NFAT5基因在食管癌组织中的表达情况及其对食管癌细胞迁移能力的影响

目的探索活化T细胞核因子5(nuclear factor of activated T cells 5, NFAT5)在食管癌组织中表达的临床意义及敲低其在食管癌细胞的表达对其迁移能力的影响。方法用免疫组化法检测所收集的26例食管癌患者组织及其癌旁组织标本中NFAT5的表达情况。将食管癌细胞ECA109分为实验组和对照组, 实验组ECA109细胞转染NFAT5-siRNA质粒, 对照组ECA109细胞转染MOCK-siRNA质粒, RT-PCR检测各组细胞NFAT5 mRNA的含量, 蛋白免疫印迹法检测各组细胞的NFAT5、TLR4、MyD88表达情况, Transwell实验、细胞划痕实验检测实验组和对照组细胞的迁移(转移)能力。结果免疫组化实验结果显示食管癌患者组织NFAT5阳性率为80.77%(21/26), 相应癌旁组织中表达率为15.38%(4/26), 食管癌组织中NFAT5的阳性率显著高于癌旁组织(P<0.001)。实验组和对照组ECA109细胞转染相应siRNA后NFAT5 mRNA含量下降;实验组ECA109细胞NFAT5、TLR4、MyD88蛋白表达量分别为0...     

环状RNA circPRDM5在食管鳞状细胞癌中的表达和功能研究

目的探索环状RNA circPRDM5在食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞和组织中的表达水平,及其对ESCC细胞功能的影响。方法 qRT?PCR检测circPRDM5在正常食管上皮细胞(HEEC)、ESCC细胞系、和44例ESCC组织及对应的癌旁正常组织中的相对表达水平;Transwell实验和CCK8实验分别检测siRNA沉默circPRDM5后,对细胞迁移侵袭和增殖功能的影响;构建裸鼠成瘤模型,检测circPRDM5对ESCC细胞在动物体内成瘤能力的影响。结果与HEEC相比,circPRDM5在ESCC细胞系KYSE150、ECA109中高表达(P0.05),且在ESCC组织中表达(2.90±0.18)较癌旁正常组织(2.01±0.15)表达高(P0.001)。Transwell实验和CCK8实验证明,沉默circPRDM5能明显抑制ESCC细胞的迁移侵袭和增殖能力(P0.05);裸鼠成瘤实验结果表明,沉默circPRDM5后,ESCC细胞的成瘤体积和重量较对照组明显下降(P0.01)。结论 circPRDM5在ESCC的细胞和组织中高表达。在ESCC细胞中沉默circPRDM5能降低ESCC细胞的增殖、迁移侵袭、和在动物体内的成瘤能力。提示circPRDM5可能成为ESCC治疗的一个新靶点。     

盐酸戊乙奎醚调控长基因间非蛋白编码RNA 00982对Eca-109食管癌细胞生物学行为的影响

目的探讨盐酸戊乙奎醚(PHC)对Eca-109食管癌细胞生物学行为的影响。方法分别给予0.01、0.05、1.00 μmol/L剂量的PHC处理人Eca-109食管癌细胞, 采用细胞计数试剂8(CCK-8)法、平板克隆形成实验和流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成及细胞凋亡率;使用划痕实验和Transwell迁移分析实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测长基因间非蛋白编码RNA 00982(LINC00982)表达量。pcDNA、pcDNA-LINC00982分别转染至Eca-109细胞, si-NC、si-LINC00982分别转染至Eca-109细胞后分别加入0.01、0.05、1.00 μmol/L PHC处理24 h, 采用上述方法分别检测细胞增殖、克隆形成数目、细胞凋亡率、迁移及侵袭能力;蛋白质印迹法(Western blot)检测E-钙黏素、B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和N-钙黏素蛋白表达量。采用独立样本t检验和单因素方差分析。结果 PHC低、中和高剂量组Eca-109细胞增殖抑制率[(12...     

布托啡诺调节CCL2-CCR2轴对食管癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的 探讨布托啡诺对食管癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其对CCL2-CCR2轴的调节作用。方法 使用0～400 ng/ml梯度浓度布托啡诺处理人食管癌KYSE30细胞,MTT法检测细胞增殖能力;将KYSE30细胞分为对照组、布托啡诺L组、布托啡诺M组、布托啡诺H组和布托啡诺H+CCL2组,EdU法检测细胞增殖能力;Hoechst法检细胞凋亡;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell法检测细胞侵袭;Western blot技术验证CC类趋化因子配体2(CCL2)、CC类趋化因子受体2(CCR2)蛋白表达。结果 50 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml、400 ng/ml浓度布托啡诺能显著抑制KYSE30细胞增殖;与对照组相比,布托啡诺L、M、H组和布托啡诺H+CCL2组KYSE30细胞增殖、迁移、侵袭能力以及CCL2、CCR2蛋白表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);与布托啡诺H组相比,布托啡诺H+CCL2组细胞增殖、迁移、侵袭能力以及CCL2、CCR2蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 布托啡诺能够显著抑制食管癌K...     

外泌体来源长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因14对食管癌5-氟尿嘧啶耐药的影响

目的探讨食管癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药细胞外泌体来源的长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因14(SNHG14)在食管癌耐药中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测郑州大学第一附属医院30例食管癌患者和30例健康对照血浆中lncRNA SNHG14的表达。浓度梯度法构建食管癌5-Fu耐药细胞3组EC9706/5-Fu和3组KYSE150/5-Fu, 分离并收集各组食管癌细胞外泌体, RT-qPCR检测SNHG14的表达。分别将3组食管癌细胞EC9706和KYSE150与耐药细胞来源外泌体共培养, 细胞计数试剂盒(CCK-8)检测5-Fu作用下细胞活性。敲低3组EC9706/5-Fu细胞中的SNHG14后分离外泌体, 通过CCK-8、Transwell、Tunnel实验检测该外泌体对EC9706细胞药物敏感度、迁移和凋亡的影响。采用t检验或单因素方差分析(One-Way ANOVA)进行统计分析。结果食管癌患者血浆中lncRNA SNHG14的表达高于健康对照组(3.30±0.20比1.33±0.09, t=49.910, P<0.001), ...     

鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对食管癌细胞凋亡和抑制侵袭的作用

目的 观察鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对食管癌Eca109细胞凋亡作用及抑制细胞侵袭的影响.方法 采用Western印迹检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达;应用噻唑蓝(MTT)比色法测定观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;应用原位末端标记(TUNEL)法和Matrigel侵袭实验分别观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响和侵袭活性的改变.结果 Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODE和AdoMetDC基因表达(P＜0.05).MTT法实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用(P＜0.05).TUNEL标记检测Matrigel侵袭实验结果 显示,Ad-ODC-AdoMetDCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡(P＜0.05),可显著降低食管癌细胞Eca109的体外侵袭能力(P＜0.05).结论 Ad-ODC-AdoMetDCas能显著促进细胞凋亡,抑制食管癌细胞侵袭.     

肌球蛋白重链11对肿瘤Hela细胞凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探讨肌球蛋白重链11(MYH11)对人宫颈癌Hela细胞凋亡、迁移和侵袭作用的影响。方法应用实时荧光定量聚合酶联反应法(qRT-PCR)检测宫颈癌Hela细胞与正常宫颈上皮细胞Ect1/E6E7中MYH11的信使RNA(mRNA)表达水平, 通过流式细胞术、噻唑蓝(MTT)实验及Transwell实验测定过表达MYH11对宫颈癌细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响, 两组间比较采用t检验。结果 qRT-PCR法检测mRNA表达, 结果显示, 宫颈癌Hela细胞中MYH11表达(0.52±0.04)明显低于正常宫颈上皮细胞(1.00±0.03), 差异有统计学意义(t=10.56, P<0.01)。细胞凋亡实验结果显示, 过表达MYH11组Hela细胞抗凋亡能力较ctrl组以及NC组表达显著降低。ctrl组、NC组、过表达MYH11组为(20.27±1.48)%、(19.83±1.85)%、(34.21±2.75)%, 差异有统计学意义(F=45.69, P<0.01)。MTT增殖实验结果显示, Hela细胞中ctrl组、NC组以及过表达MYH11组24、48、72 h细胞增...     

环状RNA circPRDM5在食管鳞状细胞癌中的表达和功能研究

［摘要］ 目的 探索环状RNA circPRDM5在食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞和组织中的表达水平,及其对ESCC细胞功能的影响。方法 qRT?PCR检测circPRDM5在正常食管上皮细胞（HEEC）、ESCC细胞系、和44例ESCC组织及对应的癌旁正常组织中的相对表达水平;Transwell实验和CCK8实验分别检测siRNA沉默circPRDM5后,对细胞迁移侵袭和增殖功能的影响;构建裸鼠成瘤模型,检测circPRDM5对ESCC细胞在动物体内成瘤能力的影响。结果 与HEEC相比,circPRDM5在ESCC细胞系KYSE150、ECA109中高表达（P<0.05）,且在ESCC组织中表达（2.90±0.18）较癌旁正常组织（2.01±0.15）表达高（P<0.001）。Transwell实验和CCK8实验证明,沉默circPRDM5能明显抑制ESCC细胞的迁移侵袭和增殖能力（P<0.05）;裸鼠成瘤实验结果表明,沉默circPRDM5后,ESCC细胞的成瘤体积和重量较对照组明显下降（P<0.01）。结论 circPRDM5在ESCC的细胞和组织中高表达。在ESCC细胞中沉默circPRDM5能降低ESCC细胞的增殖、迁移侵袭、和在动物体内的成瘤能力。提示circPRDM5可能成为ESCC治疗的一个新靶点。     

黏蛋白1在食管鳞癌上皮细胞-间质细胞转化过程中的作用

目的 观察黏蛋白1(MUC1)对食管鳞癌细胞生物学行为的影响并探讨其在上皮细胞-间质细胞转化过程中的作用.方法 设计构建靶向MUC1基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体pGC-LV-MUC1小干扰RNA(siRNA)并感染人食管癌细胞株Eca109,检测其对MUC1表达的抑制作用;应用噻唑蓝(MTT)与Transwell侵袭实验检测抑制MUC1对肿瘤细胞增殖、侵袭能力的影响,并采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)与Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)在各组细胞中的表达差异.结果 与对照组比较,感染pGC-LV-MUC1 siRNA后,Eca109细胞内MUC1基因水平(1.000±0.061比0.612±0.019)和蛋白水平(11.230±1.120比7.440±0.970)明显降低(P＜0.05);感染pGC-LV-MUC1 siRNA能显著抑制Eca109细胞的增殖活性,48 h (0.393±0.028比0.281 ±0.020),72 h(0.792±0.052比0.463 ±0.028,P＜ 0.05);感染pGC-LV-MUC1 siRNA后,Eca109细胞的侵袭数量也明显降低[(87±4)个比(48±7)个,P＜0.05];而Eca109细胞内E-cadherin基因水平(1.000±0.072比2.510±0.767)和蛋白水平(0.070±0.020比0.130±0.030)明显增高(P＜0.05).结论 MUC1可能通过诱导上皮细胞-间质细胞转化(EMT)而促进食管鳞癌细胞增殖、侵袭.     

荷载精子相关抗原9基因短发卡RNA的溶瘤腺病毒ZD55-SPAG9联合放疗对前列腺癌LNCaP细胞的治疗作用

目的观察荷载精子相关抗原9(SPAG9)基因短发卡RNA(shRNA)的溶瘤腺病毒ZD55-SPAG9联合放疗对前列腺癌LNCaP细胞的治疗作用并初步探讨其机制。方法将前列腺癌LNCaP细胞分为4组, 分别为磷酸盐对照组(PBS组)、放疗组(10 GY)、病毒组[ZD55-SPAG9, 10感染复数(MOI)]、联合组(ZD55-SPAG9+放疗, 5 MOI+5 GY);细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组LNCaP细胞增殖能力的变化;Hoechst-33258染色法检测各组细胞的凋亡;Transwell迁移及侵袭实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞SPAG9蛋白、凋亡相关蛋白及侵袭相关蛋白的表达。两组间差异的比较采用独立样本t检验, 多组间差异比较采用One-way ANOVA分析。结果 CCK-8结果显示, 联合组LNCaP细胞的存活率为(46.02±2.20)%、病毒组为(56.83±2.40)%(t=12.855, P<0.01)、放疗组为(64.12±2.23)%(t=22.389, P<0.01)、PBS组为...     

食管鳞癌RASSF1A基因启动子区甲基化研究

目的 研究肿瘤抑制基因RASSF1A启动子区甲基化所致该基因表达抑制在我国食管鳞癌发生中的作用及可能机制. 方法 用甲基化特异PCR技术(MSP)检测43例原发性食管鳞癌标本及6例对照食管上皮组织标本、食管鳞癌细胞系TE11和TE12中RASSF1A启动子甲基化状态;逆转录(RT)-PCR法检测5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理前后食管鳞癌细胞系中RASSF1A mRNA表达水平;Western blot方法检测食管鳞癌细胞系中细胞微管蛋白的表达. 结果 20.9%(9/43)原发性食管鳞癌标本有RASSF1A启动子超甲基化,正常食管上皮组织未发现该基因超甲基化改变.RASSF1A基因甲基化与食管癌患者的性别和TNM分期无关(P＞0.05),但在不同年龄组间的差异有统计学意义(P＜0.05).TE12细胞RASSF1A启动子发生甲基化,RT-PCR检测不到RASSF1A mRNA.TE11细胞系启动子未发生甲基化,RT-PCR检测其有RASSF1A mRNA表达.5-Aza-CdR处理可使TE12重新表达RASSF1A mRNA.TE12细胞的β-微管蛋白水平比TE11细胞低87.8%. 结论 原发性食管鳞癌存在RASSF1A启动子超甲基化,该基因甲基化与年龄相关.RASSF1A在食管鳞癌细胞系表达抑制与其甲基化状态有关.RASSF1A表达缺失可能导致β-微管蛋白减少.     

组织因子途径抑制物-2在肾癌组织中的表达及甲基化

目的 探讨组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)对肾癌侵袭性及细胞凋亡的影响,TFPI-2在肾癌组织中的表达与基因启动子甲基化关系.方法 免疫组织化学、蛋白质印迹、荧光定量RT-PCR检测37例肾癌及11例正常肾脏组织TFPI-2基因表达;TUNEL法检测细胞凋亡;荧光定量甲基化特异性PCR检测TFPI-2基因启动子甲基化.结果肾癌与正常肾脏组TFPI-2蛋白质印迹条带吸光度(A)值分别为0.92±0.36、1.61±0.13;2组TFPI-2 mRNA相对表达量为0.0019±0.0011、0.0065±0.0008.随肾癌分期增加,TFPI-2表达下降.肾癌TFPI-2表达1～4级细胞凋亡指数分别为2.41%、3.90%、6.78%、9.57%.随TFPI-2表达增加,肾癌细胞凋亡指数上升.肾癌TFPI-2基因启动子甲基化阳性组与阴性组TFPI-2 mRNA相对表达量分别为0.0015±0.0011、0.0024±0.0009,2组蛋白质印迹条带A值为0.82±0.35、1.04±0.34.基因启动子甲基化阳性组TFPI-2表达低于阴性组.结论 肾癌TFPI-2基因表达与侵袭性呈负相关,促进细胞凋亡;启动子高甲基化是肾癌TFPI-2基因低表达机制之一.     

微小RNA-21促进胰腺癌细胞侵袭的研究

目的探索微小RNA-21(miR-21)对胰腺癌MiaPaCa-2细胞侵袭能力的影响和机制。方法选取人类胰腺癌MiaPaCa-2细胞, 采用简单随机法分为四组:正常组、miR-21过度表达组、空白对照组和miR-21抑制组。通过慢病毒载体感染MiaPaCa-2细胞, 调节miR-21的表达, 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证miR-21的表达;体外侵袭实验(Transwell)检测其侵袭能力;流式细胞蛋白检测和RT-PCR检测上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白和基因的表达, 包括E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)。两样本间的比较采用t检验。结果 miR-21组中miR-21的表达(1.99±0.17)和MiaPaCa-2细胞侵袭能力(128.00±5.66)高于正常组(0.87±0.12、36.50±0.71), 差异有统计学意义(t=9.406、39.315, P<0.01), 反之miR-21i组中miR-21的表达(0.50±0...     

RIZ1基因表达缺陷对结肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的 观察抑癌基因Rb结合锌指结构基因(RIZ1)表达缺陷对结肠癌细胞增殖和凋亡能力的影响.方法 以表达RIZ1的LoVo细胞和不表达RIZ1的SW480细胞作为研究对象,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测2株结肠癌细胞的RIZ1基因启动子的甲基化状况;以3×105/瓶为细胞观察单位,5 μmol/L的5-杂氮2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对细胞进行去甲基化处理48 h,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测RIZ1的mRNA和蛋白表达,观察处理前后的差异;细胞增殖实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡.结果 在SW480细胞中可以扩增出RIZ1基因启动子的甲基化条带,经去甲基化处理后,则能检测出该基因的mRNA和蛋白的表达条带,其增殖速度明显减慢,凋亡率从(4.4±1.7)%增高到(23.8±2.6)%,差异有统计学意义(P＜0.05),5 μmol/L的5-aza-CdR可显著上调SW480中RIZ1的表达;而LoVo细胞中未检测到基因启动子的甲基化,处理前后其基因表达、增殖和凋亡差异均无统计学意义(P＞O.05).结论 抑癌基因RIZ1启动子异常甲基化在调节其表达中发挥重要作用,对RIZ1进行去甲基化处理使其重新表达能明显减缓结肠癌SW480细胞的生长,促进其凋亡.     

常春藤皂苷元对人胶质瘤细胞株U251MG凋亡及迁移侵袭的影响及其机制

目的探讨常春藤皂苷元(Hederagenin)对人胶质瘤(Glioma)细胞株U251MG凋亡的影响和机制。方法应用不同剂量的Hederagenin作用于人胶质瘤细胞株U251MG 48 h后应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性。U251MG细胞分为实验组(给与80 μg/ml Hederagenin干预)及对照组[给与无血清的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养液], 流式细胞术检测细胞凋亡;划痕实验和Transwell小室实验检测细胞的迁移侵袭能力;蛋白质印迹法(Western blot)技术检测各组U251MG细胞凋亡及迁移侵袭相关蛋白的变化。多组数据间比较采用单因素方差分析, 两组数据比较采用t检验。结果 MTT结果显示, 实验组U251MG细胞活性明显低于对照组, 且随药物剂量增加效应更加明显(F=288.946, P<0.01)。流式细胞术(FCM)结果显示, Hederagenin作用于U251MG细胞48 h后实验组细胞凋亡率明显高于对照组[(21.07±4.85)%比(5.12±1.52)%, t=7.687, P<0.01], 实验组细胞的迁移率明显低于对照...     

BIX-01294通过诱导DNA损伤和激活线粒体凋亡途径抑制食管鳞癌细胞增殖

目的 探讨组蛋白甲基化酶G9a抑制剂BIX-01294诱导食管鳞癌细胞凋亡的作用效应和分子机制.方法 MTT和集落形成实验分析BIX-01294对食管鳞癌细胞EC109和KYSE150生长、增殖的影响;流式细胞术分析BIX-01294作用后细胞的凋亡情况;免疫印迹实验检测BIX-01294作用后G9a催化产物H3K9m...     

微小RNA-135a调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和凋亡

目的探讨微小RNA-135a(miR-135a)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、迁移和凋亡的影响及可能的机制。方法构建miR-135a过表达和空载病毒的Saos-2细胞分别为miR-135a UP组(实验组), Control组(对照组)。采用实时定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)检测c-Myc信使核糖核酸(mRNA)的改变, 采用蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测c-Myc蛋白及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)(PAM)通路蛋白的改变。细胞集落形成和细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力, 划痕和Transwell实验分别检测迁移和侵袭能力, 细胞流式技术检测抗凋亡能力, 两组比较采用t检验。结果 miR-135a表达量实验组高于对照组(59.006±5.034比1.008±0.151, t=23.031, P<0.01), c-Myc与PAM通路蛋白表达量实验组低于对照组, 细胞增殖能力实验组低于对照组(CCK-8法:1.311±0.048比2.029±0.046, t=24.301, P<0.01...     

核桃青皮提取物对食管癌细胞增殖的抑制作用及其分子机制的探讨

目的观察核桃青皮提取物对人食管癌细胞增殖的抑制作用.方法：用MTT法分别测定核桃青皮粗提物和核桃青皮提取物没食子酸、乙酸乙酯、紫杉叶素、7-D-芹菜糖-儿茶酚对食管癌细胞EC9706和KYSE150的增殖抑制率,并用Western Blot检测不同药物处理后食管癌细胞中细胞周期相关蛋白CyclinD1的蛋白表达.结果：核桃青皮粗提物、没食子酸和乙酸乙酯能抑制食管癌细胞的增殖,其作用呈明显剂量依赖性,当药物浓度增加至80 μg/mL时,对KYSE150的抑制率分别为82.75% 、90.51%、88.36%,对EC9706的抑制率分别为85.54% 、87.21%、85.17%.与对照组相比,3种药物均会显著抑制KYSE150和EC9706细胞中CyclinD1的表达.结论：核桃青皮提取物对食管癌细胞系的增殖有较强的抑制作用,其机制可能与引起细胞周期阻滞有关.     

不可逆电穿孔消融技术对食管癌治疗作用的研究北大核心CSCD

目的探索不可逆电穿孔(IRE)消融技术对食管癌的治疗作用及安全评价。方法应用ECM830电穿孔仪分别对食管癌细胞EC109、KYSE30行IRE处理,根据电场强度不同,分为对照、500 V/cm、1000 V/cm、1500 V/cm、2000 V/cm 5组,24 h后噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况;Western blotting检测IRE处理前后凋亡蛋白的表达情况;8只BALB/c裸鼠平均分为两组(对照组、IRE组),每组4只,利用食管癌细胞EC109建立皮下移植瘤,IRE组应用平板电极对肿瘤行IRE处理,14 d后测量瘤体的重量与体积;10只新西兰大白兔平均分为两组(对照组、IRE组),每组5只,暴露腹腔找到腹段食管后,IRE组应用平板电极行IRE处理,7 d后取食管组织进行HE及Masson染色。结果当电场强度较小时(500 V/cm),IRE处理后食管癌细胞的增殖与对照组无差异(EC109细胞:P=0.385,KYSE30细胞:P=0.600),而随着电场强度的增加,IRE对食管癌细胞增殖的影响逐渐加重,当达到2000 V/cm时,IRE处理后基本上无增殖(P<0.001);Western blotting检测显示,IRE处理后,食管癌细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3表达增加(P<0.01);动物实验检测表明,IRE处理后,裸鼠移植瘤重量减轻、体积减小(P<0.05),生长减缓,兔食管组织实质细胞大量损伤,而纤维等间质组织保存较好。结论IRE消融能够抑制食管癌细胞的增殖,减缓肿瘤生长,且对食管是安全的。     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷对前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响

目的 检测E-cadherin基因在激素非依赖性前列腺癌(HIPC)细胞上的表达及启动子CpG岛甲基化,探讨甲基化抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对HIPC细胞的影响及意义.方法 2.5、5.0、10.0 μmol/L的5-Aza-CdR处理PC-3细胞72h后,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测CpG岛甲基化改变,逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测E-cadherin mRNA变化,Westernblot方法检测E-cadherin蛋白变化,Transwell小室检测细胞侵袭性改变.结果 HIPC的E-cadherin启动子CpG岛甲基化呈阳性,基因表达缺失,细胞侵袭性明显.经5-Aza-CdR作用之后,CpG岛甲基化阳性明显减弱(P＜0.05),E-cadherin基因恢复表达(P＜0.05),PC-3细胞的侵袭性下降约59.68％,且与药物的浓度呈正相关.结论 5-Aza-CdR可逆转PC-3细胞E-cadherin启动子CpG岛的异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达,并降低癌细胞的侵袭性.