MDM2环状RNA在急性髓系白血病患者骨髓中的表达及临床意义

目的: 探讨急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者骨髓标本中鼠双微粒体2（murine double minute 2,MDM2）环状RNA（circ-MDM2）表达的临床意义。方法：采用实时定量PCR检测92例AML患者和22例对照组的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells,BMMNCs）中circ-MDM2表达水平。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线评价circ-MDM2表达的诊断价值。分析circ-MDM2表达水平与AML患者临床参数的关系。使用Kaplan-Meier曲线分析circ-MDM2对总体生存时间和无白血病生存时间的影响。结果：与对照组相比,circ-MDM2在AML患者中明显升高（P＜0.05）。circ-MDM2诊断AML的ROC 曲线下面积为0.649,circ-MDM2表达水平可以区分AML患者与对照组（P=0.03）。circ-MDM2低表达患者CEBPA的突变率明显高于circ-MDM2高表达患者（P=0.039）。circ-MDM2高、低表达患者在总体生存时间与无白血病生存时间的差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：circ-MDM2在AML患者中明显上调,并且可以作为诊断AML的潜在生物标志物。     

Nanog高表达可能是急性髓系白血病预后较好的生物标志

目的: 研究Nanog基因表达水平与急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者预后的关系。方法: 采用实时荧光PCR检测31例健康骨髓样本、146例初诊AML患者骨髓样本及其中11例经治疗后达到完全缓解的患者随访标本的Nanog mRNA表达水平。采用受试者工作特征曲线（ROC）区分AML患者与对照者。通过生存曲线分析Nanog mRNA表达水平与生存期的关联。结果： AML患者Nanog mRNA的表达显著高于健康组(P=0.01)。在非低危组患者中,Nanog高表达的患者生存时间明显长于Nanog mRNA低表达组(P＝0.031）。11例完全缓解患者的Nanog mRNA的表达量明显高于治疗前（P＝0.002）。多变量分析显示,Nanog低表达在AML患者中是一个独立的危险因素。 结论： 高表达的Nanog基因是急性髓系白血病患者较好预后的生物学标志。     

急性髓系白血病患者BAALC的表达及其临床意义

目的:检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者BAALC(brain and acute leukemia,cytoplasmic)基因的表达并探讨其临床意义。方法:收集93例初诊AML患者(研究组)和36例非恶性血液病患者(对照组)骨髓,应用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)法检测骨髓单个核细胞中BAALC转录本水平。采用ROC曲线根据其表达水平对AML患者再次分组并比较组间临床参数的异同,分析其临床意义。结果:AML患者BAALC表达水平明显高于对照组(P<0.001)。AML患者的BAALC表达水平根据临界值2.107(ROC曲线敏感度51%、特异性100%)分为高表达组和低表达组。两组患者的性别、年龄、外周血白细胞计数、血小板计数、血红蛋白含量和基因突变差异无统计学意义(P>0.05),但FAB分型、WHO分型、不同核型以及染色体危险程度分型差异有统计学意义(P<0.05),BAALC高表达组原始细胞计数明显高于低表达组(P<0.001)。BAALC高表达组治疗后完全缓解率低于BAALC低表达组(P=0.087);BAALC高表达组患者总体生存时间明显低于BAALC低表达组(P=0.031),正常核型AML患者中BAALC高表达组总体生存时间也明显低于低表达组(P=0.043)。结论:BAALC高表达是AML患者预后不良的影响因素,可作为AML辅助诊断的参考标志。     

急性髓系白血病GLIPR1基因甲基化及其表达

目的：检测GLIPR1基因在急性髓系白血病（AML)细胞株和AML患者骨髓细胞中的甲基化状态和表达水平,探讨其表达水平与启动子甲基化的关系。 方法：以5株白血病细胞株, 以及54例治疗前AML患者骨髓、48例急性淋巴细胞胞白血病（ALL）患者骨髓、40例慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓、35例对照骨髓和8例治疗后完全缓解AML患者骨髓为样本,采用RT-PCR检测GLIPR1 mRNA表达水平,采用甲基化特异PCR（MS-PCR）方法检测GLIPR1基因甲基化状态,并对GLIPR1 mRNA表达水平与其甲基化状态进行相关性分析。 结果：GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平低于CML急性变细胞株和ALL细胞株,而前者甲基化水平高于后者。5-aza-2dC处理细胞后,GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平明显上调,而在CML急性变细胞株和ALL细胞株中的表达水平上调不明显。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平（0.38±0.20）明显低于ALL骨髓（0.76±0.18）、CML骨髓（0.80±0.14）和对照骨髓（0.85±0.12）,在完全缓解AML骨髓中的表达水平明显高于治疗前AML骨髓（0.78±0.13 vs. 0.36±0.20）;而ALL和CML骨髓中的表达水平与对照骨髓比较无明显差异(P＞0.05）。GLIPR1基因在AML骨髓的甲基化阳性率(81.5%)明显高于ALL骨髓（37.5%)、CML骨髓（27.5%)和对照骨髓（14.3%),在完全缓解AML骨髓中的甲基化阳性率明显低于治疗前骨髓(12.5% vs. 75.0%);而在ALL和CML骨髓中的甲基化阳性率与对照骨髓比较无明显差异(P＞0.05）。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平与其甲基化呈负相关。结论：GLIPR1基因在AML中表达下调或缺失及启动子甲基化可能是导致GLIPR1基因表达沉默的原因,GLIPR1基因表达和甲基化水平对判断AML患者的疗效有一定意义。     

急性髓系白血病CTNNA1基因的表达及临床意义

目的：研究急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者钙黏蛋白相关蛋白（α—catenin,CTNNA1）基因的表达情况并探讨其临床意义。方法：应用实时定量PCR（qRT-PCR）法检测25例非恶性血液病患者（对照组）和92例初诊AML患者（观察组）中CTNNA1基因的表达水平,并分析其与临床参数的相关性。结果：观察组中51例（51／92,55．43％）存在CTNNA1低表达,而对照组未发现CTNNA1低表达（0．00％）,两组比较,差异有统计学意义（,=17．152,P〈0．001）;CTNNA1表达水平与AML患者的年龄、性别、外周血白细胞计数、血小板计数、血红蛋白含量、FAB分型、核型分组之间均无相关性（P均〉0．05）。ROC曲线分析表明CTNNA1表达水平能有效鉴别观察组和对照组,AUC=0．806。观察组中CTNNA1低表达的患者化疗后完全缓解率高于对照组,但差异无统计学意义（x^2=2．476,P=0．142）。4例初诊AML患者在获得完全缓解后CTNNA1表达水平均较治疗前有所升高。结论：CTNNA1基因低表达可能是AML中的一个常见分子事件,检测其表达可用于AML患者的辅助诊断和疾病状态监测。     

ABCA3在急性髓系白血病中的表达及其临床意义

目的 检测三磷酸腺苷结合盒转运体A3（ABCA3）基因在急性髓系白血病（AML）细胞中的表达,探讨ABCA3在AML耐药方面的作用及临床意义。 方法 ①应用半定量RT PCR检测33例初治、13例复发/难治成人AML患者及10例正常对照者骨髓单个核细胞ABCA3 mRNA的表达水平,并分析其在不同组间的表达规律;②将初治AML患者按化疗效果分为完全缓解组和未完全缓解组,比较两组间ABCA3的表达水平;③分析ABCA3与AML患者初诊白细胞数、免疫表型、FAB分型等临床特征之间的相关性。结果 ABCA3的表达水平：初治及复发/难治AML组均明显高于正常对照组（P均＜0.01）;复发/难治AML组高于初治组（P＜0.05）;完全缓解组低于未完全缓解组（P＜0.05）;慢性粒细胞白血病急变患者高于其他AML亚型（除M3外,P均＜0.05）。ABCA3的表达水平与AML患者初诊白细胞数、骨髓原始细胞百分数、免疫表型、性别及年龄无明显相关性。结论 ABCA3与AML患者的多药耐药及治疗、预后密切相关。     

急性髓系白血病患者骨髓溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶1的表达分析

目的: 探讨急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）患者骨髓中溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶1（lysophosphatidylcholine acyltransferase 1, LPCAT1）的表达和临床意义。方法: 应用实时定量PCR技术检测60例不同临床分型的AML患者和27例健康对照骨髓标本LPCAT1 mRNA的表达。结果: 与对照组相比,AML患者LPCAT1 mRNA的表达水平显著降低（P<0.001）。60例AML患者中27例（45％）存在LPCAT1 mRNA低表达,而27例对照均未见LPCAT1 mRNA低表达改变,差异有统计学意义（χ2=17.618,P<0.001）。LPCAT1 mRNA低表达与年龄、性别、白细胞计数、血小板计数、血红蛋白、FAB分型及核型危险分级等均无临床相关性（P>0.05）。LPCAT1 mRNA区分AML患者的受试者工作特征（ROC）曲线下面积为0.896（95% CI:0.825~0.967,P<0.001）,LPCAT1 mRNA表达的截断值为0.173时,敏感性和特异性分别为88.3%和81.5%。 结论: LPCAT1低表达是AML中的常见分子事件,或可用于AML辅助诊断。     

骨髓自然杀伤细胞水平对急性髓细胞性白血病患者预后的影响

目的：探讨骨髓自然杀伤（naturalkiller,NK）细胞水平对急性髓细胞性白血病（acutemyeloidleukemia,AML）患者预后的影响。方法：研究分成AML初治组40例,缓解组20例,正常对照组20例。均抽取骨髓液2ml,采用直接免疫荧光标记法对骨髓有核细胞进行单克隆抗体（CD16＋／CD56＋）标记,应用流式细胞仪进行NK细胞数量的检测。结果：初治组患者骨髓NK细胞表达水平较缓解组显著降低（P〈0．01）。缓解组患者骨髓NK细胞表达水平仍低于对照组（P〈0．05）。不同骨髓NK细胞表达水平间原始细胞数量和AML患者疗效差异均有统计学意义（P〈0．01和P〈0．05）。结论：骨髓NK细胞表达水平可以作为AML的预后指标,亦有助于指导治疗。     

急性髓系白血病患者SALL4基因的甲基化改变及其临床意义

目的: 探讨急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者婆罗双树样基因4（Sal-like 4,SALL4）启动子的甲基化状况和临床意义。方法： 分别应用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）技术和实时定量PCR（RQ-PCR）技术检测45例初发AML患者和20例缺铁性贫血患者骨髓标本的SALL4甲基化状态和SALL4表达水平;同时,对AML患者的SALL4甲基化改变与临床特征相关性进行分析。结果： 9例（20.0%）AML患者存在SALL4基因启动子低甲基化改变,而20例对照均无SALL4基因低甲基化,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。SALL4启动子低甲基化改变与AML患者年龄、性别、血红蛋白含量、血小板计数均无相关性（P>0.05）,但低甲基化患者的白细胞计数明显高于甲基化患者（P=0.027）。SALL4表达水平和SALL4低甲基化明显相关（P＜0.05）。按WHO分型,本研究中共有7类亚型,亚型间SALL4低甲基化频率差异无统计学意义（P＞0.05）。中危和高危组核型患者中SALL4低甲基化频率明显高于低危组患者（P＜0.05）。结论： SALL4低甲基化是AML患者中一个常见分子事件,可能与AML患者中高危核型相关。     

LncRNA-MEG3作为急性髓系白血病预后标志物调控细胞增殖

目的:探索长链非编码-MEG3(LncRNA-MEG3)与急性髓系白血病(AML)生存期的关系,并分析它对细胞增殖的调控作用。方法:采用过表达技术对AML细胞系HL-60、THP-1和U937的Lnc RNA-MEG3进行过表达,用MTT检测细胞增殖情况。收集初发未治的10例AML患者和10名健康人的骨髓标本及相关临床资料,用实时荧光定量PCR(q PCR)检测Lnc RNA-MEG3在骨髓中的表达情况。检测75例被确诊为AML患者骨髓中Lnc RNA-MEG3的表达情况,并跟踪随访5年,分析Lnc RNA-MEG3的表达与患者生存结局的关系。结果:与健康人比较,AML患者骨髓中LncRNA-MEG3的表达量明显下调,差异有统计学意义(P0.01)。生存分析显示,MEG3低表达组患者的中位生存时间为21.162个月,明显短于MEG3高表达组的41.715个月(P0.000 1)。MTT结果显示,LncRNA-MEG3过表达细胞组的细胞增殖明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:LncRNA-MEG3在AML骨髓中表达下调,LncRNA-MEG3低表达可能是AML预后不良的新生物标记物,并能调控AML细胞的细胞增殖。     

VNN1基因在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的 通过在线数据库挖掘分析VNN1基因在急性髓性白血病(acute myeloid leukemia, AML)中的表达并探讨其临床意义。方法 使用癌症基因图谱(the cancer genome atlas, TCGA)、组织特异性基因表达库(the genotype-tissue expression, GTEx)和高通量基因表达数据集(gene expression omnibus, GEO)等数据库分析VNN1基因在AML患者和正常对照组中的表达水平;通过下载TCGA、GEO数据集中AML患者的数据信息,进行VNN1基因表达水平与临床特征及总体生存期的相关性分析;利用STRING数据库分析VNN1蛋白-蛋白互作网络,并进行GO基因富集和KEGG通路富集分析,通过单样本基因集富集分析(ssGSEA)来评估VNN1与免疫细胞浸润之间的相关性。结果 与健康对照组(0.025±0.053)相比,VNN1在AML中显著高表达(3.306±1.991)(P<0.001),且其表达水平与AML患者细胞遗传学风险、FLT3突变状态、NPM1突变状态存在密切关系(P<0.05);R...     

分化抑制因子1基因在急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞中的表达

目的: 探讨分化抑制因子1（inhibitor of differentiation 1,ID1）基因在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者骨髓单个核细胞中的表达及其临床意义。方法: 应用实时定量PCR方法检测153例初诊AML患者骨髓单个核细胞ID1基因的转录本水平。结果： ID1基因的表达范围为0.000～3.536（中位为0.030）。以中位数值为界将AML患者分为高表达组和低表达组,两组AML患者性别、外周血小板计数以及常见基因突变无统计学差异（P>0.05）,外周血白细胞计数、外周血血红蛋白、FAB分型、WHO分型、核型分组及核型危险程度分组趋近统计学差异（P<0.10）。ID1高表达患者年龄以及骨髓原始细胞比例显著高于ID1低表达患者（P=0.033、0.035）。ID1高表达组患者经治疗后完全缓解率低于ID1低表达组（P<0.01）,且定量分析显示经1～2个疗程诱导化疗获得完全缓解的AML患者初诊时ID1表达水平显著低于未获得完全缓解的AML患者（P=0.001）。生存分析显示在全部患者、非M3患者或正常核型AML患者中,ID1高表达患者总体生存时间均明显短于ID1低表达患者（P=0.002、0.008和0.050）。 结论： ID1基因表达水平可作为AML患者化疗反应以及预后判断的分子标志。     

N-乙酰基转移酶10基因与急性髓系白血病病人预后的关系分析

目的：探究N-乙酰基转移酶10(N-acetyltransferase 10,NAT10)与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)预后的关系。方法：选取2015年9月至2018年1月收治的84例初治AML病人(初治组)、20例复发AML病人(复发组)、20例AML完全缓解病人(缓解组)和20名健康人(对照组)为研究对象。用RT-PCR检测受试者骨髓单个核细胞中NAT10 mRNA的表达。ROC曲线分析NAT10 mRNA早期诊断AML的价值,计算曲线下面积(AUC)、灵敏度和特异度。以NAT10 mRNA中位表达水平将84例AML病人分为高表达组和低表达组,比较2组病人的生存预后。结果：初治组和复发组骨髓单个核细胞中NAT10 mRNA相对表达量均高于缓解组和对照组(P<0.05～P<0.01)。NAT10 mRNA早期诊断AML的AUC为0.827(95%CI:0.723～0.930,P<0.01),灵敏度和特异度分别为83.6%和82.6%。COX多因素分析显示,FLT3-ITD/TKD突变和NAT10 mRNA高表达是AML病人...     

急性髓系白血病病人CDH13基因甲基化状态检测及其临床意义

目的:检测急性髓系白血病(AML)病人CDH13基因甲基化状态,探讨其与病人临床特征及预后的相关性.方法:用甲基化特异性PCR法分别检测34例AML病人(AML组)和22例非恶性肿瘤的缺铁性贫血病人(对照组)骨髓标本中CDH13基因启动子甲基化状态,用半定量反转录PCR法检测2组标本中CDH13 mRNA相对含量.AML组病人随访2年,统计总体生存时间.结果:AML组标本CDH13基因甲基化阳性率为61.76%,高于对照组的27.27%(P<0.05);AML组CDH13mRNA相对含量为0.355 ± 0.109,明显低于对照组的0.745 ± 0.271(P<0.01).不同性别、年龄以及临床分型AML病人的CDH13基因甲基化差异均无统计学意义(P>0.05).Kaplan-Meier生存曲线分析显示,CDH13基因甲基化阳性的AML病人总体生存时间为(12.4 ± 3.3)个月,明显短于甲基化阴性病人的(18.6 ± 4.1)个月(P<0.01).结论:AML病人中存在CDH13基因甲基化现象,检测CDH13基因表达水平有助于判断AML病人预后.     

wt1定量联合FCM在急性髓细胞白血病MRD监测中的临床应用

目的 探讨在急性髓细胞白血病(AML)中Wilms瘤基因1(wt1) mRNA定量联合多参数流式细胞术(FCM)分析监测微小残留病灶的临床应用.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应技术(qRT-PCR)检测35例AML患者的wt1表达水平;将患者根据不同亚型分组检测;并且对9例缓解和4例复发患者进行随访,检测wt1表达水平.采用FCM分析AML中微小残留病灶(MRD)水平.结果 与对照组比较,AML病例组wt1表达水平明显增高,差异有统计学意义(P<0.05).在初诊的各种AML亚型中,M2亚型wt1表达水平最高,M6亚型wt1表达水平最低.9 例随访患者提示在达到完全缓解时wt1表达水平下降,而4例随访复发患者在复发时再次升高.FCM检测MRD在不同阶段异常髓系细胞比例明显不同.联合qRT-PCR和FCM技术对MRD检测的敏感性和特异性大大提高,两者具有一致性;利用ROC曲线对复发病例进行分析得到的监测阈值为3.33%.结论 在急性髓细胞白血病中wt1 mRNA定量联合多参数流式细胞术分析可用于监测MRD、评估治疗效果、预后及预测疾病复发风险.     

APP、Fis1、KLRF1和PDCD7基因在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的 探讨淀粉样前体蛋白(APP)、裂殖1同源物(Fis1)、杀伤细胞凝集素样受体亚家族F成员1(KLRF1)和细胞程序性死亡7(PDCD7)mRNA在急性髓系白血病(AML)细胞中的表达及其预后意义.方法 抽取34例AML及10例非恶性血液病患者骨髓.提取总RNA并逆转录成cDNA,SYBR Green I实时定量PCR法检测各基因mRNA表达水 平,采用2-~(△Cr)公式计算基因mRNA相对表达量.结果 AML患者组PDCD7mRNA表达水平均显著高于对照组(Z=-2.213,P=0.027).除M1(1例)、M2a(2例)外的AML各亚型基因表达同对照组比较,APPmRNA在伴有t(8,21)染色体异常的M2表达显著高于对照组(Z=-2.197,P=0.028),而在M4b和M5b中的表达则显著低于对照组(Z=-2.368,P=0.018).APP mRNA在AML亚型间表达有差异,M2显著高于M4和M5(Z=-2.430,P=0.015;Z=-3.175,P=0.001).结论 AML患者高表达PDCD7基因,单核细胞白血病患者低表达APP基因.

Abstract：

Objective To investigate the expression of amyloid precursor protein (APP), Fis1, PDCD7 and KLRF1 mRNA in acute myeloid leukemia (AML) and their prognostic significances. Methods Thirty-four AML patients and 10 patients with nonmalignant hematologic diseases (control group) were recruited in this study. Bone marrows were obtained from these patients to isolate the mononuclear cells, from which total RNA was extracted and reverse transcribed into cDNA. SYBR Green Ⅰ dye-based real-time quantitative PCR method was used to compare the expression of APP, Fis1, PDCD7 and KLRF1 mRNA between two groups. Results The expression level of PDCD7 mRNA in AML patients was significantly higher than that in the control group (Z=-2.213,P=0.027), but APP, Fisl and KLRF1 mRNA expression levels were similar between the two groups (P<0.05). The expression level of APP mRNA in M2 patients with t (8, 21) chromosomal abnormality was significantly higher than that in the control group (Z=-2.197, P=0.028), while APP mRNA expressions in M4b and M5b patients were both lower than those in the control group (Z=-2.368, P-0.018). The expression of APP mRNA differed significantly between the subtypes of AML, higher in M2 than in M4b and M5b (Z=-2.430, P=0.015; Z=-3.175, P=0.001, respectively). Conclusions The expression of PDCD7 mRNA increased significantly in AML patients, and APP mRNA expression is decreased in monocytic leukemia.     

尿路上皮癌胚抗原1在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的: 研究上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)患者卵巢癌组织中长链非编码RNA尿路上皮癌胚抗原1(urothelial carcinoembryonic antigen 1,UCA1)的表达及临床意义。方法: 收集30例卵巢良性疾病者及66例EOC患者卵巢组织样本,应用实时定量PCR法检测UCA1表达。应用ROC曲线分析UCA1表达对卵巢癌的诊断意义,并以ROC方法将EOC患者分为UCA1高表达组和低表达组,分析两组临床病理参数间的差异;通过Kaplan Meier生存分析评价UCA1表达对患者生存的影响。结果： EOC患者UCA1表达水平明显高于卵巢良性疾病者(P<0.05)。ROC曲线分析表明UCA1表达能够很好地区分EOC与卵巢良性疾病,曲线下面积为0.838(95%CI：0.749～0.927,P<0.05)。UCA1异常表达与FIGO分期、肿瘤分化程度以及淋巴结转移相关(P<0.05)。UCA1高表达者总体生存及无病生存明显低于UCA1低表达者(P=0.004,0.037)。 结论： UCA1过表达是EOC患者的常见分子事件,可作为EOC患者预后不佳的分子标志。     

急性白血病死亡相关蛋白激酶基因启动子的甲基化

目的 研究死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化和基因表达在初治急性白血病患者中的临床意义.方法 采用MSP方法和RT-PCR方法分别检测60例急性髓系白血病患者、55例急性淋巴细胞白血病患者和17例正常人DAPK基因的甲基化状态及其mRNA的表达,统计学分析各组之间的表达差异.结果 急性淋巴细胞白血病组的DAPK甲基化阳性率(29.1％)高于急性髓细胞白血病组(5％)和正常组(0％)(P＜0.0l25),但甲基化与急性淋巴细胞白血病组患者临床特征无关(P＞0.05).DAPK基因mRNA的表达水平以正常组最高,急性髓细胞白血病组次之,急性淋巴细胞白血病组最低(P=0.000).急性淋巴细胞白血病组患者DAPK mRNA表达与其启动子甲基化呈显著负相关(P＜0.05).结论 DAPK基因启动子在初治急性淋巴细胞白血病患者中甲基化率高于初治急性髓细胞白血病患者和正常人,但与患者临床特征无关.急性淋巴细胞白血病患者DAPK基因表达水平低或不表达可能与其甲基化有关.