Cdx2过表达对裸鼠人胃癌移植瘤生长和转移的影响

目的观察Cdx2基因过表达对裸鼠人胃癌移植瘤生长和转移的影响。方法利用脂质体将pCMV-Cdx2-HA质粒或pCMV-HA质粒分别转染人胃癌MGC-803细胞,命名为MGC-803/Cdx2细胞或MGC-803/EV细胞。将两种细胞分别注射入裸鼠近腋右背侧皮下,待皮下成瘤后将瘤组织接种于胃,建立裸鼠人胃癌移植瘤模型：接种MGC-803/Cdx2皮下瘤的裸鼠为实验组,接种MGC-803/EV皮下瘤的裸鼠为对照组;30 d后处死裸鼠,观察移植瘤生长、转移情况,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR）和Western blot技术检测移植瘤中Cdx2 mRNA和蛋白的表达。结果实验组肿瘤体积为(13.42±2.34）mm3,明显低于对照组的肿瘤体积(17.59±2.80）mm3(P<0.05）;实验组成瘤率(73.3%）低于对照组成瘤率(86.7%）;两组肿瘤转移情况比较,差异无统计学意义(P>0.05）;实验组肿瘤组织Cdx2 mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05）。结论 Cdx2过表达抑制裸鼠人胃癌移植瘤的生长,但对肿瘤转移无明显影响。     

尼美舒利对人喉鳞癌Hep-2细胞祼鼠移植瘤CD44和MMP-7表达的影响

目的探讨尼美舒利对喉鳞状细胞癌裸鼠皮下移植模型的抑瘤作用及机制。方法建立人喉鳞癌Hep-2细胞株裸鼠移植瘤模型,应用尼美舒利处理裸鼠,观察肿瘤生长情况并绘制生长曲线,免疫组织化学技术检测移植瘤组织中COX-2、CD44和MMP-7蛋白表达,RT-PCR技术检测移植瘤组织中COX-2、CD44 和MMP-7mRNA表达情况。结果与对照组相比,治疗组肿瘤体积增长较对照组缓慢,体积抑瘤率为63.36%,重量抑瘤率达51.81%,肿瘤体积和重量均明显低于对照组（P均＜0.05）。实验组和对照组治疗前后裸鼠体重增长值差异无统计学意义（P＞0.05）。实验组COX-2、CD44和MMP-7蛋白及mRNA表达明显低于对照组,差异有统计学意义（P均＜0.05）。结论尼美舒利可有效抑制人喉鳞癌细胞系Hep-2裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抑制COX-2、CD44及MMP-7表达有关。     

miR-486-5p对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨miR-486-5P对裸鼠皮下人胃癌移植瘤生长的影响及其可能的作用机制.方法:建立胃癌SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤模型,经miR-486-5P过表达质粒处理后,观察裸鼠皮下移植瘤生长情况,采用Western blotting及免疫组织化学法检测miR-486-5p靶基因神经纤毛蛋白-2(NRP2)的表达水平.结果:成功构建胃癌SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤模型;实验组移植瘤内miR-486-5p的表达水平明显高于对照组(P＜0.05),miR-486-5p可明显抑制裸鼠皮下胃癌移植瘤的生长;与阴性及空白对照组相比,实验组平均瘤体质量明显下降[(0.404±0.080) vs (0.748±0.122)、(0.788±0.176)g,均P＜0.05];移植瘤平均体积明显减小[(0.333 ±0.039) vs (0.597 ±0.175)、(0.594±0.216)cm3,均P＜0.05],实验组的抑瘤率达46.99％;实验组经miR-486-5p过表达质粒处理后,免疫组化检测结果显示,NRP2蛋白主要定位于胃癌细胞质内,呈棕黄色颗粒;实验组NRP2蛋白的IHS得分显著低于阴性及空白对照组[(2.2±0.84) vs (6.4±0.89),(6.2±1.48),均P＜0.01];阴性对照组与空白对照组的得分差异无统计学意义(P＞0.05);Western blotting检测结果显示,实验组移植瘤组织中NRP2蛋白的相对表达量显著低于阴性及空白对照组[(0.04±0.006) vs (0.70 ±0.03),(0.68±0.02),P＜0.01].阴性和空白对照组间的IHS得分值、抑瘤率及NRP2蛋白表达水平的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:miR-486-5p可明显抑制裸鼠皮下胃癌SGC-7901细胞移植瘤的生长,其作用机制可能与抑制NRP2的表达有关.     

p27mt对裸鼠肝癌移植瘤侵袭性生长的影响

目的 研究外源性突变型p27基因(p27mt)对裸鼠皮下肝癌移植瘤侵袭性生长的影响。方法 应用细胞移植法把人原发性肝癌细胞株SMMC-7721种于BALB／c裸鼠皮下,构建人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,将PBS液(100μl)、腺病毒介导的突变型p27(Ad-p27mt, 5.0×109 pfu, 100μl)及Lac Z(Ad Lac Z, 5.0×109 pfu, 100μl)分别注射到瘤体后,每隔3天测量肿瘤体积,计算肿瘤生长抑制率。于处理后21天取材行冰冻切片,免疫组织荧光化学法观察各组移植瘤的P27蛋白、CD44v6及Ⅷ因子的表达,数码成像后,用Image-Pro Plus软件计算荧光亮度和细胞总数,测量积分吸光度（integrated optical density,IOD）,计算平均吸光度（Average optical density,AOD）,以平均吸光度来反映细胞因子表达水平。结果 与Ad-Lac-Z、空白对照组比较,Ad-p27组移植瘤P27mt蛋白表达明显增高（P<0.01),并且过表达的P27mt蛋白明显减小了移植瘤体积,抑制了肿瘤的生长速度;血管大体观发现Ad-p27组血管不仅细而且分支少,Ⅷ因子免疫组织荧光化学观察发现瘤体内血管密度明显降低;同时Ad-p27组也明显降低了肿瘤细胞CD44v6 （P<0.05)。结论 Ad-p27mt能在裸鼠SMMC-7721肝癌皮下移植瘤过表达P27mt蛋白,不仅通过抑制血管的生成而抑制肿瘤的生长,而且通过降低肿瘤细胞CD44v6的表达而显著抑制移植瘤的侵袭性。     

抑制skp2基因表达对肺癌移植瘤生长影响的实验研究

目的 探讨抑制Skp2基因表达对裸鼠肺癌移植瘤生长以及移植瘤组织中Skp2、p27、p21蛋白表达的影响。方法 构建抑制Skp2基因表达的重组质粒Skp2 shRNA 1和Skp2 shRNA 2,以及Skp2 shRNA HK重组质粒（阴性pGensil-HK对照质粒）。3种重组质粒分别转染肺癌SPC-A-1细胞,提取该细胞悬液于裸鼠皮下注射建立肺癌转染细胞裸鼠动物模型。观察肿瘤形成时间,测量其体积,绘制肿瘤生长曲线。裸鼠接种转染肺癌细胞30天后处死,提取移植瘤组织并计算抑瘤率, Western blotting检测移植瘤组织中Skp2、p27、p21蛋白的表达。结果 转染Skp2 shRNA 1和Skp2 shRNA 2质粒的裸鼠肿瘤生长明显减慢。与对照组和Skp2 shRNA HK组比较,Skp2 shRNA 1和Skp2 shRNA 2质粒组肿瘤体积明显缩小（P＜0.05）,抑瘤率分别为（69.2±5.6）％和（64.5±6.1）％。与对照组比较, Skp2 shRNA 1和Skp2 shRNA 2质粒组Skp2蛋白下调率为（73.5±4.2）％、（67.3±3.2）％, p27蛋白上调率为（63.6±2.2）％、（57.3±2.4）％,p21蛋白上调率为（54.6±3.4）％、（51.7±3.1）％。结论 抑制Skp2基因表达可明显抑制移植瘤生长,Skp2基因有望成为肺癌基因治疗的新靶点。     

抑制膜联蛋白A2表达对人胃癌细胞株裸鼠移植瘤生长的影响及机制

摘 要：［目的］ 通过体内研究探讨膜联蛋白A2（ANXA2）对胃癌生长的影响及相关作用机制。［方法］ 常规培养人胃癌细胞株BGC-823;将细胞接种到裸鼠皮下制备移植瘤模型。制模成功后随机分组,分别以脂质体/ANXA2-siRNA复合物（实验组）、脂质体/Non-siRNA复合物（对照组）或生理盐水（空白组）分别在各组肿瘤局部注射,每4d干预1次。干预4次后处死,绘制肿瘤生长曲线并比较瘤重。应用荧光定量RT-PCR及免疫组化技术检测各组ANXA2、增殖细胞核抗原（PCNA）、p27mRNA和蛋白表达。［结果］ 裸鼠皮下移植瘤造模成功率100.00%（15/15）。实验组肿瘤生长比其他两组缓慢,最终体积实验组为（1680.26±110.51）mm3,对照组为（2194.18±188.48）mm3,空白组（2172.37±212.36）mm3（F=9.341,P=0.004）;肿瘤重量实验组（20.63±0.46）g,对照组为（22.92±0.86）g,空白组为（23.44±0.90）g（F=11.688,P=0.002）。PCR及免疫组化结果显示实验组ANXA2、PCNAmRNA和蛋白表达明显低于其他两组（P<0.05）,而p27mRNA和蛋白表达明显高于其他两组（P<0.01）。［结论］ 抑制ANXA2基因表达后胃癌移植瘤的生长明显受到抑制,这可能与ANXA2基因调控PCNA、p27表达有关。     

microRNA-486对结直肠癌裸鼠皮下移植瘤生长抑制作用及其机制的研究

背景与目的：越来越多的证据表明microRNA在生物进程的各个阶段发挥重要作用。在不同的恶性肿瘤中microRNA-486表达上调或者下调,但microRNA-486对人结直肠癌潜在的作用尚不清楚。该研究旨在探讨其对细胞系SW620裸鼠皮下移植瘤生长情况的影响及其可能的作用机制。方法：取18只裸鼠,按简单随机法分为实验组、阴性对照组和空白对照组。每组5只,分别皮下接种SW620细胞。造模成功后实验组、阴性对照组、空白对照组每3天分别于瘤周注射miRNA-486过表达质粒、空白载体及等量PBS,比较各组裸鼠皮下瘤体的体积,接种3周后处死裸鼠,取出皮下瘤组织,用免疫组织化学法和Western blot法分析比较neuropilin-2的表达。结果：实验组瘤体生长速度明显低于阴性对照组和空白对照组;实验组裸鼠皮下种植瘤的大小为(0.32±0.12) cm³,阴性对照组为(0.77±0.31) cm³,空白对照组为(0.82±0.18) cm³;实验组瘤体体积显著小于其他两组体积(P=0.006);实验组瘤体质量为(0.40±0.08) g,明显低于阴性对照组(0.75±0.18) g及空白对照组(0.79±0.18) g(P=0.008);实验组种植瘤中neuropilin-2的表达量较另外两组下降(P=0.000)。结论：注射miR-486过表达质粒后结直肠癌细胞SW620裸鼠皮下移植瘤的生长可受到抑制,其作用可能是通过降低neuropilin-2的表达来实现的。miR-486有望成为结直肠癌治疗新的靶点。     

RSK4与Ki-67、cyclin D1、CXCR4、E-cadherin在乳腺癌裸鼠移植瘤中的相关性研究

目的 分析乳腺癌裸鼠移植瘤中核糖体 S6蛋白激酶 4（ribosomal protein S6 kinase 4,RSK4） 与Ki-67、cyclin D1、CXCR4、E-cadherin表达的相关性,进一步探讨RSK4在乳腺癌发展中的作用机制。方法 将转染siRNA （RSK4-RNAi-LV）的MCF-7细胞（实验组）、转染siRNA （NC-GFP-LV）的MCF-7细胞（阴性对照组）和未转染的MCF-7细胞（空白对照组）分别接种至裸鼠乳腺脂肪垫下,建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,剥离裸鼠移植瘤;采用免疫组织化学法检测移植瘤标本中增殖因子RSK4、Ki-67、cyclin D1 及侵袭因子CXCR4、E-cadherin蛋白的表达。结果 实验组RSK4、E-cadherin蛋白的表达水平分别为（3.2±0.5）％、（28.2±0.7）％,明显低于空白对照组的（36.7±3.4）％、（51.7±4.2）％和阴性对照组的（61.1±5.1）％、（49.2±3.8）％,差异有统计学意义（F=56.79,61.89,P＜0.05）。实验组Ki-67、cyclin D1、CXCR4蛋白的表达水平分别为（67.8±5.8）％、（61.7±4.6）％、（56.3±3.9）％,明显高于空白对照组的（34.5±1.4）％、（29.7±2.5）％、（30.7±3.1）％和阴性对照组的（29.8±1.9）％、（35.7±4.6）％、（28.5±3.7）％,差异有统计学意义（F=45.24,52.16,61.24,P＜0.05）。相关性分析显示,RSK4与 Ki-67、cyclin D1、CXCR4表达呈负相关（r=-0.857,-0.826,-0.867,P<0.001）,与E-cadherin表达呈正相关（r=0.879,P<0.001）。 结论 RSK4可能通过调节CXCR4、Ki-67、CyclinD1和E-cadherin肿瘤相关因子的表达,在乳腺癌在乳腺癌生长及转移过程中发挥作用。     

c-jun基因沉默对放射抗拒鼻咽癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响

目的 探讨c-jun基因沉默对人鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法 用携带shRAN慢病毒载体感染CNE-2R细胞以沉默c-jun基因,构建c-jun-shRNA-CNE-2R细胞组（c-jun-shRNA组）以及阴性对照NC-shRNA-CNE-2R细胞组（NC组）,以CNE-2R细胞为空白对照组,采用Western blot 检测3组细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白的表达水平。构建裸鼠模型,观察3组细胞裸鼠皮下种植瘤生长曲线及体积;采用免疫组化法检测移植瘤组织中VEGF、CD34的表达,并检测组织内微血管密度（microvessel density,MVD）。结果 Western blot 结果显示,c-jun-shRNA组细胞VEGF蛋白表达较NC组及空白对照组明显下调（P<0.05）。裸鼠模型实验中,c-jun-shRNA组移植瘤体积为（720.85±72.10） mm³,质量为（0.42±0.04）g,MVD为11.69±3.30;NC组移植瘤体积为（1 196.81±90.69） mm³,质量为（0.80±0.08）g,MVD为32.56±7.33;空白对照组移植瘤体积为（1 203.76±100.42） mm³,质量为（0.83±0.05）g,MVD为35.45±4.87;c-jun-shRNA组种植瘤体积、质量、MVD较NC组和空白对照组低（P<0.05）。免疫组化检测结果显示,移植瘤组织中VEGF蛋白表达c-jun-shRNA组呈弱阳性,NC组及空白对照组组均呈强阳性。结论 c- jun基因沉默可抑制放射抗拒性鼻咽癌移植瘤生长及血管生成。     

阿帕替尼对胃癌HGC-27细胞放射敏感性的影响及其作用机制

目的 探讨阿帕替尼对胃癌HGC-27细胞放射敏感性的影响及可能的作用机制。方法 以不同浓度阿帕替尼（5 μmol/L、10 μmol/L、15 μmol/L、20 μmol/L）以及不同照射剂量（2 Gy、4 Gy、6 Gy、10 Gy、20 Gy）分别处理HGC-27细胞,再选取2 Gy和6 Gy单独照射或联合10 μmol/L阿帕替尼处理HGC-27细胞;采用ELISA法检测细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达情况,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,免疫荧光染色技术检测γ-H2AX的表达情况。结果 阿帕替尼呈浓度及时间依赖性抑制胃癌HGC-27细胞增殖（均P<0.05）;不同剂量照射可促进细胞VEGF表达释放,且呈时间及剂量依赖性（均P<0.01）。10 μmol/L阿帕替尼分别联合2 Gy和6 Gy照射后,HGC-27细胞增殖抑制作用、细胞凋亡率及G2/M期的细胞比例均较单照组升高（均P<0.01）,且6 Gy联合组的作用强度大于2 Gy联合组（均P<0.01）。6 Gy联合组细胞核内γ-H2AX焦点淬灭较6 Gy单照组延迟。结论 阿帕替尼通过抑制细胞增殖,促进细胞凋亡并诱导细胞周期再分布增强胃癌HGC-27细胞放射敏感性,其作用机制可能与延迟γ-H2AX表达而干扰DNA双链断裂修复有关。     

p53β异构体在rmhTNF联合顺铂抑制胃癌细胞增殖中的作用

目的 探讨p53β异构体在rmhTNF联合顺铂干预人胃癌细胞MKN45和SGC7901生长实验中的生物学功能。方法 不同浓度rmhTNF单独或联合顺铂作用于人胃癌细胞MKN45和SGC7901,应用细胞增殖/毒性检测试剂盒（CCK-8试剂盒）检测抑制率;巢式反转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测p53β和bcl-2 mRNA的表达变化情况。结果 rmhTNF单独或联合顺铂（4 μg/ml）作用MKN45细胞24 h,联合组抑制率大于单独组,且随rmhTNF浓度的增加而增加,组间差异有统计学意义（P<0.05）;在SGC7901细胞中,联合组抑制率虽有增加但差异无统计学意义（P>0.05）。rmhTNF单独使用对MKN45细胞中p53β和bcl-2表达无影响,差异无统计学意义（F=0.006,P>0.05;F=1.179, P>0.05）,而与顺铂联合作用可明显上调p53β和下调bcl-2的表达,并且随rmhTNF浓度的增加,p53β逐渐增加,bcl-2逐渐减少,差异有统计学意义（F=18.577,P<0.01;F=169.309, P<0.01）。在SGC7901细胞中未见p53β表达,但bcl-2高表达。rmhTNF和顺铂单独或联合作用时bcl-2虽有降低但差异无统计学意义（F=1.340, P>0.05）。p53β与bcl-2表达呈负相关（r=-0.897, P<0.01）,细胞抑制率与bcl-2的表达呈负相关（r=-0.906, P<0.01）。结论 rmhTNF和顺铂对p53β阳性的胃癌细胞MKN45表现出明显的抑制效应且rmhTNF和顺铂联合作用时可表现出协同抗肿瘤作用,其协同抗肿瘤效应可能是通过p53β调节下游分子bcl-2实现的。     

CD44v6和EGFR表达对Ⅱ~Ⅲ期宫颈癌新辅助化疗敏感度的预测价值

目的 探讨CD44v6和EGFR的表达对Ⅱ~Ⅲ期宫颈癌新辅助化疗（NACT）疗效的预测价值。方法 选择经病理确诊的Ⅱ~Ⅲ期宫颈癌患者53例,所有患者均行2周期紫杉醇+铂类的NACT,收集NACT前的宫颈肿瘤病理组织标本,免疫组织化学SP法检测CD44v6和EGFR的表达,并分析其与Ⅱ~Ⅲ期宫颈癌NACT疗效的相关性。结果 53例患者中NACT敏感组（CR+PR）38例 ,NACT不敏感组（SD+PD）15例,不敏感组CD44v6的表达显著高于敏感组（P<0.05）;CD44v6的表达在疗效为CR、PR、SD的患者中具有明显差异（P<0.05）。CD44v6对Ⅱ~Ⅲ期宫颈癌NACT疗效的AUC为0.74,P<0.05;与CD44v6低表达组患者相比,高表达组NACT疗效更差（P<0.05）。Pearson检验发现CD44v6和EGFR表达具有相关性（R=0.34, P<0.05）。结论 CD44v6和EGFR表达呈正相关。CD44v6高表达可能会降低Ⅱ~Ⅲ期宫颈癌NACT的疗效,CD44v6表达对宫颈癌紫杉醇+铂类NACT疗效有一定预测价值和临床意义。     

肝癌组织中FMNL-2和MMP-2的表达及临床病理分析

目的 探讨肝癌及癌旁组织中FMNL-2和MMP-2的蛋白表达及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学MaxvisionTM法检测100例肝癌及癌旁组织中FMNL-2和MMP-2的蛋白表达情况,应用图文分析软件Image-Pro Plus6.0测定FMNL-2和MMP-2的蛋白累积吸光度值（IOD）,采用SPSS19.0软件统计分析。结果 肝癌及癌旁组织中FMNL-2蛋白IOD值分别为(90 748.36±46 276.91)和(39 075.46±24 763.12),MMP-2蛋白IOD值分别为（87 969.46±27 131.77）和（59 517.72±20 218.23）,两组差异均有统计学意义（P<0.05）;FMNL-2在伴与不伴肝硬化组中IOD值分别为（47 471.96±40 273.54）和（72 123.41±45 517.93）（P<0.05）;MMP-2在HBsAg阳性或阴性组中IOD值分别为（77 668.34±27 682.79）和（64 585.83±26 173.62）（P<0.05）,在有无转移组中IOD值分别为（63 854.73±21730.42）和（77 218.05±28 930.01）（P<0.05）,差异有统计学意义;并且肝癌及癌旁组织中FMNL-2和MMP-2蛋白表达呈正相关（r=0.240,P=0.016）。结论 在肝癌发生、发展过程中存在FMNL-2和MMP-2蛋白异常表达,联合监测两者蛋白表达可能会有助于肝癌的诊断。     

siRNA干扰Mig-7基因对人胃癌MKN45细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制迁移诱导基因7（Mig-7）基因表达,对人胃癌MKN45细胞侵袭和迁移的影响及可能机制。方法 化学合成靶向Mig-7基因的siRNA,脂质体法转染MKN45细胞,分别用real-time PCR和Western blot法验证其沉默效率;MTT法检测细胞的增殖情况;Transwell小室方法检测细胞侵袭及迁移能力;Western blot法检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9蛋白表达。结果 化学合成siRNA转染胃癌MKN45细胞后,Mig-7的mRNA 水平下降（80±2.91）%,蛋白表达水平下降（89.1±2.67）%;沉默Mig-7基因后,各组细胞体外生长速度差异无统计学意义（P>0.05）,但侵袭和迁移能力下降,MMP-2蛋白表达水平下降,与阴性转染组和对照组相比差异有统计学意义（P=0.000）。而各组MMP-9蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 下调人胃癌MKN45细胞中Mig-7的表达,可能通过下调MMP-2蛋白表达从而抑制细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-711对胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响

目的 探讨 miR-711对胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition, EMT）的影响。方法 通过脂质体瞬时转染法将 miR-711 过表达（miR-711 mimics）、miR-711抑制表达（miR-711 inhibitors）、miRNA 空质粒转染人胃癌细胞株MGC-803。以 miRNA 空质粒转染组作为阴性对照组（NC 组）,以空白转染组作为空白对照组（K组）。转染48 h后在荧光显微镜下观察转染效率,然后采用Transwell 侵袭小室实验检测细胞的侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Western blot实验检测上皮蛋白和间质蛋白表达量的变化。结果 Transwell侵袭实验结果显示：与阴性对照组穿膜细胞数（120.00±4.58）及空白对照组穿膜细胞数（119.67±5.13）分别比较,miR-711 mimics组穿膜细胞数（70.67±5.51）明显下降（P均<0.05）;划痕实验显示：划痕48 h,与阴性对照组细胞愈合率（32.52±1.73）%及空白对照组细胞愈合率（32.15±1.55）%分别比较,miR-711mimics组细胞愈合率（7.08±0.73）%明显下降（P均<0.05）;Western blot实验显示：miR-711 mimics组与阴性对照及空白对照组分别比较,上皮标志物（E-cadherin蛋白）相对蛋白表达量增多,差异有统计学意义（P均<0.05）;间质标志物（vimentin蛋白）相对蛋白表达量水平减少,差异有统计学意义（P均<0.05）。结论 过表达miR-711可抑制胃癌MGC-803细胞侵袭迁移及上皮间质转化的发生。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对非小细胞肺癌体外生长及侵袭能力和TFPI-2基因mRNA表达的影响

目的 探讨5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干预对非小细胞肺癌(nonsmallcell non cancer, NSCLC)细胞株A549生长增殖及其组织因子途径抑制物2(tissue factor pathwayinhibitor-2,TFPI-2)基因表达的影响,同时探讨5-Aza-CdR能否通过恢复TFPI-2基因表达抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭能力。方法 用不同浓度的5-Aza-CdR处理A549细胞株,MTT法检测药物处理24、48、72 h后的细胞增殖活性,流式细胞仪(fl ow cytometry, FCM)法检测药物处理72 h后细胞周期分布,Real-time PCR技术检测药物处理72h后A549细胞TFPI-2基因mRNA的表达,Transwell小室法测定药物处理24h后A549细胞体外侵袭能力的变化。 结果 MTT检测显示不同浓度5-Aza-CdR处理A549细胞24、48、72h后,细胞的生长受到抑制,且抑制作用呈明显的剂量和时间依赖性。FCM检测分析显示0、1、5、10 μM 5-Aza-CdR处理A549细胞72 h 后,细胞增殖指数逐渐降低,分别为（30.43±0.99)%、（23.89±0.83)%、（16.19±0.34)%、（6.49±0.55%（P＜0.05）。Real-timePCR检测显示0、1、5、10 μM的5-Aza-CdR处理A549细胞72 h后,相对mRNA表达水平分别为（1±0)、（1.49±0.14)、（1.86±0.09)、（5.80±0.15)（P<0.05）,TFPI-2 基因mRNA表达呈明显的上升趋势,且随着药物浓度增加而增加。Transwell小室法检测显示每一高倍镜下平均穿膜细胞数分别为（316.15±18.7)、（84.15±12.14)、（28.85±7.13)、（14.35±3.33),均明显低于对照细胞（P<0.05）。结论 5-Aza-CdR能通过降低TFPI-2基因的甲基化而恢复其在非小细胞肺癌细胞株A549细胞中的表达,并抑制A549细胞的增殖和侵袭。     

甲状腺癌中CCR7和D2-40的表达及其与淋巴结转移的关系

Objective To investigate the relationship between expression of CCR7, D2-40 and lymphnode metastasis in thyroid carcinoma tissues. Methods The expression of CCR7 and D2-40 weremeasured in 87 cases of thyroid carcinoma tissues and 20 cases of normal thyroid tissues by MAX Visionimmunohistochemical staining technique. The expression of lymphatic endothelial markers D2-40 wasapplied to calculate lymphatic microvessel density(MLVD). Results CCR7 positive rate was 66.7% in the87 cases of thyroid carcinoma tissues and CCR7 positive rate was 15% in the 20 cases of normal thyroidtissues; CCR7 positive rates were counted up to 75.0%, 70.0%, 73.0% and 25.0% in PTC, MTC, FTC andUTC, retrospectively; CCR7 positive rate was 81.6%（40⁄49）in lymph node metastasis positive patients and47.4% (18⁄38) in lymph node metastasis negative patients(P<0.05). MLVD counts in thyroid carcinoma tissuesand normal tissues were (5.72±2.89) and (2.60±1.14); MLVD counts in PTC, MTC, FTC and UTC were(7.55±2.29), (6.60±1.75), (4.27±1.10) and (1.00±0.34), respectively; MLVD counts in lymph node metastasispositive patients was obviously higher than that in lymph node metastasis negative patients [(9.39±4.24), (3.24±1.67), P<0.05]. MLVD expression was positively correlated with CCR7 expression ( r_s=0.645,P<0.001).CCR7 and MLVD were positively related with lymphatic metastasis. The positive rates of CCR7 and MLVDin lymph node-positive group were higher than those in lymph node-negative group. Conclusion D2-40staining only presents in lymphatic endothelial cells. The united detection of CCR7 along with D2-40 isexpected to be the inchoate and more effective signal to judgment lymph node metastases.     

Clinical and biological significance of S-phase kinase-associated protein 2 (Skp2) gene expression in gastric carcinoma: modulation of malignant phenotype by Skp2 overexpression,possibly via p27 proteolysis

Reduced expression level of p27, a cyclin-dependent kinase inhibitor, is associated with high aggressiveness and poor prognosis of various malignant tumors, including gastric carcinoma. S-phase kinase-associated protein 2 (Skp2), a member of the F-box family of substrate-recognition subunits of Skp1-Cullin-F-box ubiquitin-protein ligase complexes, is necessary for p27 ubiquitination and degradation. In the present study, we examined the clinical and biological significance of Skp2 expression in human gastric carcinoma and the relationship between the expression of Skp2 and p27. Northern blot analysis showed that Skp2 mRNA was overexpressed in carcinoma tissues (P < 0.05), and the high Skp2 expression group showed significantly poorer prognosis in 98 patients with gastric carcinoma (P < 0.05). Immunohistochemical analysis showed that Skp2 protein was expressed predominantly in carcinoma cells. We also found an inverse correlation between the expression of Skp2 mRNA and p27 protein in vivo (P < 0.01). To analyze the biological behavior of Skp2, we established stably Skp2-transfected gastric carcinoma cell lines. Western blot analysis showed that Skp2-transfected cells expressed lower levels of p27 protein than the control cells. Skp2-transfected cells showed significantly higher levels of growth rate (P < 0.05), percentage of bromodeoxyuridine-positive cells after serum starvation (P < 0.01), resistance to apoptosis induction by actinomycin D treatment (P < 0.05), and invasion potential (P < 0.01) than the control cells. These findings indicate that Skp2 expression can modulate the malignant phenotype of gastric carcinoma, possibly via p27 proteolysis. Skp2 can play an important role in gastric carcinoma progression and would be a novel target for the treatment of gastric carcinoma as well as a strong prognostic marker.