口腔鳞状细胞癌中Hh通路关键分子

[目的]探讨Hh通路关键分子Shh、Ptch、Gli-1在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义.[方法]采用免疫组织化学方法分别检测40例口腔鳞状细胞癌组织和30例口腔黏膜正常组织中Shh、Ptch、Gli-1的表达.[结果]Shh、Ptch、Gli-1在30例正常口腔黏膜中均无表达,在口腔鳞状细胞癌中,Shh、Ptch、Gli-1阳性率分别为62.5％、60.0％和65.0％.Shh、Gli-1的阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期相关(P＜0.05),Ptch表达与淋巴结转移相关(P＜0.05).Spearman等级相关分析显示Shh、Ptch和Gli-1的表达间均存在正相关(rs=0.527、0.406、0.578,P＜0.01).[结论]Shh、Ptch、Gli-1蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中均过表达,三者可能通过配体依赖途径被激活并参与口腔鳞癌的发生发展、转移.     

乳腺癌组织中核仁纺缍体相关蛋白1表达与腋窝淋巴结转移的关系

摘 要：［目的］ 探讨乳腺癌组织中核仁纺缍体相关蛋白1（nucleolus spinosa-related protein 1,NuSAP1）的表达与腋窝淋巴结转移的关系。［方法］ 采用免疫组织化学染色法检测100例乳腺癌组织（浸润性导管癌）及其配对的癌旁组织（距离肿瘤边缘＞3cm）中NuSAP1、Hedgehog信号通路相关蛋白（Smo和Gli-1）表达水平。采用Logistic多因素分析影响乳腺癌腋窝淋巴结转移的影响因素。［结果］ 乳腺癌组织中NuSAP1高表达率为65%（65/100）,明显高于癌旁组织的18%（18/100）（χ2=45.945,P＜0.001）。NuSAP1高表达组中WHO分级Ⅲ级、TNM Ⅲ期、腋窝淋巴结转移率均高于低表达组（P＜0.05）。WHO分级Ⅲ级（OR=1.689,95%CI：1.240~3.333）、TNM Ⅲ期（OR=1.543,95%CI：1.345~3.602）、三阴性乳腺癌（OR=2.786,95%CI：1.764~4.002）和NuSAP1高表达（OR=2.507,95%CI：1.684~3.971）是乳腺癌患者腋窝淋巴结转移的独立影响因素（P＜0.05）。NuSAP1表达水平与腋窝淋巴结转移数目呈正相关（r=0.561,P＜0.001）。NuSAP1表达与Smo、Gli-1表达水平呈正相关（r分别为0.748和0.528,P均＜0.001）。［结论］ NuSAP1可能通过激活Hedgehog信号通路参与腋窝淋巴结的转移。     

Shh和Gli-1在人乳腺癌MCF-7耐药细胞株中的表达及意义

目的 研究Shh和Gli-1在人乳腺癌耐药株中的表达情况,探讨Hedgehog信号通路与乳腺癌耐药的关系。方法 高浓度间歇诱导法建立人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／PTX,MTT法检测紫杉醇（PTX）对MCF-7与MCF-7／PTX细胞的半数抑制浓度（IC50）。实时定量PCR（QPCR）检测MCF-7、MCF-7／PTX细胞中Shh、Gli-1 mRNA的表达。Western blotting检测MCF-7、MCF-7／PTX细胞中Shh、Gli-1蛋白的表达。结果 PTX 对 MCF-7细胞的IC50为（0.10±0.02）mg／L,对 MCF-7／PTX细胞的 IC50为（5.30±0.01）mg／L;耐药指数为53.0。Shh mRNA在MCF-7、MCF-7／PTX细胞中的表达量分别为0.78±0.12和1.45±0.56（P＜0.01）;Gli-1 mRNA在MCF-7、MCF-7／PTX细胞中的表达量分别为1.86±0.02和3.56±0.26（P＜0.01）。Shh 蛋白在MCF-7、MCF-7／PTX细胞中的表达量分别为0.58±0.06和1.03±0.22（P＜0.01）;Gli-1 蛋白在MCF-7、MCF-7／PTX细胞中的表达量分别为1.17±0.12和2.78±0.09（P＜0.01）。结论 人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／PTX高表达Shh、Gli-1,化疗药物可能通过上调Hedgehog信号通路相关蛋白及基因介导乳腺癌耐药,针对该信号通路的靶向治疗将是克服乳腺癌耐药的一个新的选择。     

乳腺癌中Hedgehog信号通路的表达及其与LKB1基因相关性的研究

目的：探讨Hedgehog（Hh）信号通路主要蛋白在乳腺癌中的表达及其与LKB1基因的相关性,以及与临床病理特征、预后的关系。方法：采用免疫组化方法检测75例人乳腺癌标本中Hh信号通路主要蛋白（Shh、Smo、Sufu、Gli1、Ptch）及LKB1基因的表达,分析二者相关性,并分析Hh信号通路的表达与临床病理特征及预后的关系。结果：在75例乳腺癌样本中,阳性表达Shh、Gli1、Smo、Ptch、Sufu、LKB1分别为69（92.0%）、58（77.3%）、65（86.7%）、50（66.7%）、34（45.3%）、33（44.0%）,而在其相邻的正常乳腺上皮不表达或低表达。Hh信号通路与LKB1的表达呈负相关;Hh信号通路的表达情况与患者年龄、淋巴结转移情况、分子分型具有一定的相关性,且高表达的患者预后较差。结论：Hh信号通路在乳腺癌中过度激活,与临床病理特征及预后相关,并与LKB1基因的表达呈负相关,两者之间的相互作用对乳腺癌的诊治及预后可能有重要影响。     

Hh信号通路在口腔鳞状细胞癌中的激活及意义

目的： 研究口腔鳞状细胞癌中Shh、Ptch、Gli-1在基因及蛋白水平的表达,并探讨其阳性表达与口腔鳞状细胞癌生物学特性之间的关系。方法：采用免疫组织化学方法分别检测40例口腔鳞癌和30例正常口腔黏膜中Shh、Ptch、Gli-1蛋白的表达;RT-PCR法检测10例口腔鳞癌组织及5例正常口腔黏膜组织中Shh、Gli-1和Ptch mRNA的表达。结果：免疫组织化学结果显示,Shh、Ptch和Gli-1蛋白在口腔鳞癌中阳性表达率分别为62.5%、60.0％和65.0％,在正常口腔黏膜中3种蛋白均不表达。非参数统计分析示,Shh及Gli-1的阳性表达与肿瘤的大小、淋巴结转移及临床分期相关 (P<0.05),Ptch蛋白的表达与淋巴结转移呈显著正相关 (P<0.05)。RT-PCR结果显示,Shh、Ptch、Gli-1 mRNA在口腔鳞癌组织中的阳性表达分别为60%、50%、70%,明显高于正常口腔黏膜,差异有统计学意义 (P<0.05)。结论：Hh信号通路在口腔鳞状细胞癌组织中被激活并与口腔鳞癌的发生、发展、转移关系密切。     

乳腺癌中CXCR4的表达及其与Hedgehog信号通路的相关性

目的 检测乳腺癌组织中CXCR4及Smoothened (Smo)、Patched (Ptch)的表达,对CXCR4表达的临床意义进行分析,并评价CXCR4与Smo、Ptch之间的相关性.方法 以免疫组织化学染色法检测124例乳腺癌组织中CXCR4、Smo、Ptch的表达情况,并对其结果进行分析.结果 乳腺癌组织中CXCR4阳性表达率为66.9％,CXCR4与乳腺癌淋巴结转移呈正相关(r=0.181,P=0.044);Smo、Ptch阳性表达率分别为58.9％和64.5％,与CXCR4表达呈正相关(r=0.189,P=0.036;r=0.230,P=0.0l0).结论 CXCR4的表达与乳腺癌淋巴结转移有关,与Smo、Ptch表达呈正相关,当其与Hedgehog信号通路同时表达时或许与乳腺癌的复发风险增高相关.     

LKB1基因与Hedgehog信号通路对乳腺癌MDA-MB-231细胞抑制机制的探讨

目的:探讨乳腺癌细胞中LKB1基因与Hedgehog信号转导途径的关系.方法:以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,LKB1基因转染或干扰处理后,反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法分别检测Hedgehog信号通路中Shh、Sufu、Ptch、Smo、Gli 1、Hip mRNA和蛋白表达的变化.建立LKBI 基因表达抑制的细胞移植瘤模型,验证体外实验结果并进行对比分析.结果:Hedgehog 信号通路激动因子Ptch的mRNA和蛋白的表达在各组细胞中差异无统计学意义.而激动因子Shh、Gli1和Smo的mRNA和蛋白的表达在MDA-MB-231正常细胞及其空质粒细胞、siRNA无关序列细胞中差异无统计学意义;在LKB1转染细胞中降低(F=29.56,P＜0.05),在LKBI转染siRNA细胞中升高(F=32.15,P＜0.05).而抑制因子Sufu、Hip的mRNA和蛋白的表达正好相反,在LKB1转染细胞中升高,在LKB1转染siRNA细胞中降低,F=30.25,P＜0.05.移植瘤检测Shh、Sufu、Smo、Gli 1、Hip蛋白表达与体外实验相似,F=8.40,P＜0.01.而且发现LKB1转染siRNA细胞组裸鼠肿瘤平均体积显著大于对照组(F=4.68,P＜0.05),生存时间显著短于对照组,F=3.50,P＜0.01.LKB1基因与Hedgehog信号通路相关因子表达呈负相关,r=0.232,P＜0.05.结论:LKB1基因与Hedgehog信号通路相关因子表达在乳腺癌细胞中呈负相关,LKB1基因可能通过Hedgehog信号通路抑制乳腺癌细胞的发生,两者之间的相互作用对乳腺癌的诊治可能有重要影响.     

Hedgehog信号通路对某些消化道肿瘤细胞生长的调节作用

目的：研究Hedgehog信号通路成员Shh、patched（PTCH）、smoothened（Smo）和Gli-1在结肠癌和胰腺癌细胞株以及人结肠腺瘤组织细胞中的表达情况,并探讨Smo受体特异性小分子抑制剂环靶明（cyclopamine）对这些肿瘤细胞生长的影响。方法：体外培养结肠癌细胞LS174T、HCT116、SW116、CT26和胰腺癌细胞BxPC3,并肠镜下摘取2例结肠腺瘤组织标本,提取细胞株和腺瘤组织总RNA,用RT-PCR扩增Shh,PTCH,Smo,Gli-1基因;使用MTT法检测环靶明在体外对这些肿瘤细胞生长的抑制作用。结果：在SW116、CT-26、BxPC3细胞和2例结肠腺瘤组织中Shh、PTCH、Smo和Gli-1均有不同程度的表达,而在HCT116和LS174T细胞中未能扩增出PTCH和（或）Smo基因的mRNA;环靶明对这些肿瘤细胞的生长有一定的抑制作用,且对Smo基因阳性表达细胞株的抑制作用更显著。结论：Hedgehog信号通路成员Shh、PTCH、Smo和Gli-1在结肠癌、胰腺癌及结肠腺瘤细胞中有不同程度的表达,环靶明对Smo高表达细胞的生长有明显抑制作用;提示该信号通路可能在部分消化道肿瘤细胞中被活化。     

siRNA沉默LKB1基因激活Hedgehog信号通路及对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长的实验研究

目的探讨应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默抑癌基因LKB1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中Hedgehog信号通路相关因子的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响。方法构建LKB1基因siRNA质粒LKB1-siRNA;建立LKB1表达抑制的MDA-MB-435细胞模型;裸鼠乳晕皮下接种,建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型;成瘤后,观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间;并用Western印迹法检测瘤组织中LKB1和Hedgehog信号通路中信号肽Shh、Sufu、膜受体Ptch、Smo、转录因子Gli1、Hip蛋白表达的变化。结果 LKB1-siRNA质粒组裸鼠的肿瘤体积明显增长(P<0.05);肿瘤内LKB1基因表达水平明显下降,而Hedgehog信号通路相关因子Shh、Gli1、Ptch、Smo的表达升高,Hedgehog信号通路抑制因子Sufu、Hip表达下降。结论 LKB1基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的LKB1基因的表达,上调Hedgehog信号通路相关因子的表达,促进肿瘤生长。LKB1基因和Hedgehog信号通路在乳腺癌细胞中呈现负相关表达。     

核呼吸因子-1和Ki-67在乳腺癌组织中的表达及意义

探讨核呼吸因子-1（NRF-1）蛋白表达与乳腺癌发生发展、临床病理特征及Ki-67的关系。方法:采用免疫组化EnVision二步法,对211例乳腺癌组织、50例乳腺良性病变组织中NRF-1和Ki-67进行检测。结果:NRF-1表达定位于细胞核,在乳腺癌中表达率为87.2%,低于乳腺良性病变组织的100%（χ2=100.288,P<0.001）;高分化乳腺癌NRF-1表达率明显高于中、低分化乳腺癌（χ2=16.242,P=0.001;χ2=72.802,P<0.001）,中分化乳腺癌也明显高于低分化乳腺癌（χ2=30.190,P=0.000）。乳腺癌淋巴结转移患者NRF-1表达率明显低于未转移者（χ2=12.025,P=0.007）;TNM分期中I期NRF-1表达率明显高于Ⅱ、Ⅲ期（χ2=12.025,P=0.007）。211例乳腺癌中Ki-67表达率为78.7%,Ki-67表达与NRF-1（χ2=42.914,P<0.001）、病理组织学分级（χ2=40.239,P<0.001）、淋巴结转移（χ2=16.061,P=0.001）和TNM分期（χ2=13.589,P=0.004）间比较差异有统计学意义。结论:NRF-1参与了乳腺癌的发生发展,也与Ki-67表达有相关性,可作为乳腺癌患者疾病进展监控和预后观测的指标,有可能成为乳腺癌新的治疗靶点。      

Expression of CXCR4 in breast cancer and the relationship between CXCR4 and Hedgehog signaling pathway

Objective To detect the expressions of CXCR4, Smoothened (Smo） and Patched (Ptch) in breast cancer, to analyze the clinical significance of the expression of CXCR4, and to evaluate the relationships among the CXCR4, Smo and Ptch. Methods The expressions of CXCR4, Smo and Ptch from 121 cases of breast cancer specimens were detected by immunohistochemistry, and the results were analyzed. Results The positive expression rate of CXCR4 in breast cancer was 66.9%, which was positively associated with the lymph node metastasis (r=0.181, P=0.044). The positive expression rates of Smo and Ptch in breast cancer were respectively 58.9% and 64.5%. The expressions of Smo and Ptch were positively associated with the expression of CXCR4 in breast cancer (r=0.189, P=0.036; r=0.230, P=0.010). Conclusion The expression of CXCR4 in breast cancer are associated with the lymph node metastasis. Patients with breast cancer who express both CXCR4 and Hedgehog signaling pathway may have a higher risk of recurrence.     

Hedgehog信号通路相关蛋白在头颈鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨头颈鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中Hedgehog信号通路成员Shh、Ptch1和Gli1蛋白表达的关系及其意义。方法:利用生物信息学方法分析Shh、Ptch1、Gli1在HNSCC和正常组织中的表达差异预测本研究可行性,采用免疫组化法检测84例头颈鳞状细胞癌及10例正常黏膜上皮组织中Shh、Ptch1和Gli1蛋白表达,分析Shh、Ptch1和Gli1蛋白表达水平与头颈鳞状细胞癌患者临床病理特征的关系。结果:头颈鳞状细胞癌组织中Shh、Ptch1和Gli1蛋白呈高表达（分别为65.5%、60.7%和63.1%）,均高于正常黏膜上皮组织（分别为20%、30%和30%）。Shh蛋白表达与头颈鳞状细胞癌患者临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤局部侵袭和远处转移均无关(P>0.05);Ptch1蛋白表达与头颈鳞状细胞癌患者临床病理特征均无关(P>0.05);Gli1蛋白表达仅与头颈鳞状细胞癌患者淋巴结转移有关(P<0.05)。Shh、Ptch1和Gli1蛋白的表达水平在鼻咽鳞癌和口咽鳞癌中没有差异。Shh与Ptch1、Gli1蛋白表达呈正相关。结论:Shh、Ptch1和Gli1蛋白在头颈鳞状细胞癌中高表达,与头颈鳞状细胞癌的发生、发展密切相关,是头颈鳞状细胞癌防治的一个重要靶标。     

Gli-1 expression is associated with lymph node metastasis and tumor progression in esophageal squamous cell carcinoma

OBJECTIVE: We investigated the expression and function of the hedgehog (Hh) pathway in human esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). METHODS: The expression of Hh pathway molecules were detected in 34 human ESCC cell lines by RT-PCR. Subsequently, we investigated the effects of cyclopamine, a specific inhibitor of the Hh pathway, on cell proliferation, migration and invasion. Next, the effects of siRNA targeting Gli-1 were examined. Immunohistochemically, the expression of Gli-1 was studied in 104 ESCC specimens and compared with the clinicopathological characteristics of the patients. RESULTS: Gli-1 were expressed in 31 of 34 cell lines (91%), while Sonic hedgehog (SHh), Patched (Ptch), and Smoothened (Smo) expression was noted in all 34 cell lines. Cyclopamine significantly inhibited cell proliferation and migration in ESCC cells that expressed Gli-1. siRNA targeting Gli-1 inhibited cell growth in ESCC cells. Gli-1 was expressed in 52 of 104 cancer specimens (50%). Gli-1 expression was associated with tumor depth (p < 0.001), positive lymph node metastasis (p = 0.004) and a poor prognosis (p = 0.0047). CONCLUSION: Our results raise the possibility that the inhibition of the Hh pathway could be a novel target for esophageal cancer therapy.     

Overexpression of hedgehog signaling molecules and its involvement in the proliferation of endometrial carcinoma cells.

PURPOSE: Research has revealed abnormal activation of the hedgehog pathway in human malignancies. The present study was undertaken to examine the expression and functional involvement of the hedgehog pathway in endometrial tissues. EXPERIMENTAL DESIGN: The expression of sonic hedgehog (Shh), patched (Ptch), Smoothened (Smo), and Gli1 was examined in various endometrial tissues and endometrial carcinoma cell lines. The effect of hedgehog signaling on the proliferation of endometrial carcinoma cell lines was also examined. RESULTS: The expression of Shh, Ptch, Smo, and Gli1 was very weak in normal endometrium, but was increased in endometrial hyperplasia and carcinoma stepwisely with significant differences. There was no marked difference in the expression of these molecules in carcinomas according to stages and histologic grades. Treatment with cyclopamine, a specific inhibitor of the hedgehog pathway, for endometrial carcinoma Ishikawa and HHUA cells suppressed growth by 56% and 67%, respectively, compared with the control. The addition of recombinant Shh peptide to HHUA cells enhanced their proliferation by 41%. The silencing of Gli1 using small interfering RNA (siGli1) resulted in the growth suppression and down-regulation of Ptch expression. In addition, the cyclopamine/siGli1-induced growth suppression was associated with the down-regulation of cyclins D1 and A and N-myc. No somatic mutations for ptch and smo genes were detected in the endometrial carcinoma cases examined. CONCLUSIONS: The abnormal activation of this pathway is involved in the proliferation of endometrial carcinoma cells possibly in an auto-/paracrine fashion, suggesting the possibility of the hedgehog pathway being a novel candidate for molecular targeting.     

Sonic Hedgehog信号通路与乳腺癌抑癌基因LKB1的相互影响

目的：研究环靶明（cyclopamine）抑制Sonic Hedgehog（SHH）信号通路后,转染LKB1基因的乳癌细胞的凋亡、周期及信号通路相关基因表达的改变。方法：抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分MDA-MB-231组（231组）和转染LKB1基因的MDA-MB-231（LKB1组）两组,每组分别采用0,5×10-6mol/L,10×10-6mol/L,20×10-6mol/L 4种浓度的环靶明处理细胞,各小组细胞分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,用RT-PCR法和Western blot法检测Sonic Hedgehog信号通路相关基因Shh、Smo、Ptch、Sufu、Hip及LKB1的mRNA和蛋白表达水平。结果 ：在LKB1组和231组中,各小组细胞的凋亡率变化与Sonic Hedgehog相关基因Shh、Smo表达变化一致,随环靶明浓度增大凋亡率增加、基因表达受抑制,在环靶明浓度达10×10-6mol/L时变化最明显,且LKB1组较231组的变化更为明显。在231组中,各小组细胞周期变化与Sonic Hedgehog相关抑制基因Sufu、Hip表达变化一致。而在LKB1组中,各小组细胞周期与抑制基因Sufu、Hip表达变化均无明显差异。在231组中,各小组抑癌基因LKB1的表达随药物浓度增加渐增强。Ptch表达在两组均无明显变化。结论 ：抑癌基因LKB1可协同Sonic Hedgehog信号通路抑制剂环靶明促进乳腺癌细胞凋亡,调控细胞周期,推测其机制可能是通过如上信号通路相关基因表达变化而实现。信号通路抑制剂环靶明可提高乳腺癌细胞抑癌基因LKB1的表达,推测此也是信号通路抑制剂降低癌细胞活性机制之一。