CEA重组痘苗病毒对CEA阳性肿瘤的防治研究

肿瘤的免疫治疗是治疗肿瘤的新方法,它通过增强肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的免疫原性,诱导机体产生肿瘤特异性的免疫应反应而杀伤肿瘤细胞。本系列研究采用同源重组方法构建表达人癌胚抗原的重组痘苗病毒,经动物实验证明了其具有强免疫原性,安全性和防治ＣＥＡ阳性肿瘤的可靠性。     

CEA重组痘苗病毒对CEA阳性肿瘤的防治研究

肿瘤的免疫治疗是治疗肿瘤的新方法 ,它通过增强肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的免疫原性 ,诱导机体产生肿瘤特异性的免疫应答反应而杀伤肿瘤细胞。本系列研究采用同源重组方法构建了表达人癌胚抗原 (carcinoembryonicantigen ,CEA)的重组痘苗病毒 ,经动物实验证明了其具有强免疫原性、安全性和防治CEA阳性肿瘤的可靠性。     

CEA重组痘苗病毒免疫巨噬细胞抑制CEA阳性肿瘤的机制

目的 探讨癌胚抗原重组痘苗病毒（ＣＥＡ－ｒＶ）对癌胚抗原（ＣＥＡ）阳性肿瘤的抑制机制。方法 使用我室构建的ＣＥＡ－ｒＶ腹腔接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠３次,６周后,取其腹腔巨噬细胞（ＭХｓ）转输给携带ＣＥＡ阳性肿瘤的受体小鼠,同时检测供体ＭХｓ及受体脾细胞的体外细胞毒活性。结果 供体ＭХｓ体外细胞毒活性无明显增加,但体内却能明显抑制ＣＥＡ阳性肿瘤的生长,受体脾细胞对同一靶细胞的杀伤活性亦明显增强。结论     

表达人癌胚抗原重组痘苗病毒的构建

用痘苗病毒作载体，成功构建了高效表达人癌胚抗原（ＣＥＡ）的ＣＥＡ－重组痘苗病毒，用１４３ＴＫ－细胞作主宿主细胞，表达的蛋白质只在细胞膜上的能检测到，而胞质内和细胞上清液中均未能检测到，可见所表达的蛋白保持了其原有特性，再次证实痘苗病毒是真核表达扔效载体，本结果为进一步研究ＣＥＡ－重组痘苗病毒能否激活机体的免疫系统杀伤表达ＣＥＡ的肿瘤提供了物质基础。     

人癌胚抗原cDNA-重组痘苗病毒接种动物的研究

将构建的表达人癌胚抗原（ＣＥＡ）的重组痘苗病毒接种于纯种新西兰兔，在兔血清中测到高水平的ＣＥＡ以及高滴度抗ＣＥＡ抗体，而在兔的非淋巴组织器官中未检测到ＣＥＡ的表达及免疫复合物的沉积，接种后的兔也没有明显的毒副反应，显示痘苗病毒作载体在体内应用是安全可行的。     

表达人癌胚抗原重组痘苗病毒的构建

用痘苗病毒作载体，成功构建了高效表达人癌胚抗原（ＣＥＡ）的ＣＥＡ－重组痘苗病毒，用１４３ＴＫ－细胞作为宿主细胞，表达的蛋白质只在细胞膜上能检测到，而胞质内和细胞上清液中均未能检测到，可见所表达的蛋白质保持了其原有特性，再次证实痘苗病毒是真核表达的有效载体。本结果为进一步研究ＣＥＡ－重组痘苗病毒能否激活机体的免疫系统杀伤表达ＣＥＡ的肿瘤提供了物质基础。     

CEA重组痘苗病毒对实验性CEA阳性肝癌的预防和治疗作用

目的：探讨CEA重组痘苗病毒(CEA—rV)对小鼠CEA阳性肿瘤的预防和治疗作用。方法：①预防作用观察：将实验小鼠分为4组，第1、2组和第3、4组分别皮下接种野生型痘苗病毒(W—VV)和CEA—rV3次，末次接种后，第1、3组皮下注射同源鼠CEA阴性肝癌细胞(Hepa—CEA)，第2，4组接种Hepa—CEA^ 。肿瘤细胞接种后每周测量肿瘤体积，共6周。②治疗作用观察：第1、2组先皮下注射Hepa—CEA^-，3、4组接种Hepa-CEA^ ，7d后1、3组皮下接种W—VV，2，4组接种CEA—rV。肿瘤细胞接种后每周测肿瘤体积，共6周。结果：①预防作用：接种CEA—rV和Hepa—CEA^ 组(第4组)小鼠在观察期内无肿瘤形成，其他小鼠皮下均有肿瘤形成，并且以相近速度增长。②治疗作用：接种Hepa—CEA^ 和CEA—rV组(第4组)小鼠皮下肿瘤生长缓慢，瘤块较小，其他3组肿瘤生长迅速，瘤块较大。整个实验过程中各组小鼠均未表现出其他任何不良反应。结论：CEA—rV对实验性CEA阳性肿瘤具有良好的预防和治疗作用，而且预防作用更佳。     

流式细胞术检测重组痘苗乙型脑炎病毒抗原的表达

流式细胞术检测重组痘苗乙型脑炎病毒抗原的表达ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＪａｐａｎｅｓｅｅｎｃｏｐｈａｌｉｔｉｓｖｉｒｕｓａｎｔｉｇｅｎｓｅｎｐｒｅｓｓｅｄｏｎｔｈｅＢＨＫ２１－１５ｃｅｌｌｓｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｉｒｕｓｂｙｆｌ...     

癌胚抗原重组痘病毒治疗CEA阳性肿瘤的机制及其CEA基因表达的研究

目的：探讨癌胚抗原重组痘病毒（carcinoembryonic antigen recombinant vaccinia virus,CEA-rV)治疗CEA阳性肿瘤的作用部位及其CEA基因表达的情况。方法：采用PCR法探测CEA-rV的作用部位，RT-PCR检测接种CEA-rV鼠腹腔Mφ内CEA的基因表达，免疫组化法检测各组小鼠腹腔MφCEA的蛋白表达，结果：腹腔接种的CEA-rA主要感染腹腔Mφ；皮下接种的CEA-rV主要感染皮肤局部组织，CEA-rV腹腔接种小鼠，其腹腔Mφ有CEAmRNA表达及CEA蛋白表达。结论：推测无论通过腹腔接种还是通过皮肤局部接种，GEA-rV一般多在注射局部表达，CEA-rV不仅可以进入Mφ，而且其CEA基因可以有效地表达，并可使Mφ表面分子MHC-Ⅱ与B7-2表达增强，然后递呈CEA给Th淋巴细胞，使之分泌足够的IL-2，激活Tc细胞分化为CTL，杀伤肿瘤细胞。     

痘苗病毒增强人类白血病细胞免疫原性的实验研究

作者应用痘苗病毒处理人白血病细胞制备瘤苗,免疫正常615系小鼠。结果发现,实验组小鼠的NK细胞活性、白细胞介素-2(IL-2)诱生水平显著提高,T辅助细胞数及T_(11)/Ts比值显著提高(与对照组相比,P<0.01或P<0.05),未经痘苗病毒处理的人白血病细胞则无此作用。     

The Expression of Sperm Membrane Peptide-Hepatitis B Surface Antigen Fusion Protein with Recombinant Vaccinia Virus

A synthetic oligonucleotide, HSD-2a, encoding a peptide segment of the extracellular domain of a human sperm membrane protein, YWK-Ⅱ, was fused with hepatitis B surface antigen gene (HBs gene). The fused gene was then cloned to pUC18 plasmid.     

带EB病毒膜抗原基因痘苗病毒的构建和表达

以痘苗病毒天坛株为载体,构建表达EB病毒膜抗原的重组痘苗病毒株。在重组病毒的感染细胞膜上表达病毒的膜抗原。该抗原免疫家兔能产生抗体。     

重组痘病毒表达系统测定A类氨基酸转运蛋白SAT-2的部分动力学特性

用编码T7RNA聚合酶的重组痘病毒感染CV - 1细胞 ,转染带T7启动子的A类氨基酸转运蛋白SAT- 2基因的表达质粒 ,使SAT - 2基因得到瞬时高表达 ,进而用各种放射性标记的底物直接测定SAT - 2蛋白的部分转运动力学特性 .结果表明 :SAT - 2蛋白对MeAIB ,Ala和Gln的转运呈可饱和的动力学曲线 ,转运丙氨酸和谷氨酰胺的Michaelis常数 (Km值 )分别为 :(0 5 2 9± 0 0 5 0 )mmol和 (1 6 5 4± 0 2 78)mmol.SAT - 2基因蛋白产物转运MeAIB的能力超过内源性氨基酸转运蛋白的转运能力 ,但转运丙氨酸和谷氨酰胺的能力比另一种A类氨基酸转运蛋白GlnT低     

重组痘苗病毒为载体表达脊髓灰质炎病毒（Ⅰ型）及甲型肝炎病毒双价抗原

本文报道含有脊髓灰质炎病毒Ⅰ型中和抗原位点及甲型肝炎病毒中和抗原位点重组痘苗病毒的构建，用重组痘苗病毒感染１４３ＴＫ－细胞后成功地表达了脊髓灰质炎病毒Ⅰ型和甲型肝炎病毒的抗原。免疫荧光显示，两种抗原的荧光颗粒均分布在胞浆内。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实，重组痘苗病毒所表达的脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗原和甲型肝炎病毒抗原为一融合蛋白。用此重组痘苗病毒免疫动物，可诱导脊髓灰质炎病毒Ⅰ型和甲型肝炎病毒的中和抗体产生。     

重组人乳头瘤病毒16型E7抗原痘苗病毒的构建

目的 :研究人乳头瘤病毒 16型E7(HPV16E7)基因蛋白的生物学和免疫学活性。方法 :用聚合酶链反应(PCR)技术扩增并分离出HPV16E735 9bp的基因片段 ,经XhoⅠ和BglⅡ双酶切后 ,定向插入到表达质粒PJ12 0的晚期启动子P11下游。结果 :经PCR技术、双酶切分析证明HPV16E7基因已克隆到载体PJ12 0上。结论 :HPV16E7基因痘苗病毒重组体构建成功 ,为其在真核细胞的表达奠定了基础