杜仲补天素胶囊对雄性小鼠生育力的影响

目的:探讨杜仲补天素胶囊对雄性小鼠生育力的影响。方法:SPF级4周龄雄性昆明种小鼠(体重14～16 g)随机分为对照组,生精胶囊组[0.8 g/(kg·d)],杜仲补天素胶囊低[0.694 g/(kg·d)]、高剂量[1.388 g/(kg·d)]组,每组12只。雄鼠灌胃给药1周后将小鼠尾根部负重系重约2 g的铁片(体质量5%～10%)进行适应性游泳练习,给药2周后记录小鼠力竭游泳时间,力竭判断标准按照Dawson法。灌胃给药3周,给药2周后雌雄2∶1合笼1周,合笼期间雄鼠继续给药,合笼结束后雄鼠取材检测小鼠精子数量和活力,计算各组脏器系数,HE染色观察睾丸、附睾形态学变化,ELISA法检测各组小鼠血清E2、LH、FSH、T水平,免疫组化法检测各组小鼠睾丸雄激素受体(AR)表达情况,检测血清中谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT),肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平。合笼1周后处死雌鼠,统计受孕情况。结果:与对照组受孕率54%相比,杜仲补天素胶囊低剂量组(受孕率70%)、高剂量组(受孕率75%)均能提高雌鼠受孕率。与对照组小鼠负重游泳时间[(173±17) s]相比,杜仲补天素胶囊低剂量组能够显著增加小鼠负重游泳时间[(394±51) s,P<0.01],高剂量组[(266±42) s]虽也有提高,但无显著差异;与对照组精原细胞数量(25.7±5.3)、精母细胞数量(92.5±10.7)、成熟精子数量(481±56)相比,杜仲补天素胶囊低剂量组雄性小鼠原细胞数量(77.8±5)、精母细胞数量(132.4±8.9)、成熟精子数量(734±67)显著提高(P<0.01);杜仲补天素胶囊低、高剂量组均能显著性提高睾丸AR的表达水平(P<0.01);与对照组相比,杜仲补天素胶囊低、高剂量组血清T、FSH、LH、E2水平均无显著性差异(P>0.05),血清ALT水平无显著性差异(P>0.05);与对照组相比,杜仲补天素胶囊高剂量组AST水平显著性增加[(44.2±11) U/L vs(30.5±13.7) U/L,P<0.05],Cr、BUN水平有增加但无显著性差异(P>0.05)。结论:杜仲补天素胶囊对雄性小鼠具有一定的促生育作用,为杜仲补天素胶囊的临床应用提供实验基础。     

低剂量纳米氧化镍亚慢性染毒对雄性大鼠生殖功能及子代的影响

目的:研究低剂量纳米氧化镍亚慢性染毒对雄性大鼠生殖功能及雌性大鼠胚胎发育的影响。方法:将50只健康雄性SD大鼠(180～220 g)按体重采用随机数字表随机分为5组,每组10只,分别为生理盐水对照组(阴性对照组)、微米氧化镍组(4.0 mg/ml,阳性对照组)及纳米氧化镍低、中、高剂量组(浓度分别为0.16、0.8、4.0 mg/ml);以非暴露式气管滴注法染毒,1次/3d,60 d后与正常成年雌性大鼠按1∶2合笼。确定雌鼠怀孕后,处死雄鼠,称量雄性大鼠体重、睾丸、附睾,计算脏器系数;检测附睾精子浓度及活精子率,采用原子荧光谱法测定血液和精液镍含量;于妊娠第20天处死雌鼠,观察雌雄交配受孕情况、受精卵着床数、活胎数、死胎数及吸收胎数。结果:染毒60 d后,与阴性对照组和微米氧化镍阳性对照组相比,各剂量纳米氧化镍组大鼠体重,睾丸、附睾重量及其脏器系数均无显著差异。与阴性对照组相比,中、高剂量纳米氧化镍组大鼠精子浓度[(7.49±1.46)、(6.30±1.36)×10~6/ml vs(9.36±0.98)×10~6/ml,P0.05]和活精子率[(68.26±16.63)%、(65.88±14.68)%vs(85.35±9.16)%,P0.05]显著下降,畸形精子率显著升高[(13.99±4.87)%、(15.38±8.86)%vs(8.30±2.47)%,P0.05];与阴性对照组相比,中、高剂量纳米氧化镍组孕鼠的吸收、死胎率显著增高(6.89%、7.37%vs 1.18%,P0.05);与阴性对照组相比,中、高剂量纳米氧化镍组大鼠血液镍[(0.52±0.34)、(0.82±0.44) mg/L vs(0.13±0.16) mg/L,P0.05]和精液镍[(0.35±0.23)、(0.63±0.61) mg/L vs(0.08±0.13) mg/L,P0.05]显著升高;相关性分析结果显示,血液镍和精液镍含量显著相关(r=0.912,P0.01),精液镍含量与活精子率呈负相关(r=-0.879,P0.01),而与畸形精子率呈正相关(r=0.898,P0.01)。结论:0.16 mg/ml纳米氧化镍染毒对大鼠生殖功能未见明显的毒性作用,0.8、4.0 mg/L纳米氧化镍染毒60 d可对雄性大鼠产生生殖毒性,并对胚胎有一定的致畸作用。     

还少胶囊对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠生殖功能损伤的保护机制研究

目的:探讨还少胶囊对奥硝唑(ORN)诱导的弱精子症模型大鼠生殖功能损伤可能的保护机制。方法:将SD雄性大鼠随机分为4组,每组10只,分别是空白对照组、模型组、还少胶囊组和左卡尼汀组,除空白对照组外,其余3组采用ORN 400 mg/(kg·d)灌胃大鼠28 d,制成弱精子症大鼠模型。并同时连续给药28 d后,处死大鼠,检测大鼠附睾中左卡尼汀的含量,精子浓度、活率,附睾组织中有机阳离子转运子2(OCTN2)mRNA的表达,并观察大鼠睾丸组织病理结构。结果:还少胶囊组、阳性对照药左卡尼汀组与模型组相比,附睾左卡尼汀的含量均可明显提高(6 366.5、6 934.7 mg/L vs 2 880.3 mg/L,P<0.01);改善精子浓度[(46.19±14.23)、(42.25±6.11)×10~6/ml vs(34.58±10.25)×10~6/ml,P<0.01]、活率[(61.34±7.98)%、(61.34±7.98)%vs(42.59±7.54)%,P<0.01];上调附睾OCTN2 mRNA的表达量(27.26、27.15 vs 26.07,P<0.01);同时还少胶囊组能保护ORN造模导致的睾丸生精细胞的病理损伤,使生精细胞在生精小管形态、排列方式、生精细胞的活跃程度上与空白对照组更加接近。结论:还少胶囊对ORN诱导的弱精子症大鼠模型生殖功能损伤具有保护作用,能提高模型大鼠的精子浓度与活率,其机制可能与上调附睾OCTN2 mRNA的表达量、提高附睾左卡尼汀的含量有关。     

通精灵对实验性精索静脉曲张大鼠精子DNA完整性与睾丸组织氧化应激的影响

目的:探讨通精灵对实验性精索精索静脉曲张大鼠精子DNA完整性与睾丸组织氧化应激的影响。方法:雄性Wistar大鼠75只随机分为假手术组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组15只。参照文献制备大鼠精索静脉曲张模型,"夹尾激怒法"建立合并中医肝气郁结证模型。造模完成后4周开始给药,持续8周。观察大鼠的一般情况,精子染色质结构分析法(SCSA)检测附睾精子DFI。化学比色法测睾丸过氧化氢(H_2O_2)含量、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与假手术组相比较,模型组大鼠附睾精子DFI[(8.36±2.49)%]显著升高(P0.01),睾丸组织H_2O_2含量[(431.22±97.01)mmol/g prot]显著升高(P0.01),CAT[(10.53±2.69)U/ml]、SOD[(87.30±25.33)U/ml]活性显著升高(P0.01)。与模型组相比较,通精灵各组附睾精子DFI显著降低,睾丸组织H_2O_2的含量显著降低。结论:精索静脉曲张模型大鼠附睾精子DNA完整性降低,睾丸组织呈氧化应激状态,精子DNA完整性与氧化应激有相关性,通精灵可能通过增加CAT、SOD活性,降低H_2O_2含量减轻了睾丸组织氧化应激状态,从而提高精子DNA完整性。     

巴戟天根两种提取物对微波损伤大鼠生精功能的影响

目的:探讨巴戟天根不同浓度提取物对微波损伤的雄性SD大鼠生精功能的影响。方法:40只健康雄性SD大鼠先分为正常对照组和辐射组,辐射后再将辐射组分为辐射模型组,巴戟天根水提物治疗组和巴戟天根醇提物治疗组,每组10只。辐射组应用微波信号发生器(900 HZ 1.0 W),功率密度为218μm/cm2,12 h/d,持续辐射2周。治疗组在辐射后分别给予巴戟天根水提物和巴戟天根醇提物20 g/(kg.d)持续灌胃2周。观察各组大鼠生长发育,扑捉潜伏期(CIP)和扑捉次数(CT),睾丸和附睾指数及精子形态学的差异,精子浓度、精子畸形率以及血清睾酮的浓度。结果:与正常对照组[(269.50±36.07)g]相比,辐射模型组[(254.77±20.38)g]大鼠体重稍降低,CIP延长及CT减少(P<0.05),精子浓度[(87.717±12.365)×106/ml]降低及精子畸形率[(0.126±0.100)×106/ml]明显升高(P<0.05);睾丸和附睾出现不同程度的病理损伤改变,睾丸指数降低,血清睾酮水平无明显变化。两治疗组较正常对照组体重显著下降(P<0.05),血清睾酮的水平显著升高,且与辐射模型组相比CT增加、CIP缩短、精子浓度显著升高、畸形率显著下降、血清睾酮的水平升高(P<0.05)。治疗组睾丸的病理性损伤显著修复,附睾管内除见大量精子外,还可见大量脱落的细胞。结论:巴戟天根的水提取物和醇提取物均可促进微波辐射损伤的生殖器官的修复以及精子的生成。     

加味大黄蟅虫颗粒对精索静脉曲张模型大鼠附睾结构改变的干预作用

目的:探讨实验性精索静脉曲张大鼠附睾管精子发育成熟的改变及加味大黄蟅虫颗粒对附睾精子成熟的影响。方法:60只SD雄性大鼠随机分为模型组、假手术组、迈之灵组及加味大黄蟅虫颗粒低、中、高剂量组,每组10只。除假手术组外,各组按Turner方法制作左侧精索静脉曲张大鼠模型。造模完成后,假手术组及模型组大鼠均给予生理盐水;迈之灵组给予迈之灵片54 mg/kg体重药量溶于生理盐水中;加味大黄蟅虫颗粒低、中、高剂量组分别予以含生药0.6、1.2、2.4 g/ml加味大黄蟅虫颗粒水冲剂。各组皆按1 ml/100 g体重灌胃,每日1次,连续8周。给药8周后全部处死各组实验大鼠,取出左侧附睾,检测附睾精子质量及局部显微超微结构的改变,并行组间对比。结果:模型组大鼠附睾管局部上皮细胞退化变性,部分主细胞及基细胞空泡变性,管腔内见各级未成熟精子细胞。与模型组[(12.77±6.25)%]比较,加味大黄蟅虫颗粒中[(32.23±6.55)%]、高[(39.39±8.53)%]剂量组和迈之灵组[(31.10±7.77)%]大鼠附睾精子活率升高(P0.01)。与迈之灵组比较,加味大黄蟅虫颗粒高剂量组附睾精子活率[(31.10±7.77)%vs(39.39±8.53)%]及浓度[(10.69±4.92)×10~6/ml vs(36.37±7.09)×10~6/ml]明显增高(P0.05)。结论:实验性精索静脉曲张大鼠附睾管局部细胞凋亡明显、间质水肿、微血管扩张,加味大黄蟅虫颗粒能提高附睾培育精子成熟的稳定性,为精子的发生发育创造有利的条件。     

金匮肾气丸对环磷酰胺所致睾丸损伤小鼠睾丸组织Nrf2信号通路基因表达的影响

目的:探究金匮肾气丸对环磷酰胺致小鼠睾丸损伤保护作用及其抗氧化机制。方法:将30只雄性小鼠均分为空白组、模型组和金匮肾气丸治疗组。治疗组小鼠给予1.2 g/kg体重剂量的金匮肾气丸进行灌胃,空白组和模型组小鼠给予相同体积的生理盐水灌胃,每天1次;在治疗的第7天,模型组和治疗组小鼠给予50 mg/kg体重剂量环磷酰胺进行腹腔注射,每周1次,连续用药35 d。实验结束后对所有小鼠称重(体重和睾丸重量)并采集血液进行睾酮含量检测,取附睾头用于精子质量检测,取睾丸进行组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),病理组织学及核因子E2相关因子2 (Nrf2)信号通路相关基因PCR检测。结果:实验结束时,模型组小鼠体重[(34.63±1.92) g vs(48.32±1.64) g]、睾丸质量[(80.0±3.9) mg vs(140.0±6.1) mg]、睾丸脏器系数[(0.22±0.01)%vs(0.31±0.03)%]、精子活率[(48.66±8.08)%vs(89.33±4.04)%]、精子浓度[(28.42±5.26)×10~6/ml vs(77.67±8.73)×10~6/ml]、SOD [(140.82±10.08) U/mg prot vs(358.52±40.41) U/mg prot]和血清睾酮[(8.75±0.96) pg/ml vs(21.75±1.71) pg/ml]水平较空白组显著降低(P<0.05),畸形精子百分率[(37.33±2.08)vs(15.33±1.53)%]和MDA[(54.89±6.09) nmol/ng prot vs(30.21±2.17) nmol/ng prot]水平显著升高(P<0.05);金匮肾气丸治疗组小鼠体重[(39.80±2.89) g vs(34.63±1.92) g]、睾丸质量[(130.00±11.00) mg vs(80.00±3.90) mg]、睾丸脏器系数[(0.28±0.01)%vs(0.22±0.01)%]、精子活率[(76.00±5.29)%vs(48.66±8.08)%]、精子浓度[(56.08±4.29)×10~6/ml vs(28.42±5.26)×10~6/ml]、SOD[(206.59±16.38) U/mg prot vs(140.82±10.08) U/mg prot]和血清睾酮[(15.50±1.29) pg/ml vs(8.75±0.96) pg/ml]水平较模型组显著升高(P<0.05),畸形精子百分率[(25.01±2.99)%vs(37.33±2.08)%]和MDA[(35.84±3.61) nmol/ng prot vs(54.89±6.09) nmol/ng prot]水平显著降低(P<0.05)。模型组依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶1(NOQ-1)、Nrf2、血红素氧合酶1(HO-1)mRNA的表达水平较空白组显著降低(P<0.05),半胱天冬酶3(Caspase 3)mRNA表达水平显著升高(P<0.05);金匮肾气丸治疗组小鼠Nrf2和HO-1 mRNA的表达水平较模型组显著升高(P<0.05),Caspase 3 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。病理组织学结果发现,模型组小鼠生精小管管腔内各级生精细胞层数减少,部分生精小管细胞完全脱落,精子数量减少;治疗组小鼠生精小管恢复趋于正常。结论:金匮肾气丸可有效抑制环磷酰胺造成的睾丸损伤,其机制可能与金匮肾气丸能调控Nrf2信号通路基因表达,增强抗氧化酶的活性有关。     

肥胖对雄性大鼠生殖功能影响的机制研究

目的研究肥胖对雄性大鼠生殖功能的影响,初步探讨其氧化损伤的相关机制。方法 6周龄SD雄性大鼠随机分成对照组(普通饮食,15只)和肥胖组(高脂饮食,30只)。喂养16周后,处死,测定体重、脏器系数、代谢参数和生殖内分泌激素(GnRH、FSH、LH、TT、E_2)和SHBG,检测睾丸生精细胞凋亡、氧化应激和附睾精子参数,比较两组各指标差异。结果与对照组大鼠相比,肥胖组大鼠体重和Lee指数明显增加,血清瘦素(Lep)[(3.17±0.23)ng/ml vs.(2.33±0.21)ng/ml]、胰岛素(INS)[(28.99±2.43)μU/ml vs.(20.62±1.72)μU/ml]和甘油三酯(TG)[(0.55±0.03)mmol/L vs.(0.36±0.04)mmol/L]显著升高,血清GnRH[(36.46±1.95)pg/ml vs.(45.51±2.75)pg/ml]、LH[(3.06±0.37)U/L vs.(4.67±0.70)U/L]、总睾酮(TT)[(0.81±0.13)ng/ml vs.(1.98±0.32)ng/ml]、SHBG[(55.31±3.80)nmol/L vs.(71.69±4.65)nmol/L]显著降低,差异均有统计学意义(P0.05);TUNEL结果显示,肥胖组大鼠睾丸生精细胞凋亡指数显著高于对照组[(4.26±0.35)%vs.(3.09±0.28)%,P0.05];氧化应激结果表明,肥胖组大鼠的MDA上升、SOD降低,差异有统计学意义(P0.05);附睾精子分析发现,与对照组相比,肥胖组大鼠的精子活力显著下降[(14.36±7.67)%vs.(36.40±9.17)%,P0.01],而精子浓度无显著性差异(P0.05)。结论高脂饮食诱导雄性大鼠的肥胖,代谢和生殖内分泌紊乱,氧化损伤增加,导致生精细胞凋亡增加,并最终使精子活力下降。     

“生精散”对大鼠睾丸扭转复位后生精功能的影响及其机制研究

目的:研究"生精散"对大鼠睾丸扭转复位后生精功能的影响及其机制。方法:40只雄性SD大鼠随机分为假手术组(A组),对照组(B组),生精散组小(C组)、中(D组)、大剂量组(E组),每组8只。建立左侧睾丸扭转模型,B组自扭转前1 h开始给予每日灌胃生理盐水1 ml/d,C组(0.01 g/kg.d)、D组(0.02 g/kg.d)、E组(0.03 g/kg.d)分别按体重给予灌服生精散,连续35 d后处死大鼠,对大鼠进行精液常规分析,用RT-PCR检测大鼠精子CatSper1的表达。结果:a+b级精子百分率、精子存活率、精子浓度,CatSper1基因表达,与A组[(51.30±6.60)%、(69.01±7.20)%、(40.53±7.01)×106/ml、2.04±0.77]相比,B组[(15.30±6.30)%、(44.42±6.36)%、(21.00±6.14)×106/ml、1.12±0.50),均显著降低(P<0.01);与B组相比,D组[(51.63±3.20)%、(72.09±2.20)%、(55.30±5.90)×106/ml、2.11±0.20]、E组[(55.93±3.17)%、(73.01±2.11)%、(58.33±4.90)×106/ml、2.31±0.17]均显著升高(P<0.01),而C组[(18.02±0.23)%、(48.04±7.01)%、(22.87±2.10)106/ml、1.19±0.51]升高不明显(P>0.05)。结论:生精散可以促进睾丸扭转复位后精子质量的恢复,其机制可能与调节生精功能,提高精子细胞CatSper1基因的表达有关。     

硫辛酸对奥硝唑所致少弱精子症大鼠精子发生的保护作用研究

目的:研究硫辛酸(LA)对奥硝唑(ORN)所致少弱精子症模型雄性大鼠生精功能的保护作用。方法:取70只雄性SD大鼠,随机分成7组,每组10只,分别为:A组(溶剂对照组):1 ml 0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)+1 ml橄榄油;B组(低剂量ORN造模组):400 mg/kg ORN+1 ml橄榄油;C组(低剂量ORN+低剂量LA治疗组):400 mg/kg ORN+50 mg/kg LA;D组(低剂量ORN+高剂量LA治疗组):400 mg/kg ORN+100 mg/kg LA;E组(高剂量ORN造模组):800 mg/kg ORN+1 ml橄榄油;F组(高剂量ORN+低剂量LA治疗组):800 mg/kg ORN+50 mg/kg LA;G组(高剂量ORN+高剂量LA治疗组):800 mg/kg ORN+100 mg/kg LA。连续给药20 d,处死大鼠,称量大鼠体重、睾丸、附睾、精囊重量,计算脏器指数,检测附睾精子计数及活力,睾丸、附睾做HE染色观察组织形态学改变。结果:与A组相比,E组大鼠体重增量、睾丸、附睾脏器指数明显减少[(117.67±11.53)g vs(88.11±12.65)g;(1.06±0.12)%vs(0.65±0.13)%;(0.21±0.03)%vs(0.17±0.01)%,P均0.01];与E组相比,F组大鼠附睾脏器指数明显增加[(0.17±0.01)%vs(0.20±0.02)%,P0.01],G组大鼠体重增量、睾丸、附睾脏器指数明显增加[(88.11±12.65)g vs(102.70±16.10)g,P0.05;(0.65±0.13)%vs(0.95±0.06)%,P0.01;(0.17±0.01)%vs(0.19±0.02)%,P0.05],精囊脏器指数各组之间并无明显差异。与A组相比,B组大鼠精子活力明显降低[(74.12±8.73)%vs(40.25±6.08)%,P0.01],E组大鼠精子计数与活力明显降低[(38.59±6.40)×105/100 mg vs(18.67±4.59)×105/100 mg;(74.12±8.73)%vs(27.58±8.43)%,P均0.01];与B组相比,C、D组大鼠精子活力明显增加[(40.25±6.08)%vs(58.13±7.62)%;(40.25±6.08)%vs(76.04±8.44)%,P均0.01];与E组相比,F、G组大鼠精子计数及活力明显增加[(18.67±4.59)×10~5/100 mg vs(25.63±9.66)×10~5/100 mg,P0.05;(18.67±4.59)×10~5/100 mg vs(29.92±4.15)×10~5/100 mg,P0.01;(27.58±8.43)%vs(36.56±11.08)%,P0.05;(27.58±8.43)%vs(45.05±9.59)%,P0.01]。A、B、C、D组大鼠睾丸、附睾组织形态学无明显改变。E组大鼠睾丸与A组相比,生精小管腔内可见坏死脱落的生精细胞,生精细胞层次不清,排列紊乱;附睾管腔中精子数目明显减少,并伴有较多非细胞成分存在。F、G组大鼠睾丸生精小管内精子数目增加,但仍可见到生精小管内有生精细胞脱落,生精细胞层次不清晰,排列紊乱,但较E组有明显改善;F、G组大鼠附睾管腔中精子数目明显减少,可见散在、脱落的生精细胞,但较E组有明显改善。结论:LA能够改善ORN对大鼠造成的生殖系统损伤,提高精子质量,对生殖系统有较好的保护作用。