腺病毒介导的LacZ基因在乳腺癌细胞中的表达

观察腺病毒介导的基因转移在乳腺癌细胞的转导效率及腺病毒转导对细胞生长的影响。方法：腺病毒介导的基因转导。结果：在病毒的重复感染率为５００时细胞的转导效率达到１００％；不同数量的病毒转导乳腺癌细胞对癌细胞的生长没有明显影响。低温冻存可使病毒的感染性明显下降。结论：腺病毒介导的基因转移在乳腺癌细胞中有高的转导效率，而病毒载体本身对细胞的生长没有影响，可用作乳癌特异物前体酶激活基因治疗的基因转移方法。     

基因转移载体脂质体和重组腺病毒介导碱性磷酸酶基因在B16F1细胞中的表达比较

目的：探讨两种基因转移载体脂质体转染的和重组腺病毒收集并转导的SEAP基因在B16F1细胞中的表达动态。方法：脂质体和质粒DNA复合后，转染10^6 B16F1细胞，连续5d收集并换细胞培养液，并检测其中的SEAP酶活性，将重组腺病毒以1000m.o.i,2000m.o,i,3000m.o.i,4000m.o.i接种B16F1细胞，连续5d收集并换细胞培养液，并检测其中SEAP的含量，结果：随着时间的推移，脂质体转染的SEAP的表达逐渐下降，由第1天的821．6μUmit/ml下降到第5天的275．2μUnit/ml，腺病毒转导的SEAP的表达却是逐渐上升，并随接种毒量的增加而上升，且第三，四天表达达最高后，能保持较稳定的水平，接种4000m.o.i组，SEAP的表达由第1天的93．9μUnit/ml上升到第3天1281.1μUnit/ml，到第5天仍为1240．4μUnit/ml，结论：脂质体和重组腺病毒作为不同的基因转移载体都能有效地介导外源基因的转移入靶细胞，并使外源基因在靶细胞内获得有效地表达，但表达的动态过程完全不同。     

腺病毒介导的LacZ基因在乳腺癌细胞中的表达

目的：观察腺病毒介导的基因转移在乳腺癌细胞的转导效率及腺病毒转导对细胞生长的影响。方法：腺病毒介导的基因转导。结果：在病毒的重复感染率（MOI）为500时细胞的转导效率达到100％；不同数量的病毒转导乳腺癌细胞对癌细胞的生长没有明显影响。低温冻存可使病毒的感染性明显下降。结论：腺病毒介导的基因转移在乳腺癌细胞中有高的转导效率，而病毒载体本身对细胞的生长没有影响，可用作乳癌特异药物前体酶激活基因治疗的基因转移方法。     

腺病毒载体介导人PML基因在人前列腺癌细胞的高效转染和表达

早幼粒细胞白血病基因（Ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ，ＰＭＬ）编码的蛋白质是一种广谱的细胞生长抑制因子，在多种肿瘤细胞中过度表达能够有效地抑制细胞生长和裸鼠体内致瘤能力。在前列腺癌、乳腺癌及结肠癌中的表达变化可能与肿瘤的分化、局部浸润和...     

腺病毒携带的LacZ基因静脉注射后在大鼠体内的表达

目的 :探讨周围静脉注射的腺病毒载体介导的外源基因在体内不同组织的表达。方法 :将重组LacZ腺病毒经尾静脉注射导入Wistar大鼠体内 ,以X -gal染色法明确腺病毒载体介导的标识基因 (LacZ)在大鼠体内的表达部位和时间。结果 :β- gal表达具有剂量依赖性 ,而且存在器官、组织和细胞三种水平的表达差异。剂量较小时 ,肺、肾、肝、脾优先表达 ,而心肌在 1× 1 0 1 1 pfu/kg剂量组才有少量表达 ,大血管和脑组织始终未见表达。注射后 1～ 2周 ,大鼠的肾、肺、肝、脾、肾上腺高表达 β -半乳糖苷酶 ,3～ 4周表达量减少 ,5周基本消失。 结论 :腺病毒介导的外源基因经静脉途径转移 ,可能是肾、肺、肝的部分疾病基因治疗的有效基因转移途径 ,而对心脑血管疾病不适合。     

重组腺病毒介导的CTLA-4Ig基因在人源性细胞中的表达

目的：了解CTLA－4Ig重组腺病毒在不同人细胞中的转染能力及表达效率，为其器官转染研究及其治疗应用奠定基础。方法：用所构建的CTLA－4Ig腺病毒感染培养的HeLa细胞，人成纤维细胞，人脐静脉内皮细胞，应用免疫组化检测CTLA－4Ig的表达情况，结果：与重组腺病毒共培养6h使HeLa细胞获得转染，12h开始表达，36h表达达高峰；人成纤维细胞8h获得转染，24h开始表达，60h后达高峰，人脐静脉内皮细胞4h获得转染，12h开始表达，36h后达高峰。结论：CTLA－4Ig重组腺病毒能高效转染HeLa细胞，人成纤维细胞，人脐静脉内皮细胞。     

腺病毒介导的p16对胆管癌细胞的生长抑制作用

目的 研究p16基因对胆管癌细胞的作用。方法 将重组体腺病毒p16转移到人胆管癌细胞QBC939,对p16基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析。结果 用Ad-LacZ进行重组体腺病毒转导效率的检测,发现当MOI为100以上时,重组体朱病毒可使90%以上的培养的人胆管癌QBC939细胞被转导,用RT-PCR方法检测,在胆管癌QTBC939细胞系中p16呈低表达,重组体腺病毒能介导外源基因p16在胆管癌QBC939细胞系中高效表达,重组体朱病毒介导的p16在QBC939细胞中表达,能抑制QBC939细胞的生长和集落形成。流式细胞计数和细胞DNALadder,证实p16能诱导QBC939细胞发生凋亡并导致其发生G1期阻滞。结论 p16基因通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞在肿瘤的基因治疗方面发挥作用。     

腺病毒介导的LacZ基因在人肝癌细胞HepG2中的表达

目的观察腺病毒介导的LacZ基因在人肝癌细胞HepG2中的转染表达效率。方法常规重组腺病毒Ad-LacZ扩增、滴度测定及转染HepG2细胞,并检测细胞表达LacZ的情况。结果当病毒感染繁殖数(MOI)为100时,24小时后接近100%的HepG2细胞被感染并表达LacZ。感染后HepG2细胞的增殖能力无明显异常。结论腺病毒介导的LacZ基因在HepG2细胞中能获得较高的转染效率和有效表达。     

腺病毒介导的P16／CDKN2基因对TJ899细胞系活性的影响

（1）目的 研究5型腺病毒载体（Ad5)携带P16基因对恶性脑胶质瘤细胞系TJ899生长状态的影响。（2）方法 免疫组化（SP法）测定P16蛋白表达，MTT（methly thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定恶性脑胶质瘤细胞系生长状态，克隆形成实验。（3）结果 重组体腺病毒能介导P16外源基因在恶性脑胶质瘤细胞系TJ899细胞中阳性表达，6d时肿瘤细胞生长抑制率为93%，并且能显地抑制肿瘤细胞的克隆形成能力。（4）结论 腺病毒介导P16基因能在肿瘤细胞中表达。并能明显抑制肿瘤细胞生长的状态。     

Study of the "killing" effect of retrovirus-mediated HyTK gene transfer on melanoma cell line

Ithasbecomeanoticeablestrategytokilltu-morcellsselectivelybyintroducingtheHerpessimplexvirustype1(HSV1)thimidinekinase(tk)geneintothesecells,followedbytreatmentwithantiviraldrugsuchasganciclovir(GCV).TheclinicaltrialsapprovedbyNIHRACinvolvingretroviral-mediatedtransferofHSVltkgeneintotumorcel1scombinedwithsystemicadministrationofGCVforthetreatmentofbraintumorsandoth-ermalignanttumorsareongoing[']-InthisstudyarecombinantretroviralvectorLHyTK/Nwascon-structed.ThesupernatantfromPA317cel…     

Reporter LacZ gene transfer into cultured ocular cells of human eyes in vitro

Objective To investigate whether a reporter LacZ gene could be transferred into cultured ocular cells of human eyes in vitro. Methods Fibroblast cells of Tenon’s capsule, trabecular meshwork cells, and muscle celms in the ciliary body of human eyes were cultured and the pcDNA3-LacZ gene was transferred into these cells using a cationic liposome delivery system.The cells were subsequently fixed with 4% paraformaldehyde, mixed with X-gal, then observed under a microscope. Results Blue stain was seen in the cytoplasm of the cultured cells under the microscope, demonstrating the successful transfer of the LacZ gene into these cells.Conclusion Reporter LacZ gene was easily transferred into the cultured ocular cells in vitro.This provides insights into the transfer of the genes into these cells to study the pathogenesis and therapy of glaucoma.     

重组鼠白细胞介素12与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因联合治疗小鼠B16黑色素瘤

目的：研究重组鼠白细胞介素12（AdCMVIL-12）与粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（AdCMVGM-CSF）的腺病毒载体联合应用对B16黑色素瘤的抗肿瘤作用。方法：将B16黑色素瘤细胞接种于C57/BL6小鼠右侧背部皮下后,待瘤体直径达5mm时将荷瘤小鼠随机分为4组,分别为AdCMVIL-12组、AdCMVGM-CSF组、AdCMVIL-12加AdCMVGM-CSF组（联合治疗组）和AdC MVLacZ组（对照组）,每组12只,并于肿瘤组织局部分别多点注射相对应剂量的腺病毒载体,观察各组小鼠肿瘤的生长情况及其诱导的细胞免疫反应,检测各组小鼠血清IL-12和GM-CSF表达水平的变化。结果：病理学观察,联合治疗组肿瘤组织内可见大片凝固性坏死,有大量的淋巴细胞、巨噬细胞浸润。治疗30 d后,联合治疗组肿瘤平均体积为（60.73±11.36 ）mm³,与对照组、AdCMVIL-12组和AdCMVGM-CSF组［分别为（675.18±80.59）、（1 86.91±19.15）和（223.45±23.11）mm³］ 比较差异均有显著性（P>0.01）。同时,AdCMVIL-12与AdCMVGM-CSF联合基因治疗可有效延长IL-12和GM-CSF的表达时间,并且对B16黑色素瘤细胞具有很强的特异性杀伤作用,杀伤率为（69.53 ± 9.20）%。 结论：IL-12与GM-CSF联合基因治疗可增强荷B16黑色素瘤小鼠的抗肿瘤免疫反应,并能有效降低单独应用AdCMVIL-12的毒副作用。     

含鼠GM-CSF基因的腺病毒载体对荷B16黑色素瘤小鼠免疫功能的影响

目的：研究含鼠GM-CSF基因的腺病毒载体（AdCMVGM-CSF）直接注射荷B16黑色素瘤小鼠瘤体内对小鼠免疫功能的影响。 方法：将B16黑色素瘤细胞（5×10⁶/只）接种于C57/BL6小鼠右侧背部皮下后,将荷瘤小 鼠随机分为2组,每组12只,待瘤体直径达5 mm时分别注射AdCMVGM-CSF、AdCMVLacZ （5×10⁸ PFU/只）,检测每组小鼠的免疫功能及其对B16黑色素瘤的抑制作用。 结果：AdCMVGM-CSF实验组小鼠注射后第10天,荷瘤鼠血清中GM-CSF水平［(1 563.72±136.58)ng·L^-1］高于对照组（P<0.01）,肿瘤组织周围的CD8＋ T细胞表达明显增强。 结论：AdCMVGM-CSF可增强荷B16黑色素瘤小鼠的抗肿瘤免疫反应,具有抑制肿瘤生长的作用。     

Lipofectin介导tk基因转移使B16细胞获得对GCV的敏感性

用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将真核表达质粒ｐＣＭＶ－ＨｙｇｒｏＴＫ导入小鼠黑色素瘤细胞系Ｂ１６，用潮霉素Ｂ筛选出阳性克隆。聚合酶链式反应检测ｔｋ基因的存在，并在倒置显微镜下动态观察了核苷类似物丙氧乌苷（ＧＣＶ）对ｔｋ￣－和ｔｋ￣＋的Ｂ１６细胞的作用。结果表明，ｔｋ￣＋的Ｂ１６细胞获得了对ＧＣＶ的敏感性，ｔｋ基因／ＧＣＶ使细胞死亡具有“旁观者效应”。     

Effect of cytokines on the efficiency of gene transfer into murinehematopoietic progenitors

Ｅｆｆｅｃｔｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅｓｏｎｔｈｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒｉｎｔｏｍｕｒｉｎｅｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ￥（杨建民）（宋献民）（卢大儒）（闵碧荷）（李川晟）（孟沛霖）ＹａｎｇＪｉａｎｍｉｎ；Ｓｏ...     

穿心莲内酯滴丸抗小鼠黑色素瘤作用的研究

目的 研究穿心莲内酯滴丸的抗肿瘤作用.方法 采用C57BL/6小鼠作为实验动物于右腋下皮下接种小鼠黑色素瘤细胞B16,建立小鼠B16皮下移植瘤模型,用穿心莲内酯滴丸(0.143 mg·20 g-1)和对照药物氢化穿心莲内酯滴丸(0.143 mg·20 g-1)灌胃治疗,观察肿瘤体积、肿瘤质量、小鼠生存率的变化,分析穿心...     

细胞因子对小鼠造血祖细胞基因转移效率的影响

观察细胞因子对逆转录病毒载体介质的Ｎｅｏ＾Ｒ基因在小鼠造血祖细胞及人Ｋ５６２细胞中基因转移效率的影响，以探求最有效地促进造血细胞基因转移的细胞因子或其组成。Ｉｌ－１α／ＩＬ－３／ＳＣＦ联合应用可提高造血干、祖细胞基因转移效率，ＳＣＦ可用于急性髓性白血病患者自体骨髓移植时基因标志的临床研究。     

条件培养基抑制L-抗坏血酸钠介导的小鼠黑色素瘤细胞凋亡

目的探讨肿瘤细胞B16F10通过自分泌对抗由L-抗坏血酸钠(VitCNa)介导的凋亡作用。方法常规在75 cm~2培养瓶中培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10,待细胞长至90%～95%融合时吸取原DMEM/高糖培养液,用PBS反复清洗后加入无血清的DMEM/高糖10ml在培养箱中培养6～8 h,收集培养液用2500 r/min离心5min后上清用0.22μm滤器过滤,-20℃保存备用,在6孔板中每孔接种1×10~6 B16F10,常规培养24h后,实验组每孔加入2ml条件培养液(含有10%胎牛血清),对照组用普通培养液,两组均用10 mmol/L VitC Na促凋亡,分别在3、6、24 h观察细胞凋亡情况,hoechst染核,收集细胞免疫荧光检测caspase3和TUNEL、RT-PCR检测Bcl2表达。进而分离出条件培养液中相对分子质量大于5 000和小于5 000成分,分别煮沸,用蛋白酶K灭活后对B16F10促凋亡。结果发现条件培养基能够抑制VitC Na介导的小鼠黑色素瘤细胞B16F10凋亡,抗凋亡成分小于5 000,且不能被煮沸和蛋白酶K灭活,提示其是小分子抗凋亡物质。结论 B16F10可以分泌出拮抗细胞凋亡的小分子物质。