;成功构建pcD-NA3.1(+)-miR-205真核表达质粒,为进一步研究miR-205在SW-13细胞中的基因调控机制奠定基础。     

转染BAX基因对A549细胞系的凋亡及化疗敏感度的影响

目的 探讨BAX转染是否增强人肺癌A549细胞对顺铂致凋亡的敏感度。方法 通过CCK8法检测顺铂对A549细胞体外增殖的影响。应用脂质体介导重组真核表达载体BAX-pcDNA3.1和空载体pcDNA3.1质粒转染至人肺癌A549细胞中,G418筛选阳性细胞。RT-PCR法检测BAX在A549细胞中的表达。将不同浓度的顺铂分别作用于A549、A549/BAX和A549/pcDNA3.1细胞72 h,CCK8法测定各组细胞的存活率,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果 顺铂能抑制A549细胞体外生长,BAX和顺铂使A549细胞发生G₁/S期细胞阻滞。RT-PCR显示转染BAX基因的A549细胞中BAX表达显著增加,转染BAX基因及加药组细胞凋亡率明显增加。 结论 稳定转染BAX基因明显增强A549细胞对顺铂致凋亡作用的敏感度。     

miR-424靶向NRP2对宫颈癌细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响

目的:探讨微小RNA（miR）-424靶向神经纤毛蛋白2（NRP2）对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响。方法:实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测宫颈癌组织和癌旁组织以及宫颈癌细胞SiHa和人宫颈上皮细胞HCerEpiC中miR-424和NRP2蛋白表达情况。将体外培养的SiHa细胞分为对照组、miR-ctrl组（转染miR-ctrl）、miR-424组（转染miR-424模拟物）、miR-424+pcDNA3.1组（共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1空载体质粒）和miR-424+NRP2组（共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1-NRP2过表达载体质粒）,采用实时荧光定量PCR法验证转染效率,免疫印迹法检测SiHa细胞中NRP2蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424和NRP2靶向关系,MTT法检测细胞增殖和顺铂敏感性,Transwell小室检测细胞迁移。结果:双荧光素酶报告基因实验证实miR-424可与NRP2靶向结合;相较于癌旁组织,宫颈癌组织中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高（P＜0.05）;相较于HCerEpiC细胞,SiHa细胞中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高（P＜0.05）;与miR-ctrl组比较,miR-424组SiHa细胞中miR-424表达水平明显升高,而NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的半数抑制浓度（IC50）值均明显降低（P＜0.05）;与miR-424+pcDNA3.1组比较,miR-424+NRP2组细胞中NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的IC50值均明显升高（P＜0.05）;miR-ctrl组和对照组之间以及miR-424+pcDNA3.1组和miR-424组之间上述各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-424可通过靶向调控NRP2表达抑制SiHa细胞增殖、迁移并增强顺铂敏感性。     

长链非编码RNA GAS5调节喉癌细胞生物学行为的实验研究

目的 探讨长链非编码RNA GAS5（lncRNA GAS5）对喉癌Hep2细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测喉癌和癌旁正常组织中GAS5的表达,分析其表达与喉癌临床病理特征的关系。Hep2细胞中分别转染pcDNA3.1-GAS5或siGAS5,另分别转染pcDNA3.1-NC或siNC作对照。MTT法检测转染后Hep2细胞增殖活性,流式细胞术检测Hep2细胞周期和凋亡,QPCR法和Western blotting法检测E2F1、BTF3 mRNA和蛋白的表达。结果 喉癌组织和癌旁正常组织中GAS5 表达水平分别为0.56±0.10和0.98±0.11,差异有统计学意义（P＜0.05）。GAS5表达与分化程度、TNM分期有关。pcDNA3.1-GAS5组24、48 、72 、96 h Hep2细胞存活率明显低于pcDNA3.1-NC组,差异有统计学意义（P＜0.05）;siGAS5组细胞存活率明显高于siNC组,差异有统计学意义（P＜0.05）。pcDNA3.1-GAS5组细胞G1期细胞比例为（68.14±4.33）％,高于pcDNA3.1-NC组,差异有统计学意义（P＜0.05）。pcDNA3.1-GAS组凋亡率高于pcDNA3.1-NC组,差异有统计学意义（P＜0.05）。pcDNA3.1-GAS5组细胞E2F1、BTF3 mRNA和蛋白的水平均低于pcDNA3.1-NC组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;siGAS5组细胞E2F1、BTF3 mRNA和蛋白的水平均高于siNC组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 GAS5可负性调控E2F1和BTF3表达,从而参与调控喉癌细胞的增殖和凋亡。     

miR-663通过靶向TGFB1对肺癌细胞A549增殖的调控

目的利用双荧光蛋白报告基因分析系统,验证miR-663的直接靶基因TGFB1,探讨miR-663促进肺癌细胞A549增殖的可能机制。方法实时定量RT-PCR检测10对肺癌组织和正常肺组织中miR-663的表达水平;利用细胞计数和集落形成实验来验证细胞转染miR-663 ASO后的A549细胞增殖。选取表达绿色荧光蛋白的质粒pcDNA3/EGFP,将TGFB1 3′UTR的一段特异性序列插入该质粒中,并与miR-663及表达红色荧光蛋白质pDsRed2-N1共同转染肺癌细胞系A549,转染后细胞提取的蛋白样品,荧光分光光度计进行定性和定量检测。结果 miR-663在肺癌组织中的表达高于在正常肺组织中的表达;miR-663表达明显促进了细胞A549的增殖;共转miR-663和pcDNA3/EGFP-TGFB13′UTR质粒后,绿色荧光蛋白的表达量明显低于pcDNA3和pcDNA3/EGFP-TGFB13′UTR共转组。结论 miR-663可能通过靶定靶基因TGFB1,促进了肺癌细胞A549的增殖。     

长链非编码RNA NR2F2-AS1对胃癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:研究lncRNA NR2F2-AS1对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR法检测细胞中 NR2F2-AS1、miR-425-5p的mRNA表达情况;将pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-NR2F2-AS1组（转染pcDNA-NR2F2-AS1）、sh-NR2F2-AS1组(转染sh-NR2F2-AS1)、sh-NC组(转染sh-NC)、anti-miR-NC组（转染anti-miR-NC）、anti-miR-425-5p组（转染anti-miR-425-5p）、pcDNA-NR2F2-AS1+miR-NC组（共转染pcDNA-NR2F2-AS1和miR-NC）、pcDNA-NR2F2-AS1+miR-425-5p组（共转染pcDNA-NR2F2-AS1和miR-425-5p mimics）转染至MGC-803、MKN-45细胞;MTT法检测细胞的增殖;流式细胞术检测细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果:与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞MGC-803、MKN-45中NR2F2-AS1的表达显著降低,miR-425-5p的表达显著升高;过表达NR2F2-AS1、抑制miR-425-5p均可抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡;miR-425-5p可抑制野生型NR2F2-AS1的MGC-803、MKN-45细胞的荧光活性;过表达miR-425-5p可逆转过表达NR2F2-AS1对MGC-803、MKN-45细胞增殖和凋亡的作用。结论:lncRNA NR2F2-AS1可抑制胃癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与靶向miR-425-5p有关,将可为胃癌的治疗提供新靶点。     

吲哚胺2,3-双加氧酶上调人肝癌细胞人类白细胞抗原-G的表达

目的:探讨人类吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO）对肝癌细胞人类白细胞抗原-G（humanleucocyte antigen-G,HLA-G）表达的影响。方法:用脂质体lipofectamine^TM2000将pcDNA3.1-IDO重组质粒稳定转染入肝癌SMMC-7721细胞作为实验组（pcDNA3.1-IDO质粒转染组）,同时设置空载体对照组（pcDNA3.1转染组）和空白对照组（未转染组）,用RT-PCR和Western blot鉴定实验组和2个对照组细胞IDO mRNA和蛋白的表达,然后分别给予实验组细胞IDO的抑制剂(2.5 mmol/L 1-D-MD和底物（200μmol/L L-色氨酸）干预48 h,进一步用实时荧光定量PCR和Westernblot检测上述5组细胞中HLA-G mRNA和蛋白的表达水平。结果:RT-PCR和Western blot显示空载体对照组和空白对照组未见IDO表达,而实验组细胞高表达IDO。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,实验组HLA-G mRNA和蛋白表达水平较空载体对照组和空白对照组均明显上调（P均<0.05）,给予1-D-MT和L-色氨酸干预后此效应可逆转。结论:在肝癌SMMC-7721细胞,IDO可以上调HLA-G的表达,色氨酸降解途径参与了此调节过程。     

Indoleamine 2,3-dioxygenase up regulates the expression of human leucocyte antigen-G in hepatocellular carcinoma cells

目的:探讨人类吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)对肝癌细胞人类白细胞抗原-G(human leucocyte antigen-G,HLA-G)表达的影响.方法:用脂质体lipofectamineTM2000将pcDNA3.1-IDO重组质粒稳定转染入肝癌SMMC-77 2 1细胞作为实验组(pcDNA3.1-IDO质粒转染组),同时设置空载体对照组(pcDNA3.1转染组)和空白对照组(未转染组),用RTPCR和Western blot鉴定实验组和2个对照组细胞IDO mRNA和蛋白的表达,然后分别给予实验组细胞IDO的抑制剂(2.5 mmol/L 1-DMT)和底物(200μmol/L L-色氨酸)干预48 h,进一步用实时荧光定量PCR和Westernblot检测上述5组细胞中HLA-G mRNA和蛋白的表达水平.结果:RT-PCR和Western blot显示空载体对照组和空白对照组未见IDO表达,而实验组细胞高表达IDO.实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,实验组HLA-G mRNA和蛋白表达水平较空载体对照组和空白对照组均明显上调(P均＜0.05),给予1-D-MT和L-色氨酸干预后此效应可逆转.结论:在肝癌SMMC-7721细胞,IDO可以上调HLA-G的表达,色氨酸降解途径参与了此调节过程.     

抑制人高迁移率族蛋白1基因表达对胰腺癌细胞凋亡影响的研究

目的:探讨反义人高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因转染对人胰腺癌细胞的凋亡诱导作用及对Bcl-2/bax mRNA表达水平的影响.方法:应用分子克隆技术构建反义HMGB1基因真核表达栽体pcDNA3.1/anti-HMGB1,脂质体介导转染人胰腺癌细胞pane1,G418筛选获得阳性克隆.RT-PCR方法检测HMGB1、Bcl-2和Bax表达水平,MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡及细胞周期情况.结果:成功构建pcDNA3.1/anti-HMGB1真核表达裁体,转染pcDNA3.1/anti-HMGB1可使pancl细胞HMGB1和Bcl-2 mRNA表达水平显著降低,P<0.01;Bax mRNA的相对表达量明显升高,P>0.05;与对照组相比,Bax/Bcl-2 mRNA的比值显著升高,P<0.05.肿瘤细胞增殖能力明显受到抑制,P<0.01;并出现G1期阻滞和凋亡细胞百分率增加.结论:反义HMGB1基因转染能抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,是胰腺癌基因治疗的策略之一.     

Raf激酶抑制蛋白增强卵巢癌细胞的化疗敏感性

摘 要　目的：探讨Raf激酶抑制蛋白（Raf kinase inhibitor protein,RKIP）对卵巢癌SKOV-3细胞化疗敏感性的影响。方法：以脂质体法将含有人全长RKIP基因的真核表达质粒pcDNA3.1-ssRKIP转染入SKOV-3细胞中,Western blotting检测SKOV-3细胞中RKIP蛋白的表达。不同浓度顺铂作用转染后的SKOV-3细胞,MTS法观察RKIP基因转染对顺铂处理后SKOV-3细胞增殖的影响,流式细胞仪检测RKIP基因转染对顺铂诱导SKOV-3细胞凋亡及细胞周期的影响。结果：pcDNA3.1-ssRKIP转染的SKOV-3细胞RKIP表达明显升高。不同浓度顺铂处理细胞24、48、72 h后,RKIP基因转染细胞增殖抑制率显著高于对照细胞（P<0.05）。用2.5 μg/ml顺铂作用SKOV-3细胞24 h后,RKIP转染细胞的凋亡率为（10.86±0.73）%,明显高于未转染细胞的（4.27±0.67）%和空质粒转染细胞的（4.02±0.43）%（P<0.01);在无顺铂作用情况下,RKIP转染细胞的凋亡率为（3.11±0.78）%,仍然高于未转染细胞的（1.51±0.13）%和转染空质粒细胞的（1.97±0.46）%（P<0.01)。细胞周期检测结果显示,RKIP转染细胞G0/G1期的比例下降,S期的比例增加,转染的SKOV-3细胞发生S期阻滞。结论：RKIP基因的转染可以增加卵巢癌SKOV-3细胞对化疗药物顺铂的敏感性。     

Smac/DIABLO增强子宫内膜癌细胞对紫杉醇化疗敏感性的机制研究

目的:研究上调Smac/DIABLO基因在人子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达,对紫杉醇化疗增敏方面的作用及可能机制。方法:构建Smac/DIABLO的过表达质粒pcDNA3.1-Smac,应用脂质体法转染人子宫内膜癌Ishikawa细胞,实验分为过表达组、空载体对照组和空白对照组。转染48 h后,应用qRT-PCR和Western blot法检测Smac/DIABLO mRNA及蛋白表达情况。将转染pcDNA3.1-Smac的Ishikawa细胞暴露于终浓度为0.1 μmol/L紫杉醇中,实验分为pcDNA3.1-Smac+紫杉醇组、紫杉醇组和空白对照组,CCK-8法检测暴露紫杉醇24,48,72,96 h,3组细胞增殖能力的变化。应用Western blot检测Ishikawa细胞过表达Smac/DIABLO并暴露于紫杉醇后,Caspase-3,Caspase-7,Caspase-9蛋白的表达情况。结果:转染48 h后,过表达组较空载体对照组、空白对照组,Smac/DIABLO mRNA及蛋白相对表达量均明显增加（F=152.056,P=0.002;F=697.953,P=0.001）。CCK-8实验结果显示,过表达Smac/DIABLO并暴露于紫杉醇后,pcDNA3.1-Smac+紫杉醇组较紫杉醇组和空白对照组,细胞增殖能力受到抑制（P＜0.05）。Western blot检测到pcDNA3.1-Smac+紫杉醇组Caspase-3,Caspase-7,Caspase-9蛋白的相对表达量比较另外两组明显增加（FCaspase-3=434.277,FCaspase-7=392.401,FCaspase-9=88.936,P＜0.05）。结论:上调Smac/DIABLO表达可增强Ishikawa细胞对紫杉醇的化疗敏感性,其机制可能通过线粒体和死亡受体两条途径,解除凋亡抑制蛋白家族对Caspase的抑制作用。     

自噬基因Beclin1对宫颈癌HeLa细胞生长影响的体内外研究

目的 研究自噬基因Beclin1在宫颈癌细胞株HeLa中过表达对HeLa细胞体内外生长的影响.方法 构建自噬基因Beclin1的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Beclin1,转染HeLa细胞[pcDNA3.1(+)-Beclin1组],同时设空载体转染组[pcDNA3.1(+)组]和空白对照组.采用荧光定量PCR和Western blot法检测3组HeLa细胞中Beclin1 mRNA和蛋白的表达变化,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测3组HeLa细胞生长的变化,采用流式细胞术检测3组HeLa细胞的凋亡情况,采用单丹磺酰尸胺染色检测3组HeLa细胞的自噬情况.将3组HeLa细胞分别接种于裸鼠皮下,观察体内成瘤性和生长情况.结果 pcDNA3.1(+)-Beclin1组、pcDNA3.1(+)组和空白对照组HeLa细胞中Beclin1 mRNA的表达水平分别为994.718 ±468.764、0.570±0.121和0.736±0.251.pcDNA3.1 (+ )-Beclin1组HeLa细胞中Beclin1 mRNA的表达水平较pcDNA3.1(+)组和空白对照组明显增高(P＜0.05),而pcDNA3.1(+)组与空白对照组间的差异无统计学意义(P＞0.05);3组HeLa细胞中Beclin1蛋白的表达情况与mRNA相似.pcDNA3.1(+)-Beclin1组的自噬细胞率为10.9％,明显高于空白对照组和pcDNA3.1(+)组(分别为2.5％和3.1％,P＜0.05).pcDNA3.1(+)-Beclin1组HeLa细胞的凋亡率为(28.2±2.3)％,明显高于pcDNA3.1(+)组和空白对照组[分别为(14.6±4.6)％和(11.2±3.0)％,P＜0.05].Beclin1在HeLa细胞中过表达可抑制肿瘤细胞在体外的生长,抑制率为58.7％;并可使HeLa细胞在裸鼠体内成瘤时间延长,瘤体体积和重量明显小于pcDNA3.1 (+)组和HeLa组(P＜0.05),抑瘤率为52.2％.结论 自噬基因Beclin1过表达可抑制HeLa细胞在体内外的增殖,促进细胞的自噬与凋亡,为宫颈癌基因治疗提供了新的选择途径.     

Sestrin2在鼻咽癌中的表达及其生物学功能

 目的 探讨Sestrin2在鼻咽癌组织和细胞中的表达及其生物学功能。方法 收集46例鼻咽癌患者病理活检组织，免疫组织化学法检测Sestrin2在鼻咽癌及癌旁组织中的表达。利用pcDNA3.1/Sestrin2转染鼻咽癌CNE-1细胞，RT-PCR和Western blot法验证转染效率。CCK-8和流式细胞术检测Sestrin2过表达对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。Western blot法检测Sestrin2过表达对腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达的影响。结果 鼻咽癌组织中Sestrin2的表达水平明显低于癌旁正常组织，且Sestrin2的低表达与TNM分期和淋巴结转移显著相关（P<0.05）。与未处理组和阴性对照组相比，转染组Sestrin2 mRNA和蛋白水平显著升高（P<0.05），细胞增殖能力明显下降，细胞凋亡水平显著升高（P<0.05）。Sestrin2转染组细胞AMPK磷酸化水平升高，mTOR磷酸化水平降低（P<0.05）。结论 Sestrin2在鼻咽癌中低表达，且Sestrin2过表达能显著降低鼻咽癌细胞增殖能力，促进鼻咽癌细胞凋亡，其机制与AMPK和mTOR信号通路有关。     

miR-218对肾癌细胞生物学功能的影响

目的 通过调控miR-218在肾癌细胞株中的表达水平,验证miR-218对肾细胞癌细胞生物学功能的影响.方法 将pcDNA3.1-miR-218稳定转染至肾癌细胞株A498、769-P中,检测肾癌细胞株中miR-218表达水平的变化,采用CCK8、Transwell小室、Annxin V-FITC、生长曲线、克隆实验等,体外验证转染后的癌细胞株在miR-218调控下的细胞活性、侵袭能力、凋亡情况、增殖能力的变化.结果 A498、769-P细胞转染后miR-218相对表达量分别为1.99、1.64,较转染前表达量（1.00）增高,差异均有统计学意义（t=60.82、10.89,均P＜0.000 1）.A498、769-P细胞转染miR-218表达质粒组的细胞活性分别为0.90±0.10、0.68±0.06,低于对照组的1.39±0.14、1.24±0.08,差异均有统计学意义（t=15.02、31.69,均P＜0.000 1）.Transwell检测结果显示,A498、769-P细胞转染miR-218表达质粒组的细胞侵袭能力较对照组减弱（t=15.78、18.80,均P＜0.000 1）.AnnxinV-FITC检测结果显示,A498、769-P细胞株对照组和转染组凋亡细胞比例分别为0.25％、45.77％和0.11％、45.57％.转染组细胞增殖能力较对照组减弱（均P＜ 0.000 1）.结论 体外实验证实miR-218表达上调能够抑制肾癌细胞的生长.     

lncRNA MEG3 increases the radiosensitivity of lung cancer cells by regulating miR-21

Objective To investigate the regulatory mechanism of long-chain non-coding RNA (lncRNA) MEG3 on the sensitivity of lung cancer cell line H1299 to irradiation. Methods The expression of MEG3 and miR-21-5p in lung cancer cell line H1299 was detected by qRT-PCR. Overexpression control group (transfected with pcDNA3.1), MEG3 overexpression group (transfected with pcDNA3.1-MEG3), miR-NC inhibition group (transfected anti-miR-NC), miR-21-5p inhibition group (transfected with anti-miR-21-5p), MEG3 overexpression+miR-NC overexpression group (co-transfected with pcDNA3.1-MEG3 and miR-NC), MEG3 overexpression+miR-21-5p overexpression group (co-transfected with pcDNA3.1-MEG3 and miR-21-5p mimics) were all transfected into H1299 cells by liposome method treated with 4Gy irradiation. Cell survival fraction was detected by colony formation assay. Cell apoptosis was detected by flow cytometry. The binding of MEG3 to miR-21-5p in cells was assessed by dual luciferase reporter assay. Results Compared with normal lung epithelial cells, the expression of MEG3 was significantly decreased, whereas the expression of miR-21-5p was significantly increased in the radioresistant lung cancer cells H1299. Overexpression of MEG3 or inhibition of miR-21-5p could promote the apoptosis and enhance the radiosensitivity of H1299 cells. MEG3 could targetedly regulate the expression of miR-21-5p. Overexpression of miR-21-5p could reverse the enhanced radiosensitivity of MEG3 to H1299 cells. Conclusion LncRNA MEG3 can enhance the sensitivity of lung cancer cells H1299 to irradiation. The mechanism may be related to targeting miR-21-5p.     

lncRNA MEG3通过调控miR-21表达增加肺癌细胞放射敏感性

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) MEG3对肺癌细胞H1299的放射敏感性调控机制。方法 运用qRT-PCR法检测具有放射抗性的H1299细胞中MEG3、miR-21-5p的表达。将过表达对照组(转染pcDNA3.1)、过表达MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-21-5p组(转染anti-miR-21-5p)、过表达MEG3+过表达miR-NC组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-NC)、过表达MEG3+过表达miR-21-5p组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-21-5p mimics)均用脂质体法转染。克隆形成实验检测细胞存活分数,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MEG3与miR-21-5p的结合力。结果 与正常肺上皮细胞相比,H1299细胞中MEG3表达明显降低,miR-21-5p表达明显升高;过表达MEG3或抑制miR-21-5p均可促进H1299细胞凋亡,增强放射敏感性;MEG3可靶向调控miR-21-5p的表达。过表达miR-21-5p可逆转MEG3对H1299细胞放射增强作用。结论 lncRNA MEG3可增强H1299细胞放射敏感性,其机制也许可能与靶向miR-21-5p有关。     

LncRAN MEG3 regulates the radiosensitivity of cervical cancer cells by targeting miR-181a-5p

Objective To evaluate the effect of long-chain non-coding RNA MEG3(LncRNA MEG3) on the radiosensitivity of cervical cancer cells, and to explore its underlying mechanism. Methods The expression of LncRNA MEG3 in cervical cancer cells was detected by qRT-PCR. In the overexpression control group (transfected with pcDNA 3.1), LncRNA MEG3 overexpression group (transfected with pcDNA 3.1-LncRNA MEG3), miR-NC inhibition group (transfected with anti-miR-NC), miR-181a-5p inhibition group (transfected with anti-miR-181a-5p), LncRNA MEG3+miR-NC overexpression group (co-transfected with pcDNA3.1-LncRNA MEG3 and anti-miR-NC), LncRNA MEG3+miR-181a-5p overexpression group (co-transfected with pcDNA 3.1-LncRNA MEG3 and anti-miR-181a-5p), all plasmids were transfected into SiHa cells by liposome method. The cell survival fraction was assessed by colony formation assay. The cell apoptosis rate was evaluated by flow cytometry. The cell fluorescence activity was assessed by dual luciferase reporter assay. The expression levels of PTEN, p-Akt and Akt proteins were detected by Western blot. Results Compared with the radiosensitive group, the expression of LncRNA MEG3 was significantly down-regulated in radiation-resistant cervical cancer tissues (P<0.05), and its expression level was positively correlated with the sensitivity of cervical cancer cells. Overexpression of LncRNA MEG3 or inhibition of miR-181a-5p could significantly enhance the irradiation sensitivity and promote the apoptosis of cervical cancer cell line SiHa (both P<0.05). The fluorescence activity of wild-type LncRNA MEG3 cells was inhibited by miR-181a-5p. Overexpression of miR-181a-5p reversed the irradiation sensitization and pro-apoptosis effect of LncRNA MEG3 and the regulation of the PTEN/Akt signaling pathway on cervical cancer cell. Conclusion LncRNA MEG3 can enhance the sensitivity of cervical cancer cells to radiation exposure, probably by targeting the miR-181a-5p and regulating the PTEN/Akt signaling pathway, which will provide a new direction for improving clinical prognosis of cervical cancer patients.     

LncRNA MEG3靶向miR-181a-5p调控宫颈癌细胞放射敏感性

目的 研究LncRNA MEG3对宫颈癌细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法 运用qRT-PCR法检测放射抗性和放射敏感性宫颈癌细胞中LncRNA MEG3的表达;将过表达对照组(转染pcDNA 3.1)、过表达LncRNA MEG3组(转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、过表达LncRNA MEG3+过表达miR-NC组(共转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3和anti-miR-NC)、过表达LncRNA MEG3+过表达miR-181a-5p组(共转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3和anti-miR-181a-5p),均用脂质体法转染至SiHa细胞;克隆形成实验检测细胞的存活分数;流式细胞术检测细胞的凋亡率;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性;Western blot检测细胞中PTEN、p-Akt、Akt的蛋白表达。结果 与放射敏感组相比,放射抗性宫颈癌组织中LncRNA MEG3的表达明显降低(P<0.05),其表达量与宫颈癌细胞的放射敏感性呈正相关;过表达LncRNA MEG3、抑制miR-181a-5p均可显著增强宫颈癌细胞SiHa放射敏感性,促进凋亡(P<0.05);野生型LncRNA MEG3细胞的荧光活性受miR-181a-5p的抑制。过表达miR-181a-5p逆转了LncRNA MEG3对宫颈癌细胞放射增敏和促凋亡作用及对PTEN/Akt信号通路的调控。结论 长链非编码RNA LncRNA MEG3可增强宫颈癌细胞放射敏感性,其机制可能与靶向miR-181a-5p调控PTEN/Akt 信号通路有关,可为提高宫颈癌的预后提供新方向。     

转录因子HOXC13通过上调PCNA表达促进喉鳞状细胞癌AMC-HN-8 细胞的恶性生物学行为

目的：本研究旨在探讨转录因子HOXC13在喉鳞状细胞癌（LSCC）中的表达、功能及可能的调控机制。方法：常规培 养LSCC细胞,将其分为 sh-NC 组、sh-HOXC13 组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-HOXC13组、pcDNA3.1-PCNA组和sh-HOXC13+ pcDNA3.1-PCNA组,用转染试剂将相应核酸和质粒转染各组细胞。用数据库数据分析HOXC13 mRNA在LSCC组织中的表达;收 集2019年1月至2022年12月在联勤保障部队第九八〇医院耳鼻咽喉头颈外科手术切除的62对LSCC组织及配对的癌旁组织,免 疫组织化学法检测中国人LSCC组织中HOXC13蛋白的表达,qPCR检测中国人LSCC组织、癌旁组织以及各组细胞中HOXC13和 PCNA mRNA的表达,MTS法检测各组AMC-HN-8细胞的增殖能力,平板克隆实验检测各组AMC-HN-8细胞的克隆形成能力,Transwell 小室实验检测各组AMC-HN-8细胞的迁移和侵袭能力,双萤光素酶报告基因实验和染色质免疫沉淀技术（ChIP）验证HOXC13与PCNA 之间的结合关系。结果：HOXC13和PCNA在LSCC组织和细胞中均呈高表达（P<0.05或P<0.01）且两者的表达水平呈正相关（P<0.01）, HOXC13的表达水平与 TNM 分期有明显关联（P<0.01）。敲减 HOXC13可明显抑制AMC-HN-8细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均 P<0.01）,过表达HOXC13则促进TU686细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）。HOXC13可与PCNA启动子区结合并调控其转录。 敲低PCNA可部分逆转HOXC13对AMC-HN-8细胞的恶性生物学行为的促进作用（均P<0.01）。结论：HOXC13通过上调PCNA 促进LSCC细胞的恶性生物学行为,HOXC13是LSSC临床诊断和治疗的潜在靶点。