去甲斑蝥素抑制基质金属蛋白酶-9蛋白表达对前列腺癌PC-3细胞迁移及侵袭力的影响

目的:研究去甲斑蝥素抑制基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达对前列腺癌PC-3细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:将去甲斑蝥素作用于前列腺癌PC-3细胞后,Western-blot和实时荧光定量PCR检测MMP-9表达水平的变化,划痕实验和侵袭实验检测PC-3细胞侵袭力的变化,透射电镜观察PC-3细胞的伪足形态变化。结果:去甲斑蝥素干预组PC-3细胞中MMP-9的mRNA表达量显著低于空白对照组(P<0.05),同时,去甲斑蝥素干预组PC-3细胞中MMP-9的蛋白表达量显著低于空白对照组(P<0.05);迁移与侵袭实验结果显示,去甲斑蝥素干预组PC-3细胞划痕愈合程度较空白对照组显著降低(P<0.05);去甲斑蝥素干预组PC-3细胞侵袭能力显著低于空白对照组(P<0.05),透射电镜观察发现去甲斑蝥素干预组PC-3细胞的伪足较空白对照组明显减少。结论:去甲斑蝥素作用于前列腺癌PC-3细胞后,PC-3细胞的侵袭能力下降,可能与MMP-9蛋白表达水平下降使PC-3细胞的侵袭伪足减少有关。     

lncRNA NPIPA9靶向miR-210-3p对前列腺癌细胞生长和迁移的影响

目的:分析lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中的相对表达量，通过过表达lncRNA NPIPA9检测miR-210-3p的相对表达量及对前列腺癌细胞生长和迁移的影响。方法:通过Oncomine数据库分析lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中的相对表达量。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA NPIPA9在前列腺癌细胞株DU-145、PC-3、C4-2B、22Rv1、LNCaP和正常前列腺上皮细胞RWPE-1中的相对表达量。体外培养前列腺癌PC-3细胞，分为两组：NPIPA9组和对照组，NPIPA9组转染100 nmol/L lncRNA NPIPA9载体，对照组转染100 nmol/L对照载体。CCK-8法检测PC-3细胞的增殖活力。Transwell实验检测PC-3细胞的迁移能力。生物信息学技术预测lncRNA NPIPA9的潜在靶点。双荧光素酶报告基因实验确定lncRNA NPIPA9和miR-210-3p的靶向结合关系。RT-qPCR检测lncRNA NPIPA9对前列腺癌细胞中miR-210-3p相对表达量的影响。Western blotting法检测lncRNA NPIPA9对前列腺癌细胞中核因子κB(NF-κB)通路蛋白表达量的影响。计量资料以均数±标准差( ± s)表示，两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:前列腺癌组织中lncRNA NPIPA9相对表达量低于癌旁组织，差异具有统计学意义( P<0.01)。前列腺癌细胞株中lncRNA NPIPA9相对表达量均低于RWPE-1细胞，差异具有统计学意义( P<0.01);前列腺癌PC-3细胞中lncRNA NPIPA9相对表达量最低，差异具有统计学意义( P<0.01)。与对照组相比，lncRNA NPIPA9对前列腺癌PC-3细胞活力具有抑制作用，差异具有统计学意义( P<0.05)。对照组和NPIPA9组PC-3细胞迁移数目分别为(101.70 ± 8.63)、(45.97 ± 8.83)个，lncRNA NPIPA9对PC-3细胞迁移具有抑制作用，差异具有统计学意义( P<0.01)。lncRNA NPIPA9可以直接靶向结合miR-210-3p，差异具有统计学意义( P<0.01)。对照组和NPIPA9组PC-3细胞中miR-210-3p相对表达量分别为5.32±0.79和1.11±0.56，lncRNA NPIPA9可直接下调PC-3细胞中miR-210-3p表达，差异具有统计学意义( P<0.01)。与对照组相比，lncRNA NPIPA9能够降低PC-3细胞中NF-κB通路蛋白c-Myc、MMP-9、VEGF、p65、p50表达。 结论:lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中表达下调，其通过靶向并负调控miR-210-3p，降低前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移能力。     

长链非编码RNA Linc00662促进前列腺癌细胞生长的研究

目的:探讨Linc00662在前列腺癌的表达情况及对前列腺癌细胞生物学功能的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对60例前列腺癌患者的前列腺癌组织标本以及正常前列腺上皮细胞(WPMY-1细胞)和前列腺癌细胞系(DU145、PC-3、LNCaP和22RV1)检测Linc00662的表达,并分析前列腺癌组织中Linc00662表达与患者临床病理特征的相关性。应用RNA干扰(siRNA)转染PC-3和DU145细胞,qRT-PCR验证干扰效率。通过CCK-8、Caspase 3/9活性测定、划痕试验、Transwell侵袭试验分别检测干扰Linc00662的表达对前列腺癌PC-3和DU145细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果:与邻近及正常组织前列腺上皮细胞相比,Linc00662在前列腺癌组织和细胞系的表达呈显著上调(P0.01)。Linc00662的高表达与肿瘤分期(P=0.002)、原发灶大小(P=0.006)、淋巴结转移(P=0.001)及远处转移(P=0.001)呈正相关。si-Linc00662转染PC-3和DU145细胞后,Linc00662的表达明显下降(P0.01)。与对照组相比, Linc00662干扰组在PC-3和DU145细胞中的增殖、侵袭及迁移能力均明显下降(P0.01),而凋亡增加(P0.01)。结论:Linc00662在前列腺癌组织及细胞中呈相对高表达,敲低Linc00662的表达可抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进其凋亡,可作为前列腺癌新的标志物。     

不同前列腺癌细胞株Talin-1表达情况和侵袭能力关系研究

目的探讨踝蛋白1(Talin-1)在不同前列腺癌细胞株中的表达情况和侵袭能力的关系。方法体外培养不同人前列腺癌细胞株(DU-145、PC-3、LNCaP)及人正常前列腺上皮细胞株(RWPE-1)。传代培养后利用MTT法检测各细胞株增殖能力。细胞划痕实验,Transwell小室侵袭和迁移实验检测各细胞株侵袭及迁移能力。RT-PCR技术检测各细胞株中Talin-1的mRNA表达水平。Western-blot技术检测各细胞株中Talin-1的蛋白表达水平。结果与RWPE-1细胞株相比,LNCaP细胞株、PC-3细胞株、DU145细胞株的增殖、侵袭和迁移能力明显增高(P0.05),其中LNCaP、PC-3、DU-145细胞株的增殖、迁移以及侵袭能力依次递增(P0.05)。前列腺癌LNCaP细胞株、PC-3细胞株、DU145细胞株中的Talin-1 mRNA及蛋白表达水平显著高于RWPE-1细胞株(P0.05);其中LNCaP、PC-3、DU-145细胞株中的Talin-1 mRNA以及蛋白表达水平依次递增(P0.05)。结论Talin-1与前列腺癌的增殖、侵袭和迁移能力相关;低表达Talin-1的前列腺癌的增殖、侵袭和迁移能力低,恶性度低;高表达Talin-1的前列腺癌的增殖、侵袭和迁移能力强,恶性度高。Talin-1可作为前列腺癌恶性度的预测指标之一。     

MiR-29a通过调节HuR影响前列腺癌细胞的生物学行为

目的 研究前列腺癌中miR-29a 对HuR表达的调节，进而影响细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡。方法 通过实时荧光定量（qRT-PCR）和免疫印迹法（Western blot）检测在正常前列腺上皮细胞RWPE-1和激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3内miR-29a、人抗原R(HuR) mRNA和蛋白的表达水平；miR-29a mimics(模拟剂)、inhibitor（抑制剂）和NC miRNA(对照剂)转染PC-3细胞48 h后检测miR-29a、HuR mRNA和蛋白的表达水平。细胞增殖试剂盒(CCK-8)、迁移和侵袭实验（Transwell小室）、流式细胞术分别检测PC-3细胞被转染后细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的改变。结果 与RWPE-1细胞相比，PC-3细胞中miR-29a的表达下调，HuR mRNA和蛋白的上升（P<0.05）。与对照组相比，miR-29a mimics(模拟剂)、inhibitor（抑制剂）转染PC 3细胞后HuR mRNA无改变，但是能够改变HuR蛋白的表达（P<0.05）。MiR-29a能够抑制细胞增殖、迁移、侵袭，促进细胞凋亡（P<0.05）。结论 在前列腺癌PC-3细胞中，miR-29a通过调节HuR蛋白的表达，进而对细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡产生影响。     

IFITM3在原发性肝癌中的表达及其对MMP-9调控效应

目的:探讨干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)在原发性肝癌中的表达及作用。方法:用免疫组化与Western blot检测60例肝癌组织及对应癌旁组织中IFITM3以及基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白的表达;构建IFITM3小干扰RNA片段(psilencer3.1-sh IFITM3)转染肝癌Hep G2细胞,用实时荧光定量PCR及Western blot法、CCK8法、Transwell试验和划痕试验分别检测细胞转染后IFITM3和MMP-9 m RNA及蛋白表达、增殖能力以及侵袭与迁移能力的变化。结果:与癌旁组织比较,肝癌组织中IFITM3与MMP-9的蛋白的阳性表达率与表达量均明显升高(81.67%vs.13.33%;88.33%vs.8.33%,均P0.05);psilencer3.1-sh IFITM3转染后,Hep G2细胞IFITM3和MMP-9的m RNA与蛋白表达水平、细胞增值率均明显降低,穿膜细胞数明显减少,划痕融合速率明显减慢。以上定量指标间的差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:原发性肝癌中IFITM3表达增高,高表达的IFITM3可能通过调控MMP-9的表达而促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

靶向沉默维生素D受体基因对前列腺癌细胞迁移及侵袭性的影响

目的:探讨小干扰RNA靶向沉默维生素D受体(VDR)对前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响。方法:构建VDR-shRNA慢病毒载体,用RT-PCR和Western印迹法分别检测VDR的mRNA和蛋白表达水平;通过细胞划痕愈合实验和Transwell小室检测VDR被沉默后的PC-3细胞迁移能力和侵袭性的变化。结果:VDR-shRNA质粒显著干扰VDR表达,并成功筛选VDR-shRNA干扰稳定的细胞株;细胞划痕实验结果显示划痕愈合率VDR干扰组为59%明显低于空白对照组73.6%和LV3阴性对照组的77.8%,组间差异有显著性(P0.05),空白对照组和LV3阴性对照组组间差异无显著性(P0.05)。Transwell小室实验显示VDR干扰组透膜细胞数量明显低于空白对照组和LV3阴性对照组约为50%,细胞组间差异有显著性(P0.05),空白对照组和LV3阴性对照组组间差异无显著性(P0.05)。VDR干扰组细胞的迁移和侵袭能力明显低于对照组细胞。结论:VDR基因表达水平能影响前列腺癌细胞的迁移及侵袭能力,VDR低表达可致前列腺癌细胞迁移及侵袭能力下降。     

叶黄素抑制人前列腺癌PC-3M细胞黏附和转移

目的:探究叶黄素(lutein)对人前列腺癌PC-3M细胞黏附和转移的作用及机制。方法:实验分为对照组和叶黄素低、中、高剂量组。细胞黏附实验观察细胞与基质黏附能力;鬼笔环肽染色法观察细胞伪足的变化;Western印迹法检测桩蛋白(Paxillin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、 E-钙粘蛋白(E-cadherin)、 N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平;划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力;高内涵成像技术观察细胞动态运动情况。结果:与对照组比较,叶黄素组细胞与基质的细胞黏附数量明显减少,细胞伪足也明显减少,同时,与对照组比较,Paxillin、 MMP-2和MMP-9的蛋白水平下降,TIMP-1蛋白水平增加;与对照组比较,叶黄素组细胞迁移率降低,侵袭迁移细胞明显减少;动态检测结果发现,与对照组比较,叶黄素组细胞的位移和运动距离缩短;上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin的蛋白水平上升,N-cadherin和Vimentin的蛋白水平降...     

蒲公英甾醇调控膀胱癌T24 细胞迁移与侵袭能力的作用及机制研究

目的:探索蒲公英甾醇对膀胱癌T24细胞迁移与侵袭能力的作用及机制。方法:体外培养膀胱癌T24细胞,在其中加入不同浓度(10、20、40μg/mL)蒲公英甾醇进行干预。采用划痕实验和Transwell小室法分别观察膀胱癌细胞迁移能力及侵袭能力;Western blotting实验考察细胞中SDF-1/CXCR4信号通路相关蛋白的变化;ELISA试剂盒检测细胞上清中基质金属蛋白酶(MMP)-2/9的水平。结果:蒲公英甾醇可抑制膀胱癌T24细胞的迁移与侵袭能力(P<0.05,P<0.01),降低细胞分泌MMP-2及MMP-9的能力(均P<0.05,P<0.01)。同时蒲公英甾醇能有效抑制膀胱癌T24细胞内基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、CXCR4、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:蒲公英甾醇通过干扰SDF-1/CXCR4信号通过,下调Akt/mTOR的传导,削弱了细胞分泌MMP-2及MMP-9的能力,从而有效抑制膀胱癌T24细胞的迁移与侵袭。     

槲皮素通过G3BP1调控Wnt/β-catenin信号通路对前列腺癌细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化的影响

目的探讨槲皮素对前列腺癌(PCa)细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(EMT)的影响,并分析其可能机制。方法人前列腺癌细胞(PC-3)随机分为空白对照组及槲皮素低、中、高浓度组,转染GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1(G3BP1)siRNA及其阴性对照、pcDNA3.1-G3BP1及其阴性对照至PC-3细胞,并用槲皮素处理。分别采用细胞划痕试验和Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭能力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测G3BP1 mRNA表达,Western blot法检测G3BP1蛋白、EMT相关蛋白及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路蛋白表达。结果槲皮素抑制PC-3细胞迁移、侵袭,上调E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达,下调N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、转录因子Snail表达;槲皮素下调PC-3细胞G3BP1 mRNA和蛋白表达,下调Wnt家族成员3A(Wnt-3α)、β-catenin、磷酸化糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)表达,上调GSK-3β表达;沉默G3BP1增强槲皮素对PC-3细胞及Wnt/β-catenin通路的作用,过表达G3BP1逆转槲皮素对PC-3细胞及Wnt/β-catenin通路的作用。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论槲皮素可通过抑制EMT抑制PCa细胞的迁移、侵袭能力,其作用机制可能与其靶向G3BP1抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

Akt特异性抑制剂鱼藤素对前列腺癌PC-3细胞生长的影响

目的:观察Akt抑制剂鱼藤素对前列腺癌PC-3细胞株的抑制作用并探讨其可能的作用机制。方法:用MTT法检测鱼藤素对PC-3细胞的增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测鱼藤素对细胞周期的影响;RT-PCR检测细胞中小鼠双微体2(MDM2)、糖元合成酶激酶3β(GSK3β)mRNA表达的变化;Western印迹法检测MDM2、GSK3β蛋白表达的变化。结果:MTT法显示,10、100、500、1 000 nmol/L的鱼藤素作用于前列腺癌PC-3细胞24、48、72 h后,对前列腺癌PC-3细胞增殖抑制率分别为(91.10±3.75)%、(86.39±1.16)%、(79.51±2.63)%;(82.46±3.65)%、(76.84±0.97)%、(69.69±2.30)%;(81.46±0.41)%、(75.56±1.12)%、(54.07±3.21)%;(66.77±2.82)%、(58.22±0.35)%、(39.34±2.40)%,均能显著抑制其增殖(P均<0.01);FCM检测显示各浓度的鱼藤素使前列腺癌PC-3细胞周期阻滞在G0/G1期比例增加[(53.4±2.3)%、(62.4±2.2)%、(63.6±1.1)%、(65.0±0.3)%、(66.5±1.9)%,P均<0.01],S期细胞比例减少[(26.9±1.7)%、(14.7±2.4)%、(11.1±5.2)%、(5.8±1.1)%、(7.0±0.6)%,P均<0.01];RT-PCR和Western印迹法结果显示鱼藤素上调了GSK3βmRNA和蛋白的表达水平,而下调了MDM2 mRNA和蛋白的表达水平。结论:Akt抑制剂鱼藤素能抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖,其机制可能与影响Akt信号通路下游分子GSK3β、MDM2的表达相关。     

FOXN2在前列腺癌组织的表达及对前列腺癌细胞生物学的影响

探讨双头框蛋白N2（FOXN2）在前列腺癌（PCa）组织中的表达以及对PCa细胞生物学的影响。方法 选取宜宾市第二人民医院50例接受手术治疗的PCa患者的标本及癌旁组织,通过RT-qPCR实验和Western blot实验分别检测PCa组织和癌旁组织中的FOXN2 mRNA及蛋白的表达水平,并分析PCa组织中FOXN2与患者临床病理特征的相关性。通过RT-qPCR实验检测正常前列腺细胞RWPE-1、PCa细胞PC-3、DU145、LNCaP中FOXN2 mRNA的表达水平。选取PC-3细胞为研究对象,分为FOXN2过表达组、空载体对照组以及对照组,分别通过MTT实验、流式细胞实验、Transwell实验以及Western blot实验检测各组细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况以及相关蛋白Bax、CyclinD1、MMP-2的表达量。结果 与癌旁组织相比,FOXN2的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,与TCGA数据库中结果一致。FOXN2低表达与PCa患者淋巴转移、TNM分期以及Gleason评分有关（P=0.003、0.005、0.002）。与人正常前列腺细胞RWPE-1相比,FOXN2在PCa细胞PC-3、DU145、LNCaP中均呈现低表达（P<0.05）,其中PC-3细胞中表达量最低。与对照组和空载体对照组相比,FOXN2过表达组的PC-3细胞在作用24 、48 、72 h后增殖能力显著下降（F=290.400、57.735、113.014,P<0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著下降（P<0.05）;PC-3细胞的凋亡率显著升高（P<0.05）,Bax蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;PC-3细胞的迁移和侵袭能力显著下降（P<0.05）,MMP-2蛋白表达水平显著下降（P<0.05）。结论 FOXN2在PCa组织及细胞中低表达,过表达FOXN2可抑制PCa细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。     

癌相关成纤维细胞外泌体携带微小RNA-20a靶向CX43调控细胞缝隙连接促进PC-3细胞侵袭和迁移

目的探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)来源外泌体微小RNA(miR)-20a对前列腺癌细胞间通讯连接(GJIC)、侵袭和转移能力的影响及其机制。方法构建CAFs来源近红外荧光蛋白(IRFPs)标记外泌体,以不同浓度(0、10、100、200 mg/L)与PC-3细胞共培养。蛋白质印迹法检测PC-3细胞中CX43蛋白的相对表达水平;荧光漂白恢复技术测定PC-3细胞间缝隙连接功能;Transwell小室侵袭和迁移实验检测PC-3侵袭能力。构建高表达和低表达miR-20a的CAFs,分别与PC-3细胞共培养,检测缝隙链接蛋白43(Connexin 43,CX43)表达、细胞缝隙连接功能、细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证PC-3细胞中miR-20a与CX43基因是否直接结合。用Student’t检验分析组间差异。结果PC-3细胞的CX43表达水平及细胞缝隙连接功能均随外泌体浓度增加而降低(0.715±0.058、0.544±0.039、0.313±0.028和0.196±0.020,F=19.031,P<0.05),差异有统计学意义。Transwell小室检测结果表明,CAFs来源外泌体促进PC-3细胞迁移[各组每视野穿膜细胞数分别为(176.0±9.2)、(485.0±12.8)、(159.5±9.7)和(198.0±10.5)个,F=11.475,P<0.01]和侵袭[各组每视野穿膜细胞数分别为(150.0±8.4)、(443.0±21.7)、(182.0±11.2)和(153.5.0±10.1)个,F=16.306,P<0.01],差异有统计学意义;增强细胞缝隙连接能抑制此效应(F=14.052,P<0.01;F=14.804,P<0.01)。高表达miR-20a组的PC-3细胞的CX43表达水平(0.126±0.062比0.834±0.103,t=9.430,P<0.05)、荧光恢复率[(25.02±7.85)%比(46.65±6.98)%,t=5.782,P<0.05]均显著低于低表达miR-20a组,但细胞的迁移[(502.5±18.6)个比(128.5.0±9.4)个,t=9.120,P<0.05]和侵袭能力(458.0±16.8比194.5±9.2,t=6.286,P<0.05)均显著高于表达miR-20a组,差异均有统计学意义。双荧光素酶报告实验结果显示,野生型CX43的PC-3细胞中,转染miR-20a的细胞荧光活性显著低于miR-NC组(0.46±0.08比0.99±0.14,t=10.208,P<0.05),差异有统计学意义;而突变型CX43的PC-3细胞中,miR-20a组与miR-NC组细胞荧光活性差异无统计学意义(0.94±0.06比0.97±0.08,t=0.142,P>0.05)。结论CAFs来源外泌体miR-20a通过直接作用CX43基因,下调PC-3细胞CX43的表达,从而显著降低细胞间通讯连接功能,增强前列腺癌细胞的增殖、侵袭和转移能力。     

NDRG2基因对前列腺癌细胞株PC-3M侵袭转移能力的影响

目的 观察NDRG2基因对人前列腺癌细胞株PC-3M侵袭转移能力的影响.方法 以携带人NDRG2基因的腺病毒感染体外培养的PC-3M细胞株,采用Western blot及明胶酶谱实验检测NDRG2、MMP-2、MMP-9蛋白表达情况及相关酶活性的变化.平板克隆实验、细胞生长实验检测NDRG2对PC-3M增殖能力的影响.Transwell实验检测NDRG2对PC-3M细胞体外侵袭能力的影响.结果 Ad-NDRG2感染后,PC-3M细胞中NDRG2表达明显增加,而MMP-2和MMP-9表达水平及活性均降低.噻唑蓝(MTT)比色法(抑制率24 h为16.2%、48 h为24.4%、72 h为43.7%)及平板克隆实验(3组分别为56.3%、55.2%和36.7%)显示NDRG2对PC-3M细胞的生长有明显抑制作用.Transwell显示对照组及Ad-LacZ组穿入下室面的细胞数明显多于Ad-NDRG2组(3组分别为93.0、94.8和50.4).结论 NDRG2对人前列腺癌PC-3M细胞株侵袭能力有明显抑制作用,提示NDRG2可能在前列腺癌的侵袭及转移中发挥重要作用.

Abstract：

Objective To investigate the effect of NDRG2 gene expression on the cell migration and invasion of human prostate cancer cell line PC-3M.Methods Recombinant adenovirus vectors carrying human NDRG2 gene (Ad-NDRG2) were infected into prostate cancer cell line PC-3M.The protein expression and enzymatic activities of NDRG2,MMP-2 and MMP-9 were determined by Western blotting and gelatin zymography respectively.Methylthiazol tetrazolium (MTT) assay and plate colony formation were used to determine the effect of proliferation of PC-3M cells.Invasion of PC-3M cells was measured by Transwell chamber assay.Results After infection by Ad-NDRG2,it had been verified that the protein expression of NDRG2 in PC-3M cells was obviously increased,and the expression and enzymatic activities of MMP-2 and MMP-9 were reduced.The MTT assay (inhibition ratio: 24 h,16.2%,48 h,24.4%,and 72 h,43.7% respectively) and plate colony formation (56.3%,55.2% and 36.7% in control group,Ad-LacZ group and Ad-NDGR2 group respectively) revealed that NDRG2 could significantly inhibit the growth and proliferation of PC-3M cells.The number of PC-3M cells that invaded the lower chamber in the Ad-NDRG2 group was significantly decreased as compared with the control group and the Ad-LacZ group (93.0,94.8 and 50.4 respectively).Conclusion NDRG2 gene can significantly inhibit invasion of the PC-3M cells,which may paly an important role in metastasis of prostate cancer.     

白细胞介素6促胆囊癌细胞增殖、侵袭与JAK/STAT3信号通路的关系

目的:探讨炎症因子白细胞介素6(IL-6)对胆囊癌细胞生物学行为的影响及其与JAK/STAT3信号通路的关系.方法:将胆囊癌细胞株GBC-SD用IL-6或IL-6+AG490(JAK/STAT3通路抑制剂)作用后,分别用MTT法检测增殖情况;Transwell法检测侵袭能力;明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)活性;Western blot法检测磷酸化STAT3(p-STAT3)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达.结果:IL-6(10,50,100 ng/mL)作用后,GBC-SD细胞增殖呈浓度依赖性增加(均P＜0.05),AG490能取消IL-6对细胞增殖的促进作用.IL-6作用GBC-SD细胞后,细胞侵袭能力及MMP-9的分泌明显增加(均P＜0.05),细胞p-STAT3和VEGF的表达明显上调,加入AG490后,以上作用均被取消.结论:IL-6能促进胆囊癌细胞的增殖通和侵袭,其作用可能与其活化JAK/STAT3信号通路,从而上调下游的MMP-9和VEGF的表达有关.     

GPR75受体介导20-HETE信号通路对雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

探讨G蛋白偶联受体75（GPR75）受体介导20-羟二十烷四烯酸（20-HETE）信号通路对雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法 体外培养PC-3雄激素非依赖性前列腺癌细胞系,未经干预为对照组,细胞转染敲减GPR75受体为shGPR75组,20-HETE干预为20-HETE组,细胞转染敲减GPR75联合20-HETE干预为shGPR75+20-HETE组。采用Western blot检测各组GPR75表达情况,采用四唑盐比色法（MTT）观察PC-3细胞增殖情况,采用Transwell检测PC-3细胞侵袭能力,采用划痕实验检测PC-3细胞迁移能力。结果 对照组GPR75蛋白表达量为（1.04±0.13）,shGPR75组为（0.42±0.03）,20-HETE组为（1.27±1.20）,shGPR75+20-HETE组为（0.68±0.07）,四组GPR75蛋白表达水平整体比较差异有统计学意义（P<0.05）。对照组细胞存活率为（76.30±10.30）%,shGPR75组为（40.33±4.60）%,20-HETE组为（88.50±12.61）%,shGPR75+20-HETE组为（54.38±6.70）%,四组PC-3细胞存活率整体比较,差异具有统计学意义（F=30.269,P<0.05）。Transwell法结果显示,对照组侵袭能力为（107.30±15.39）个,shGPR75组为（62.30±7.20）个,20-HETE组为（123.57±18.90）个,shGPR75+20-HETE组为（80.11±10.61）个,四组侵袭能力整体比较,差异有统计学意义（P<0.05）。划痕实验显示,对照组迁移能力为（142.50±20.33）个,shGPR75组为（86.24±10.60）个,20-HETE组为（170.93±24.78）个,shGPR75+20-HETE组为（113.65±16.01）个,四组差异有统计学意义（P<0.05）。结论 20-HETE可促进雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖、侵袭、迁移,通过抑制GPR75受体可降低20-HETE的促癌作用。     

缺氧诱导因子-1α对低氧状态下前列腺癌PC-3细胞株增殖及侵袭的影响

目的 研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对低氧状态下前列腺癌PC-3细胞株增殖及侵袭的影响。 方法 利用转染试剂Fermentas将人HIF-1α重组表达质粒pcDNA3.1-HIF-1α转染PC-3细胞株后,低氧环境培养,采用G418筛选,建立稳定表达HIF-1α基因的细胞株,分别命名为pcD-NA3.1-HIF-1 α-PC-3、pcDNA3.1-PC-3及PC-3组。采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测3组细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达情况;噻唑盐法测定细胞生长;transwell小室检测侵袭能力。 结果 与pcDNA3.1-PC-3组和PC-3组相比,pcDNA3.1-HIF-1 α-PC-3组细胞内HIF-1α mRNA条带增强不明显,pcDNA3.1-HIF-1α-PC-3组细胞内HIF-1α蛋白的条带明显增强,HIF-1α过表达的PC-3细胞增殖速度明显增快,侵袭细胞数明显增多。 结论 HIF-1α过表达对PC-3细胞株的增殖及侵袭具有促进作用。     

Effects of gametogenetin-binding protein 2 on proliferation,invasion and migration of prostate cancer PC-3 cells

We aimed to assess the effects of gametogenetin-binding protein 2 (GGNBP2) on the proliferation, invasion and migration of prostate cancer PC-3 cells. PcDNA3-HisC-GGNBP2 was transfected to overexpress GGNBP2. Proliferation was tested by MTT assay, and migration and invasion were detected by Transwell assay. Cell cycle was detected by flow cytometry. The protein expressions of COX-2, cyclin D1, PI3K, Akt and p-Akt were detected by Western blot. A subcutaneous xenograft model of prostate cancer was established. Mice were randomly divided into three groups (n = 9) and intratumorally injected with pcDNA3-HisC-GGNBP2, pcDNA3-HisC and normal saline respectively. The xenograft tumour volume was measured every 3 days, and weight was measured after 2 weeks. After GGNBP2 overexpression, the proliferation, migration and invasion capacities of PC-3 cells decreased, and cell cycle was arrested in the G1 phase. The protein expressions of COX-2, cyclin D1, PI3K, Akt and p-Akt all reduced. The tumour volume and weight of pcDNA3-HisC-GGNBP2 group were significantly lower than those of pcDNA3-HisC group (p < .05). The proliferation capacity of GGNBP2-overexpressing prostate cancer cells is significantly attenuated, tumour growth is significantly inhibited, and cell cycle is arrested in the G1 phase. GGNBP2 overexpression affects the growth of castration-resistant prostate cancer via the PI3K/Akt signalling pathway.